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[size=3][b][font=楷体_GB2312][/font][/b][/size][align=left]分子生物学常用溶液配制[/align][size=3][b][font=楷体_GB2312]一、分子生物学常用贮存液的配制[/font][/b][/size][size=3][b][font=Times New Roman]1[/font][font=楷体_GB2312].[/font][font=Times New Roman]30%[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺溶液[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】将[/font][font=Times New Roman]29g[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺和[/font][font=Times New Roman]1g N[/font][font=楷体_GB2312],[/font][font=Times New Roman]N’-[/font][font=楷体_GB2312]亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为[/font][font=Times New Roman]60ml[/font][font=楷体_GB2312]的水中。加热至[/font][font=Times New Roman]37[/font][font=宋体]℃[/font][font=楷体_GB2312]溶解之,补加水至终体积为[/font][font=Times New Roman]100ml[/font][font=楷体_GB2312]。用滤器([/font][font=Times New Roman]0.45μm[/font][font=楷体_GB2312]孔径)过滤除菌,查证该溶液的[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=楷体_GB2312]值应不大于[/font][font=Times New Roman]7.0[/font][font=楷体_GB2312],置棕色瓶中保存于室温。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约[/font][font=Times New Roman]0.2[/font][font=楷体_GB2312]体积的单床混合树脂([/font][font=Times New Roman]MB-1Mallinckrodt[/font][font=楷体_GB2312]),搅拌过夜,然后用[/font][font=Times New Roman]Whatman 1[/font][font=楷体_GB2312]号滤纸过滤以纯化之。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。[/font][/size][size=3][b][font=Times New Roman]2[/font][font=楷体_GB2312].[/font][font=Times New Roman]40%[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】把[/font][font=Times New Roman]380g[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺([/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=楷体_GB2312]测序级)和[/font][font=Times New Roman]20g N[/font][font=楷体_GB2312],[/font][font=Times New Roman]N’-[/font][font=楷体_GB2312]亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为[/font][font=Times New Roman]600ml[/font][font=楷体_GB2312]的蒸馏水中。继续按上述配制[/font][font=Times New Roman]30%[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为[/font][font=Times New Roman]1L[/font][font=楷体_GB2312]。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【注意】见上述配制[/font][font=Times New Roman]30%[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺的说明[/font][font=Times New Roman],40%[/font][font=楷体_GB2312]丙烯酰胺溶液用于[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=楷体_GB2312]序列测定。[/font][/size][size=3][b][font=Times New Roman]3[/font][font=楷体_GB2312].放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]溶液[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】把[/font][font=Times New Roman]20mg[/font][font=楷体_GB2312]放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]溶解于[/font][font=Times New Roman]4ml 100%[/font][font=楷体_GB2312]乙醇中,[/font][font=Times New Roman]1:10[/font][font=楷体_GB2312]稀释贮存液,用[/font][font=Times New Roman]100%[/font][font=楷体_GB2312]乙醇作空白对照读取[/font][font=Times New Roman]OD[sub]440[/sub][/font][font=楷体_GB2312]值。放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312](分子量为[/font][font=Times New Roman]1255[/font][font=楷体_GB2312])纯品在水溶液中的摩尔消化系数为[/font][font=Times New Roman]21[/font][font=楷体_GB2312],[/font][font=Times New Roman]900[/font][font=楷体_GB2312],故而[/font][font=Times New Roman]1mg/ml[/font][font=楷体_GB2312]的放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]溶液在[/font][font=Times New Roman]440nm[/font][font=楷体_GB2312]处的吸光值为[/font][font=Times New Roman]0.182[/font][font=楷体_GB2312],放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于[/font][font=Times New Roman]-20[/font][font=宋体]℃[/font][font=楷体_GB2312]。