Bradford 蛋白定量试剂盒

产品名称：Bradford 蛋白定量试剂盒

BCA法蛋白定量试剂盒检测原理是，在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂相互作用，两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫颜色的络合物，该复合物为水溶性，其在562nm处有强吸光性，在一定浓度范围内，吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系。 通过测定562nm的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 BCA法是目前实验室应用最广泛的蛋白质浓度测定方法，BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。 本试剂盒采用牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液。 本试剂盒最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/mL。 本试剂盒测定范围为20～2000 μg/ml，在此范围内有较好的线性。

Bradford 蛋白定量试剂盒，使用注意事项

1.Bradford法对于去污剂敏感的，受高浓度去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BestBio贝博的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

2.染色液使用前请混匀。

3.将G250染色液放置到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

Bradford 蛋白定量试剂盒，操作方法

A． 96孔酶标板测定：

1. 蛋白标准工作液配制：

根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5倍稀释，配成1mg/ml的工作液。

2. 标准曲线绘制。

取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

3. 振荡混匀后，室温放置5-10分钟。

4. 用酶标仪测定A595，以不含BSA的光吸收值为空白对照。

5. 以蛋白含量（g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

6. 样品测定：

将待测蛋白样品用纯水稀释至适当浓度，取10l样品，加入100l 2x Bradford染色液和90l的纯水，混匀后放置5-10分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A595。

【注】：

 必须用纯水补足体积，不能用PBS等buffer。

7. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。

8. 计算蛋白浓度：

以查得的蛋白含量除以样品体积10l，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

B． 比色皿测定

按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。

Bradford 蛋白定量试剂盒，试剂准备

1.纯水 2.生理盐水

Bradford 蛋白定量试剂盒，注意事项

1.蛋白标准品注意防止微生物污染。避免反复冻融。

2.可以根据需要将蛋白标准分装后冻存。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

保存温度2-8℃

保质期1年

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