产品名称:金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED)ELISA试剂盒
产品规格:48T/96T
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实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入指标,再与HRP标记的-O-甲基转移酶(COMT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中指标浓度。
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组成:
(1)结合物及标本的稀释液;
(2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(3)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(4)酶的底物;
(5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中);
金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED)ELISA试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/8ac664a1-8f64-427c-845a-62c75c6c0ac7.jpg)
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED)ELISA试剂盒判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/8d441294-b2bb-4f39-9430-1a48efb318fe.jpg)
![白试剂盒.png 白试剂盒.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/ce3d0787-fd7d-4cd3-a47e-cc118f5ca895.jpg)
金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED)ELISA试剂盒准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:*检测浓度小于1.0 ng/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
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