曲古霉素

动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法一、实验目的本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，LC-MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、实验目标物氯霉素(CAS:56-75-7) 三、应用范围本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。 四、参考标准推荐性国家标准《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》 五、实验材料 Biocomma®Silibase™ C18固相萃取柱6mL/1000mg。六、实验方法 1、样品提取 将称取5g试样，精确到0.01g。置于50ml于涡旋具盖离心管中，加入5ml水，于涡旋混合器上快速混合1min，使试样完全溶解。准确加入15ml乙酸乙酯，在振荡器上振荡10min，以3000r/min离心10min，准确吸取上层乙酸乙酯12ml转入15ml的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45℃吹扫蒸干，加入5ml水溶解，待净化。 2、SPE柱净化(1)活化：依次采用5mL甲醇、5mL水活化C18固相萃取小柱。(2)净化：将提取液过C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3ml水过柱，然后再用5ml乙腈+水淋洗柱，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10min。 3、洗脱 用6ml乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10ml离心管中，于45℃用氮气吹干液吹干，用乙腈+水（2：8，体积比）定容至1ml，供LC-MS/MS上机测定。 4、LC-MS条件色谱柱：Venusil ASBC18（2.1×150mm，5µm，100Å）；质谱仪：API 4000流动相：A:0.1mM乙酸铵溶液（0.1%甲酸） B:甲醇溶液；流速：0.2mL/min柱温：40℃进样体积:5ul离子源：电喷雾（ESI），负离子模式检测方式：多反应监测（MRM）。 表1 质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 30 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) -4500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 表2 氯霉素及内标的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间（min） 监测离子对 DP EP CE CXP 氯霉素 4.90 320.9/151.9 -60 -10 -25 -12 320.9/256.9 -60 -10 -25 -12 氯霉素-D5 4.90 326.1/157.0 -60 -10 -25 -12 七、实验结果1、10ppb猪肉基质氯霉素添加回收结果平均加标回收率在90%以上，RSD值小于5符合标准要求。 表3 猪肉基质氯霉素添加回收结果 名称 1（%） 2（%） 3（%） 平均回收率（%） RSD（%） 氯霉素 98.31 96.28 90.61 95.07 4.20 2、 空白样品添加氯霉素残留物色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508141639_560777_3310_3.jpg

万古霉素是由链霉菌产生的、结构复杂的糖肽类抗生素,易溶于水,甲醇中极微溶解,乙醇或丙酮中几乎不溶.万古霉素主要抑制细菌细胞壁合成,由于万古霉素有较强的抗菌作用,在人医临床上也较少使用,而且同氨基糖苷类药物一样,具有严重耳毒性及肾毒性,故只宜在其他抗生素对病菌无效时才会被短期使用于抢救,也就是所谓的最后一线药物. 近年来,一些养殖者和饲料生产企业在动物饲喂过程或加工生产中,为追求利润,将万古霉素添加到饲料中应用,长期使用的后果是使需要万古霉素来治疗的一种能够致死的细菌产生抗药性,变异成万古霉素抗药性肠球菌(VRE),对人类生命安全造成了极大的威胁.因此,建立饲料中万古霉素的测定方法是非常必要的.1、适用范围适用于饲料中万古霉素的检测。2、提取称取1 g 均质样品于15 mL 离心管中，加入8 mL 乙酸提取液* 和4 mL 三氯甲烷；振荡4 min， 4,000 rpm下离心4 min，收集上清液；下层残留物用5 mL、5 mL 乙酸提取液重复提取两次，合并三次提取液；作为上样液，待净化。* 乙酸提取液：10% 乙酸溶液（用50% 甲醇水溶解）3、净化ProElut PXC 500 mg/12 mL (Cat.#68207)a 活化： 依次加入6 mL 甲醇，6 mL 水，流出液弃去；b 上样： 将上样液加入柱中，流出液弃去；c 淋洗： 依次用10 mL 水，3 mL 甲醇淋洗，流出液弃去；d 洗脱： 10 mL 10% 氨水（甲醇/ 水= 3/7）溶液洗脱，收集洗脱液；e 重新溶解：50 oC 下用减压蒸馏将洗脱液浓缩近干，然后用1% 乙酸重新定容至1 mL，上机供HPLC 分析。4、色谱条件色谱柱：Spursil C18 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #82001)流动相：50 mmol/L 磷酸二氢钾(1 L 磷酸二氢钾溶液需加入300 μL 磷酸)/ 乙腈= 92/8流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：30 oC 检测器： UV 210 nm5、添加回收结果5.1 添加水平为1.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041358_559009_2452211_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041358_559010_2452211_3.png回收率：71.6%（注：被仪器的logo遮住了）5.2 添加水平为10.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041421_559012_2452211_3.png回收率：69.4%（注：被仪器的logo遮住了）5.3 饲料中万古霉素检测（空白样品）的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041422_559013_2452211_3.png5.4 万古霉素标准品10.0 mg/L 的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041423_559014_2452211_3.png5.5 万古霉素标准品1.0 mg/L 的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041424_559015_2452211_3.png

