苹果炭疽菌的病原特征与流行规律及防治方法！ 一、知识简介苹果炭疽病又名苦腐病、晚腐病，是由小丛壳属侵染所引起的、发生在苹果上的一种病害。主要危害果实，接近成熟的果实受害最重，也可侵害果苔和枝干。主要以菌丝在僵果、果苔、病枯枝等部位越冬。 苹果炭疽病在世界上所有气候温暖湿润、适宜种植苹果的国家和地区都有发生。苹果炭疽病是中国各苹果产区普遍发生的一种主要为害果实的病害。以夏季高温多雨地区发病较重，发病后果实腐烂，流行年份病果率达30-60%，对苹果品质和产量均有很大影响。 苹果炭疽病的防治方法以农业防治和化学防治为主。首先加强管理，提高果树抗病能力；其次是铲除病源，同时要给果实套袋；最后适时用药。  二、产品信息平台编号：Bio-24525 规格：培养物 拉丁属名：Glomerella Cingulata 中文名称：胶孢炭疽菌拉丁属名：Glomerella种名加词：cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk收藏时间*：2005-8-30来源历史：山东莱阳农学院转原产国：中国资源归类编码：15151528101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：在PDA培养基上生长良好。无子实体产生。ITS鉴定显示该菌株与围小从壳的相似性达99％，故该菌株鉴定为围小从壳。生物危害程度：四类寄主中文名称：苹果致病对象：植物致病名称：植物病原菌分离基物：苹果果实采集地区：山东诸城培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：26--30资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、病原特征1、形态特征苹果炭疽病的病原在有性态为小丛壳属（Glomerella ciningulaia (Stonem.) Spauld. et Sch.），属子囊菌亚门、小丛壳属。子囊壳产生在菌丝层上或半埋于子座内，壳壁有毛，没有侧丝，子囊孢子单细胞，无色。无性态为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz.et Sacc.），属半知菌亚门、炭疽菌属。分生孢子盘埋生于寄主表皮下，枕状，无刚毛，成熟后突破表皮。分生孢子梗平行排列成一层，圆柱形或倒钻形；分生孢子单胞、无色，长圆柱形或长印网形。 2、生理特性病菌繁殖的温度为15-40℃，最适温度为28℃；形成分生孢子的适宜温度为25-28℃，相对湿度为80%以上；分生孢子萌发最适宜温度为28-32℃，相对温度在95%以上，此时分生孢子接触果面5小时即可侵入果肉，10小时大部分病菌完成侵入过程。 3、寄小丛壳属病菌除为害苹果外，还可侵染海棠、梨、葡萄、桃、核桃、山楂、柿、枣、栗、柑橘、荔枝、杭果等多种果树以及刺槐等树木。 四、为害症状苹果炭疽病主要为害果实；也侵害枝梢和果台，但很少。果实发病初期呈现针头大淡褐色圆形斑点，边缘清晰，病斑迅速扩大后果肉软腐（果肉微苦，与好果肉易分辨），呈圆锥状深入果肉。以后病斑下陷，病斑表面呈现颜色深浅相间的轮纹。当病斑扩大到1-2厘米时，自病斑中心生出突起的小粒点，初为褐色，后变为黑色，呈同心轮纹状排列，逐渐向外扩展，此即病菌的分生孢子盘。当天气潮湿时，黑色粒点突破表皮，溢出粉红色粘液，即病原菌的分生孢子团。一个病斑可扩展到果面的1/3-1/2，并可烂至果心。病果上有一至多个病斑，病斑连片可使全果腐烂，造成果实脱落。果实若在深秋染病，病果腐烂失水干缩，变为黑色僵果，与好果区别明显，长期悬挂技头不落。若采收前病菌侵入果实，贮藏期继续发病。果台发病多自顶端向下蔓延，为害重时抽不出副梢，最后干枯死亡。枝干发病多在病虫枝、枯死枝及生长衰弱枝的基部，发病症状与果实近似，病斑表面同样产生黑色小粒点。后期病皮龟裂脱落，严重时病部以上枝条逐渐枯死。  五、分布范围苹果炭疽病在世界上所有气候温暖湿润、适宜种植苹果的国家和地区都有发生，如中国、美国、澳大利亚、英国、法国、德国、丹麦、保加利亚、荷兰、俄罗斯、巴西、墨西哥、日本、韩国等。  六、侵染循环苹果炭疽病是一种高等真菌性病害，病菌主要以菌丝体在枯死枝、破伤枝、死果台及病僵果上越冬，也可在刺槐上越冬。第2年苹果落花后，潮湿条件下越冬病菌可产生大量病菌孢子，成为初侵染源。分生孢子借风雨、昆虫传播，从果实皮孔、伤口或直接侵入为害。病菌从幼果期至成果期均可侵染果实，但前期发生侵染的病菌由于幼果抗病力较强而处于潜伏状态，不能造成果实发病，待果实近成熟期后抗病力降低才导致发病，该病具有明显的潜伏侵染现象。近成熟果实发病后产生的病菌孢子（粉红色黏液）可再次侵染为害果实，该病在田间有多次再侵染。尤其在7、8月份高温、高湿条件下，病菌繁殖快，传染迅速，即雨水越多、降雨时间越长，发病率越高。晚秋气温降低时发病减少，但感病果实仍继续发病。 七、流行规律（一）发病条件1、气候：病菌潜伏期一般3-13天，最长达40-50天。炭疽病菌在高温、高湿、多雨水的情况下，繁殖快，传染迅速，特别是雨后高温更有利于大流行；晚秋雨少温度低，发病则轻。不同年份发病轻重与当年降雨早晚及雨量大小密切相关，一般降雨早而多的年份发病早而重，干旱年份则轻。 2、栽培管理水平：株行距小、树冠大而枝叶茂密、通风透光条件较差、偏施氮肥、土壤粘重、地势低洼、果园内雨后积水的，发病都重；中耕除草不及时或间作高秆作物的发病也重；果园附近（20-25米内）有刺槐（也侵染炭疽病），能加重发生；树体健壮的发病轻，弱树发病重；日灼果多的树发病率高。 3、品种的抗性：不同苹果品种，炭疽病感染程度差异很大。在现有栽培品种中，以国光、红富士发病最重，金冠、元帅、红星、青香蕉发病轻。 （二）发病特点先在园内形成中心发病株，后逐渐向周围蔓延。病果有分片集中现象，树冠内膛较外部病果多，中部较上部多。  八、防治方法1、农业防治加强管理，提高果树抗病能力注意采用增强树势的措施，如深翻改土，多施有机肥，控制氮肥施用量；防止园内积水，果园行间选种低秆作物或绿肥，或及时中耕除草，降低果园湿度；合理密植，精细修剪，尤其要合理夏剪，以改善果园内通风透光条件；避免用刺槐作果园的防护林。 （1）铲除病源结合冬季修剪彻底清除树上树下的病僵果、干枯枝和病果台，刮除病枯树皮，减少侵染源。发病初期及早摘除病果，清除落果，并集中深埋，减少病源，避免重复侵染。 （2）果实套袋果实套袋可使无病虫的好果率达到90%以上。套袋时间一般在5月中下旬左右。套袋之前先喷1次吡唑醚菌酯2000倍液；套袋以后可喷波尔多液，不喷防治食心虫的药剂。 2、化学防治苹果树发芽前喷3-5°Be石硫合剂、0.3-0.5%五氯酚钠混合液或果康保50-100倍液。实践证明，此法铲除越冬病源、减轻病害发生效果好。 生长季节，特别是发病前及时喷药保护果实是防治该病的重要措施。实践证明，200-240倍波尔多液对该病有控制作用。喷波尔多液必须细致、周到，并加皮胶作展着剂，以提高粘着性，延长药效期。‘金冠’等品种对波尔多液敏感，幼果期用多发生药害或产生果锈，可改喷其他药物。 一般从幼果期开始喷药（寺河山一般在5月中下旬至6月上旬），以后每隔15-20天喷药1次，全年三四次。为防止病菌产生抗药性，可与50%退菌特可湿性粉剂600-800倍液交替使用，防治效果好。前期和后期仍以波尔多液为宜。如喷药后遇雨，未能及时喷波尔多液，雨后可喷退菌特，杀死雨期产生的分生孢子。选用下列任一种，或交替使用，效果也好。如40%多菌灵胶剂800倍+40%毒死蜱1500倍液（5月中旬左右施用，兼治苹果轮纹病、卷叶蛾、红蜘蛛等），或70%甲基托布津800倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍、25%粉锈宁可湿性粉剂1000倍液。为了提高防治效果，在使用上述药剂时，最好加入粘着剂、6501展着剂，以防雨水冲刷降低药效。 贮藏苹果的库房、筐、箱等用50%多菌灵或50%甲基托布津200-500倍液喷洒杀菌，然后每立方米空间用20-25克硫磺加锯屑和10%氯酸钾点燃，密闭熏蒸2天。果实入库前用70%甲基托布津或50%多菌灵300-500倍液浸果1-3分钟。贮藏期最好保持1-2℃的低温。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物实验室常见的温湿度控制要求有哪些？ 百欧博伟生物：实验室温湿度控制的要求因实验的类型和目的而异，以下列举了一些常见的实验室温湿度控制要求： 1、生物实验室 生物实验室通常需要严格控制温度和湿度，以确保实验过程和结果的可重复性和稳定性。在大多数情况下，生物实验室的温度应控制在20°C到25°C之间，湿度控制在40%到60%之间，以维持稳定的生物环境。 2、化学实验室 化学实验室通常需要控制温度和湿度，以确保实验过程和结果的准确性和安全性。在化学实验室中，温度通常应控制在20°C到25°C之间，湿度应控制在40%到60%之间。对于某些实验，如灭菌和无菌实验，需要更高的湿度和温度控制。 3、光学实验室 光学实验室通常需要控制温度和湿度，以确保实验过程和结果的准确性和稳定性。