自动细菌计

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

1．固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后，单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团，称为菌落（colony）。(1)菌落的形态特征：大小、形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。据细菌菌落表面特征不同，可将菌落分为3型： ①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。①α溶血：又称草绿色溶血，菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；②β溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致；③γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化，红细胞没有溶解或缺损。(3)色素：有些细菌产生水溶性色素，使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色，产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味：某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味，如铜绿假单胞菌（生姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦的臭味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、白色假丝酵母菌（酵母味）和放线菌（泥土味）等。

用细菌杀死细菌病菌对抗生素产生了耐药性怎么办？或许可以用另一种细菌来杀死它。新加坡研究人员利用合成生物学手段，通过基因改造使大肠杆菌分泌专门的毒素，成功杀死绿脓杆菌。 绿脓杆菌是一种生存能力很强、对多种抗生素和消毒剂有耐药性的细菌。 不同类型的绿脓杆菌之间因生存竞争而存在“内战”，它们会分泌称为绿脓菌素的毒素，彼此攻击。每种绿脓菌素只对特定菌株起作用。新加坡南洋理工大学的研究人员利用这种特性，给大肠杆菌植入基因，使其分泌可杀灭感染人类的绿脓杆菌菌株的毒素。 在这种大肠杆菌作用下，实验室中培养的绿脓杆菌只有1％能够存活，绿脓杆菌形成的生物膜也比正常情况下稀薄得多。生物膜是由细菌及其分泌的物质形成的膜状物，毒性和耐药性比单个细菌更强。 不过这一方法目前还有缺陷，离实用尚有距离。研究小组正在设法改进这种方法，并在培养另一种大肠杆菌菌株,用于杀灭霍乱弧菌。

一、细菌的分布： 微生物种类繁多，繁殖迅速，分布广泛，不论自然界的空气、土壤、水，生活中的食物、各种物体和器械表面，以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物，其中以细菌、放线菌最多。因此，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 （一）空气中细菌的检查（设计性实验选题） （二）水中细菌的检查（设计性实验选题） （三）人体皮肤表面细菌的检查（设计性实验选题） 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀，无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察，用记号笔在平板底上进行点数（以免遗漏），然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集，可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线，分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区，再分别选择菌落密集和稀疏的两个区，再做平分线，使每一小区为平皿面积的1／8 或1／16，然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数，所得数乘以8或16，即为该平皿的菌落总数。（图４-1） ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上，计算10个小方格内的菌落数，如为30个，则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米，则半径为4.5厘米，整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×（4.5）2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系，当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖；当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境，来抑制或杀灭微生物，以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 （一）物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 （二）化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用（三）生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 （1）将琼脂平板划分成三等份，注明1、2、3。 （2）分别以接种环取菌后，在1、3处涂布痢疾杆菌，2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif（3）分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央，（注意不要交叉污染），另取一接种环的肉汤放于3处中央。 （4）置37℃孵育24小时后取出，观察噬菌斑出现的位置（见图4-2），并记录之。 （四）细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法 　　又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌圈。测量抑菌圈的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18～24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子；含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 （1）将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 （2）将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面，相互间应间隔一定距离。 （3）37℃培养24小时后，观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 （五）中草药对细菌的抑菌作用测定

征集原创： 研究人员发现，冰箱沙拉屉里的细菌量达每平方厘米7850个细菌，是被认为的安全范围的750倍。这些细菌中包括潜在的杀手细菌大肠杆菌、沙门氏菌和李斯特菌。 希望大家能把自家的冰箱细菌含量测试一下，把测试过程记录，拍照发上来就是一篇不错的原创，看看大家的冰箱是否像报道中一样？是否够清洁！你家的冰箱清理了么？-----冰箱每平方厘米含8000个细菌

厕所的烘干机，会“吸入”冲厕时溅起的细菌和细菌孢子，再通过出风口吹出来。这个细菌规模可不小！

电泳槽细菌测试流程如下。所用仪器：小冰箱、培养盘、温度控制在30摄氏度的细菌培养盘、无菌棉棒、可以长期保存的标签、可以自由处置的含90%的无菌水瓶。操作流程：1、打开稀释瓶倒入10ml电泳漆。2、塞上瓶塞并且轻摇瓶身，充分摇匀。3、将培养盘移出冰箱，并根据标签进行区分。4、将棉棒伸入稀释过的样品，滴三滴在琼脂上，进行测试。5、保持温度和湿度的稳定性。6、两天后定期做检查，7天后丢弃样品。根据以上实验，电泳漆的主槽要每周进行一次细菌含量的检测，当主槽进行过两次细菌测试时，对包括洗涤系统在内的整个系统进行UF或RO预处理；将主槽内使用的加仑数再加上软管中的加仑数（折合为主槽的10%），来计算增加的杀菌剂的数量。 先后用1.5%的Kathon EDC及硝酸银处理细菌。用在电泳槽以及洗涤槽内的杀虫剂必须是与存在的细菌是相配的。 在24小时内保持细菌的水平。

