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孔板琼脂成球分析(反映单个细胞的生长) (一)实验材料:LLC-ASD细胞 琼脂粉 超纯水 含5%FBS的DMEM培养基(含抗生素) 超净台 漩涡振荡仪 倒置显微镜 (二)基本步骤: (1)制单细胞悬液: 收集对数生长期的LLC-ASD细胞,计数后用含5%FBS的DMEM培养基极限梯度稀释得5ml 1×103个/ml,剩余的细胞重新收集,以便以后做RT-PCR验证实验。 (2)制底层琼脂: 用蒸馏水制备1%的琼脂液,待琼脂液温度刚刚不烫手时,在15ml离心管中加入5ml 1%的琼脂和5ml 5%FBS的DMEM培养基(含抗生素),迅速用漩涡振荡仪混合均匀,即刻向6孔板中每孔加入1ml混合液,摇匀铺平,待冷却凝固后,作为底层琼脂,置于超净台中备用。 (3) )制底层琼脂: 用蒸馏水制备1%的琼脂液,待琼脂液温度刚刚不烫手时,在15ml离心管中加入4.5ml 1%的琼脂和4.5ml 5%FBS的DMEM培养基(含抗生素),迅速用漩涡振荡仪混合均匀,再加入1ml 1×103个/ml的LLC-ASD细胞单细胞重悬液,用漩涡振荡仪混合均匀,得含细胞数100个/ml的0.1% 的琼脂培养基混合液。迅速向6孔板中各孔加入1ml混合液,摇匀铺平,待冷却凝固后,即为上层琼脂, (4)加培养基,观察计数: 向6孔板每孔缓慢沿壁加入1ml5%FBS的DMEM培养基(含抗生素)后放入培养箱持续培养8~10天,第4天开始每天在倒置显微镜下检查,到80%以上的细胞形成100个细胞以上的克隆球时终止培养,此时计数形成50个细胞以上的克隆球的数目,作为此孔的克隆球数。 (5)每孔克隆球数除以100,作为此孔克隆率,统计分析。 注意: 1 此实验最重要的是把握好时机,即不可动作过快,使得过热的琼脂液破坏培养基和细胞,又不可动作过慢,使得琼脂过早凝固。 2 用漩涡振荡仪时一定要充分混匀混合液,否则最终单细胞无法固定于琼脂中。具体时间视混合液体积和琼脂比例而定。
昨天做饭,把4个三全的奶黄包放电饭煲里蒸了吃,没想到最后出来2个乒乓球吃了其中正常的一个,比较正常,留下这正常的一个和2个乒乓球,捏着超有弹性唉,这都什么玩意啊,增稠剂加多了?有图有真相!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205100845_365985_2073332_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205100847_365988_2073332_3.jpg
求纸箱爆裂强度标准 TAPPI 810,请有此标准的朋友帮帮忙!