在光学实验室中，温度应控制在20°C到25°C之间，湿度应控制在40%到60%之间。对于某些高精度实验，如干涉仪和激光实验，需要更高的温度和湿度控制。 4、材料实验室 材料实验室通常需要控制温度和湿度，以确保实验过程和结果的准确性和稳定性。在材料实验室中，温度应控制在20°C到25°C之间，湿度应控制在40%到60%之间。对于某些高精度实验，如热分析和热重分析，需要更高的温度和湿度控制。 蠕动泵以其独特的工作原理和特点，在生物制药、医疗实验、食品饮料、化工化学等领域发挥着重要的作用，尤其是在对流体纯度要求较高的场合，以及微量流量控制和高精度液体输送方面，成为了众多行业的标配！尤其是在实验室，蠕动泵更是发挥了举足轻重的作用！ 雷弗蠕动泵流量型及分配型等系列蠕动泵具有只能温控功能，根据环境自动调节散热，让设备始终处于最佳状态！ 综上所述，实验室温湿度控制要求因实验类型和目的而异。实验室管理人员和实验人员需要根据实验需要制定适当的温湿度控制策略，并确保实验室环境稳定和安全。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 刀枪不入的危险细菌：鲍曼不动杆菌的治疗与预防！ 百欧博伟生物：今天，小编要给大家介绍一个大部分人很少听到，但是对身体影响很严重的细菌！ 它虽然懒，毒性又低，却有“刀枪不入”的危险能力，它是让医生都头疼的“细菌Killer”！ 它广泛地存在于大自然中，对多种消毒剂及抗生素具有很强的抵抗能力，是医院感染的主要来源！ 它就是鲍曼不动杆菌！别看这个名字普普通通，但是威力可不容小觑！ 什么是鲍曼不动杆菌？ 鲍曼不动杆菌（学名：Acinetobacter baumannii，俗称：AB菌），又称鲍氏不动杆菌，属于革兰氏阴性菌，是一种严格需氧、非乳糖发酵的条件致病菌，普通培养基生长良好，也可在麦康凯培养基上生长，在血琼脂平板上形成灰白色、圆形、光滑、边缘整齐的菌落。不具鞭毛，移动性不高，但生命力极强，可广泛地存在于大自然中。 鲍曼不动杆菌引发的疾病与危害？ 鲍曼不动杆菌通常会引起菌血症，肺炎，脑膜炎，腹膜炎，心内膜炎，以及泌尿道和伤口皮肤感染。其治疗一直是临床上很大的难题，因为鲍曼不动杆菌极易对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性，对重症患者、ICU病房的患者等威胁很大。CRAB（耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌）、MDR-AB（多重耐药鲍曼不动杆菌）、XDR-AB（泛耐药鲍曼不动杆菌）等的广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。 鲍曼不动杆菌的治疗方法？ 考虑到鲍曼不动杆菌极易对抗菌药物耐药，故用药时应联合用药。常用的方案有β-内酰胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类等。 重在预防 1、加强医务人员专业知识的教育与培训，严格按抗生素使用规范用药，确保抗生素等药物规范、科学使用。 2、严格执行各项消毒灭菌措施。 3、严格按操作规程进行各项医护活动。 4、对易感人群做好保护性隔离。 5、增强易感人群的自身抵抗力、免疫力。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 大鼠肺大静脉平滑肌细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、背景及概述 平滑肌细胞又叫平滑肌纤维，系构成平滑肌的纤维状长细胞。由于平滑肌所分布的部位不同，平滑肌细胞的长度很不一致，在小血管壁上的平滑肌细胞长度仅有20μm左右，妊娠期子宫壁平滑肌细胞可长达500μm，位于一般器官平滑肌细胞的长度约200μm左右，此细胞的宽度在7μm以内。 平滑肌细胞多聚集成束，细胞轮廓不清，需用适当浓度的酸(碱)溶液将其分离，方可获得外形完整的肌细胞。细胞内只有1个细胞核，呈椭圆形或长杆状，位于细胞中段最宽的部分，长度与纵轴平行，核染色质为纤细网状，可见2个以上核仁。 在制作切片标本时，如肌细胞收缩则可变粗，核也随之变粗，甚至可出现螺旋形的扭曲。平滑肌细胞的胞质通常称为肌浆。生活状态下的胞质呈均质性，一般染色切片上不显任何结构。应用特殊染色或用三氯醋酸溶液稍加浸泡，可在胞质内显出纵列的细丝，称肌原纤维。 平滑肌细胞外面包有1层肌膜。每个平滑肌细胞周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维，包绕于肌膜的表面。平滑肌细胞可随环境的改变伸长或缩短，有很大的弹性和韧力。 大鼠肺大静脉平滑肌细胞分离自肺大静脉组织；肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中，把动脉血由肺送回心脏的静脉，是一个静脉里流动脉血的血管。左右1对，共4条，两条连接右肺，两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接，而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位。 肺静脉淤血性肺动脉高压，是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下，肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点，肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力，要维持肺循环的低压、低阻的状态，必须保证整个肺循环系统的畅通无阻，血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉，再入左心室，经过左心室收缩进入体循环，才能避免肺动脉内压力升高。 二、细胞培养 大鼠肺大静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。该细胞参与血管壁炎症反应，保持静脉管腔的通畅，还是多数动脉疾病的靶细胞。 大鼠肺大静脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                构建一个分子生物学试验室需要具备哪些必要的条件？ 百欧博伟生物：分子生物学作为基因工程的上游技能，其试验的效果和准确性将决议下流一切的进程和结尾的试验成果。所以构建一个齐备的分子生物学试验室是十分重要的，以下就让咱们来看看构建一个分子生物学试验室需求哪些仪器。  1、冰箱: 依据药品、试剂及多种生物制剂保管的需求，有必要具有不一样控温等级的冰箱，最常运用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃合适贮存某些溶液、试剂、药品等。-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃合适某些长时间低温保管的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特别的低温处置消化液等的保管。0-10℃的层析冷柜合适低温条件下的电泳、层析、透析等试验。   2、培育箱：37℃恒温箱用于细菌的平板培育及分子生物学试验。   3、恒温培育摇床：用于大肠杆菌等生物工程菌种的扩增。   4、水浴锅：用于保温并进行各类试验。   25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验，各种生物化学酶反响等试验的保温。   含低温的水浴槽能够用于分子生物学的质粒与基因片段的衔接等试验及用于42度的大肠杆菌感受态的热激。   5、烘箱：主用于烘干试验器皿，有些需求温度高些，有些需求温度低些。用于RNA方面的试验用具，需求在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。   6、超纯水机：跟着分子生物学的飞速发展，许多试验对水纯度的需求越来越高，用自来水、蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水，磁铁耦合齿轮泵效果使水循环。用于PCR、PCR氨基酸剖析、DNA测序、酶反响、安排和细胞培育等。   7、蒸汽消毒锅：分子生物学所用大多数试剂，并且试验用具都应严厉消毒灭菌。用于小批量物品的随时消毒。大批试验物品、试剂、培育基可运用大型消毒且守时进行消毒。   8、滤器滤膜：不耐高温、高压的试剂用其处菌。   9、各种天平：台秤、精细电子剖析天平，用于准确称量各类试剂。   10、液体体积的衡量：量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯、锥形瓶　等。   