小鼠膀胱成纤维细胞提取物的知识背景与应用研究！

                  小鼠膀胱成纤维细胞提取物的知识背景与应用研究！

一、背景

小鼠膀胱成纤维细胞提取物分离自小鼠膀胱成纤维细胞，小鼠膀胱成纤维细胞分离自膀胱组织；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。

肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。

成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。

30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。

二、应用

小鼠膀胱成纤维细胞提取物可用于腺苷通路在膀胱出口梗阻所致膀胱纤维化的机制研究：

通过对大鼠膀胱出口梗阻导致的膀胱纤维化模型进行研究,初步探讨腺苷通路在膀胱逼尿肌纤维化过程中的作用机制。方法：体重约150g的健康wistar大鼠24只,随机分为4组每组6只：空白对照组、假手术组、膀胱纤维化组、膀胱纤维化+茶碱干预组。假手术组仅做下腹部正中切口及分离膀胱颈部,不行膀胱出口结扎。

茶碱干预的开始时间为手术后天(剂量为10mg/kg/d),干预时间为6周。用免疫组织化学法和实时荧光定量(Real-Time PCR)的方法检测膀胱组织中纤维化相关指标：Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及与腺苷代谢密切相关的胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表达以及变化,并进行统计学分析,观察各组之间表达的差异。

结果：空白对照组和假手术组Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比膀胱出口梗阻组的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β(TGF-β)表达上调、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表达下降并且差异有统计学意义(P<0.05)。与膀胱出口梗阻组相比茶碱干预组的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达下调、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表达上升差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：

1、膀胱出口梗阻后膀胱组织中TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达增加,CD-73表达下调。

2、腺苷受体阻断剂茶碱可以抑制膀胱出口梗阻后导致的TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达。

3、CD-73mRNA的表达下调可能和腺苷的反馈调节机制有关。

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