β-淀粉酶(β-AL)活性检测试剂盒说明书(DNS 显色法)
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;
2、 试剂二:临用前取取 1 支试剂三加入到 1 瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂 2-8℃保存 4 周;
3、 标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 10 mg/mL 的标准溶液,2-8℃保存两周。
产品说明:
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 样本,加入 0.8mL 蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取 15min,每 5min 振荡 1 次,使其充分提取;6000g,常温离心 10min,取上清液加蒸馏水定容至 10mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准液的稀释:将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078mg/mL的标准溶液。
3. 标准液稀释可参考下表:
4. 取2支EP管分别加入75μL淀粉酶原液和淀粉酶稀释液,沸水浴5min,分别作为α-淀粉酶对照管和总淀粉酶对照管使用。
5. 测定操作表:
三、酶活性计算
注意事项:
测定的吸光值大于1.5时,可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小,可以浓缩淀粉酶稀释液或者淀粉酶原液。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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企业名称
上海博尔森生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310117MA1J4K3L3L
成立日期
2020-09-02
注册资本
100
经营范围
一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)
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公司地址
松江区石湖荡镇石湖新路95号
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