全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒

全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒

商品属性：

 产品介绍：

保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。RNase A 建议-20℃长期保 存。
产品介绍：
独特的结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组 DNA 在 高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的 步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲 液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1.重复性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.提取纯度高，OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
3.简单快速，一小时内即可获得超纯的基因组 DNA。
4.广泛:适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。

注意事项：

1.结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

 2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
 3.结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保批 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
自备试剂：无水乙醇
操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
如果需要去除 RNA，可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液振荡 15sec，室温放置 5 min1.处理材料
a. 血液
如提取材料为血液，可直接使用220μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足220µl用缓冲液BB补足220µl，振荡混匀后，直接进行下一步骤。
注意：如需处理更大体积血液，如300μl-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10,000rpm离心1min（若离心机最高转速不允许，也可3000rpm离心5min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加220μl缓冲液BB，振荡至彻底混匀。10×红细胞裂解液(SH406-01)本公司另外有售，可根据需要来决定购买。（10× 红细胞裂解液使用ddH2O稀释成1×使用。）
b. 禽类等血液
如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5-20μl，可加缓冲液 BB 补足 220μl 后进行下面的步骤。

c. 贴壁培养的细胞
贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000rpm 离心 1min，弃上清，加 220μl缓冲液 BB，振荡至彻底悬浮；
d. 动物组织取 20-50mg 动物组织在液氮中研磨成细粉，或用解剖刀切成微小碎块后，转入离心管中，加入 180μl 裂解液 TL 后，涡旋振荡混匀。
2.提取基因组DNA时为清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振荡混匀，室温放置5 min。
3.加入20µl蛋白酶K，振荡混匀，置于55℃水浴中消化处理。
a. 提取血液基因组时，只需加入蛋白酶K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入蛋白酶K混匀，即可继续进行下一步。
c. 提取组织基因组时，加入蛋白酶K混匀后，在55℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜），不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
4.加入220μl结合液CB并充分混匀后，置于70℃水浴10 min，等溶液变清亮，12,000rpm 短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入结合液CB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
5.加入220µl的无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中12,000rpm 离心30sec，倒掉废液，将吸附柱AC放回收集管中。
7.加入500µl抑制物去除剂IR，12,000rpm离心1min。倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。
8.加入500µl漂洗液WB，12,000rpm离心30sec。（使用前请检查是否已经加入无水乙醇）倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。
9.重复步骤8的操作。
10.将吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液。将AC吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11.在吸附膜的中间部位加 50-100μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好），室温放置 2-5min，12,000 rpm 离心 1min。为了提高基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置 2-5min，12,000rpm 离心 1min。
注意：DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。  

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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