作为科研生产中最重要的基础性资源—菌毒种,其收集、保藏及相关的研究工作在我国正处于整理、整合以及全方面逐步正规化阶段.2003年7月23日,科技部在北京召开了“国家科技基础条件平台建设”部际联席会和专家顾问组成立大会,正式启动了国家科技基础条件平台建设工作.国家自然科技资源共享平台建设作为其中的一个重要组成部分同步启动.作为该项8的一个重要组成部分,微生物菌种资源整理、整合工作同期启动,在此项工作中,中国兽医药品监察所承担了兽医微生物资源整理、整合工作.本所在行业内发展了数家加盟单位,在整理、整合菌种资源的过程中遇到了一些实验室细菌鉴定结果出现偏差的问题.经分析调查,多是由于实验室人员结构以及实验室的硬件水平差别较大等原因,造成实验室间鉴定能力的参差不齐,致使鉴定项目完成情况不尽相同,细菌鉴定结果出现偏差. 细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定.而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定.系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种:

[size=3]一种令人恐惧的细菌、一个颇具争议的命名、一场喋喋不休的争论、南亚“超级细菌”事件被全球媒体热炒，既让人惊心，又让人匪夷所思。“超级细菌”真的来了，但它真的如洪水猛兽么？有关答案并不简单。在对“超级细菌”保持时刻警惕的同时，我们不得不对本次事件重新做一番审视。细菌抗药性超强说本次事件让人惊心，是因为英国医学杂志《柳叶刀》１１日刊登研究报告称，英国医院发现一类新的超级耐药细菌，感染者曾在印度和巴基斯坦接受过外科手术。这种细菌抗药性极强，研究显示，这些“超级细菌”对替加环素和多黏菌素之外的所有抗生素都有抗药性，目前已感染英国、美国、瑞典、荷兰、澳大利亚个别居民，人数达３０多人。英国卫生部就此发布了警告。命名争议使事态扩大说本次事件让人匪夷所思，是因为它有争议的命名，以及当事各方难以说清的利益纠葛。随着事态发展和事件的放大，人们前所未有地对“超级细菌”表示出恐惧，一时间，全球各地的有关专家纷纷出来“灭火”，安抚人心。让事态迅速扩大的首先就是命名问题。这份研究报告将这类细菌携带的超级抗药基因命名为“新德里金属蛋白酶－１（ＮＤＭ－１）”，从而给印度戴上了“超级细菌”大本营的帽子。印度对此的反应可想而知，从官方到专家纷纷高调声讨这样的命名。实际上，医学界的确有把一些新发现的病菌和基因以发源地来命名的做法，但前提是必须证明细菌和基因确实源于这一地区。本次争议正在于此。印度从官方到专家均认为，“超级细菌”可能因国际旅行而得以传播，引用孤例声称新发现的“超级细菌”源自印度，有失妥当。难怪对本次事件，世卫组织都没有任何明确评价。此外，自然界存在多种“超级细菌”，希腊、以色列、美国、英国、巴西等国都曾发现过，比如耐药性金黄色葡萄球菌这种“超级细菌”，在不少国家都出现过，但并没有以个别国家和地区名字命名。况且，本次发现的一类“超级细菌”在印度、巴基斯坦等南亚国家都出现过。在没有彻底搞清来源地之前，以“新德里金属蛋白酶－１”命名抗药性基因，印度自然难以接受。 [/size]

细菌分类主要研究细菌分类的理论和方法。主要包括分类、命名和鉴定。 分类是人们认识事物的方法，是指根据细菌的相似性和亲缘关系，将细菌归入不同的分类类群，命名是根据国际细菌命名法规给细菌分类单元以科学名称，鉴定则是确定一个新的分离物质属于已经命名的分类单元的过程。

