土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒

土壤 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 4 mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周；

2、 标准品：5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

产品说明：

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min，波长调至400nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂一，充分混匀，配制成100 μmol/L标准液使用，现用现配。（实验中每管需要500μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 加样表：

三、S-NAG 活力计算

单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG活力（U/g 土样）=ΔA测定÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T=1.44×ΔA÷ΔA标准÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：6×10^-4L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W：样本质量，g。

注意事项：

当ΔA大于1时，建议将上清液稀释后进行测定；当ΔA小于0.02时，建议延长反应时间。计算公式中注意乘以稀释倍数或注意反应时间变化。

实验实例：

1、 取两管 0.1g 三叶草土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.509-0.434=0.075，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.604-0.002=0.602，计算酶活得：

S-NAG 活力（U/g 土样）=1.44×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.44×0.075÷0.602÷0.1=1.79402 U/g 土样。

2、 取两管 0.1g 林土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A测定管-A 对照管=0.574-0.497=0.077，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.604-0.002=0.602，计算酶活得：

S-NAG 活力（U/g 土样）=1.44×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.44×0.077÷0.602÷0.1=1.84186 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！