全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1032-100 次 | 100 次 | 全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒 |
P-PR1032-100 次×2 | 100 次×2 | 全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒 |
产品介绍:
保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。RNase A 建议-20℃长期保 存。
产品介绍:
独特的结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在 高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的 步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲 液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.重复性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.提取纯度高,OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,可直接用于 PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
3.简单快速,一小时内即可获得超纯的基因组 DNA。
4.广泛:适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。
注意事项:
1.结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
3.结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保批 pH 大于 7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
自备试剂:无水乙醇
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
如果需要去除 RNA,可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液振荡 15sec,室温放置 5 min1.处理材料
a. 血液
如提取材料为血液,可直接使用220μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足220µl用缓冲液BB补足220µl,振荡混匀后,直接进行下一步骤。
注意:如需处理更大体积血液,如300μl-1ml,应按以下步骤操作:在样品中加入3倍体积红细胞裂解液(例如,300μl血液加入900μl红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置5 min,期间再颠倒混匀几次。10,000rpm离心1min(若离心机最高转速不允许,也可3000rpm离心5min,吸去上清,留下白细胞沉淀,加220μl缓冲液BB,振荡至彻底混匀。10×红细胞裂解液(SH406-01)本公司另外有售,可根据需要来决定购买。(10× 红细胞裂解液使用ddH2O稀释成1×使用。)
b. 禽类等血液
如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5-20μl,可加缓冲液 BB 补足 220μl 后进行下面的步骤。
c. 贴壁培养的细胞
贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后 10,000rpm 离心 1min,弃上清,加 220μl缓冲液 BB,振荡至彻底悬浮;
d. 动物组织取 20-50mg 动物组织在液氮中研磨成细粉,或用解剖刀切成微小碎块后,转入离心管中,加入 180μl 裂解液 TL 后,涡旋振荡混匀。
2.提取基因组DNA时为清除RNA,加入5µl RNase A(10mg/ml),振荡混匀,室温放置5 min。
3.加入20µl蛋白酶K,振荡混匀,置于55℃水浴中消化处理。
a. 提取血液基因组时,只需加入蛋白酶K混匀,即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时,只需加入蛋白酶K混匀,即可继续进行下一步。
c. 提取组织基因组时,加入蛋白酶K混匀后,在55℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。
注意:不同组织裂解时间不同,通常需1-3 h即可完成(鼠尾需要消化过夜),不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。
4.加入220μl结合液CB并充分混匀后,置于70℃水浴10 min,等溶液变清亮,12,000rpm 短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意:加入结合液CB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。
5.加入220µl的无水乙醇,充分振荡混匀15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中12,000rpm 离心30sec,倒掉废液,将吸附柱AC放回收集管中。
7.加入500µl抑制物去除剂IR,12,000rpm离心1min。倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。
8.加入500µl漂洗液WB,12,000rpm离心30sec。(使用前请检查是否已经加入无水乙醇)倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。
9.重复步骤8的操作。
10.将吸附柱AC柱放回收集管中,12,000rpm离心2min,倒掉废液。将AC吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11.在吸附膜的中间部位加 50-100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 2-5min,12,000 rpm 离心 1min。为了提高基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置 2-5min,12,000rpm 离心 1min。
注意:DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。
![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/6c3845b4-40f6-4da9-9255-cd3d60482c38.jpg)
![5.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/e61abc57-2a7c-4156-9260-f14e6ba63934.jpg)
![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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