10，抽取5个版友）；中奖名单：玲儿响叮当（注册ID：jshbhh）夏天的雪（注册ID：bingwang228）牛一牛(注册ID：v2700892)千层峰（注册ID：jxyan）dahua1981（注册ID：dahua1981）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611251519_01_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611251519_02_1610895_3.jpg【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================饲料中万古霉素测定方法：SPE基质：饲料应用编号：101707化合物：万古霉素固定相：ProElut PXC色谱柱/前处理小柱：Spursil C18 5u 150 x 4.6mm样品前处理：1.样品准备/提取(1)称取1 g均质样品于15 mL离心管中，加入8 mL乙酸提取液 *和4 mL三氯甲烷。(2)振荡4 min， 4000 rpm下离心4 min，收集上清液；(3)下层残留物用5 mL、5 mL 乙酸提取液重复提取两次，合并三次提取液；作为上样液，待净化。*乙酸提取液：10%乙酸溶液（用50%甲醇水溶解）2.SPE柱净化——ProElut PXC 500 mg/12 mL（Cat.# 68207）(1)活 化：依次加入6 mL甲醇，6 mL水，流出液弃去；(2)上 样：将上样液加入柱中*，流出液弃去；(3)淋 洗：依次用10 mL水，3 mL甲醇淋洗，流出液弃去；(4)洗 脱：10 mL10%氨水（甲醇：水=3:7）溶液洗脱，收集洗脱液；(5)重新溶解：在50 ℃下用减压蒸馏将洗脱液浓缩近干，然后用1%乙酸重新定容至1mL，上机供HPLC分析。色谱条件：分析条件 色谱柱：Spursil C18 250×4.6mm ID，5μm（Cat.#82001） 流 速：1.0 mL/min 检测器：UV 210nm 柱 温：30 ℃ 进样量：20 μL 流动相：50mmol/L磷酸二氢钾(1L磷酸二氢钾溶液需加入300uL磷酸)：乙腈(92:8)文章出处：天津迪马实验室关键字：饲料，万古霉素，ProElut PXC，68207，Spursil ，82001摘要：饲料中万古霉素测定谱图：http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/wangumeisu%201.PNGhttp://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/wangumeisu%202(1).PNGhttp://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/wangumeisu%203.PNG图例：万古霉素

【作者中文名】徐兵; 李昕; 张莉;【作者英文名】XU Bin; LI Xin; ZHANG Li（Third Hospital of Changsha; Changsha Hunan 410015）;【作者单位】长沙市第三医院;【摘要】目的建立快速测定人血浆中万古霉素的RP-HPLC法。方法采用液-液萃取法对血样进行预处理,以去甲万古霉素为内标。色谱条件:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾缓冲液(9.5∶90.5,pH=3.0),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为紫外230 nm。结果万古霉素的最低定量浓度为2.07 mg.L-1,线性范围为2.07~132.64 mg.L-1,相对回收率95%,绝对回收率65%,日内、日间RSD均10%。结论该方法方便、经济、无杂质干扰,适用于万古霉素血药浓度监测及药动学研究。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061206_381806_2379123_3.jpg

[align=center][font='times new roman'][size=13px]全自动固相萃取测定罗非鱼[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]的氯霉素[/size][/font][/align][font='arial'][size=13px][size=18px]前言[/size][/size][/font][font='arial'][size=13px][size=18px][/size][/size][/font][font='arial'][size=16px] 氯霉素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，而阻挠蛋白质的合成，属于抑菌性广谱抗生素，能够用于人体某些疾病的治疗，以及作为兽药用于防范及治疗动物疾病。[/size][/font][font='arial'][size=16px]在日常生活中氯霉素等激素类药物会广泛应用于养殖业，[/size][/font][font='arial'][size=16px]例如鱼、虾等水产类食品，养殖户为了所养殖的鱼、虾能够快速生长，并且不生病，会放很多抗生素类药物到养殖的水中，从而造成药物在动物体内及动物体表富集，而人类食用这些肉类会使兽药残留进入人体，从而影响身体健康。[/size][/font][font='times new roman'][font=arial][font='arial']关键词[/font][/font][/font][font='arial'][size=16px]SPE[/size][/font][font='arial'][size=16px]1000[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]MiniLab[/size][/font][font='arial'][size=16px]3000；[/size][/font][font='arial'][size=16px]M[/size][/font][font='arial'][size=16px]64；[/size][/font][font='arial'][size=16px]GB31658.2-2021[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]氯霉素[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]动物性食品[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']1[/font][font='arial']. [/font][font='arial']仪器设备及试剂耗材[/font][/size][/font][font='arial'][size=18px]1[/size][/font][font='arial'][size=18px].1 [/size][/font][font='arial'][size=18px]仪器设备[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.1.1 SPE1000全自动固相萃取[/size][/font][font='arial'][size=16px]系统[/size][/font][font='arial'][size=16px]，莱伯泰科公司；[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']1.1.2 SCIEX-4500 液相色谱-质谱仪，AB公司[/font][/size][/font][font='times new roman'][size=13px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.1.3 MinLab3000全自动液体处理平台，莱伯泰科公司；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.1.4 M[/size][/font][font='arial'][size=16px]64高通量[/size][/font][font='arial'][size=16px]平行浓缩仪，莱伯泰科公司[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.1.5 离心机[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].1.6 震荡仪[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']1[/font][font='arial'].2 [/font][font='arial']试剂耗材[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.1甲醇（色谱纯， Fisher Chemical）；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.2乙腈（色谱纯， Fisher Chemical）；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.3正己烷（色谱纯， Fisher Chemical）；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.4乙酸乙酯（色谱纯， Fisher Chemical）；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.5氯化钠（分析纯）[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.6 4%氯化钠溶液：取4g氯化钠（2.5）用水溶解并稀释至100mL，临用现配[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.7 水饱和乙酸乙酯：取400mL乙酸乙酯（2.4）于500mL棕色试剂瓶中，加水50mL，加盖、振摇、静置，使用时取上层溶液[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.2.8 C18[/size][/font][font='arial'][size=16px]固相萃取柱：1[/size][/font][font='arial'][size=16px]000[/size][/font][font='arial'][size=16px]mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/6[/size][/font][font='arial'][size=16px]m[/size][/font][font='arial'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]（莱伯泰科）。[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']1[/font][font='arial'].3 标准溶液[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px]1.3.1内标[/size][/font][font='arial'][size=16px]储备[/size][/font][font='arial'][size=16px]液：ρ=100μg/mL，氘代氯霉素，国家标准物质[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1.3.2氯霉素[/size][/font][font='arial'][size=16px]储备液[/size][/font][font='arial'][size=16px]：ρ=100μg/mL，国家标准物质[/size][/font][font='arial'][size=16px]；[/size][/font][font='arial'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].3.3 [/size][/font][font='arial'][size=16px]内标工作液：精密量取内标储备液适量，用流动相稀释成浓度为[/size][/font][font='arial'][size=16px]100[/size][/font][font='arial'][size=16px]ng[/size][/font][font='arial'][size=16px]/mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]的内标工作液。4℃保存，有效期[/size][/font][font='arial'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px]个月。[/size][/font][font='arial'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].3.4 [/size][/font][font='arial'][size=16px]氯霉素标准工作液：精密量取氯霉素标准储备液适量，用流动相稀释成浓度为1[/size][/font][font='arial'][size=16px]00[/size][/font][font='arial'][size=16px]ng/m[/size][/font][font='arial'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]的标准工作液。