土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒 微量法

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 15 mL 试剂一充分溶解备用，用不完的试剂 2-8℃保存两周。

2、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准液备用，2-8℃保存两周。

产品说明：

S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

S-NI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 NI 活性成正比。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水、30-50目筛、甲苯（不允许快递）。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min，波长调至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。

3、 标准液稀释表

4、 加样表：

三、S-NI活性计算

注意事项：

1、 如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；

2、 如果吸光值大于 1，可以用试剂一将上清液稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若吸光值较小，可以增加上清液体积或者土样质量进行测定。

实验实例：

1、 取两管 0.1g 林土，测定管加入试剂二 800μL、甲苯 20μL，对照管加入试剂一 800μL、甲苯 20μL，37℃准确水浴 1h 后，煮沸 10min，离心取上清稀释 5 倍，之后按照测定步骤操作，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.191-0.074=0.117，标准曲线：y=5.1864x-0.1698，x=0.055，计算酶活得：

S-NI（U/g 土样）=19.2×x÷W×5（稀释倍数）=19.2×0.055÷0.1×5（稀释倍数）=52.8 U/g 土样。

2、 取两管 0.1g 土样，测定管加入试剂二 800μL、甲苯 20μL，对照管加入试剂一 800μL、甲苯 20μL，37℃准确水浴 1h 后，煮沸 10min，离心取上清稀释 5 倍，之后按照测定步骤操作，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.161-0.086=0.075，标准曲线：y=5.1864x-0.1698，x=0.047，计算酶活得：

S-NI（U/g 土样）=19.2×x÷W×5（稀释倍数）=19.2×0.047÷0.1×5（稀释倍数）=45.12 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！