人胚胎干细胞HESCs的用途与培养及注意事项！

                   人胚胎干细胞HESCs的用途与培养及注意事项！

人胚胎干细胞（human embryonic stem cell，hES）是一种源于人囊胚内细胞团，经体外分离、培养获得的原始多能干细胞。

一、细胞简介

平台编号：Bio-129453

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：HESCs

细胞名称：人胚胎干细胞hESCs

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6：1x10^6

保存温度：37℃：-198℃

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途限制：仅供科研1类

培养体系：干细胞专用培养基

培养温度：37℃

二氧化碳浓度：5%

简介：人胚胎干细胞hESCs取自女性供体，贴壁培养。

注释：倍增时间39h

用途：细胞系

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞用途

人胚胎干细胞的分离和体外培养成功具有极其重要的研究和临床应用价值，其可用于体外研究人类胚胎发生发育的过程，有助于理解分化发育的机制、认识生命和疾病的现象。通过对人胚胎干细胞体外分化和定向分化的研究，将其用来修复或替换丧失功能的组织和定向分化的研究，可识别某些靶基因，为人类新基因的发现及其功能的研究提供新方法。人胚胎干细胞最为深远的潜在用途是通过定向分化诱导产生各种特化的细胞和组织，将其用来修复或替换丧失功能的组织和器官，从而治疗许多疾病，如帕金森病、老年痴呆症、脊髓损伤、脑卒中、烧伤、心脏病、糖尿病、白血病、骨关节炎等。经过遗传工程改造的人胚胎干细胞，还可为人类疾病的基因治疗开辟更广泛的应用前景。在生物学特征上，人胚胎干细胞具有哺乳动物胚胎干细胞的共性，也有·一定的特性。

三、细胞接受后处理方法

1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3)弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

四、细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。  

3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为类；

1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

五、验收细胞注意事项

1、收到细胞后，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。

2、收到细胞后，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。

3、收到细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。

4、收到细胞后如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。

特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。

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