11、pH计：测定溶液中H+的直接电位的仪器，首要经过一对电极，在不一样的pH溶液中发生不一样的电动势用pH值表示出来；   pH试纸：只适用于培育液、酚饱满液、缓冲液或其它试剂溶液的pH值的大略估量。而大多数试剂的制作需求严厉的pH值，需准确度高（小数点后两位）的pH计。   12、分光光度计：光密度、分光光度计是运用物质在可见光和紫外线区域中的吸收光谱来判定该物质的性质及其含量的一种仪器。它是由光源、单色器、吸收池、接收器、丈量外表或显现屏幕所组成。OD值是许多溶液中溶质定量的便利目标之一，经过所发生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值，运用它可进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。OD值也能够作为菌浓的检测目标。   13、高速离心机：最大转速25000 r/m ，最大离心力89000g。有冷冻和常温两种，多用于制备和手搜集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸铵沉淀物以及免疫沉淀物等。   14、超净作业台：内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备，是一种供给部分洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气，经过低、中效的过滤器后，经过作业台面，使试验操作区域变成无菌的环境。   15、电泳体系：电泳技能是检测、判定各种生物大分子的纯度、含量及描绘它们的特征，乃至仍是别离、纯化、收回和浓缩样品的东西之一。   电泳体系分为电源和电泳槽，电源需经稳流经过稳压器，既能供给安稳的直流电，又能输出安稳的电压；水平式电泳槽：通常分为微型电泳槽和大号水平式电泳槽   16、PCR仪：Polymerase Chain Reaction仪，也称DNA热循环仪，基因扩增仪，它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两边，然后酶促组成拷贝数百万倍的靶序列DNA基因片段，它的每一循环包含在三种不一样温度进行的DNA变性，引物复性，DNA聚合酶催化的延伸反响三个进程。需求阐明的是，有些试验室能够还需求梯度PCR仪或实事定量荧光PCR仪来进行一些特别的分子生物学试验。   17、凝胶成像系统：上海kunke凝胶成像系统是一个不错的挑选，检测灵敏度能到pg级（紫外和EB只能到5ng），并且不必紫外和EB，更安全，操作和拍照十分便利。 18、其他设备   （1）微波炉：便于一些溶液的疾速加热和定温加热，电泳琼脂糖凝胶制作、溶化等。   （2）制冰机：用于制作大多数核酸、蛋白质的试验操作所需的低温环境，以削减核酸酶或蛋白质酶的水解。   （3）层析设备：（色谱别离）是一种别离多组分混合物的有用物理办法。   真空印记体系，DNA组成/测序仪：这些都是对核酸进行深入研究的必备仪器。   （4）磁力搅拌器：多角度旋转混匀器、疾速振动混合器：用于混合仪器。   （5）匀浆器：超声安排及细胞破碎器，用其进行样品的别离提纯试验。   （6）通风橱：许多溶剂能逸出毒气，必备柜 ，放射性试验还要有有机玻璃屏蔽。   （7）玻璃蒸馏器、电热加帽、变压器：用于酚等有机溶剂的蒸馏。   （8）Tip头、Eppendorf管：  微管移液器tip头（吸液尖）、Eppendorf管（微量离心管）可洗刷，硅化消毒后重复运用。对一些需求严厉的试验，如RNA的获取、保管等操作，应运用新的消毒tip头与Eppendorf管。别的还应备有常用标准的离心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的细胞培育塑料平板等。   （9）小型设备、用具：   守时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊、惯例的玻璃或塑料器皿（包含平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保管的试剂应运用棕色试剂瓶，如饱满酚、巯基乙醇等）、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、防酸的等）。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                石蜡切片与贴片的制作方法和操作步骤及注意事项！ 百欧博伟生物：以石蜡制作的切片，可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外，石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普通常用的一种方法。 一、切片前的准备 1、恒温水浴，锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。 3、载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。 蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。 4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。 二、切片的步骤 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。 2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。 3、根据需要调整切片厚度。 4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。 5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。 6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。 三、切片的注意事项  1、切片质量的好坏，除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外，切片刀是决定的因素，所以刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起，或将组织划伤出现刀痕，更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在，将使制成的切片断裂、破碎，不完整，切片时应时时擦净刀口。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。在每次更换蜡块时，应习惯地检查一下组织块是否夹紧，切片刀是否稳固，稍有疏忽就会影响切片质量，甚至将蜡块全部切坏，造成不可弥补的后果。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障，最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则可因用力过重而使机身震动，造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时，更应该轻轻切削，以防组织由于震动形成空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，这样不仅可保持石蜡的硬度，同时也减少了切片的褶皱，给切片制作带来方便。 四、贴片  1、将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份时用毛笔，拨正切片位置。如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列应密集、整齐。 3、用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。 4、将附贴好的切片置于60℃恒温箱 内干燥2小时，蛋白质凝固后即可进行染色。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 研究发现生物降解材料的推广使用将成为大势所趋！ 百欧博伟生物：随着人们生活理念的改变，越来越多的人偏好轻巧、便捷的日用品，而塑料具有重量轻、可塑性强、制造成本低、功能广泛等特点，日用塑料制品愈加成为现代社会生活中不可缺少的一部分。 塑料制品人均年消费量往往与所在地经济发达程度相关，发达国家如美国（170kg）、比利时（200kg）等的人均年消费量较高。由于生活习惯、消费理念的影响，发达地区餐饮多以快餐为主，塑料餐饮具为速食餐饮提供了便捷性服务；居家方面，轻便、易移动的塑料家居产品则便于人们对物品进行快速的收纳与整理。近年来，随着中国、东南亚等国家经济的快速增长，人们的消费能力增强，生活节奏加快、消费意识逐渐改变，日用塑料制品的增长空间将进一步扩大。 