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共聚焦显微镜与普通光学显微镜的比较显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜同属于光学显微镜。 一、普通光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组成,是显微镜的主体,为了消除球差和色差,目镜和物镜都由复杂的透镜组构成;③机械装置,用于固定材料和观察方便。 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数,还与显微镜的分辨力(resolution)有关,分辨力是指显微镜(或人的眼睛距目标25cm处)能分辨物体最小间隔的能力,分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率,用公式表示为: R=0.61λ /N.A. N.A.=nsinα/2 式中:n=介质折射率;α=镜口角(标本对物镜镜口的张角),N.A.=镜口率(numeric aperture)。镜口角总是要小于180?,所以sina/2的最大值必然小于1。 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78,所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说,介质为空气,镜口率一般为0.05~0.95;油镜头用香柏油为介质,镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm,因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm,人眼的分辨力是0.2mm,所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。
机械管长度的光学显微镜的物镜转换器被安装时,如果目标的开口,插入目镜(目镜)的观测管的顶部边缘之间的距离被定义为。在图1中示出的图形定义的机械管的长度为一个典型的透射光显微镜的光路(红线)。[img=,351,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929395762_9408_2206495_3.jpg!w351x346.jpg[/img][color=#000000]多年来,几乎所有著名的显微镜制造商设计自己的目标为有限管长度[/color][color=#000000]。设计人员进行的假设下,试样,在焦点被放置在一个“小”比前面的物镜的焦平面的距离。的目标,然后收敛(被聚焦)目镜插入目镜膜片上面的电平,位于10毫米以下的显微镜观察管的开口的顶部边缘-试样的放大图像投影(见图1和图2)。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]管长度现在已经标准化,以皇家显微学会(RMS)160毫米有限校正透射光显微镜的建议。目标设计为160毫米管长度有限显微镜上刻“ 160[/color][color=#000000] “(毫米)枪管上,在我们的讨论中所概述的[/color][url=http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/specifications.html][color=#000000]客观规范和鉴定[/color][/url][color=#000000]。眼和目标的定位是相反的在金相,基本上是倒的,如在图2中示出的反射光显微镜。请注意,图1和图2中所示的两个例子中,“管”是不在一条直线上的光波从目标发送到与镜像分束镜的目镜(目镜)。这是与大多数现代的显微镜,特别是那些配备三目头的显微摄影的情况下。[/color][color=#000000][/color][color=#000000][img=,351,395]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929398842_108_2206495_3.jpg!w351x395.jpg[/img][/color][color=#000000][color=#000000]一些较旧的显微镜有机械管长度160毫米标准偏离。显微镜由莱茨仪器产生持续后RMS标准已被纳入由其他制造商制造,长170毫米的管长度。我们提醒显微镜谁试图插入显微镜不同的管长度设计成一个机械管长度设计的目标。当目标和管的长度不匹配时,图像质量经常遭受由于[/color][url=http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/aberrations.html][color=#000000]球面像差[/color][/url][color=#000000]的引入,因为光管的长度[/color][color=#000000]发生变化。光电管的长度被定义为目标的后焦平面与中间体或主图像上面的固定光阑的目镜之间的距离。当该管的长度被改变,偏离设计规范,球面像差的引入在显微镜和图像遭受光学质量的劣化。中使用显微镜160毫米的管长度为170毫米的管长度而设计的一个客观的情况下,修正目标设计成将导致其下像差补偿。与此相反的是真实的,当使用160毫米的目标在170毫米管长度显微镜。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]具有有限的管长度显微镜系统中,每当的配件,如偏振中间件,DIC的渥拉斯顿棱镜,或荧光照明器,被置于光路中的物镜和目镜之间的背部,机械管的长度越长超过160毫米。当试样被重新聚焦,然后可以引入像差。其结果是在一个有限的系统中,每个这样的小东西必须包含光学元件的表面上使管的长度,返回到第160毫米。此类设备通常导致一个不良的增倍镜和降低图像的整体强度。也有产生“鬼影”的危险 - 会聚光线通过分光镜的反射光配件的结果。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]正如我们已经看到从上面的讨论,在现代显微镜的管体包含一个复杂的组装,光传输从客观到目镜透镜,反射镜和分光镜。几乎所有的显微镜制造商正在设计自己的显微镜来支持无限远校正[/color][color=#000000]目标。这些目标的投影影像,无穷大(没有共同的描述是相当准确地表述为新出现的平行光线)的试样。为了使观看的图像成为可能,在显微镜的主体管,或在反射光显微镜的垂直照明灯本身必须包含一个管透镜。此透 镜具有作为它的主要功能,目镜膜片的平面,即所谓的中间像平面处的图像形成。目镜,目镜“着眼于”真实,倒立,放大的图像,并在平时的第二阶段复式显微镜的放大倍率放大图像。