据台湾《联合晚报》报道，台湾“中央研究院”院长翁启惠和基因体研究中心副研究员马彻共同领导的研究团队，成功解构了细菌的保护屏障，突破了苦恼全球科学家２０年的“细菌谜团”。　　长久以来，医药界一直以转胜肽酶为标的，设计出一系列对抗细菌的抗生素，其中最有名的就是盘尼西林；然而，随着细菌抗药性的增加，这类抗生素的威力大不如前，人类在遭受各种细菌的强大威胁时，也逐渐面临无药可用的窘境。　　马彻说，虽然科学家清楚知道透过抑制转醣酶来开发新一代抗生素，但因对转醣酶的结构及作用机制不清楚，２０年来进展有限。“中研院”基因体研究中心近年来针对转醣酶进行一系列研究，成功利用Ｘ光绕射方法，清晰解构出金黄色葡萄球菌细胞壁上转醣酶及其受质的复合结构。今后只要设计出可阻断转醣酶继续作用下去的小分子药物，就能开发出可杀死细菌的新一代抗生素。 据报道，这项重要的研究发现，发表在“美国国家科学院期刊”最新一期刊物中，引起全球科学界高度重视。翁启惠认为，这是未来解决具抗药性细菌的利器，很有前景。

据报道，全球已有170人感染了超级细菌。其中，一名比利时男子确诊为感染超级细菌死亡；而在英国，超级细菌至少造成5人死亡。这超级细菌究竟是何方神圣？难道真是被人类给逼出来的吗？　　8月11日，医学权威杂志《柳叶刀》刊登的一篇论文说，2009年英国发现有一种带有NDM-1的大肠杆菌感染病例增加。这种细菌超级顽强，几乎能抵御目前所有的抗菌药物，并已经导致一些病人死亡。英国的研究者发现，感染这种细菌的患者中有许多在1年内曾经去过印度或巴基斯坦接受手术治疗，因此怀疑这种细菌来源于南亚。科学家们担心这种超级细菌很可能向全球蔓延。　　何谓超级细菌　　NDM-1是新德里金属β内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase 1)的英文缩写。之所以被称为金属β-内酰胺酶，是因为它上面含有金属离子，这种酶就是依靠上面的金属离子来破解抗菌药物的活性密码，使病菌对许多药物产生了抗药性。我国也曾发现金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的感染病例。最近发现的这种带有金属β-内酰胺酶大肠杆菌是一种新类型，怀疑是从印度传入的，因此被冠以印度首都新德里之名。　　超级细菌是人类逼出来的　　超级细菌身上的NDM-1实际上是人类给逼出来的。由于人类抗菌药物的广泛应用，尤其是不合理的使用，使许多细菌在抗菌药物的强大压力下不得不逐渐进化，改变自己体内的基因，产生对这些抗菌药物的抗药性，继续在这种恶劣的抗菌环境下生存。

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t05321993细菌分析绝迹稀释

据美国媒体8月12日报道，在印度、巴基斯坦等南亚国家出现的一种新型细菌变种基因有可能在全球蔓延，拥有这种基因的细菌乎对所有的抗生素都有耐药性。有报道称，这种变种基因目前已经传播到英国、美国、加拿大、澳大利亚、荷兰等国家。抗生素耐药性领域的医学专家将这种变种基因命名为NDM-1，最早出现在印度、巴基斯坦等南亚国家，后来有不少英美等国的游客前往这些南亚国家接受价格低廉的整形手术，使得这种基因得以传播。美国疾病控制和预防中心今年1月至6月间在美国发现3例这种病例，并建议医生们对在南亚接受过手术的病人特别加以关注。医学专家对NDM-1的出现感到“担忧”，担心它会在全球蔓延。不过也有医学专家持乐观态度。他们认为，尽管世界上存在多种对抗生素具有耐药性的细菌，但是其中并没有任何一种能够真正成为“超级细菌”和“食肉细菌”。纽约大学朗格尼医学中心负责人表示：“这些对抗生素具有耐药性的细菌无疑是带有危害性的，但NDM-1超级细菌比耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）更令人担忧吗？现在作出判断还为时过早。”MRSA是一种可以抵抗所有抗生素和药物的病菌，能够感染伤口和褥疮，引起各种感染，令免疫力弱的人死亡。MRSA呈多重耐药，是临床重点耐药性监测的多重耐药菌之一。===============================================这种超级细菌就是带有NDM-1的细菌，所谓NDM-1就是“新德里金属β内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase 1，简称NDM-1)”，这种酶存在于大肠杆菌等不同细菌DNA结构的一个线粒体上，并让这些细菌变得威力巨大，对几乎所有的抗生素都具备抵御能力。 去年，卡迪夫大学的研究者蒂莫西沃尔什首次在一名瑞典病人感染的大肠杆菌和肺炎杆菌中确认了这种酶的存在，并将之命名为NDM-1。[b]那我们怎么才能检测？假如大肠杆菌带有这种酶，怎么检测？用什么方法？用什么仪器？[/b]

