动物组织中甲醛脱氢酶（FDH）活性检测试剂盒 微量法

动物组织中甲醛脱氢酶（FDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 0.25 mL 蒸馏水，充分混匀；用不完的试剂-20℃分装保存两周，避免反复冻融。（1瓶粉剂溶解后可做 100T，为了延长使用时间，此产品多给 1 瓶粉剂）

2、 试剂二工作液：根据试验所需用量，按照试剂二（μL）∶蒸馏水（μL）=1∶29 比例配成工作液，现配现用。试剂二工作液当天配制当天用完。

3、 试剂三：临用前加入 0.6mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂 4℃分装保存两周。

产品说明：

甲醛脱氢酶存在于绝大多数原核生物以及所有的真核生物中，是一种将甲醛进行转换的氧化还原酶。甲醛脱氢酶可催化甲醛和 NAD+产生 NADH，在 340nm 处的吸光值会增加，测定 340nm 处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照动物组织质量（g）：提取液体积（mL）=1∶5~10 的比例（建议称取 0.1 g 动物组织，加入 1 mL提取液），冰浴匀浆，8000 g，4℃条件下离心 10 min；取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤）置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 临用前将试剂一、试剂四置于 37℃预热 10 min。

3、 在微量石英比色皿或96孔UV板中依次加入 20 μL 样本、110 μL试剂一、50 μL试剂二工作液、10 μL试剂三、10μL 试剂四，充分混匀后于 340nm 处测定 20s 时的吸光值 A1，迅速置于 37℃水浴或培养箱 5min（酶标仪有控温功能可将温度调至 37℃），拿出迅速擦干测定 5min20s 时的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

三、动物组织中甲醛脱氢酶活性计算

A、按微量石英比色皿计算

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

FDH酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹÷（V样×Cpr）÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

2、按样本质量计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

FDH酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹÷（V样×W÷V样总）÷T×F=321.54×ΔA÷W×F

ε：NADH 摩尔消光系数，6220 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹ nmol；F：稀释倍数。

B、按 96 孔板（UV 板）计算将上述公式中 d=1 cm 变为 d=0.6 cm，代入公式进行计算即可。

注意事项：

1、如果测定吸光值 A＞1.5 或 ΔA＞0.5，建议用提取液稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低，建议增加样本量后再进行测定。

2、试剂四有毒性，实验时请佩戴口罩手套等防护用具。

实验实例：

1、 称取 0.1 g 小鼠心脏组织，加入 1 mL 提取液，冰浴匀浆，8000 g，4℃条件下离心 10 min；取上清置于冰上待测。使用微量石英比色皿按照测定步骤操作，计算 ΔA=A2-A1=0.6385-0.3807=0.2578，按公式计算小鼠心脏组织中甲醛脱氢酶活性：

FDH酶活（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×F=825.9 U/g 质量

2、 称取 0.1 g 小鼠肝脏组织，加入 1 mL 提取液，冰浴匀浆，8000 g，4℃条件下离心 10 min；取上清稀释 10 倍置于冰上待测。使用微量石英比色皿按照测定步骤操作，计算 ΔA=A2-A1=0.2534-0.1699=0.0835，按公式计算小鼠肝脏组织中甲醛脱氢酶活性：

FDH酶活（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×F=2684.9 U/g 质量

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！