热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)

热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)

商品属性：

 产品介绍：

描述：

热 敏 双 链 DNA 特 异 性 核 酸 酶 (Heat labileds-DNA-specific Nuclease ，又名 ezDNase 或 HLdsDNase)，为双链特异性核酸酶。其特异性的识别降解双链 DNA，对单链 DNA 或 RNA 几乎无活性，其降解 dsDNA的能力比 ssDNA 高~5000 倍。除此外，该酶降解双链 DNA的能力比 bovine DNaseI 高~30 倍，因此特别适用于去除RNA 样品中的基因组 DNA 污染。该热敏型双链 DNA 核酸酶可将 DNA 降解为 2~8bp 的产物，且 55℃ 5min 可使该酶不可逆失活，同时又能保持 RNA 和 ssDNA 的稳定性。除此外，本酶适合于，对基因组样品进行酶法片段化反应。
储存：-20℃ 可保存 3 年。
活性定义： 1 单位指 25°C 条件下 15min 将 10μg 基因组DNA 消化至 80%的产物<500bp，所需的酶量。  

注意事项：

（1）1×dsDNase Buffer：20mM Tris-HCl pH8, 5mM MgCl2。该酶需要 1~5mM MgCl2。
（2）该酶对 K+敏感，反应体系中推荐 K+浓度低于 40mM。
（3）通常在 RT 反应中的用量为 0.1~0.5U/20 μl 体系。
（4）任何浓度的 SDS、盐酸胍均抑制该酶活性。
（5）该酶的最佳反应温度为 25~37℃，42℃ 30min 后活性损失 70%。
使用实例 1（对基因组 DNA 进行片段化反应）
1. 按以下组分配制反应体系
基因组 DNA 10 μg
10×dsDNase Buffer 2.5 μl
HL dsDNase (2 U/μl) 0.5-1 μl
Rnase Free H2O Up to 25 μl
2. 室温 25°C 孵育 15min，55~65°C 5min 加热失活。
使用实例 2（基因组 DNA 的去除）
1. 按以下组分配制反应体系
基因组 DNA 1 μg
10×dsDNase Buffer 2.5 μl
HL dsDNase (2 U/μl) 1 μl
Rnase Free H2O Up to 25 μl
2. 室温 25°C 孵育 30min，55~65°C 5min 加热失活。此时
基因组 DNA，通常 90%以上的产物被消化至<15bp

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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