胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒

产品名称：胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒

产品规格：50T

膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从动物细胞和动物组织提取总膜蛋白。

提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，

阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀

、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒，使用方法

1. 提取液准备：

每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A，充分混匀。

5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。

6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。

8. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。

9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴5-10分钟，37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体，保留下层。

11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。

12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。

13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒，注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

保存温度2-8℃

保质期1年

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