还原糖含量检测试剂盒 微量法

还原糖含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

标准品：10 mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用，4℃可保存 2 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

产品说明：

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样本中还原糖的量。

技术指标：

最 低检出限：0.0616 mg/mL

线性范围：0.1-0.6 mg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机，可调式移液器、超声破碎仪，微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。

2、 组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。

3、 血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。

二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL。

3. 标准品稀释表

4. 在 EP 管中加入下列试剂：

三、还原糖含量计算

注意事项：

1. 每个测定管需设定一个对照管。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！