4℃保存，有效期[/size][/font][font='arial'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px]个月。[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']2[/font][font='arial']. 实验过程[/font][/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']2[/font][font='arial'].1 提取[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px] 取鱼肉5g，加内标溶液50μL、氯霉素标准溶液50μL、乙腈5mL、4%氯化钠溶液5mL，涡旋振荡2min，4000r/min离心10min，取上清液，残渣重复提取1次，合并上清液。加正己烷5mL,涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，弃去上层液，正己烷重复处理1次。加水饱和的乙酸乙酯溶液5mL,涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，上层液转移到20mL上样瓶中，重复提取1次，合并提取液，氮气吹干，加水-乙腈（95[/size][/font][font='arial'][size=16px]+[/size][/font][font='arial'][size=16px]5）3mL使溶解，备用。[/size][/font][font='times new roman'][size=13px][/size][/font][font='arial'][size=13px][size=18px]2[/size][/size][/font][font='arial'][size=13px][size=18px].2 净化[/size][/size][/font][font='times new roman'][size=13px][/size][/font][font='arial'][size=16px] 将前述制备液按照[/size][/font][font='arial'][size=16px]图1[/size][/font][font='arial'][size=16px]的方法进行萃取净化[/size][/font][font='arial'][size=16px]，收集洗脱液，加水饱和乙酸乙酯4mL，涡旋振荡1min，2000r/min离心5min，取上层液，重复处理1次，合并上层溶液，氮气吹[/size][/font][font='arial'][size=16px]至近干[/size][/font][font='arial'][size=16px]干。加甲醇[/size][/font][font='arial'][size=16px]+[/size][/font][font='arial'][size=16px]水（50[/size][/font][font='arial'][size=16px]+[/size][/font][font='arial'][size=16px]50）1mL溶解，[/size][/font][font='arial'][size=16px]微孔滤膜[/size][/font][font='arial'][size=16px]过滤，供[/size][/font][font='arial'][size=16px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/size][/font][font='arial'][size=16px]测定[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310280939010396_6066_1610970_3.png[/img][align=center][font='arial'][size=16px]图1 固相萃取方法[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=13px][font='arial']2[/font][font='arial'].3 校准曲线配制[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px] 按照图2和图3的方法，用全自动液体处理平台配制氯霉素标准曲线，供液质分析。[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310280939011608_7860_1610970_3.jpeg[/img][font=&][size=16px] 图2校准曲线配置[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310280939015136_9025_1610970_3.jpeg[/img][align=center][font=&][size=16px]图3校准曲线配置[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=13px][font='arial']2[/font][font='arial'].4 仪器条件[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px]离子源：E[/size][/font][font='arial'][size=16px]S[/size][/font][font='arial'][size=16px]I 源；离子源温度：120[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]；电离电压：2.8KV；[/size][/font][font='arial'][size=16px]碰撞气：氩气3*10[/size][/font][font='arial'][sup][size=16px]-3[/size][/sup][/font][font='arial'][size=16px]mbar；脱溶剂气速：500L/h；锥孔气速：20 L/h；[/size][/font][font='arial'][size=16px]色谱柱：C[/size][/font][font='arial'][sub][size=16px]18[/size][/sub][/font][font='arial'][size=16px] (150mm*3.2mm,5μm)；进样量：[/size][/font][font='arial'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]0μL；柱箱温度：40[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font=arial][size=16px] 