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请有经验的同行介绍一下,做氯霉素用什么牌子和型号的固相萃取柱比较好,我打算用GB/T22338-2008 方法。氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素一起做。
各位老师,我最近在摸索固相萃取的条件,药物是氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考。用水复溶上样的。用了几个柱子都不是很理想,想和大家讨论一下固相萃取柱的选择和萃取条件的选择?HLB的柱子用纯甲醇洗脱的回收率都不高?峰型也不好看。安捷伦C18的柱子上样的时候会有样品流出来。
动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法一、实验目的本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,LC-MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。 二、实验目标物氯霉素(CAS:56-75-7) 三、应用范围本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。 四、参考标准推荐性国家标准《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》 五、实验材料 Biocomma®Silibase™ C18固相萃取柱6mL/1000mg。六、实验方法 1、样品提取 将称取5g试样,精确到0.01g。置于50ml于涡旋具盖离心管中,加入5ml水,于涡旋混合器上快速混合1min,使试样完全溶解。准确加入15ml乙酸乙酯,在振荡器上振荡10min,以3000r/min离心10min,准确吸取上层乙酸乙酯12ml转入15ml的离心管中,置于浓缩吹氮仪在45℃吹扫蒸干,加入5ml水溶解,待净化。 2、SPE柱净化(1)活化:依次采用5mL甲醇、5mL水活化C18固相萃取小柱。(2)净化:将提取液过C18固相萃取柱,待溶液完全流出后,用2×3ml水过柱,然后再用5ml乙腈+水淋洗柱,弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10min。 3、洗脱 用6ml乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液于10ml离心管中,于45℃用氮气吹干液吹干,用乙腈+水(2:8,体积比)定容至1ml,供LC-MS/MS上机测定。 4、LC-MS条件色谱柱:Venusil ASBC18(2.1×150mm,5µm,100Å);质谱仪:API 4000流动相:A:0.1mM乙酸铵溶液(0.1%甲酸) B:甲醇溶液;流速:0.2mL/min柱温:40℃进样体积:5ul离子源:电喷雾(ESI),负离子模式检测方式:多反应监测(MRM)。 表1 质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 30 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) -4500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 表2 氯霉素及内标的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 监测离子对 DP EP CE CXP 氯霉素 4.90 320.9/151.9 -60 -10 -25 -12 320.9/256.9 -60 -10 -25 -12 氯霉素-D5 4.90 326.1/157.0 -60 -10 -25 -12 七、实验结果1、10ppb猪肉基质氯霉素添加回收结果平均加标回收率在90%以上,RSD值小于5符合标准要求。 表3 猪肉基质氯霉素添加回收结果 名称 1(%) 2(%) 3(%) 平均回收率(%) RSD(%) 氯霉素 98.31 96.28 90.61 95.07 4.20 2、 空白样品添加氯霉素残留物色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508141639_560777_3310_3.jpg