土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒 可见分光光度法

土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 标准品：临用前加入 1.97 mL 甲苯，即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃保存一个月。

2、 工作液的配制：将试剂三临用前加入 20 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。冷却至常温后加入5 mL 试剂二混合，高速震荡 2 次，每次 3min，间隔 5min。可根据该比例现用现配。

产品说明：

脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2、 标准溶液的稀释：取50μL 100μmol/mL油酸标准溶液，加入950μL甲苯，充分混匀，配制成5μmol/mL标准溶液待测，现用现配。（实验中每管需要1mL。）

3、 操作表：取2mL EP管，加入下列试剂

三、S-LPS 活性计算

活性单位定义：37℃中每g土样每天水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

S-LPS (U/g 土样) =ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V甲苯÷T÷W=144×ΔA测定÷ΔA标准÷W

V甲苯：加入的甲苯体积，1.2mL；C标准：标准溶液浓度，5μmol/mL；T：催化反应时间，1/24d；W：样本质量，g。

注意事项：

1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3、当吸光度大于 0.8 时，建议将样本稀释后测量（第二次加入甲苯的量增加）。

4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。

实验实例：

1、 取两管 0.1g 三叶草土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用 1mL 玻璃比色皿测定吸光值，记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.195-0.094=0.101，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.754-0.028=0.726，计算酶活得：

S-LPS (U/g 土样) =144×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=144×0.101÷0.276÷0.1=200.33 U/g 土样。

2、 取两管 0.1g 林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用 1mL 玻璃比色皿测定吸光值，记为 A 测定管、A 对 照 管 。 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.143-0.074=0.069 ， ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白 管=0.754-0.028=0.726，计算酶活得：

S-LPS (U/g 土样) =144×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=144×0.069÷0.726÷0.1=136.86 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！