从产量上分析，2013-2016年我国日用塑料制品产量平稳增长，于2016年达到634.26万吨。自2017年以来，包括“限塑令”在内的一系列法律法规对塑料工业产生了一定冲击，日用塑料制品产量出现下滑。而在2019年，产量大幅上升达到648.64万吨，超过2016年峰值。从内部因素上看，严格的环保政策助力本行业的结构优化，淘汰了落后产能，提升了行业集中度；从外部因素上，快速增长的快餐、团膳和家居市场为日用塑料制品行业带来了巨大需求，对冲了政策监管对产量带来的不利影响。 从需求上分析，我国日用塑料制品行业拥有广阔的市场需求。首先，我国快速推进的城市化进程将加快居民的生活节奏。得益于此，快餐、团膳类行业正处于发展的快车道，对餐饮具的需求量逐步扩大。其次，居民稳步增长的收入水平也使人们在家居生活用品方面的关注点从简单的实用性向兼顾美观与实用性延伸。日用塑料制品成本低廉，轻便美观，替换周期相对较短，与新形势下消费者消费偏好高度贴合，具有持续发展的潜力。此外，随着全球化程度的不断提升和“一带一路”新兴市场的开辟，日用塑料制品的出口规模有望进一步扩大。 从技术水平和竞争格局的角度来看，目前，我国日用塑料制品行业整体集中度较低，厂商众多，技术水平参差不齐，这种情况广泛存在于包括塑料餐饮具、塑料家居在内的行业内各领域。未来，政策和居民环保意识将共同促进行业技术水平的提升，行业产业结构的优化，落后产能将被逐步淘汰，具有领先优势的头部厂商将获得更为有利的发展环境，行业集中度将进一步得到提升。 生物降解塑料制品行业概况 生物降解塑料制品现已广泛应用于餐饮、日常家居、包装等领域当中，其中，塑料餐饮具的较大需求量已成为推动生物降解塑料发展的主要驱动力之一。近年来，国际上多个国家出台了限制传统塑料制品使用的政策，客观上促进了生物降解塑料行业的发展。 部分发达国家及地区对传统塑料制品的限制政策列示如下： 2016年，我国工业和信息化部发布了《轻工业发展规划（2016-2020年）》，进一步鼓励和刺激生物可降解塑料产业：将强化轻工基础能力作为我国“十三五”规划的重点任务，在新材料研发及应用工程中重点发展全生物降解材料及产品；在基础性创新平台及共建工程中注重食品接触塑料制品安全体系建设，并将塑料制品工业作为耐用消费品领域的主要行业发展方向，推动塑料制品工业向功能化、轻量化、生态化、微型化方向发展。同时，“限塑令”等环保法规的落地，也在一定程度上限制了传统塑料制品的生产。根据前瞻产业研究院数据，2018年我国生物可降解塑料总产量达到13.5万吨，同比增长12.5%，与当年塑料总产量下滑形成了鲜明对比。 从市场需求上看，目前生物可降解塑料的国内需求市场主要受政策驱动。但居民日益觉醒的环保意识也将助力市场规模的拓展。前瞻产业研究院数据显示，2018年我国生物可降解塑料需求量为4.2万吨，同比增长13.5%。 前后对比可发现，我国生物降解塑料的产量规模大于国内需求量。在满足国内需求后，剩余的产量主要用于直接或加工成相关终端产品出口至欧洲、北美等国家。欧洲国家居民普遍拥有较强的环保意识且环保政策要求严格，是目前生物可降解塑料最大的区域市场。中国塑料加工业协会指出，未来生物降解塑料行业将持续得到政策的有力支持，塑料行业环保政策趋严和高端化绿色化进程加快将持续为生物降解塑料的发展赋能。随着技术的发展，生物降解塑料制品有望实现成本的下降与性能的提升。生物降解塑料将在我国塑料工业中占据愈发重要的地位。 生物降解塑料行业的发展前景广阔 （1）市场需求扩大，集中度提高 在快速发展的外卖、快递、电商、家居零售等行业的不断推动下，塑料制品行业市场需求将持续扩大，而随着“一带一路”沿线市场的开拓，本行业的出口需求也将进一步增加。此外，技术的进步将为塑料制品开拓更多的应用场景，创造新的需求。随着环保要求趋严、产业结构升级、行业各项标准的制定和完善，低端产品将逐步退出市场，而行业内领先厂商凭借优秀的产品质量和口碑以及丰富的渠道，将进一步巩固其领导地位，行业集中度将进一步增加。未来，随着人们生活水平的全面提高，人们对产品的追求渐渐由物质层面提升到精神层面。对于塑料制品，除了要求实用性和功能性以外，人们将更加关注其在便捷性、健康性、环保性、时尚性、个性化等方面的特点。新的消费观念和消费趋势将进一步推动相关产业的分化，提高优势企业的竞争地位，促进产业集中度的提升。 （2）技术水平提升，产业结构优化 随着“以消费者为核心”经营理念的普及，为应对复杂多变的需求和市场环境，塑料制品行业将持续提升产品性能与质量、持续提升设计和定制水平。行业内厂商将以技术创新为核心驱动力，确保其持续保有市场竞争力。 当前，新一轮科技和产业变革正在孕育，信息技术在工业领域广泛渗透引发发展理念、技术体系、制造模式和价值链的重大变革，协同、智能、绿色、服务等正逐渐成为制造业的核心价值体现，工业互联网、大数据、机器人等将重构制造业技术体系，产品个性化、高端化、小批量、定制生产将是未来制造业新趋势。未来，塑料制品行业将继续推进信息化和工业化深度融合，大力落实“中国制造2025”，推动智能制造，实现生产经营的数字化、自动化、智能化。 （3）环保要求趋严，政策持续助力生物可降解材料制品研发应用 随着环境污染的日益严峻和环保理念的深入人心，我国将持续建立健全相关环保法规，进一步加强对传统塑料的限制以及对塑料制品企业的要求。在短期内，行业的发展会受到一定的影响，但从长远看，这将有利于塑料行业绿色健康规范发展，有利于促进塑料行业的可持续与高质量发展。同时，国家也将持续加大对以生物降解塑料为代表的新型环保材料研发应用的支持。在国家政策与消费观念的促进下，我国生物降解塑料的相关技术与产业将快速发展、应用场景将更加丰富，在塑料工业未来发展中的重要性将持续增加。 生物降解塑料行业具备显著的周期性、地域性、季节性特征 （1）周期性 日用塑料制品属于日常消费品，与人们的日常生活息息相关，需求弹性小，销售稳定性强，在需求上不存在鲜明的周期性。稳定上行的宏观经济态势和国民收入水平将对本行业的发展提供利好。随着未来居民收入水平不断提升，品牌消费意识增强以及广大居民对产品需求的日益增加，行业将保持稳定并无明显的周期性特征。 （2）地域性 我国日用塑料制品行业存在明显的地域性。从生产厂家来看，行业内厂商聚集于广东、浙江、四川、湖北、福建等地区。中塑协资料显示，2018年以上5省份在我国日用塑料制品生产总量中占比超过73%，体现出较高的地域集中性。得益于沿海地域优势，广东、浙江、福建等省份的产品广泛应用于出口。 在消费方面，日用塑料制品属于大众化消费产品，不同地区消费者对此类产品的消费习惯差异并不明显，主要受城市化程度、人均可支配收入等因素影响。在欧美发达国家中，消费者养成了对于塑料餐饮具及家居用品较高的消费习惯与消费水平；在国内，城市化和人均收入水平较高的东部沿海经济发达地区日用塑料制品的人均消费量远高于中西部欠发达地区。未来，随着欠发达地区居民收入水平、生活水平的提升，日用塑料制品行业的消费潜力巨大，具有广阔的发展前景。 （3）季节性 日用塑料制品行业不存在明显的季节性特征。但受消费者消费习惯与产业工人放假影响，在节假日前后，如圣诞节、感恩节、春节、寒暑假等，由于团聚、旅游等带来的对快餐、团膳及其他生活日用品的需求，本行业也会呈现短时间的、相对更旺盛的销售。 生物降解塑料行业竞争格局尚未固定，集中度较低。 我国日用塑料制品行业企业众多，技术与规模差异较大，行业集中度较低，而生物降解材料制品行业则尚处初期，市场参与者较少。以下将从传统日用塑料制品行业和生物降解材料制品行业两个维度对其进行分析。 生物降解材料制品市场竞争格局生物降解材料制品行业尚处于发展的初级阶段，产品成本较高，政策尚未大范围强制推进。但相比传统塑料制品，生物降解材料制品的利润水平更高。目前行业内领先企业具有一定技术积累，正在积极划分赛道并确立领先优势。生物降解材料的制备涉及共混、聚合等多种不同工艺流程，各技术参数的不同将直接影响最终成品的功能指标和可降解性。在当前和未来一段时间内，厂商间的竞争将主要体现在优化产品性能、降低生产成本与开拓营销渠道等方面。 随着各国环保政策的日趋严格和环保意识的提升，生物降解材料的使用与推广成为必然趋势。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   ATCC 7830莱氏曼氏乳杆菌单层冻干管打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-72751 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Lactobacillus Leichmannii 菌株名称：莱氏曼氏乳杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Lactobacillus leichmannii (Henneberg) Bergey et al. 拉丁名(ATCC? 7830?)