平板计数琼脂

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大肠菌群平板计数法的常见问题有哪些？1、VRBA培养相关问题（1）所用器皿是否需要灭菌？答：不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留。煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般常用的卫生纸（软纸）覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。（2）如何保持“煮沸2min”？答：可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸，在该培养基即将煮沸时调低温度。实际操作时，不需要严格按照此要求进行，加热煮沸数秒即可。原因：本培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。（3）若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？答：不可以。4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌（即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象）。（4）倾注完成后是否需要“覆盖一层”？如何覆盖？答：一般情况下不需要覆盖。在实际操作过程中，若检验员初次接触该食品（或食品品类），则有必要在倾注培养基后再覆盖一层（原因是不清楚该样品是否会发生蔓延）。而如此往复测试几次后，若该样品或食品品类均不存在蔓延现象，则以后的实验中都不需要进行覆盖。若重复多次测试后都有蔓延现象，则以后的检验中zuihao都进行覆盖，zuihao是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。 2、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？答：建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验简单易操作，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心。3、两个梯度都长了菌，如何选取？答：选取15-150CFU之间的平板（指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围），挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明：若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间，则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验，实际操作时，可灵活操作，如：1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123，1:100的两个平板的菌落数分别为16、18，严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验，如此需要40根GBLB肉汤管。建议使用镍合金接种环（即传统的接种环，而不是一次性塑料接种环），因为VRBA上生长的菌落（无论典型或可疑）大部分长在底层、且菌落一般较大，被培养基覆盖，传统的接种环较细，用以刮去上层培养基较方便，挑取菌落也较方便。 4、如何进行证实试验？菌落选取数量？答：同上所述，建议新手们VRBA上的所有不同形态的菌落都进行证实试验。每种不同形态都挑取5-10个进行证实试验（若BGLB管足够，建议多挑取几个进行试验）。注意：A.每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1管GBLB管中；B.“产气者，记为大肠菌群阳性管”，就要求在实验前须认真筛选BGLB管，凡产气的GBLB管应弃去不用。 5、结果如何计算？答：首先，在VRBA培养24h后进行计数，分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群（何为可疑、何为典型？同“2”，检验员多进行几次实验后自然很清楚典型的大肠菌群是何种形态）的数量。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个，典型大肠菌群有6个；其次，进行证实试验，挑取上述可疑和典型大肠菌群各5个（或者全部挑取），假如10个可疑大肠菌群中有3个证实为阳性，6个典型大肠菌群中有5个证实为阳性，则计算方法如下：最终大肠菌群数=经证实的大肠菌群数=可疑大肠菌群经证实的数量+典型大肠菌群经证实的数量=10×（6/10）×10+6×（5/6）×10=110。 6、若平板上很多菌落，最终证实全部为阴性，结果如何计算？答：根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落（建议可疑和典型菌落分别挑取10个）进行证实试验，若第二次证实试验均呈阴性，以＜1乘以zuidi稀释度进行计算，如：1:10的平板菌落数分别为120、123，1:100的平板上菌落数分别为16、18，首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验，若全部为阴性，再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验，若1:10的平板上的菌落数证实为阴性，则最终计算过程为＜1x10，最终结果为＜10；若1:10的的平板上的菌落有阳性管，则按照第5条进行计算。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

深圳市集银科技有限公司成立于2002年，是广东正业科技股份有限公司（股票代码：300410）的全资子公司，主营绑定、贴合、背光等平板显示自动化设备，是集产品研发、制造、销售及服务于一体的国家高新技术企业，2019年通过了“广东省平板显示智能装备工程技术研究中心”认定。 集银科技在平板显示自动化组装及检测设备制造行业中积累了大量技术经验，形成了高精度多镜头CCD影像自动对位、高精密背光LED检测、高响应高稳定加热，高精度恒温控制、高稳定性双回路恒压控制、高精密3D自动贴膜、高真空度快速贴合等几大核心技术，实现技术研究与行业应用研究相结合，进行产业化发展。目前，集银科技累积专利申请超110件，未来持续加强技术创新，提升公司的核心竞争力，实现经济效益最大化。 ▲ 深圳集银科技（深圳总部）近几年来，集银科技在激烈的市场中得以持续稳健发展，保持经营业绩增长。但随着业务的快速发展，产能扩展需要更大的场地。为此，正业科技集团总部给予大力支持，在智能制造中心提供一个更大的研发制造基地，让集银科技轻装上阵，更加专注研发。 ▲ 智能制造中心正业科技智能制造中心，位于“广深港”黄金走廊腹地的东莞松山湖生态园，占地面积近50亩，总建筑面积约6.46万平方米，已建成现代化的办公、研发、生产等场地，为其降本增效、扩产增能提供发展平台。如今，集银科技已顺利入驻智能制造中心，落实“莞深两地研发、东莞集中制造”战略布局，为企业发展注入强大动力。 ▲ 集银科技研发制造基地 集银科技产品主要涵盖“LCD、OLED”两大市场，为客户提供全自动小尺寸COF/COG绑定线、全自动中尺寸COG绑定线、全自动小尺寸真空贴合线、全自动背光组装线、全自动背光源组装线、非标自动化生产组装线等平板显示智能装备。同时，集银科技可为客户提供一整套适用的生产工艺流程和生产设备方案，并且提供完善的售后服务，不断提高生产商的生产技术和降低厂商的生产成本。 集银科技平板显示自动化产线模块在行业内一直处于前部地位，拥有较高的市场知名度和口碑，得到国内外知名客户一致认可，与JDI（日本显示）、BOE（京东方）、华星光电、天马、维信诺、信利、联创、同兴达、德普特等行业知名客户建立了长期稳定的合作关系。当前，该业务模块正聚焦OLED领域，深度布局头部客户，在手机柔性屏、车载屏、电视屏等领域持续发力。 ▲ 全自动小尺寸COF/COG绑定线 ▲ 全自动中尺寸COG绑定线 ▲ 全自动小尺寸真空贴合线 ▲ 全自动背光组装线 ▲ 全自动背光源组装线 未来，集银科技将不断为客户提供优质的产品和服务，挖掘未来更大的发展空间。