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培养基灭菌是否彻底,影响因素很多,除了培养基内杂菌的种类和数量,灭菌温度的高低,时间长短外,还取决于:1. 营养成分的保持湿热灭菌时,微生物被杀死的同时,培养基的营养成分也遭到了一定的破坏,特别是氨基酸和维生素。如在121℃,仅20min,就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏,蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应,造成培养基中原有营养成分的数量变化,因而影响培养基质量。2. 微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大,灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。3. pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时,微生物最不易死亡。pH6.0时,微生物比较容易死亡,此时H+很容易渗入微生物的细胞,从而改变细胞的生理反应,促使其死亡。所以培养基的pH越低,所需的时间也越短。4. 培养基成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性,灭菌较易。例如:大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡,在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候最好选用115℃,30分钟;一般的培养基可选择121℃20分钟。5. 泡沫泡沫中的空气形成隔热层,使热量难以渗透进去,杀死其中的杂菌。6. 颗粒颗粒小,容易灭菌,颗粒大,则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基,可用粗滤的方法(不应影响培养基质量)予以除去,培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。7. 灭菌锅内空气是否排净这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点,同样达到了相同的压力的情况下,如果空气未能排净,也就是说不是纯蒸汽灭菌,此时的温度不一定能达到目的要求,会严重影响灭菌效果。
培养基灭菌是否彻底,影响因素很多,除了培养基内杂菌的种类和数量,灭菌温度的高低,时间长短外,还取决于:1. 营养成分的保持湿热灭菌时,微生物被杀死的同时,培养基的营养成分也遭到了一定的破坏,特别是氨基酸和维生素。如在121℃,仅20min,就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏,蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应,造成培养基中原有营养成分的数量变化,因而影响培养基质量。2. 微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大,灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。3. pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时,微生物最不易死亡。pH6.0时,微生物比较容易死亡,此时H+很容易渗入微生物的细胞,从而改变细胞的生理反应,促使其死亡。所以培养基的pH越低,所需的时间也越短。4. 培养基成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性,灭菌较易。例如:大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡,在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候最好选用115℃,30分钟;一般的培养基可选择121℃20分钟。5. 泡沫泡沫中的空气形成隔热层,使热量难以渗透进去,杀死其中的杂菌。6. 颗粒颗粒小,容易灭菌,颗粒大,则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基,可用粗滤的方法(不应影响培养基质量)予以除去,培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。7. 灭菌锅内空气是否排净这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点,同样达到了相同的压力的情况下,如果空气未能排净,也就是说不是纯蒸汽灭菌,此时的温度不一定能达到目的要求,会严重影响灭菌效果。
