酸性木聚糖酶活性检测试剂盒 微量法

酸性木聚糖酶（ACX）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、试剂一：临用前加入 6mL 蒸馏水，4℃保存 3 个月。

2、标准品：10mg 木糖。临用前加入 667μL 缓冲液配成 100μmol/mL 的标准品溶液，2-8℃保存 8 周。

产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖酶（ACX）一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、可调式移液枪、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样本。

2. 酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。

3. 组织样本：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，可见分光光度计蒸馏水调零。

2、 标准品稀释：取20μL 100μmol/mL木糖标准液，加入980μL缓冲液，充分混匀，配制成2μmol/mL的木糖标准液备用，现用现配。（实验中每管需要60μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 样本测定：（在EP管中加入下列试剂）

三、ACX活性计算

注意事项：

吸光度变化应该控制在 0.01~1.5 之间，否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

实验实例：

1、 取 0.1g 草莓加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨，取上清用缓冲液稀释十倍后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A测定=1.432、A 对照=1.317、A 标准=0.515、A 空白=0.103，按样本质量计算酶活得：

ACX 活力（U/g 质量）= 0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2×F = 1.87 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！