统一编号Strain Designations 菌株别名 313Application 用途 Assay of vitamin B12 cobalamin, cobalamins Food testing Pharmaceutical and Personal CareBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen（冷冻物）: -80℃ or colderFreeze-Dried（冻干物）: 2℃ to 8℃Live Culture（活物）: See Propagation SectionPreceptrol? noType Strain 模式菌株 noComments 注释 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis is a heterotypic synonyMedium 培养基 ATCC? Medium 416: Lactobacilli MRS Agar/BrothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37℃Atmosphere 需氧情况: 5% CO2Name of Depositor 寄存人 RP TittslerReferences 参考文献   AOAC International Vitamin assays, microbiological method. Gaithersburg, MD:AOAC International;AOAC "Official Methods of Analysis of the AOAC International" 960.46. AOAC International Cobalamin (vitamin B12 activity) in milk-based infant formula, turbidimetric method. Gaithersburg,MD:AOAC International;AOAC "Official Methods of Analysis of the AOAC International" 986.23. Hoffmann CE, et al. Response of Lactobacillus leichmannii 313 to the antipernicious anemia factor. J. Biol. Chem. 176: 1465-1466, 1948.Dietary Supplements: Oil-and Water-Soluble Vitamins with Minerals Tablets. Rockville, MD: U.S. Pharmacopeia; USP USP34-NF29, 2011Cross References Nucleotide (GenBank) : AF496040 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis hypothetical protein gene, partial cds. 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。  五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 六、单层安瓿瓶冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  EMT6 [EMT-6]小鼠乳腺癌细胞的培养操作规程！ 一、产品信息平台编号：Bio-107422 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：EMT6 [EMT-6] 细胞名称：小鼠乳腺癌细胞用途：(种属鉴定正确) 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍EMT6成立的移植小鼠乳房癌的植入BALB / cCRGL鼠标出现增生性乳腺肺泡结节。结果肿瘤行(名为KHJJ)传播在BALB / cKa老鼠和适应组织培养后25日动物通道,和细胞系名叫EMT。EMT6 EMT的克隆分离孤立于1971年在斯坦福大学。 三、细胞特性1）来源：小鼠  乳腺组织2）形态：上皮样 贴壁生长3）量：>1x106  细胞数4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                       六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理1）冻存细胞的复苏将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  指状青霉：主要用于病原菌及可引起柑桔绿霉病 指状青霉是家养/栽培，属于指状青霉属。菌落绒状，暗黄绿色，后变橄榄灰，有特殊的香味；分生孢子梗短，帚状枝大而不规则；产孢瓶体在不同的高度上形成；分生孢子卵形至圆柱形。侵害柑橘果实,引起绿霉病。 一、菌种简介平台编号：Bio-17470 提供形式：斜面培养物英文名称：Penicillium digitatum中文名称：指状青霉属名：Penicillium种名加词：digitatum其它保藏中心编号：来源历史：←中国农科院生防所原产国：中国资源归类编码：15151913115模式菌株：非模式菌株主要用途：a:4:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教学;i:3;s:8:分析检测;}具体用途：病原菌，可引起柑桔绿霉病生物危害程度：四类致病对象：植物分离基物：芦柑采集地：福建永春培养基编号1：13或14资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:3:{i:0;s:14:真空冷冻干燥法;i:1;s:8:矿物油法;i:2;s:10:定期移植法;}共享方式：a:4:{i:0;s:10:公益性共享;i:1;s:16:资源纯交易性共享;i:2;s:12:合作研究共享;i:3;s:14:资源交换性共享;}                  用途：病原菌，可引起柑桔绿霉病 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在定条件下，经过扩大培养成为具有定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。 五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  M109小鼠肺癌细胞系的特点与培养及应用研究！ 一、背景 M109小鼠肺癌细胞系是一种来源于C57BL/6小鼠的肺癌细胞系，属于鳞状细胞癌。该细胞系具有高增殖能力、易形成肿瘤球和转移等特点，被广泛应用于肺癌相关研究。 M109小鼠肺癌细胞系的建立始于1980年代，当时研究人员从一例C57BL/6小鼠肺癌组织中分离出肿瘤细胞，并成功建立了该细胞系。目前，M109细胞系已经成为一种常用的肺癌研究模型，被广泛应用于肺癌的发生机制、肿瘤生物学特性、药物筛选和治疗等方面。 二、M109小鼠肺癌细胞系具有以下特点 高增殖能力：M109细胞系具有较快的生长速度和较高的增殖能力，可以在体外持续传代。 易形成肿瘤球：M109细胞系在培养过程中容易形成肿瘤球，这是一种由单个肿瘤细胞或少数肿瘤细胞聚集形成的球状结构。肿瘤球的形成有助于维持肿瘤细胞的干细胞特性和生长信号通路的激活。 转移能力强：M109细胞系具有较强的转移能力，可以通过血液或淋巴系统转移到其他部位形成转移瘤。 多药耐药性：M109细胞系具有多药耐药性，即对多种化疗药物产生抗性。这使得该细胞系在药物筛选和治疗研究中具有一定的应用价值。 总之，M109小鼠肺癌细胞系是一种重要的肺癌研究模型，具有高增殖能力、易形成肿瘤球和转移等特点。通过深入研究该细胞系，可以为肺癌的发生机制、肿瘤生物学特性、药物筛选和治疗等方面提供重要的实验依据。 三、M109小鼠肺癌细胞系细胞培养操作 1)复苏M109小鼠肺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)M109小鼠肺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)M109小鼠肺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 M109小鼠肺癌细胞系可以用于地塞米松增强FRα介导的环境敏感纳米粒的靶向递送及其抗肿瘤药效评价： 制备一种pH/还原响应性FA功能化胶束,在壳寡糖(Chitosan oligosaccharide,CSO)上接枝FA、还原敏感胆固醇(Reduced sensitive cholesterol,CET)及pH敏感2’3-二甲基马来酸酐(DMMA)得到FA修饰的CET-CSO-DMMA(FCSD)。