食油假单胞菌的培养方法与操作流程及注意事项！

                   食油假单胞菌的培养方法与操作流程及注意事项！

食油假单胞菌是Pseudomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为与其它菌复配后用于驱油。

一、菌种简介

平台编号：Bio-52848

规格：冻干物

拉丁属名：Pseudomonas Oleovorans

菌株名称：食油假单胞菌

属：Pseudomonas

原产地：中国

模式菌株：非模式菌株

其它编号：NCIMB6576=ATCC8062

培养基编号：2

培养温度：25℃

用途：检测抗菌防腐剂抗生物降解作用测试

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、形态特征

食油假单胞菌，G染色阴性，短杆， 0.40.6×1.22.0μm，极生鞭毛，氧化酶、接触酶阳性，明胶液化、淀粉水解阳性，硝酸盐水解阳性，反硝化阴性，41℃生长。可利用多种底物产酸，在液蜡、豆油、菜籽油、色拉油等多种脂肪中可产大量糖脂表面活性剂。

三、培养方法

菌种经人工传代保藏过程中,由于自发突变而引起特性变弱或消失往往为菌种衰退。使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性,称为菌种复壮。常用方法有:

①分离纯化：将菌种接种至营养肉汤培养基培养24小时,取菌液在营养琼脂平板上分区划线,培养后挑取典型单个菌落。产品仅用于科研实验

②宿主复壮：将退化菌种接种到相应昆虫或动植物宿主体内,传种数代可恢复其原有的特性与毒力。

四、操作流程

菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)

1)所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:

cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名。

2)隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h

菌种鉴定:(48h后观察结果)

五、保藏条件

斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请在-20°C 保存。

六、注意事项

1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；若直接接种液体培养基，则试管液体以不超过 5ml 为宜）；经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；

7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

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