尿酸(UA)含量检测试剂盒 微量法

尿酸（UA）含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 3 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存。2-8℃保存 1 周。（1 瓶粉剂溶解后可做 100T，为了延长使用时间，此产品多给 1 瓶粉剂）

2、 试剂三：临用前加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃可保存 4 周。

3、 试剂四：临用前加入 3 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃可保存 4 周。

4、 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。-20℃可保存 4 周。

5、 试剂六：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃保分装保存，避免反复冻融。-20℃可保存 4 周。

6、 标准品：5 μmol/mL 尿酸溶液。

7、 工作液 A 的配制：用于样本测定管、空白管及标准管的检测，按照试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六=1:1:1:1:2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

8、 工作液 B 的配制：用于样本对照管的检测，按照试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂一=1:1:1:1:2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

产品说明：

技术指标：

最 低检出限：0.00388 μmol/mL

线性范围：0.003906-0.8 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

血清（浆）或尿液：直接检测。若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备：将5μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625μmol/mL的标准溶液备用，具体稀释可参考下表。

3. 操作表：(在1.5 mL离心管/96孔板中)

三、UA 含量计算

1. 标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。

2. UA含量的计算：

（1）按样本质量计算

UA含量（μg/g 质量）=x×V提取÷W×M=168x÷W

（2）按液体体积计算

UA含量（μg/mL 血清（浆）或尿液）=x×V样÷V样×M=168x

V提取：提取液体积，1mL；W：样本质量，g；M：尿酸分子质量，168；V样：加入的样本体积，0.05mL。

注意事项：

1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2、工作液A与工作液B，需根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完。工作液本身淡黄的，如有变色，则视为失效，需重新配制。

实验实例：

1、 取 0.1g 大鼠肾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA测定=A 测定管-A 对照管=0.591-0.347=0.244，带入标曲 y=1.7648x+0.0127，计算 x=0.131，按样本质量计算含量得：

UA 含量（μg/g 质量）=168x÷W=168×0.131÷0.1=220.08 μg/g 质量。

2、 取鹅血清后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.217-0.093=0.124，带入标曲 y=1.7648x+0.0127，计算 x=0.063，按液体体积计算含量得：

UA 含量（μg/mL 血清）=168x =168×0.063=10.584 μg/mL 血清。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！