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]无限远校正系统是特别有价值的,因为他们消除“鬼影”(聚光通过倾斜的平面玻璃表面造成的),往往伴随着旧形式的仪表。这样的系统具有的优点是更容易设计,也使插入费用较少的附件中的“平行”的光路。这种先进的新显微镜光学系统能够支持复杂的光学组件集群的目标和镜筒之间的光学路径。这是特别有用的技术,如共聚焦,偏光,DIC,荧光显微镜,以获得最佳效果,必须采用专门的透镜系统。[/color][/color][color=#000000][color=#000000][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000]在现代的无限远校正系统,在管透镜是一个多元素的光纤(即使有增加的“无限远光路空间,以防止引入的彗差或像散)在观察管内置到并密封。在本设计中,可以容纳多达两个中间附件没有附加的光学修正图像,在“无限空间”(参见图3)之间的目标和管透镜。鬼影消除上面讨论。配件更容易设计,避免了不必要的额外的放大系数。图3中所示的光路是一个无限远校正的显微镜系统的示意性表示。图3的左手侧示出的物镜和目镜膜片平面的前焦面的联络点。右侧显示“无限空间”的目标和管透镜放入光路中间附件。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][/color][img=,340,476]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929409247_5930_2206495_3.jpg!w340x476.jpg[/img][color=#000000]图4中所示的示意性的无限远校正系统表示附加的光学组件可以被插入到光路中。图4(a)是表示由台下聚光照明一个载玻片上的标本的无限远校正系统的图解表示。通过图像形成的光线通过物镜聚焦到目镜管透镜形成平行光束。配件可插入的平行光束没有进一步的光学矫正所示,在图4(b)所示,其示出了渥拉斯顿棱镜和几个偏振器插入通路。图4(c)示出的平行光束的分束器插入的插入。此分束器转移到外部附件在正确的位置的平行光束的光。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][img=,401,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929404322_6483_2206495_3.jpg!w401x514.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000]无限远校正目标进来了广泛的倍率,从1.5倍到200倍,以及色差和球面校正,从简单的消色差透镜的planachromats和精密planapochromats的各种素质。大多数,但不是全部,被设计可用于干法,也就是空气的目标和试样之间的空间中的。习惯显微镜明视场系列螺纹拧入物镜转换器(见图5)。用于明/暗视野观察的目标通常有更广泛的的直径螺纹和需要更宽的开口,用于连接这些目标(这些目标,被称为新[/color][color=#000000],BF / DF[/color][color=#000000],或B / D[/color][color=#000000]目标)物镜转换器。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]在较长的工作距离从标本比平常一些反射光的目标是设计的重点,这些目标被标记桶的客观长工作距离(LWD[/color][color=#000000])或ULWD[/color][color=#000000](超长工作距离)。制造商通常指定要用于反射光的利用Nomarski差分干涉对比研究的目标系列,例如,奥林巴斯的情况下,适当的串联MS“[/color][color=#000000]系列为明视场目标的新S[/color][color=#000000]在明/暗视野系列计划[/color][color=#000000]。这些目标有时客观桶上标有网卡[/color][color=#000000]或指定应变减少。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][img=,345,244]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929406812_4874_2206495_3.jpg!w345x244.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000]无限远校正目标都刻有一个无穷大符号(∞)。产生了由物镜的放大倍数是物镜的焦距除以管透镜的焦距的商数。例如,在[url=http://www.olympus.com/][color=#000000]Olympus显微镜[/color][/url]系统具有焦距为180毫米的管透镜,9毫米焦距目标将目镜膜片的平面上投影了20倍放大的图像。与180毫米的管透镜,它是可以低至1.25X的放大倍率,同时仍保持45毫米的距离parfocalizing设计目标。[/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][/color][/color][/color]
光学显微镜@长霉的条件及@保养方法%%光学显微镜属精密仪器,在工矿企业和科研院校运用的十分广泛,对运用和寄存环境有着较高的需求。湿润、霉菌、氧化腐蚀及工业废气等都会对光学显微镜形成损害。光学显微镜长霉的条件:湿度: 环境相对湿度大于60%霉菌即可成长。大于65%时, 成长加速,湿度达80-95%时, 是霉菌的高发环境。温度: 霉菌菌丝体在8℃以上环境温度即可成长, 12℃以上成长加速,当温度在10℃以上, 湿度在60%以上的环境下, 霉菌即可对物品形成损害。当温度在20-35℃, 湿度在75-95%时, 霉菌即可呈爆发性成长。养分物质: 霉菌对养分物质需要的量很少, 碳、氮、钾、磷、硫、镁等是霉菌的必需养分物质, 霉菌还能吸收一切的无机盐来历的根本元素。当物品富含上述霉菌所需的养分成份, 而环境的温度湿度又适合孢子发育时, 即可长霉。因而,在工作中安放光学显微镜时应尽可能远离上述使光学显微镜长霉的条件。在使用光学显微镜过程中应特别注意做好保养工作。1、严厉依照有关操作规矩运用显微镜,防止因运用不当形成损毁。2、 显微镜在贮存和运用过程中,遍及存在着生霉起雾疑问,霉和雾会使显微镜的视场含糊,分辩率降低。为了使显微镜坚持杰出的作业状况,延伸运用寿命,显微镜的作业环境应坚持清洗、枯燥、防尘。3、显微镜在每次运用结束后应及时做好清洗作业,特别是目镜、物镜等简单污染的光学部件,如发现体现外表有尘埃、指纹、脏物等,应及时用镜头纸清洗洁净。4、显微镜作业室最佳能设备空调、抽湿及防尘设备。5、如发现光学部件内部有生霉等表象,最佳及时联络有关厂家派人清洗、维修。