糖化酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前取 1 瓶加入 10 mL 提取液,充分混匀后沸水浴直至溶解(约 10min),2-8℃保存 4 周;
2、 标准品:10 mg 无水葡萄糖,临用前加 1 mL 提取液溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用,2-8℃保存两周;
产品说明:
糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称γ-淀粉酶。糖化酶是由一系列微生物分泌的,具有外切酶活性的胞外酶,主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端依次水解α-1,4糖苷键,切下一个个葡萄糖单元,对于支链淀粉,当遇到分支点时,它也可以水解α-1,6糖苷键由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。多应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。糖化酶将可溶性淀粉生成葡萄糖,碱性条件下,葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸共热后生成红棕色化合物,在540nm处有最 大光吸收,在一定范围内葡萄糖的量与反应液颜色深浅成正比,以此测定糖化酶的活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪 、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、研钵/匀浆器,超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。(若有沉淀则离心后测定)
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 2、1.5、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。
3. 吸取 50μL 样本于 1.5mLEP 管中沸水浴 5min 作为对照管的灭活样本。
4. 加样表:
三、糖化酶活性计算
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注意事项:
测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样本用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
实验实例:
1、 取 0.1g 玉兰叶片加入 1mL 提取液冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上,之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测=A 测定管-A 对照管=0.501-0.396=0.105,带入标准曲线 y=0.488x-0.003,计算 x=0.221,按样本质量计算酶活得:
糖化酶活性(U/g 质量)=3x÷W=6.64 U/g 质量。
2、 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上,之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测=A 测定管-A 对照管=1.006-0.858=0.148,带入标准曲线 y=0.488x-0.003,计算x=0.309,按样本质量计算酶活得:
糖化酶活性(U/g 质量)=3x÷W=9.27 U/g 质量。
3、 取兔血清按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测=A 测定管-A 对照管=1.045-0.481=0.564,带入标准曲线 y=0.488x-0.003,计算 x=1.162,按照液体体积计算:
糖化酶活性(U/mL)=3x=3.486 U/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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企业名称
上海博尔森生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310117MA1J4K3L3L
成立日期
2020-09-02
注册资本
100
经营范围
一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)
上海博尔森生物科技有限公司
公司地址
松江区石湖荡镇石湖新路95号
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