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最近在做一个糖苷类的检测方法,想用对硝基苯甲酸和糖苷上的羟基发生酯化反应显色后用紫外检测器检测,但是副产物太多,不能进行准确的定量,想请教下还有别的衍生化条件没? 我的衍生化条件是10mg糖苷样品+50mg对硝基苯甲酸加丙酮溶解后加1ml浓盐酸加热10min,条件是我自己摸索的,可能有很多的不规范的地方样品里可能有葡萄糖,蔗糖,葡萄糖甲苷,1-O-甲基-四苄基葡萄糖,1-羟基-四苄基葡萄糖
请教一下,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]连用中用来分离多糖(主要是单糖二糖三糖四糖和五糖)的柱子哪些比较好?希望做过的朋友给点建议,谢谢!
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]检测麦芽四糖麦芽四糖是由4个α-D型葡萄糖基以α-1,4糖苷键连接成的直链麦芽低聚糖,是一种功能性食品,其甜度低、黏度高、保湿性好,具有易消化吸收、低渗透压等特点和抑制肠内腐败菌、保持肠道健康、促进人体对Ca2+吸收等功能,主要应用于食品与医疗领域[1]。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031093525_2754_3458762_3.png[/img]图1 麦芽糖醇结构式[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031097576_6203_3458762_3.png[/img]图2 麦芽四糖结构式最近老板接到测定麦芽四糖的项目,安培检测器测定糖类物质灵敏度高,且之前做过麦芽糖醇的检测,考虑到麦芽糖醇和麦芽四糖结构式较为类似,就沿用麦芽糖醇的方法进行检测,配置了250mM NaOH溶液作为流动相,结果发现无论怎么调整梯度淋洗程序,基线都不平且有明显噪音。谱图见图3-7。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031100320_9022_3458762_3.jpeg[/img]图3 麦芽四糖(麦芽糖醇方法)[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031116336_8129_3458762_3.png[/img]图4 麦芽四糖(调整梯度程序后)[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031125906_1701_3458762_3.png[/img]图5 麦芽四糖(调整梯度程序后)[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031136561_3586_3458762_3.png[/img]图6 麦芽四糖(调整梯度程序后)[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031143035_2870_3458762_3.png[/img]图7 麦芽糖醇沿用麦芽糖醇方法时,可以看见明显的基线不平以及噪音。调整梯度程序后,粗看感觉分离的不错,再进一针发现两分钟前出的峰高度不对,连进两针发现重复性很差,说明这个梯度程序不适合,且与之前麦芽糖醇谱图比对也能明显看出基线不平和噪音明显。这时候老板来询问测试结果如何,一看谱图就判断不可以,问题为:出峰太少、麦芽三糖应该在15min前出峰、麦芽四糖没有出峰。老板提示:虽然麦芽糖醇和麦芽四糖结构相似,但麦芽四糖属于多糖,出峰会慢,可参考文献做法在流动相中添加醋酸钠来梯度淋洗。查找相关文献阅读,发现对于聚合度较高的葡萄糖链(即多糖),需要很高浓度的OH-作流动相,才能将其从固定相上淋出。但支链淀粉糖分子在强碱环境中,易发生糖分子降解和差向异构化反应,因此需使用弱碱性且无电化学活性的醋酸钠作为流动相,进行梯度淋洗。流动相的洗脱作用主要依靠醋酸钠,而NaOH主要起到电离糖分子羟基以及为检测器提供碱性检测环境的作用[2]。配置了1M NaAC作为流动相进行二元梯度淋洗,结果如图8。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009281031144845_8768_3458762_3.jpeg[/img]图8 麦芽四糖(NaAC与NAOH二元梯度淋洗)可以看出,麦芽四糖中主峰为麦芽四糖,其他各峰为麦芽一糖、二糖、三糖、五糖等多糖。这个小任务让我明白到即使结构相似,但也要根据物质的性质着手分析,多多思考多多学习啊!参考文献[1] 杨亚楠, 宿玲恰, 吴敬. 重组Bacillus subtilis产麦芽四糖淀粉酶的发酵优化及麦芽四糖制备[J]. 食品与发酵工业, 2019.[2] 贺伟, 丁卉, 王婕琛, et al. 高效阴离子交换色谱一脉冲安培法测定支链淀粉糖链长分布[J]. 分析测试学报, 2012.