通过超声法由FCSD材料包载DOX制备pH/还原响应性FA功能化阿霉素(Doxorubicin,DOX)胶束(FCSD/DOX)。 本研究提出一种Dex诱导FRα放大效应及免疫抑制联合FA功能化阿霉素胶束增加对肿瘤杀伤的序贯疗法。在序贯疗法中,一方面,Dex选择性增加M109小鼠肺癌细胞系细胞表而FRα的表达,降低血清免疫球蛋白含量,减弱天然IgM对FCSD/DOX肿瘤靶向性的影响;另一方面,生理条件下FCSD/DOX表面的负电荷在肿瘤细胞外弱酸性(ExtracellularpH,pHc)条件下,电荷翻转,促进FA功能化DOX胶束的摄取,到达胞内后,胞浆内GSH刺激下CET的二硫键断裂,胶束结构破裂,快速释放所包载的DOX。 结果表明,序贯疗法的抑瘤率为81.01%,与单独使用FCSD/DOX相比,对M109小鼠肺癌细胞系抑瘤效果明显增强。因此,我们应重新认识地塞米松和FA功能化NDS联合对FRα阳性肺癌患者的序贯疗法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                微生物立式高压灭菌锅使用时的常见故障及处理方法！ 百欧博伟生物：高压灭菌是实验室常用的灭菌方法，给所需灭菌的物品加100Mpa-1000Mpa的压力作用一段时间，利用高压使细菌失活，从而杀灭物品中微生物。高压灭菌锅广泛应用在各大专院校、医疗卫生、食品化工、生物科研等单位对器械、敷料、器皿、药液、培养基等物品的灭菌处理。 高压灭菌锅根据容量大小不同可分为手提式、立式、卧式三种。本文就立式高压灭菌锅在使用过程中出现的常见故障进行分析并提出相应的故障处理办法及预防措施。 一、立式高压灭菌锅在使用过程中常见的故障 常见的故障有：加热功能失灵、水位器工作异常、联锁灯不亮、漏气、安全阀工作异常、无法正常排气、排液等。 1、仪器使用时，加热功能失灵导致无法正常产生蒸汽。 仪器运行时，面板上加热指示灯亮，但温度指示不上升，一直维持室温状态。 处理方法：打开仪器侧盖，面板显示正常表明220V电源正常进入控制电路。将与加热管连接的电线拆下，用万用表检查加热管电阻，一般阻值在8~15Ω之间，如阻值过大表明加热管内部断路，须更换。由于加热管烧坏是有原因的，所以无论第一步排查出加热管好坏与否，都应检查控制加热管的固态继电器。在通电情 况下，其继电器输入电压应在12VDC左右，输出电压应在220VAC左右。如果输入正常、输出异常，则须更换此继电器；如果输入异常，须检查控制电路上的负载输出控制部分。一般常见的情况就是以上两种。 2、仪器使用时，水位器工作异常。 仪器一开机，控制电路就对水位器进行检查。控制面板上有“高水位”、“低水位”、“缺水”三个指示灯，正常使用时应保持水位在高水位，即“高水位”指示灯亮。如果在加入足量水的情况下水位灯不亮或一直是“缺水”灯亮并报警，则表明水位器工作异常。 处理方法：打开仪器侧盖，先检查水位器与控制电路连线是否松动；用扳手旋开水位器上的旋盖，取出水位器，检查三个探针是否生锈，可用酒精棉进行去锈处理。在通电情况下，将三个探针依次与水位器外部钢管短接，检查控制面板水位指示灯工作是否正常。如正常表明水位器无损坏；反之须检查控制电路上水位控制电路；处理完毕后装好水位器，接通电源，加水检查指示灯。一般主要是由于水位器接线接触不良或探针表面生锈造成工作异常。 3、联锁灯不亮，仪器不正常加热。 联锁灯由仪器上盖处的联锁按钮、联锁杆及联锁控制器串联后与控制电路相连起到联锁保护功能。在仪器上盖关闭情况下，联锁灯不亮表明控制电路无信号输入或电路损坏。 处理方法：在仪器上盖关闭正常情况下，检查联锁按钮及联锁杆下方的控制开关通断情况。正常情况控制开关应串联接通，如异常须更换控制开关；在上述控制开关正常情况下检查联锁控制器。调节控制器旋钮使其内部弹片接触闭合，信号输入控制电路；通常情况下，由于仪器上盖温度高，致使其下方的联锁按钮开关在高温下老化，造成接触不良。 4、仪器漏气，压力无法达到要求。 仪器漏气常见在仪器上盖密封胶圈处。由于密封胶圈老化或上盖旋转造成密封胶圈损坏造成。 处理方法：将密封胶圈取出重新安装，损坏不严重的可涂滑石粉处理；老化或损坏严重的须更换。 5、安全阀工作异常，压力超高无法泄压。 安全阀是高压灭菌锅最后一道保护屏障。在仪器工作异常持续加热使压力大于127MPa时自动跳起泄压，从而保护仪器和操作者的安全。 处理方法：定期在压力为108MPa左右时手动打开安全阀泄压，防止安全阀长时间不用导致锈死；损坏较严重时须由专业维修人员进行更换并重新调试。 6、仪器无法正常排气、排液，导致压力与温度差值较大，无法正常灭菌。 一般自控型立式高压灭菌锅底部均有排气、排液三通阀，无法正常排气会导致仪器压力指示较高易产生危险。 处理方法：打开仪器侧盖，拆卸排水管路及三通阀，进行疏通；锈死严重须更换，并在以后使用过程中定期带压打开排气、排水阀冲击管路；为防止这一问题再次出现，灭菌锅内尽量加入蒸馏水并定期更换（加入蒸馏水一般一周更换两次；加入自来水须一天更换一次）. 二、故障紧急处理步骤 1、仪器异常报警时先检查压力表指示。如超过允许最大压力而安全阀没有跳起，应立即切断电源并将排气阀旋到最大。 2、观察水位指示灯工作情况，如缺水应切断电源并放气至压力表指示为“0”后打开上盖，加水至"高水位"指示灯亮后在接通电源工作。 3、如压力表指示正常应观察联锁指示灯和压力指示灯的工作情况，如异常应记录并上报。 4、控制面板上温度指示异常而压力表指示正常则应调节排气阀旋钮，使其尽量一致。 5、如有不明原因而报警应立即切断电源并上报，同时必须在压力表指示为“0”时才可打开上盖取出灭菌物品，最后通知专业维修人员进行维修。 三、高压灭菌锅使用时的注意事项 1、灭菌完毕后须等到压力表指示为“0”时再打开上盖。当灭菌室有压力时，联锁手柄不能提起，不可强制开门。 2、灭菌液体时不可快速泄压。待液体温度降到70℃以下时，才能开门。禁止灭菌后立即开门。 3、探头、水位计要定期清洗。 4、进汽口不可堵塞；门框、胶圈无损坏，最好每天使用完后在胶条上涂滑石粉，以延长胶条寿命。 5、排水阀每月清洗一次，以利于排冷气，保持温度。 6、使用一年后，每年要请有资格的检测部门做一次全面系统的检查。 7、不能完全依靠自动水位保护，应经常注意水位，以免烧坏电热管。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    产氨短杆菌的菌株培养与注意事项及打管说明！ 产氨短杆菌是Brevibacterium属的微生物，原产地为中国。非运动性，不形成孢子，革兰氏染色阳性。主要用途为研究；教学，具体用途为产L-谷氨酸。  一、菌种简介平台编号：Bio-58348 规格：冻干物拉丁属名：Brevibacterium Ammoniagenes 中文名称：产氨短杆菌属名：Brevibacterium种名加词：ammoniagenes来源历史：←上海市工业微生物研究所(B113) ←中国科学院微生物研究所收藏时间：2005.12.30原始编号：1.846资源归类编码：15131530101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：产肌苷酸。特征特性：肉汁琼脂平板：菌落圆形，平坦，光滑，全缘，灰色，产生微黄色素；不液化明胶；吲哚阴性；还原硝酸盐，发酵尿素形成氨。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：葡萄糖 2.0g，牛肉膏 0.3g，酵母膏 0.5g，玉米浆 0.5g，蛋白胨 0.5g，MgSO4·7H20 0.2g，蒸馏水100ml，琼脂 2.0g，pH 7.0，15psi15min灭菌。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；产肌苷酸。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上培养基三选一即可） 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             人肾上皮细胞接收后的处理方法与培养步骤及注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73527 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：人肾上皮细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：小鼠   乳腺组织2）形态：上皮样 贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。 三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                       五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理1）冻存细胞的复苏将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