表1 流动相梯度表[/size][/font][table][tr][td][align=center][font='等线'][size=14px][color=#000000]步骤[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='等线'][size=14px][color=#000000]总时间[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='等线'][size=14px][color=#000000]流速（[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#000000]mL/min[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#000000]）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]A[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#000000]（水）[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#000000]%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]B[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#000000]（甲醇）[/color][/size][/font][font='arial'][size=14px][color=#000000]%[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]100[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]30[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]70[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]20[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]80[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]4[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]4[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]20[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]80[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]100[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=14px][color=#000000]0[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=13px][font='arial']3[/font][font='arial']. 实验结果[/font][/size][/font][font='times new roman'][size=13px][font='arial']3[/font][font='arial'].1 标准样品色谱图[/font][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310280939016945_9699_1610970_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=13px]图4氯霉素标样色谱图[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=13px][font='arial']3[/font][font='arial'].2 标准曲线图[/font][/size][/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310280939018538_1935_1610970_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=13px]图5氯霉素标准曲线[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]图[/size][/font][/align][align=left][font='arial'][size=18px]3.3 精密度及准确度结果[/size][/font][/align][font='arial'][size=16px] 经过鱼肉样品提取、净化、浓缩等前处理步骤，得到氯霉素样品加标[/size][/font][font='arial'][size=16px]回收率为86.3%~105.2%，RSD为8.1%，满足GB31658.2-2021中[/size][/font][font='arial'][size=16px]的[/size][/font][font='arial'][size=16px]相应要求。[/size][/font][font=arial][size=16px] 表2 样品加标回收率[/size][/font][table][tr][td=1,2][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]化合物[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]加标[/color][/size][/font][/align][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]浓度[/color][/size][/font][/align][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]μg/kg[/color][/size][/font][/align][/td][td=6,1][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]加标回收率%[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]均值[/color][/size][/font][/align][