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[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析,探讨其发生原因、处理方法,以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4] [b]一、材料与方法[/b][/size][size=4] 1. 仪器与试剂:VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡(生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4] 2. 试验菌株:1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定,其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4] 3.VITEK-AMS鉴定法:根据细菌表型特征,选择相应GNI+、GPI、YBC卡,严格按仪器操作说明进行,孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时,挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离,观察是否纯培养,若是,分别按同法及以下两法鉴定。否则, 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4] 4. 双歧检索鉴定法:根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表,依生化结果检索至属或种。[/size][size=4] 5. 常规鉴定法:按照全国临床检验操作规程[1]进行,并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献[2]进行。 [/size][size=4] [b]二、结果[/b][/size][size=4] 1. UIO发生机率:总共1025株细菌鉴定中,共出现UIO 44株,占4.3%。其中GPI卡334株,出现UIO16株,占4.8%;GNI+卡631株,出现UIO 24株,占3.8%;YBC卡60株,出现UIO4株,占6.7%。[/size][size=4] 2.UIO发生原因:在44株出现UIO中,9株(0.9%)为待检细菌不纯,3株(0.3%)为浊度不合要求,2株(0.2%)为接种物孵育时间过长(超过48h),2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围(均为臭鼻克雷伯菌),1株(0.1%)为菌悬液不乳化(粘液型绿脓假单胞),其他如冲液时气泡过多,或其他原因不确定者27株(2.6%)。[/size][size=4] 3.处理:(1)9株不纯菌株,经纯培养后,重新上机,均能成功鉴定。(2)35株纯培养但报告UIO菌株中,18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果,并与常规分类法结果完 全一致。3株(0.3%)浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株,经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液,然后低速离心1~2 min(1 000r/min),取上清液比浊并调节到所需的浓度后,得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中,仅2株(1株为大肠埃希菌,另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果,其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等),虽能从双歧检索表获得结果,但与常规鉴定法结果不相符合,或出现矛盾的生化结果,需增加试验项目,按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4] [b]三、讨论[/b][/size][size=4] 实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定,仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因(占近1/5),其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因(如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定)也不可忽视。正确处理这部分菌株,有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时,必须挑取纯培养菌落,可提高鉴定率,对确认为纯培养而无法鉴定者,可通过传统分类法,参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株,因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4] 参考文献[/size][size=4] 1,叶应妩,王毓三,主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京: 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4] 2,Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]
1.固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后,单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团,称为菌落(colony)。(1)菌落的形态特征:大小、形状(露滴状、圆形、菜花样、不规则等)、突起或扁平、凹陷、边缘(光滑、波形、锯齿状、卷发状等)、颜色(红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等)、表面(光滑、粗糙等)、透明度(不透明、半透明、透明等)和粘度等。据细菌菌落表面特征不同,可将菌落分为3型: ①光滑型菌落(S型菌落):菌落表面光滑、湿润、边缘整齐,新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落(R型菌落):菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状,边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整,毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型,如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落(M型菌落):菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征:菌落溶血有下列3种情况。①α溶血:又称草绿色溶血,菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环,为高铁血红蛋白所致;②β溶血:又称完全溶血,菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环,是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致;③γ溶血:即不溶血,菌落周围的培养基没有变化,红细胞没有溶解或缺损。(3)色素:有些细菌产生水溶性色素,使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色,产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味:某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味,如铜绿假单胞菌(生姜气味)、变形杆菌(巧克力烧焦的臭味)、厌氧梭菌(腐败的恶臭味)、白色假丝酵母菌(酵母味)和放线菌(泥土味)等。
简介:水质毒性在线分析仪基于发光细菌急性毒性原理而研发,能直接、客观地反映出水体对生物(发光细菌)的综合毒性,具有连续、快速、自动监测等在线监测仪器的特点,同时具有较高灵敏度和可靠性。可响应数千种生物/化学污染物的生物毒性,满足ISO 11348-3以及GB/T 15441-1995等标准要求,保证监督机构对水质变化能够做出快速反应,为全面保障供水安全与环境监管提供一种快速有效的方法,为环境污染事件以及整个地表水体、饮用水等的监测预警提供重要技术支持。其适用范围包括:饮用水水源地和饮用水水质的常规预警监测,瓶/桶装水及饮料生产企业、大型集会直饮水供给、水产养殖的监控预警。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271501_524892_2966054_3.png基本参数1)试验生物:发光细菌(种类包括:费氏弧菌,明亮发光杆菌,青海弧菌等);2)检测范围:污染物浓度在ppb-ppm之间,光强抑制率-100%~+100%;3)识别污染物:可响应2000种及以上毒性物质(包括:农药、除草剂、PCB 、PAH 、重金属、生物毒物、石油污染物、蛋白抑制剂、呼吸系统抑制剂等有毒物质以及其他微生物等等);4)测量方式:采用序批式检测方式;可设置成时间周期测量模式或外部触发测量模式;5)测量周期:最短15min (接触反应5min),接触反应时间可在5min-60min内任意设置;6)校准及参比:仪器具备标样自动校准功能。采用双路对照检测技术,检测样本的同时,检测纯水作为参考进行对比;7)警报信息:实时自动报警。包括抑制率超标,质控异常,试剂体积异常,仪器运行状态异常等;8)信号输出:RS-485,标准MODBUS通讯协议。功能特点:操作及维护简单、界面友好且稳定性好;响应快速(最快可设置反应时间为5min);运行成本不高;灵敏度高,可检测到低于ppm的含量;在出现高污染情况时不需重新启动机器;机器断电后重新来电时,自动恢复工作状态;运用专用软件可以实现准确控制检测进程、自动生成报告、绘图、分析、保存等功能,并且直接读取相对发光强度、相对发光率、抑制率、毒性级别等。专业配套发光细菌(费氏弧菌):包括在线和便携式http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271507_524900_2966054_3.png相关指标:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271506_524899_2966054_3.png