            嗜水气单胞菌分离株的鉴定与菌株肠毒素及致病性研究！ 嗜水气单胞菌(Aeromonas  hydrophila,以下简称Ah)广泛分布于污水、池水及河底土壤中,为革兰阴性杆菌,是引起腹泻的新病原菌。关于此菌的感染, 国外有较多报道, 而国内仅见有零星报道。近年来,我们对云南边防部队感染性腹泻进行病原监测,采集腹泻患者粪便标本328份,在分离多种肠道病原菌的同时,从中分离出5株Ah,该菌经镜检、培养、法国梅里埃VITEK32微生物全自动分析仪系统鉴定及电子显微镜下观察予以证实,并对菌株进行了肠毒素及致病性研究，报道如下。　　一、材料和方法　　1、菌株来源 　　从云南边防部队感染性腹泻患者粪便标本中分离。　　2、分离培养 　　将腹泻患者粪便标本接种于SS琼脂平板上置37℃孵箱培养18～24h，挑取可疑菌落进行纯培养。　　3、生化鉴定 　　采用常规法和法国梅里埃VITEK32全自动微生物分析仪NFC卡进行系统鉴定。　　4、电子显微镜检查 　　将分离菌接种普通肉汤培养基,37℃培养18h, 2%磷钨酸(PH6.4)负染制样,用日立－2型电镜检查。　　5、侵袭性测定 　　采用豚鼠角膜试验（Sereny  test）。　　6、肠毒素测定 　　采用乳鼠灌胃法测定热稳定性肠毒素(ST)。　　7、致病力测定 　　15～18g健康小白鼠（购自昆明医学院实验动物中心）雌雄兼用，随机分成试验组和对照组，每组5只，试验组注射Ah肉汤培养物，每只0.5ml,观察小白鼠发病情况，对照组同法注射无菌肉汤，观察7d。　　8、药敏试验 　　采用K-B纸片扩散法。药敏纸片系北京天坛生物技术开发公司产品，在有效期内使用。　　二、结果　　1、生物学特性 　　在SS琼脂平板上经37℃培养24h,其菌落形态为圆形，半透明、边缘整齐、光滑、湿润、微隆、直径1～2mm。菌体形态为革兰阴性杆菌，两端钝圆呈单或呈双排列。在暗视野下观察运动极为活泼，在电子显微镜下可见极端鞭毛（见图1）。　　2、系统生化鉴定　　VITEK32全自动微生物分析仪NFC卡系统鉴定结果见表1。表1 分离的嗜水气单胞菌生化特征试验项目结果 　　3、侵袭力测定 　　豚鼠角膜试验阴性。　　4、肠毒素测定 　　经乳鼠灌胃试验测试，分离的5株Ah肠/体之比均大于0.083,分别是0.091、0.105、0.087、0.123、0.096。证明产生较强的热稳定性肠毒素（ST）。　　5、致病力测定 　　5株分离菌肉汤培养物分别腹腔注射小白鼠后，均在24h左右发病，表现为弓背、耸毛、运动迟缓、食欲不振，双眼半闭、呼吸急促等症状，72h内相继死亡。解剖死亡的小白鼠，发现肠水肿，肠腔积液等，取肠内容物培养，仍获原感染菌。注射无菌肉汤的对照组观察7d无不良反应。　　6、药敏试验 　　在所试的12种抗菌药物中 ，对9种敏感，1种中度敏感，3种耐药，见表2。表2 分离的嗜水气单胞菌药敏试验结果抗菌素纸片含量（略）注：S: 敏感； MS: 中度敏感； R：耐药。　　三、讨论　　1、Ah是气单胞菌属中的细菌之一，该菌广泛存在于水环境中，是一种人—畜—水生动物共患病病原菌。此类菌致病性决定于某些菌株的侵袭力、热稳定性肠毒素和不稳定性肠毒素，该毒素和溶血素为气单胞菌类主要致病因子。该分离菌侵袭力测定为阴性，产热稳定性肠毒素（ST），致病性测定有较强的致病力，与临床症状密切相关。我们从边防部队腹泻病人粪便标本中分离出5株Ah，患者的主要临床表现是：类似急性胃肠炎，症见腹泻、呕吐、腹痛，无发热。Ah不仅感染动物，而且也是引起人类腹泻的新病原菌。由于条件所限，未做不稳定肠毒素和溶血素测试。目前，国外已将Ah纳入腹泻病原菌的检测范围。　　2、气单胞菌属的细菌通常不产生赖氨酸脱羧酶，但与致病性有关的气单胞菌赖氨酸脱羧酶阳性率较高，如本次分离的5株Ah赖氨酸脱羧酶均为阳性。对Ah的研究，国内很少有人用电子显微镜观察其菌体形态，我们使用了较先进的电镜对分离的Ah进行观察，有助于对菌体结构的认识。使用先进的VITEK32全自动微生物分析仪对其菌株进行鉴定，具有快速、省事、省力且结果准确等优点。由于Ah的生化特性与肠干菌科、弧菌属、邻单胞菌属较为相似，没有先进设备的基层单位，可利用氧化酶试验、粘丝试验、鸟氨酸脱羧酶和甘露醇、肌醇发酵等反应来鉴别。腹泻病原感染因子的研究在临床治疗上具有重要意义，不同细菌的感染因子所需的首选药物不尽相同，我们做的药敏试验，筛选出敏感、中度敏感、耐药三类药敏谱，对指导部队和地方今后治疗Ah的感染具有重要的指导意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    工作环境中的霉菌超标及污染来源与防治方法！ 食品生产车间霉菌超标怎么处理？ 食品加工过程中“微污染源”很多，如何防止食品被污染乃是一重要课题。霉菌作为为微污染源中的一种，如果不加以控制势必会影响到食品保质期的长短。 那又如何控制霉菌污染食品呢？ 杀菌消毒专家认为：控制霉菌污染，首先要了解霉菌的生长环境、污染食品的条件。在此基础上，方可以提出合理的防控措施，提高食品卫生质量。 一、常见霉菌 1、曲霉 在自然界中分布广泛, 它以土壤或空气为媒介, 而污染至食品原料。该霉在原料贮藏期间几乎不会死亡。因其对干燥抗性强, 故常在一些干燥食品中被分离出来, 而糖类和壳类处理工厂, 也常被此类霉菌污染。曲霉会产生黄曲毒素, 为天然致癌物质中致癌性最强的霉菌毒素。 2、青霉 与曲霉一样在自然界中广泛分布, 而且具同样的生态, 但曲霉生长于中温至高温, 而青霉以中温性为主, 青霉也是以土壤和空气为媒介, 而污染至食品原料中, 是干燥性壳物产品处理工厂的主要霉菌。其有害性是造成食品腐败和产生霉菌毒素以及诱发过敏。 3、毛霉  毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。在工厂湿度高的环境、通风不良的环境与气温差异显著的地方(如湿的地板和天花板) , 常有此霉菌存在。  4、交链孢霉  属中温性和好湿性霉菌。其有害性是造成腐朽、腐败和过敏。在高湿度的工厂环境(如鱼肉、水产加工与肉食加工环境) 的天花板、墙与地板、配水管的黑色霉菌, 几乎为该菌或枝孢霉。 5、镰刀菌 是一类世界性分布的真菌，它不仅可以在土壤中越冬越夏，还可侵染多种植物(粮食作物、 经济作物、药用植物及观赏植物)，引起植物的根腐、茎腐、茎基腐、花腐和穗腐等多种病害，寄主植物达100余种。食用霉变的粮食可导致人患病和死亡。某些菌种可诱发人皮肤和角膜溃疡。恶性肿瘤的发生可能与有的菌种有关。 6、根霉 黑根霉也称匐枝根霉，分布广泛，常出现于生霉的食品上，瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关。黑根霉(ATCC6227b)是目前发酵工业上常使用的微生物菌种。黑根霉的最适生长温度约为2~8℃，超过32℃不再生长。 二、霉菌生长习性 与霉菌的生长繁殖关系密切的有水份、温度、基质、通风等条件，为此，只有充分的了解霉菌的生长习性，才能为下一步控制霉菌提供理论依据。 1、水分    霉菌生长繁殖主要条件之一是必须保持一定的水分，大部分霉菌于湿度90 %以上, 水含量18 %的高湿度环境下以上容易生长。当食品中的水分活性值为0.98时，霉菌最易生长繁殖。 2、温度     温度对霉菌的繁殖及产毒影响同样重要。大多数霉菌繁殖最适宜的温度为25～30℃，在0℃以下或30℃以上，不能产毒或产毒力减弱。如黄曲霉的最适生长温度37℃左右，最适产毒温度为28-32℃。 3、氧    霉菌为绝对好气性微生物, 于通气良好环境下生长较好, 故厌氧下其生长可被抑制。  4、食品基质    与其它微生物生长繁殖的条件一样，不同的食品基质霉菌生长的情况是不同的，一般而言，霉菌则在以碳水化合物为主要成分的植物性食品原料中繁殖。 三、食品工厂中霉菌污染的来源   不同的食品工厂由于产品种类不同, 故污染的霉菌种类也有所差异。共同的污染源可能来自于水、通风良否、操作人员与食品原料。   1、高湿度和水汽引起的霉菌污染 高湿度场所的霉菌污染，湿度高于85-90%的环境，霉菌会生长很快。食品加工过程中常产生大量水汽，易造成墙壁潮湿及冷凝水形成的情况。木质及混凝土结构的建材也会附着霉菌，故食品工厂内，宜少用木质的物体。 2、空气流动传播的霉菌污染 霉菌通过空气流动传播，生产车间空气净化效果不理想导致外界霉菌入侵。在建筑物的构造中, 应保持通风才不易产生霉菌。在一些通风不良的地方, 由于原料附着以及使用易吸湿的混凝土、木材及纤维等材质时, 一旦有霉菌生长时, 霉菌孢子会四散飞扬，其蔓延速度非常快速, 直接或间接的污染成品、输送带、机械与操作人员手指等处。当工厂旁为果园, 果实成熟开始腐烂长霉时, 空气中的霉菌也特别多, 此时也易造成工厂内空气的污染。在湿度高及通风不良的场所, 可看见枝孢霉、交链孢霉等霉菌生长。   3、水环境中的霉菌污染 一些水槽、水桶、水管、自来水的水龙头、自来水管、地板与底板等处, 由于长期贮水, 所以污染情形特别常见。