谷草转氨酶(GOT/AST)活性检测试剂盒 微量法

谷草转氨酶（GOT/AST）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：提供 1 个 8 mL 空瓶；临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中，用 2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留的试剂润洗下来，现用现配；

2、 标准品：20 μmol/mL 丙酮酸钠。

产品说明：

谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶（ 2.6.1.1），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT在心肌细胞中含量最 高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、标准曲线的测定：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到相应浓度的标准管

3、在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂

注：0μmol/mL 标准管为空白管。

三、GOT 活性计算

实验实例：

1. 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定管=0.451，A 对照管=0.281，标准曲线 y=0.2817x+0.0211，计算?A=A 测定管-A 对照管=0.451-0.281=0.170，x=（0.170-0.0211）÷0.2817=0.53，按样本质量计算酶活得：

GOT（U/g 质量）=12x÷W=12×0.53÷0.1=63.6 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！