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滴定管读数属于A类还是B类不确定度
硝基呋喃类代谢物快速检验方法—UPLC/MS/MS1、范围本方法规定了动物源性食品中四种硝基呋喃类代谢物残留量的高效液相色谱串联质谱快速测定方法。2、原理试样中残留的硝基呋喃代谢物用硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、衍生化、净化后用液相色谱串联质谱法进行检测,外标法定量。3、试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。3.1.1乙腈:色谱纯。3.1.2甲醇:色谱纯。3.1.3 乙酸铵:色谱纯。3.1.4 甲酸:色谱纯3.1.5 标准品: 氨基脲(SEM)、3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、1-氨基-乙内酰脲(AHD):≧99%。3.1.6 标准贮备溶液:准确称量各SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD 各10 mg,用甲醇分别定容于100 mL容量瓶中,配制成100 µ g/mL的标准贮备液。3.1.7 硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒:(提取剂1 20瓶、提取剂2 20瓶、衍生化试剂2瓶、催化剂2瓶、净化柱20根) 4、仪器和设备4.1.1 Waters ACQUITY UPLC-Micromass Quattro Premier XE4.1.2匀浆机。4.1.3旋转蒸发仪。4.1.4离心机:4 000 r/min4.1.5可水浴加热超声波清洗机或恒温摇床。4.1.6聚四氟乙烯离心管:50 mL,具塞。4.1.7微孔滤膜:0.25 µ m。5、测定步骤5.1提取、衍生化、净化5.1.1提取:准确称取已捣碎的样品10.00 g于50 mL离心管中,先后加入提取剂1及提取剂2(液体20.0 mL) 后,漩涡混合后于40℃振摇或超声30min,于6000 r/min离心5 min;5.1.2衍生化:取出5.1.1中上清液10mL于50 mL离心管中,加入衍生化试剂0.3mL及催化剂0.3mL后混匀,于40℃振摇或超声60 min,取出冷至室温。5.1.3净化:将净化柱依次用5mL甲醇、5mL水激活后,加5.1.2中试剂正压或负压以2~3mL/min速度过柱,流净后加10mL蒸馏水洗涤,挤干,弃去流出液,用1mL甲醇以2~3mL/min速度洗脱,接收全部洗脱液,用蒸馏水定容至2mL,过0.25µ m滤膜,进样分析。 5.2绘制标准工作曲线移取SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD混和标准溶液,在10mL提取剂2中添加0.5µ g/kg、1µ g/kg、2µ g/kg、5µ g/kg标准工作溶液,按5.1测定步骤处理,样液用高效液相色谱仪-串联质谱仪测定,得出标准工作曲线。5.3测定5.3.1液相色谱条件a) 色谱柱: Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (100mm×1.0mm i.d., 1.7μm)b) 柱温:35℃c) 样品温度:22℃d)流动相:A5mmol/l乙酸胺+0.2%甲酸 B:甲醇;e)流动相梯度:Time(min)Flow Rate(mL/min)%A%BCurve1.000.30090.010.083.500.30020.080.064.000.30010.090.064.300.30010.090.014.500.30090.010.015.3.2 质谱条件a)离子化模式:正离子API-ES;b)干燥气流量:8.0L/min c) 喷嘴压力:35Pa d)萃取锥孔电压:5.00~5.25Ve) 雾化气温度:400~394℃ f)雾化气流速: 803(L/Hr)g)反吹气流速:45 L/Hrh).离子源温度:120~119℃i) 毛细管电压:2.0~1.97KVj)衍生化物SIM参数,正离子模式化合物驻留时间(min)母离子子离子锥孔电压(V)碰撞能量AMOZ0.050.05324.30280.20,324.30251.2021.021.011.014.0SEM0.100.10198.2138.10198.2181.1022.022.019.012.0AHD0.050.10238.20167.30238.20138.1025.025.017.020.0AOZ0.050.05225.20138.10,225.20125.1030.030.018.019.05.3.2色谱测定根据样液中SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD的含量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD的响应值均应在仪器的检测线性范围内。5.3.3空白实验除不加试样外,按上述测定步骤进行。5.4结果计算用色谱数据处理机或按式(2)分别计算供试样品中的SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD残留量。 nci×Vω= …… (2)20mn—为提取样液上清液体积数;20—液体提取剂体积数;ω-样品中SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD残留量,μg/kg;ci -标准曲线上查出试样溶液中SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD标准工作溶液的浓度,μg/L;V-最终定容体积数,mL;m-供试试料样品重量,g。6、测定低限、回收率6.1检测限本方法SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD的检测限均为0.5μg/kg。6.2回收率本方法SEM 、AOZ 、AMOZ 、AHD回收率为:85%~105%另有四环素类、沙星类前处理方法,前处理时间30min,磺胺类前处理方法,水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的快速测定方法,已申请行标SN/T1768-2006。有需要的可以试验下,提供样品,请联系010-52029409 13810957048张小姐。
核苷类成分含量测定,有鸟苷、尿苷、腺苷,10mmol/L磷酸二氢钠(1%磷酸调pH 2.6-2.7):甲醇(97:3);C18柱,检测波长254nm,25℃柱温当时我把ph调到2.60,样品中(板蓝根注射液)三种核苷类均能很好的分开;今天ph2.61,结果腺苷和鸟苷的保留时间均延长了3min左右,而且样品图谱中鸟苷的峰与其它峰合并在一起了。想来想去其它的条件都是一样的,唯独pH不同,是不是核苷类真的对ph敏感?