[color=#333333]常见的细菌性食物中毒细菌有哪些？[/color]

一、目的和要求(1) 了解水细菌学检验的卫生学意义和基本原理，掌握水中细菌总数的检验方法。(2）了解平板菌落计数原则。二、原理水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求各不相同，无法找到一种在某种条件下使水中所有细菌均能生长繁殖的培养基。因此，通常选择一种大部分细菌能生长的培养基，通过生长出来的菌落大致计算水中细菌总数。目前一般是采用普通肉膏蛋白陈琼脂培养基。三、仪器与试剂(1)高压蒸汽灭菌器。(2）显微镜。(3）灭菌水。(4）肉膏蛋白陈琼脂培养基。蛋白陈 l0g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000m将上列成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4-7.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃ (151b①/in2）高压蒸汽灭菌20min，冷暗处备用。四、实验步骤1．水样的稀释根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管做10倍系列稀释。①11b=0. 453 592掩，下同。2．接种以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，再倾注约15mL已融化并冷却到45℃左有的培养基，并立即转动平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注3个平皿。每次检验时另用3个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。3．培养待冷却凝固后，翻转平皿，使皿底向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。3个平皿中的平均菌落数即为水样1mL中的细菌总数。4．菌落计数做平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大状菌落生长时，则不宜采用；而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数；若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。五、数据处理1．按各种不同情况进行计算(1) 首先选择平均菌落数在30-300者进行计算，当有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告。(2) 若有两个稀释度，其平均菌落数均为30-300，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的菌落总数。(3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。(5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。2．菌落计数的报告菌落数在100以内时按实有数报告。大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示，报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。六、注意事项(1）严格无菌操作，防止污染。(2）根据水样污染程度选择稀释倍数，必要时做预实验。

细菌内毒素的概念 　　细菌内毒素，英文称作Endotoxin，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖中的类脂A 细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引成的，1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。 细菌英文叫Bacteria：为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。这两类细菌细胞壁的结构和化学组成存在很大差异。唯有肽聚糖为其共同成分，但其含量的多少和肽链的性质有所不同，见下表：细胞壁结构革蓝氏阳性菌革蓝氏阴性菌厚度厚，15—50薄，10—15肽聚糖含量多，占胞壁干重50—80%少，占胞壁干重10%左右脂类含量少，约1—4%多，约11—22%磷壁酸有无外膜无有脂蛋白无有脂多糖无有 细胞壁较薄，厚约10－15nm，结构也较复杂。肽聚糖含量低，仅占细胞干生10％左右，层薄又较疏松，因肽聚糖之间仅四肽侧链直接联结，缺乏五肽桥；肽聚糖居于细胞最内层，外面由内向外还有脂蛋白，外膜和脂多糖的三层聚合物。 （1）脂蛋白（lipoprotein） 由类脂和蛋白质构成，联结在外膜与肽聚糖层之间，类脂一端经非共价键联结到外膜的磷脂上，另一端由共价键联结到肽聚糖肽链中的二氧基庚二酸 残基上，使外膜和肽聚糖层构成一个整体。 （2）外膜（outer membrane） 是革兰氏阴性菌细胞壁的重要结构，位于肽聚糖的外侧，其结构类似细胞膜，为液态的磷脂双层，其中镶嵌一些特异蛋白质，穿透外膜的内外双层，呈液态镶嵌体。外膜中间有微小孔道，容许水溶性的小分子通过，以进行细胞内外的物质运输和交换。除此之外，外膜还能防止胰蛋白酶和溶菌酶等进入，起到保护性屏障作用。（3）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS） 由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipid A)组成（图1-8），位于最外层。多糖O抗原向外，由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链，即革兰氏阴性菌的菌体抗原（O抗原），有特异性。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸（2-keto-3-deoxyoctonic acid, KDO）等组成，所有革兰氏阴性细菌都有此结构。类脂A是以脂化的葡萄胺二糖为单位，通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物，具有致热作用，是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。 细菌内毒素即：许多病原性细菌所产生的毒素。 一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素（Exotoxin）；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。另一类为内毒素（Endotoxin）。是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。

