小鼠肾小球系膜细胞的背景与概述及应用！

              小鼠肾小球系膜细胞的背景与概述及应用！

一、背景

小鼠肾小球系膜细胞分离自肾小球组织采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。

在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用(hyperfiltration)的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。肾小球系膜是位于肾小球毛细血管袢之间的一种特殊间充质，由系膜细胞和系膜基质组成。

肾小球系膜细胞是肾小球内非常活跃的细胞，具有分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和清除大分子物质及类似平滑肌细胞收缩的功能。肾小球系膜细胞增生和基质的过多产生是多种肾小球肾炎的主要病理表现。肾小球系膜细胞的培养是研究系膜扩张、瘢痕形成和肾小球硬化的理想方法。

系膜细胞的主要作用可能有：①收缩作用，入球小动脉和出球动脉的收缩作用受系膜细胞的调节，以影响毛细血管袢的内压和滤过率；②支持作用，它填充于毛细血管袢之间，支持毛细血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜内的大分子物质和蛋白质；④分泌肾素，在肾缺血或免疫复合物沉积时，系膜细胞增生且分泌肾素。

二、应用

用于HMGB1在狼疮性肾炎肾小球系膜细胞增殖中的作用及机制研究：

以狼疮性肾炎（lupus nephrits,LN）模型MRL/faslpr小鼠和小鼠系膜细胞为研究对象，探讨高迁移率族蛋白（high mobility groupprotein B1,HMGB1）及其相关信号通路在狼疮性肾炎肾小球系膜细胞增殖中的作用及其可能作用机制，并应用电穿孔技术进行小鼠活体转染，观测敲低HMGB1及其相关信号通路因子的表达对小鼠肾脏损伤和肾功能改善情况，为狼疮性肾炎的病因研究和靶向治疗提供依据。

方法：1、检测HMGB1，PCNA和TLR2在MRL/faslpr小鼠肾组织的表达28周龄雄性MRL/MPJ小鼠和MRL/faslpr小鼠（体重：45-55g）各8只，分别设为对照组（Control组）和狼疮性肾炎组（LN组）。

留取24h尿液及内眦动脉取血后处死小鼠，取肾脏皮质，部分置于4%多聚甲醛固定，用于光镜检测；部分置于液氮保存，用于冰冻切片和肾小球目的蛋白及RNA水平检测。常规病理染色技术观察肾小球形态结构；免疫荧光技术和Western blot检测肾皮质HMGB1、PCNA和TLR2蛋白的表达；

显微切割技术提取肾小球组织，Real-time PCR检测肾小球HMGB1、PCNA和TLR2mRNA的表达；雷诺RT-9600半自动生化分析仪检测Scr、BUN和24h蛋白尿生化指标。

2、敲低MRL/faslpr小鼠肾皮质HMGB1的表达对小鼠肾脏增殖水平及肾功能的影响⑴以小鼠系膜细胞为研究对象，脂质体介导向细胞内转染shHMGB1质粒，Western blot和Real-time PCR检测shHMGB1质粒对小鼠系膜细胞HMGB1蛋白及mRNA表达水平的抑制作用。