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]RSD[/color][/size][/font][/align][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]氯霉素[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]86.3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]84.7[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]101.3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]100.9[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]93.5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]105.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]95.3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='arial'][size=16px][color=#000000]8.1[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=13px][font='arial']4[/font][font='arial']. 结果与讨论[/font][/size][/font][font='arial'][size=16px] 实验使[/size][/font][font='arial'][size=16px]用全自动液体处理平台配制氯霉素标准[/size][/font][font='arial'][size=16px]溶液，搭配全自动固相萃取净化，能够节约时间，减少人力，真正做到节约成本，提高效率。全自动固相萃取液相色谱串联质谱法能够用于测定罗非鱼中的氯霉素。[/size][/font][font='arial']参考标准：[/font][font=&][size=13px]GB31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱[/size][/font][font=&][size=13px]-串联质谱法[/size][/font]

0.9940。河豚鱼中的8种抗生素和鳗鱼中林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素方法检出限(LOD)为2.0 μg/kg；鳗鱼中螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星方法检出限(LOD)为5.0µg/kg。回收率在75.4%～124.0%之间。八种大环内酯类抗生素重复性相对标准偏差(RSDr)在1.34%～5.79%之间，再现性相对标准偏差(RSDR)在6.20%～15.27%之间。可以用于河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素残留检测的高效液相色谱-串联质谱方法的定性和定量。河豚鱼和鳗鱼在中国有着悠久的食用历史，营养丰富。由于目前中国的河豚鱼和鳗鱼主要是养殖的，在养殖过程中不可避免使用抗生素用于保护鱼体正常生长。养殖用药主要是林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星和泰乐菌素等，该类抗生素通过羟基以苷键与去氧氨基糖或二甲氨基糖缩合成碱性苷，作用于细胞核糖体50 S亚单位，阻碍细菌蛋白质合成，有较强的抗菌活性。曾广泛应用于食用动物作为预防和治疗用药，而通过食用途径进入人体,导致中毒，甚至死亡。世界各国对抗生素药物残留均有严格的限量要求，欧盟已限制在供食用动物中的饲料中使用，中国也有相应的要求。近年来，日本、韩国针对河豚鱼以药物残留为借口相继对中国河豚鱼实行贸易技术壁垒，限制和排斥中国河豚鱼出口。因此，为破解该类壁垒、促进出口，一种高灵敏度的测定河豚鱼和鳗鱼中大环内酯类抗生素的多残留方法是十分必要的。林可霉素等抗生素的吸收光谱多在紫外末端区，缺乏可用的特征紫外吸收区位。已见报道的文献中，主要分析方法有微生物法、荧光光度法、紫外分光光度法、气相色谱、薄层谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法(CE)和液质联用技术LC-MSn法法。在近期的文献报道中，测定大环内酯类残留，样品前处理大多采用缓冲溶液提取合固相萃取技术分析技术，采用液相色谱-串联质谱方法检测。这种技术灵敏度高、选择性和特异性好，能够对低浓度的样品进行很好的定性确认，已经成为食品和环境中污染物定性、定量分析的重要手段。文献报道的测定大环内酯类分析方法多应用于食品和动物产品，未见到同时适用于河豚鱼、鳗鱼的相关检测研究。在参考以上文献的基础上，建立用Tris缓冲溶液提取河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素残留，Oasis HLB固相萃取柱萃取、净化，罗红霉素为内标，LC-MS-MS检测河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素的新方法。该方法经过4年的推广使用，提取操作简单、回收率稳定、灵敏度高、选择性好，未发现不良反应，林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素检出限达到2.0µg/kg，鳗鱼中的螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星检出限达到5.0µg/kg，低于国际上该类药物残留限量的检测要求。1 实验过程1.1 主要试剂水，符合GB/T 6682，一级。甲醇、乙腈，色谱纯。甲醇溶液(2+3)。定容液：0.01 mol/L乙酸铵溶液+乙腈(17+3)。tris溶液：依次溶解12.0 g三羟甲基氨基甲烷(tris)和7.35 g氯化钙(CaCl2·2H2O)于1000 mL水中，用盐酸调节pH值为9。标准物质：林可霉素(CAS 7179-49-9)、竹桃霉素(CAS 7060-74-4)、红霉素(CAS 59319-72-1)、替米考星(CAS 108050-54-0)、泰乐菌素(CAS 74610-55-2)、螺旋霉素(CAS 8025-81-8)、吉它霉素(CAS 1392-21-8)、交沙霉素(CAS 16846-24-5)和内标物质罗红霉素(CAS 80214-83-1)，纯度≥95%。2.0 μg/mL标准工作溶液：依次准确称取每种标准物质适量，用甲醇溶解至浓度为1.0 mg/mL的标准储备溶液；将标准储备溶液用甲醇逐步稀释为2.0 μg/mL的标准工作溶液。1.0 μg/mL内标标准溶液：准确称取罗红霉素适量，用甲醇溶解为浓度1.0 mg/mL的内标储备溶液；将内标储备溶液用甲醇逐步稀释为1.0 μg/mL内标标准溶液。