小鼠直肠平滑肌细胞

本司产品仅用于科研，不用于临床诊断和治疗

1.产品名称：小鼠直肠平滑肌细胞

2.组织来源：直肠组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

4.细胞简介：

小鼠直肠平滑肌细胞分离自直肠组织；直肠为大肠的未段，位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以肛门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位，最下端变细接肛管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式；肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。

意事项如下：

（1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强对无菌操作的观念，以预防为主，一旦污染，通常难以消除。

（2）培养基：所使用的培养基必须满足细胞存活和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养基的要求也会有一定差异，必要时可通过预实验选择适宜的培养基。

（3）小牛血清：小牛血清对于维持培养细胞的存活和促进细胞增殖起着至关重要的作用。可以选择多个不同批次的小牛血清进行小样分析。一旦确定了某一厂家某一批次的小牛血清，就应坚持使用至实验结束。

（4）胶原酶溶液：必须新鲜配制，贮存时间过长（即使是低温保存在-20℃），也会影响消化效力，导致消化时间过长，增加细胞损伤。

（5）L-谷氨酰胺：几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的需求，细胞需要谷氨酰胺来合成核酸和蛋白质，缺乏谷氨酰胺会导致细胞生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中不太稳定，在4℃冰箱贮存两周以上时，应重新加入相同量的谷氨酰胺。

（6）静置培养：原代细胞在消化分离后，放置于CO2培养箱的前24～48h（必要时达到72小时）内，应处于绝对静止状态，切忌频繁取出培养瓶观察生长情况，这会使原代分离细胞难以附着于壁面，更谈不上伸展和增殖。

（7）消化时间：通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已松散，稍加吹打即可形成细胞团或单个细胞，过长的消化时间往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。

（8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养都可以成功。对于少数特殊类型的细胞，也可以考虑添加一些特殊的生长因子，例如胰岛素可以促进细胞对葡萄糖和氨基酸的摄取。此外，内毒素、EGF、FGF等也具有促进有丝分裂的作用，但费用较高。

原代细胞培养具体步骤如下：

1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3、处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。

4、剪切：用眼科剪把组织切成2-3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。

5、消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500-1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2-7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8、培养：置于37℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。

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