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想要对液体中的大肠菌进行分离纯化,能不能直接将样品或者稀释后的样品接种于培养基?选择性培养基是选用VRBA、麦康凯、伊红美蓝?或者有另外适宜的培养基?
1、 1、血琼脂平板:适用于各类细菌的生长,一般细菌检验标本的分离都应接种到血平板上。其中肉浸液琼脂中加兔血(对嗜血杆菌生长更好)或羊血均可。用血量为5%--7%.在血平板上除可以观察菌落的形态外,还可判断溶血情况,菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血环,菌落周围呈绿色为α-溶血。2、巧克力平板:该平板是用马血、羊血或兔血制备,因其含有X和V因子,嗜血杆菌、奈瑟菌等生长良好,血液标本培养增菌后有细菌生长,若移种该平板上有利于分离出更多的细菌。3、中国蓝平板或伊红美兰平板:可抑制革兰氏阳性细菌,是较好的弱选择性培养基,有选择性促进革兰氏阴性菌生长。发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同,在此种平板上的菌落颜色不同,便于鉴别菌种。该培养基不含胆盐,与SS平板配对用于大便中志贺氏菌和沙门氏菌的分离培养最为理想。4、麦康凯平板:该培养基中含有胆盐,为中等程度选择性,抑菌力略强,有少数阴性菌不生长。在麦康凯平板能否生长是非发酵菌鉴定的一个依据,如果用麦康凯平板作为原始标本分离的培养基时,应注意观察该标本在血平板上的细菌分离情况,以免遗漏部分被抑制生长细菌。5、SS平板:因含胆盐较高,有较强的抑菌力,用于志贺氏菌和沙门氏菌的分离培养。在目前商品培养基中,不同厂家的产品抑菌力不同,使用时应注意,选择性过强可影响检出率,所以最好是加上一种弱选择性平板同时培养。6、碱性琼脂或TCBS或庆大霉素琼脂或4号琼脂:用于分离培养霍乱弧菌及其他弧菌。选择其中1-2种作为常规检验用就行了,这几种培养基对肠道非致病菌的抑制力各不相同,使用时应有所了解。7、M-H琼脂平板(水解酪蛋白琼脂):专用于抗菌药物敏感试验。8、营养琼脂平板:用于纯化菌种和保存菌种,以及卫生细菌学方面的细菌总数测定培养基。9、营养肉汤:用于标本及各类细菌的增菌。10、TTC沙氏培养基:(氯化三苯四氮唑培养基)用于检测酵母菌和酵母样真菌分离。11、Cary-Blair运送培养基:用于空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌和志贺氏菌的保存运送培养基,但在该采样管中的标本只能保存72小时。12、S.F培菌液(亚硒酸盐培菌液):用于肠道致病菌的增菌培养。注意该培养基灭菌后PH为7.1,有棕黄色沉淀物出现,不宜高压蒸汽灭菌,增菌培养时标本约占培养液体积的10%,培养时间不超过24小时,此培养基储存时不超过两个星期。
1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。2 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。3 性能测试3.1 测试菌株选择测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。3.2 定量测试方法改良Miles-Misra法测试菌株过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从最高稀释度开始,分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释液涂满整个1/4区域,37℃培养18小时;对易计数的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。3.3 半定量测试方法 改进的划线法接种法平板分ABCD四区,共划16条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制, 目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。3.4 定性测试方法平板接种观察法用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养, 目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。