非典型韦荣菌的菌株培养与实验内容及保存方法!
一、菌种简介
平台编号:Bio-115883
规格:冻干物
拉丁属名:Veillonella Atypica
中文名称:非典型韦荣菌
拉丁名称:Veillonella atypica
来源历史:ATCC
收藏时间:2021-01-13 00:00:00.0
原始编号:ATCC 17744
原产国:美国
模式菌株:是
生物安全级别:一级
其它保藏中心编号:ATCC 17744
培养基编号: 207
培养温度:37℃
培养时间:24-48
需氧类型:专性厌氧
保存方法:冷冻干燥管保藏
用途:研究
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)
保藏条件:安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。活化好的菌种要放厌氧环境下保存。
二、培养基
培养基一:强化梭菌培养基 RCM+1.5%(60%乳酸钠)
培养基二:培养基:1053# +1.5%(60%乳酸钠)
胰蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 葡萄糖 5g
氯化钠 5g 酵母膏 3g 乙酸钠 3g
可溶性淀粉 1g L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g 琼脂 15g
PH 6.8
三、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
四、保存方法
1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。
2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
3、悬液保存法:
(1)蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
(2)糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
4、载体保存法:土壤保存法;砂土保存法;硅胶保存法;磁珠保存法;麸皮保存法;纸片(滤纸)保存法。
五、注意事项
1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板,操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养;若需接种液体培养基,制作培养液时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气);
2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;
3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;
4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;
5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;
6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。
7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到后 2 个月内联系,逾期不予受理;
8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。
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