问:分离的细菌如何鉴定?答:细菌的传统鉴定 1. 形态特征及染色结果 ①革兰氏染色 ②鞭毛染色 ③荚膜染色 ④细胞壁染色（NaCl法：1.取1d25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。2.挑一环培养6h的细菌在25%的NaCl中涂匀，自然凉干。3.滴加0.01%的结晶紫于其上，30s后水洗干燥，油镜观察。） ⑤抗酸染色 2. 培养特征观察取菌龄24-28h的菌3.6接种于PDA平板，PDA斜面，营养肉汤中培养24h，进行琼脂柱，明胶穿刺培养，30℃培养24h。 3. 生理生化实验需氧性测定和运动性测定：将斜面培养24h的待测菌用接种针穿刺到培养基管底，3d后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长，表明为好氧菌，反应为阳性，如果菌落沿穿刺线生长，反应为阴性。培养基成分：蛋白胨0.2g，NaCl0.5g，K2HPO40.2g，琼脂0.5-0.6g，葡萄糖1.0g，水100ml。 4. 生长温度测定在肉汤培养基（外加1%葡萄糖）中用接种针接种，在恒温水浴锅中不同温度下（[c

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=18px]　　细菌检测仪工作原理，细菌检测仪的工作原理主要基于荧光素酶作用的ATP检测试剂，通过检测样品表面的ATP含量来判断细菌的数量。以下是细菌检测仪工作原理的详细解释：　　荧光素酶反应：细菌检测仪利用荧光素酶与ATP检测试剂反应，将样品表面的ATP转化为荧光素。这一过程中，荧光素酶起到催化作用，使得ATP与试剂中的荧光素结合。　　发光特性测定：转化后的荧光素在荧光素酶的催化下会发光，细菌检测仪通过测量这种发光的强度来判定样品表面的ATP含量。由于ATP是所有活细胞的基本能量单位，因此其含量可以间接反映细菌的数量。　　快速、准确测量：这种基于荧光素酶反应的测量方法非常快速且准确。一般来说，整个检测过程不超过30秒，使得细菌检测仪成为一种高效的工具，特别适用于需要快速检测细菌数量的场合。　　应用领域广泛：细菌检测仪广泛应用于食品、医药卫生、日化、造纸、工业水处理等多个行业。在食品行业中，它常被用于检测食品表面的微生物污染情况，以确保食品安全。　　综上所述，细菌检测仪通过荧光素酶反应的ATP检测技术，能够快速、准确地测量样品表面的细菌数量，为保障公共卫生和食品安全提供了重要的技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406250932573396_8825_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]

坛子里的朋友们，知道哪里可以检测土壤中硝化细菌和反硝化细菌的绝对定量的地方吗？QPCR不行哦，有没有其他的方法能绝对定量？谢谢！

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一，微生物检验中常用的生化反应介绍如下： 　　一、糖酵解试验　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。　　试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。　　二、淀粉水解试验　　某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。　　试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。　　淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

我们自来水公司的想检测下管道里铁细菌,硫细菌,我们把自来水管给割下来了,想刮些沉淀物大概检测一下,请问各位有什么好的方法没有?

细菌生化鉴定试验你了解几何？——三糖铁培养基的灵活应用摘要：糖类是细菌合成菌体成分必需的原料，各类细菌对各种糖类的分解能力也有差异，葡萄糖、乳糖、蔗糖是三糖铁培养基的三种糖，通过细菌对这三种糖的利用和分解产物做生化鉴定已经很有历史了。笔者通过对三糖铁培养基的应用，总结了三糖铁培养基在细菌鉴定中的灵活应用。总结：三糖铁培养基在肠道菌的鉴定中起到很重要的作用，只要灵活准确应用，将会在细菌的生化鉴定试验的第一步中起到关键性的作用。

今天看见一条消息，88%空调散热片细菌总数超标 最高超标可达1000倍以上据经济之声《天下财经》报道，中国疾控中心、上海市疾控中心等机构对上海、北京、深圳进行实地家用空调入户调研发现：88%的空调散热片细菌总数超标，84%的空调散热片霉菌总数超标；空调散热片中检出细菌超标最高可达1000倍以上。散热片上也能滋生细菌吗？