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【注意】放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]是致畸剂和致癌剂[/font][font=Times New Roman],[/font][font=楷体_GB2312]配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作[/font][font=Times New Roman],[/font][font=楷体_GB2312]而不能在开放在实验桌面上进行[/font][font=Times New Roman],[/font][font=楷体_GB2312]谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]药厂提供的作治疗用途的放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在[/font][font=Times New Roman]440nm[/font][font=楷体_GB2312]波长处的光吸收确定放线菌素[/font][font=Times New Roman]D[/font][font=楷体_GB2312]的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。[/font][/size][size=3][b][font=Times New Roman]4[/font][font=楷体_GB2312].[/font][font=Times New Roman]0.1mol/L[/font][font=楷体_GB2312]腺苷三磷酸([/font][font=Times New Roman]ATP[/font][font=楷体_GB2312])溶液[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】在[/font][font=Times New Roman]0.8ml[/font][font=楷体_GB2312]水中溶解[/font][font=Times New Roman]60mg ATP,[/font][font=楷体_GB2312]用[/font][font=Times New Roman]0.1mol/L NaOH[/font][font=楷体_GB2312]调至[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=楷体_GB2312]值至[/font][font=Times New Roman]7.0[/font][font=楷体_GB2312],用蒸馏水定容[/font][font=Times New Roman]1ml[/font][font=楷体_GB2312],分装成小份保存于[/font][font=Times New Roman]-70[/font][font=宋体]℃[/font][/size][size=3][b][font=Times New Roman]5[/font][font=楷体_GB2312].[/font][font=Times New Roman]10mol/L[/font][font=楷体_GB2312]乙酸酰溶液[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】把[/font][font=Times New Roman]770g[/font][font=楷体_GB2312]乙酸酰溶解于[/font][font=Times New Roman]800ml[/font][font=楷体_GB2312]水中,加水定容至[/font][font=Times New Roman]1L[/font][font=楷体_GB2312]后过滤除菌。[/font][/size][size=3][b][font=Times New Roman]6[/font][font=楷体_GB2312].[/font][font=Times New Roman]10%[/font][font=楷体_GB2312]过硫酸铵溶液[/font][/b][/size][size=3][font=楷体_GB2312]【配制方法】把[/font][font=Times New Roman]1g[/font][font=楷体_GB2312]过硫酸铵溶解于终量为[/font][font=Times New Roman]10ml[/font][font=楷体_GB2312]的水溶液中,该溶液可在[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]℃[/font][font=楷体_GB2312]保存数周。[/font][/size]
分子生物学作为基因工程的上游技术,其实验的成果和准确性将决定下游所有的步骤和最终的实验结果。所以构建一个完备的分子生物学实验室是非常重要的,以下就让我们来看看构建一个分子生物学实验室需要哪些仪器。 1.冰箱:根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的冰箱,最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。 2.培养箱:37℃恒温箱用于细菌的平板培养及分子生物学实验。 3.恒温培养摇床:用于大肠杆菌等生物工程菌种的扩增。 4.水浴锅:用于保温并进行各类实验。25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验,各种生物化学酶反应等试验的保温。含低温的水浴槽可以用于分子生物学的质粒与基因片段的连接等实验及用于42度的大肠杆菌感受态的热激。 5.烘箱:主用于烘干实验器皿,有些需要温度高些,有些需要温度低些。用于RNA方面的实验用具,需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。 6.超纯水机:随着分子生物学的飞速发展,许多实验对水纯度的要求越来越高,用自来水、蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水,磁铁耦合齿轮泵作用使水循环。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。 7.蒸汽消毒锅:分子生物学所用大部分试剂,而且实验用具都应严格消毒灭菌。用于小批量物品的随时消毒。大批实验物品、试剂、培养基可使用大型消毒且定时进行消毒。 8.滤器滤膜:不耐高温、高压的试剂用其处菌。 9.各种天平:台秤、精密电子分析天平,用于精确称量各类试剂。 10.液体体积的度量:量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯、锥形瓶等。
分子生物学作为基因工程的上游技术,其实验的成果和准确性将决定下游所有的步骤和最终的实验结果。所以构建一个完备的分子生物学实验室是非常重要的,以下就让我们来看看构建一个分子生物学实验室需要哪些仪器? 1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的冰箱。 最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。