土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)活性检测试剂盒 可见分光光度法

土壤谷氨酰胺酶（S-GLS）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 6 mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂 2-8℃保存一周；

2、 试剂三：临用前根据样本量按比例（A:B=1:4）配制，现配现用；若发现变色后则不能再使用；

3、 标准品：10 μmol/mL 氮标准液。取 8μL 10μmol/mL 氮标准液，加入 1016μL 蒸馏水，充分混匀，配制成0.078μmol/mL 的标准液待测。（实验中每管需要 400μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

产品说明：

S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率，即可计算其酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、30~50目筛、研钵、甲苯（不允许快递）、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）

三、酶活性计算

单位定义：37℃下每g土壤每天催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。

S-GLS（U/g 土样）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V酶促÷W÷T=1.872×ΔA测定÷ΔA标准÷W

V酶促：酶促反应总体积，1mL；T：反应时间，1/24d；W：土壤质量，g；C标准：标准液浓度，0.078μmol/mL。

注意事项：

1、 当测定吸光值大于 0.7 时，建议将上清液用蒸馏水进一步稀释后测量。计算时乘以稀释倍数。

2、 离心后若上清液仍含有少量杂质，可将上清液再次 10000g，常温离心 10min 去除。

实验实例：

1、 称取两管 0.1g 土样，分别为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用 1mL 玻璃比色皿测定吸光值。计算ΔA测定=A 测定管-A 对照管=0.552-0.116=0.436，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.216-0.005=0.211，计算酶活得：

S-GLS（U/g 土样）=1.872×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.872×0.436÷0.211÷0.1=38.682 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！