培养基是人工配制的供微生物或动植物细胞生长、繁殖、代谢和合成人们所需产物的营养物质和原料,同时,培养基也为微生物等提供除营养外的其它生长所必须的环境条件。常用的培养基都应符合一些基本要求:1 ) 都必须含有作为合成细胞组成的原料;2 ) 满足一般生化反应的基本条件,如碳源、氮源、无机盐、生长因素;3 ) 一定的pH等条件。 2 培养基的组成 2.1 碳源 碳源是组成培养基的主要成分之一。常用的碳源有糖类、油脂、有机酸和低碳醇。在特殊情况下( 如碳源贫乏时) ,蛋白质水解产物或氨基酸等也可被某些菌种作为碳源使用。葡萄糖是碳源中最易利用的糖,几乎所有的微生物都能利用葡萄糖,所以葡萄糖常作为培养基的一种主要成分,并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。但是过多的葡萄糖会过分加速菌体的呼吸,以致培养基中的溶解氧不能满足需要,使一些中间代谢物不能完全氧化而积累在菌体或培养基中,如丙酮酸、乳酸、乙酸等导致pH下降,影响某些酶的活性,从而抑制微生物的生长和产物的合成。 2.2 氮源 氮源主要用于构成菌体细胞物质( 氨基酸、蛋白质、核酸等) 和含氮代谢物。常用的氮源可分为两大类: 有机氮源和无机氮源。 2.2.1 有机氮源 常用的有机氮源有玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉和酒糟等。它们在微生物分泌的蛋白酶作用下,水解成氨基酸,被菌体吸收后再进一步分解代谢。 有机氮源除含有丰富的蛋白质、多肽和游离氨基酸外, 往往还含有少量的糖类、脂肪、 无机盐、 维生素及某些生长因子, 因而微生物在含有机氮源的培养基中常表现出生长旺盛, 菌丝浓度增长迅速的特点。大多数发酵工业都借助于有机氮源,来获得所需氨基酸。 玉米浆是一种很容易被微生物利用的良好氮源。因为它含有丰富的氨基酸( 丙氨酸、 赖氨酸、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等) 、还原糖、磷、微量元素和生长素。玉米浆是玉米淀粉生产中的副产物,其中固体物含量在50%左右,还含有较多的有机酸,如乳酸,所以玉米浆的 pH在4左右。 2.2.2 无机氮源 常用的无机氮源有铵盐,硝酸盐和氨水等。微生物对它们的吸收利用一般比有机氮源快, 所以也称之谓迅速利用的氮源。但无机氮源的迅速利用常会引起pH的变化。 氨水在发酵中除可以调节pH外,它也是一种容易被利用的氮源,在许多抗生素的生产中得到普遍使用。氨水因碱性较强,因此使用时要防止局部过碱,加强搅拌,并少量多次地加入。 2.3 无机盐微生物在生长繁殖和生产过程中,需要某些无机盐和微量元素如磷、 镁、 硫、 钾、 钠、 铁、氯、锰、锌、钙等,以作为其生理活性物质的组成或生理活性作用的调节物,这些物质一般在低浓度时对微生物生长和产物合成有促进作用,在高浓度时常表现出明显的抑制作用。在培养基中,镁、磷、钾、硫、钙和氯等常以盐的形式( 如硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸钙、氯化钾等) 加入,而钴、铜、铁、锰、锌、钼等缺少了对微生物生长固然不利,但因其需要量很少,除了合成培养基外,一般在复合培养基中不再另外单独加入。 2.3.1 磷 是核酸和蛋白质的必要成分,也是重要的能量传递者——三磷酸腺苷的成分;在代谢途径的调节方面,磷起着很重要的作用,磷有利于糖代谢的进行,因此它能促进微生物的生长。但磷若过量时,许多产物的合成常受抑制。2.3.2镁 除了组成某些细胞的叶绿素的成分外,并不参与任何细胞物质的组成。但它处于离子状态时,则是许多重要酶( 如己糖磷酸化酶、柠檬酸脱氢酶、羧化酶等) 的激活剂,镁离子不但影响基质的氧化,还影响蛋白质的合成。镁常以硫酸镁的形式加入培养基中。 2.3.3 氯 氯离子在一般微生物中不具有营养作用,但对一些嗜盐菌来讲是需要的,在一些产生含氯代谢物的发酵中,除了从其它天然原料和水中带入的氯离子外,还需加入约0.1%氯化钾以补充氯离子。 2.3.4钠、钾、钙 钠、钾、钙等离子虽不参与细胞的组成,但仍是微生物发酵培养基的必要成分。钠、钾离子与维持细胞渗透压有关,故在培养基中常加入少量钠盐、钾盐,但用量不能过高,否则会影响微生物生长。钙离子能控制细胞透性,它不能逆转高浓度无机磷对某些产品的抑制作用。 2.4前体、 促进荆和抑制剂发酵培养基中某些成分的加入有助于调节产物的形成,而并不促进微生物的生长。这些添加的物质包括前体、抑制剂和促进剂/ 包括诱导剂、生长因子等) 。2.4.1前体 指某些化合物加入到发酵培养基中,能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分子中去,而其自身的结构并没有多大变化,但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。 2.4.2促进剂 指那些既不是营养物又不是前体,但却能提高产量的添加剂。 2.4.3抑制剂 在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行, 同时会使另一代谢途径活跃,从而获得人们所需的某种产物或使正常代谢的某一代谢中间物积累起来。 2.5 水 除了少数微生物如蓝细菌能利用水中的氢作为还原CO2时的还原剂外,其他微生物都不是利用水作为营养物质。即使如此,由于水在微生物的生命活动过程包括营养过程中的重要性,它仍应属于营养要素之一,为培养基的重要组成之一。 3 结束语 对某一微生物和产品来讲,究竟用哪些原料作培养基还需经过一系列实验的摸索,能确定一种既有利于微生物生长,又能保证得到高产优质的较为理想的培养基配方。另外,工业生产培养基所用的原材料还必须来源丰富、价格低廉、质量稳定。当然一种好的培养基配方还应随菌种的改良、发酵控制条件( pH、溶解氧、中间补料等工艺条件) 和发酵设备的变化而作相应的变化。