测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液系列：分别吸取1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、25.0 μL浓度为2.0 μg/mL的标准工作溶液，依次加入到相应的试剂瓶中，再分别加入20.0 μL内标工作溶液，用河豚鱼样品空白提取液定容至1.0 mL。配成内标物浓度均为20 ng/mL，林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素分别为2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL的四个浓度水平的测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液系列。测定鳗鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取浓度为2.0 μg/mL的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素标准工作溶液各1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、25.0 μL和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星标准工作溶液各2.5 μL、5.0 μL、10.0 μL、25.0 μL，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加

10，抽取5个版友）；中奖名单：大川之子,纵横四海(注册ID：chuangu120)捌道巴拉巴巴巴（注册ID：v3082413）20071940xu（注册ID：20071940xu）mengzhaocheng（注册ID：mengzhaocheng）zengzhengce163(注册ID：zengzhengce163)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612121511_01_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612121511_02_1610895_3.jpg【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================有机肥中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的测定方法：SPE/HPLC基质：有机肥料应用编号：101798化合物：土霉素、四环素、金霉素、强力霉素固定相：Spursil C18色谱柱/前处理小柱：ProElut PLS 200mg / 6ml 30/pkg、ProElut PXA 500mg/12ml 20/pkg、Spursil C18 5u 150 x 4.6mm样品前处理：1.样品准备 (1) 将1 g鸡粪与20 mL提取液 *加入塑料离心管； (2) 涡旋混合1 min；超声提取 10 min，8000 rpm下离心5 min，收集上清液； (3) 残留物用15 mL、10 mL提取液重复提取两次，合并三次提取液，水定容至50 mL，作为上样液； (4) 取25 mL上样液(相当于0.5 g样品)，加入1 mL磷酸，8000 rpm下离心5 min，上清液在40 ℃下用减压蒸馏蒸至小于15 mL，加水50 mL，混匀待净化。 *提取液：Mcllvaine 缓冲液 */ 甲醇=1/1，pH=7.5 Mcllvaine 缓冲液（pH4.0）：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）27.6 g、柠檬酸（C6H8O7•H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸而钠盐37.2 g，用水用•溶解后稀释并定容至1000 mL。 2.SPE柱净化——ProElut PXA 500 mg/12 mL（Cat.#68307）上层 ProElut PLS 200 mg/6 mL（Cat.#68012）下层 将PXA与PLS用适配器连接（PXA在上层，PLS在下层），装在固相萃取装置上备用。 (1)活 化：依次加入10 mL甲醇，10 mL水，流出液弃去； (2)上 样：将待净化液加入小柱，流出液弃去； (3)淋 洗：加入5 mL水，流出液弃去； (4)洗 脱：10 mL 1%乙酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液； (5)重新溶解：将洗脱液在45 ℃下减压蒸干，1 mL水溶解残渣，上机分析。色谱条件：分析条件 色谱柱：Spursil C18，150 mm×4.6 mm，5μm（Cat# 82001） 流 速：1.0mL/min 检测器：UV 365 nm 柱 温：30℃ 进样量：20 μL 流动相：A：乙腈 / 甲醇=1/1，B：0.01 moL/L 草酸水溶液， 梯度： 时间t 0 10 10.5 20 B％ 70 50 70 70 *本方法中，目标化合物是由HPLC测定的，但这并不表明其他仪器不适合。当使用者采用其他方式进行检测时，同样可以采用本方法进行样品前处理文章出处：天津迪马实验室关键字：有机肥，土霉素，四环素，金霉素，强力霉素，Spursil C18，82001，ProElut PXA，68307，ProElut PLS，68012摘要：适用于有机肥中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素检测。谱图：http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/youjifei1.PNGhttp://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/youjifei2.PNG图例：1.土霉素 2.四环素 3.金霉素 4.强力霉素

盐酸克林霉素BSTFA衍生，全扫描色谱图出现鼓包，空白对照、空针，林可衍生物和大观衍生物均没出现鼓包现象。请教各路大神可能是什么原因，需要怎么解决。色谱柱：VF-5ht，离子源：280℃ 传输线温度：280℃。色谱条件如下图所示。另附色谱峰图。[img=,631,353]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808072013535338_4325_3312593_3.png!w631x353.jpg[/img][img=,661,418]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808072014010477_9230_3312593_3.png!w661x418.jpg[/img]