β-淀粉酶活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)微量法

β-淀粉酶（β-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 15mL 试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试

剂 2-8℃保存 8 周；

2、 标准品：10 mg 淀粉标准品。临用前加 10 mL 试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成 1 mg/mL 淀粉标准液。2-8℃保存四周。

产品说明：

 淀粉酶负责水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开 α-1,4 糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

 碘可以与未被淀粉酶水解的淀粉结合，生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL 耐酸，β-AL 不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测得另一种活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：称取约 0.1g 样本，加 1mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，常温离心 10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。（若有浑浊则离心后测定）

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至570nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的标准溶液

3、 按操作表依次加入各试剂：

三、β-淀粉酶活性计算

注意事项：

吸光值大于 1.5 或者 ΔA 大于 0.8 时，可以对样本进行适当稀释后测定。

实验实例：

1. 取约 0.1g 藜叶片进行样本处理，取上清液后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔAα=A5（- A1-A2）=1.065-（0.849-0.220）=0.436，ΔA 总=A5-（A3-A4）=1.065-（0.677-0.197）=0.585，带入标准曲线 y=2.628x-0.0051，计算 x1=0.1678，x2=0.2245，按样本质量计算酶活得：

β-淀粉酶活性(U/g 质量)=0.2×x2÷W-0.2×x1÷W=0.2×0.2245÷0.1-0.2×0.1678÷0.1=0.1134 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！