如，车间地面、明沟、气帽有积水潮湿；冷凝水的管路、墙壁、天花板、空调口等；生产过程产生的液体废弃物未及时清理出车间；离墙离地近的设备表面、潮湿墙面、冷风机容易产生冷凝水滋生霉菌。 这些水环境中的霉菌, 属好湿性霉菌(孢子在Aw0. 9 以上萌发, 在Aw1 时为其最适生长Aw) , 在自然环境中孢子形成粘块状, 当接触水的瞬间即四散飞去,孢子粘块也会借空中浮游, 造成污染。   4、人员、物料不洁的霉菌污染 操作人员和物料也是霉菌的污染源。包材的污染，如瓦楞纸箱，包装或罐装食品的包装袋、包装瓶、瓶盖等；生产过程防护不当造成的霉菌污染；进入车间的人员手部消毒不彻底、不洁净衣物；物料不洁净带入霉菌。 5、食品原料的霉菌污染   食品原料中一些壳粉原料、畜肉、糖质原料、蔬菜与水果等所含的霉菌，在工厂内的加工过程中四处飞散，往往造成工厂内的霉菌污染。在肉品加工厂内的瓷砖上污染的霉菌，主要为PhomaAureobasidium(为空气中的霉菌) 。在面包制造厂的搅拌机的外壁上，可发现黑色斑点状的霉菌，此类霉菌为壳粉原料中的主要霉菌———曲霉。 四、霉菌污染的防治措施 1、温湿度控制  控制车间的温度和湿度，温度在24度以下，湿度在55％以下，因为过高的温湿度会促进霉菌的生长。必要时应装设有效的换气设施,班中每2小时用风机及时将含有大量水分的空气排出车间， 以防止室内温度过高、蒸汽凝结或异味等发生。 2、化学处理 酒精喷雾消毒是制造食品时防止霉菌与细菌污染常用的方法, 每天班前、班后对车间内部墙壁、风机、下水道、案面、手部、围裙套袖、墙壁、下水道实施75%的酒精或消毒剂喷洒，杀灭霉菌。 对于制造环境的天花板、壁面与地板等, 为防止霉菌污染, 应采用防腐蚀、抗霉菌与防止结露的施工及材料。 3、紫外线照射或臭氧处理 人员的工作服、更衣室等，必须保持卫生清洁，定期清洗和进行紫外线或臭氧杀菌30分钟以上，防止人为造成霉菌的交叉污染（不可在有人情况下杀菌）。紫外线对霉菌孢子的杀菌效果有限时，可适当配合酒精喷雾等方法进行处理。 4、洁净室 在食品工厂内的加热后放冷至包装阶段 , 为最需防止外部浮游菌侵入和落菌的污染，设置洁净室，利用空气导入设施，将可达到空气洁净化，减少污染的目的。 5、车间卫生控制 首先要保持生产车间的内部工具的清洁和卫生，注意对一些卫生死角进行严格的卫生清理和保持（每半月实施一次深度清洁）。即管理者与操作人员应具有卫生观念, 随时注意操作的卫生与减少污染的可能性 , 必须从加强员工卫生教育着手。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                食品实验室常见仪器设备的使用与管理及操作规程！ 一、目的 规定实验室内仪器设备使用及管理，保证检测工作的正常进行。 二、职责 实验室负责人负责实验室仪器设备的综合管理工作，各仪器设备的使用与管理由化验员负责实施。 三、适用范围 本制度适用于实验室内所有仪器设备的购置使用、维护、故障处理、报废与管理工作。 四、仪器设备使用及管理制度 (一) 超净工作台操作规程 （1）标准： A、根据环境的洁净程度，可定期（一般2-3个月）将粗滤布拆下清洗予以更换； B、定期（一般为一周）对超净工作台环境进行灭菌，同时经常用纱布沾上酒精或丙酮有机溶剂将紫外杀菌灯外表面揩擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果； C、当加大风机电压不能使操作风速达到0.32M/S时，必须更换高效空气过滤器； D、更换高效空气过滤器时可打开顶盖，更换时应注意过滤器上的箭头标志，箭头指向即为层气流流向； E、更换高效空气过滤气后，应用尘埃粒子计数器检查四周边框密封是否良好，调节风机电压，使操作平均风速保持在0.32-0.48M/S范围内，再有用Y09-4型尘埃粒子计数器检查洁净度。 （2）操作规程： A、使用工作台时，应提前1小时开机，同时开启紫外灭菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，三十分钟后关闭杀菌灯； B、新安装的或长期未使用的工作台，使用前必须对工作台和周围环境先用超净真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作台，再采用药物灭菌法和紫外线灭菌法进行灭菌处理； C、操作区内不允许存放不必要的物品，以保持操作区的洁净气流流型不受干扰； D、操作区内应尽量避免作明显扰乱气流流型的动作； E、操作区内的使用温度不得大于60℃。 （二） 冰箱操作规程 （1）使用标准： A、在冰箱接入电源之前，请仔细核对冰箱的电压范围和电源电压是否相等； B、冰箱必须有干燥的接地，如果电气线路没有接地，那么必须请电工将冰箱单独接地； C、不可将汽油、酒精、胶粘剂等易燃、易爆品放入冰箱内，以免引起爆炸； D、冰箱不能在有可燃性气体的环境中使用，如发现可燃气体泄漏，千万不可拔去电源插头，关闭温控器或灯开关，否则会产生电火花，引起爆炸； E、切勿用水喷洒冰箱顶部，以免使电气零件受损，发生危险； F、清洁保养及搬动冰箱时必须切断电源，并小心操作，不让电气元件受损； G、冰箱应放置在平坦、坚实的地面上，如放置不平，可调节箱底平脚； H、冰箱应放置在通风干燥，远离热源的地方，并避免阳光直射； I、冰箱在一般使用时，会结霜，当结霜特别严重时，可关机或关掉电源进行人工化霜，必要时可打开柜门加速霜层融化； J、当冰箱搁置不用时或长时间使用箱内出现异味时，必须进行清理； K、不可用酸、化学稀释剂，汽油、苯之类物品清洗冰箱任何部件； L、箱内不要放熟的食品，热的仪器必须冷却至室温后，再放入箱内； （2）操作规程： A、首次通电或长时间不用重新通电时，由于箱内外温度接近，为迅速进入冷藏状态，可把温度调至最冷处，待冰箱连续运行2-3小时，箱温降低后，再将温度调至适当位置； B、在使用中，不要经常调动温度控制器。 （三） 电子天平操作规程 （1）操作规程： A、将电子天平置于稳固、平整的台面上； B、插上电源，打开开关； C、开机时，秤托盘上不能有重物，待显示稳定后，将空容器放在秤盘上，但其重量不能超出最大称量，按去皮键回零； D、加入所需样品后，显示数值即为样品重； E、称量完毕，将天平先置零，再关闭开关，拔掉电源； F、用干布或干刷子将天平打扫干净，放归原位（避免与水接触）； G、天平要经常用配备的砝码进行校准； H、天平内应放置适量的干燥剂（如硅胶等）。 （四） 手提式高压蒸汽灭菌器操作规程 （1）操作规程 A、堆放：将要消毒的物品包扎好后顺序地放置在消毒桶内的筛板上，并在包与包之间留有适当的空隙，以利于空气的逸去和蒸汽的穿透 ； B、加水：在消毒器身内加水量超出发热圈3-5cm高，水在消毒过程中会逐渐蒸发，水面随之相应降低，以致每次消毒完毕后，若继续使用，应将水重新加足，避免器身底无水开裂而报废； C、密封：将消毒桶放入器身内，此时水应不倒流入消毒桶内，盖上消毒器盖,注意将软管插入消毒桶槽内，盖上螺柱紧固槽应与主体的螺柱槽对正，然后顺序的将相应方位的翼形螺母均匀的旋紧，使盖与器身密合； D、加热：将消毒器放在热源上加热，开始时将放气阀摘子放在垂直方位处于放汽状态，消毒器内冷空气会随着加热由阀孔逸去。当水煮沸后有一股较急的蒸气冲击，此时将放气阀摘子处于关闭状态。消毒器内压力随着加热而上升，并在压力表上指示出来； E、消毒：当消毒器内压力达到所需范围时，适当调整热源，使它维持恒压，并开始计算消毒时间，按不同的物品和包装维持所需的消毒时间； F、干燥：敷料、器械和器皿等消毒后需要干燥的，可在消毒终了时，立即将消毒器内的蒸汽由放气阀(或于安全阀)排去，当压力表指针回复至零位后，稍待一分钟，将其打开，并继续加热5分钟，这样能使物品达到干燥； G、冷却：溶液和培养基等若在消毒终了时立即放汽，会因压力突然降低而剧烈沸腾发生瓶子爆破或溶液溢出等严重事故，所以在消毒终了时不应立即放汽，应首先将热源熄灭，或从热源上移开，使它自然冷却，一般20━30分钟后就使锅内压力因冷却而下降至零位，等压力表回到零位，数分钟后将放汽阀门开放和打开盖子。 （2）注意事项 A、始终应保证消毒器内有足够的水量，每次消毒后应将消毒桶筛板下面积聚的冷凝水倒出； B、待灭菌的溶液或培养基应装在耐热或硬质玻璃瓶内，不要装得太满,一般装到容器的1/2～3/4容积，瓶口用棉花塞、牛皮纸线绳包扎好； C、使用时，操作人员应经常观察压力表指针值，一旦发现压力表指针超过0.165MPa，安全阀仍不能自动排气时，应立即切断电源，协调工程科相关人员对安全阀进行修理； D、若压力表回复至零位，桶内仍不能开启，可能是因内部真空原因所致，此时可以开启放气阀，使外界空气入内，消除真空，即能将盖开启； E、压力表使用日久后会使读数不正确，应加检修，检修后应与标准压力表对照，若仍不正常，应更换新表； F、平时应保持消毒器清洁干燥，可以延长使用寿命。 （五） 电热恒温水浴锅操作规程 （1）操作规程： A、锅内加适量水，以浸没电热管3─5cm； B、接通电源，温度旋钮调到所需温度的指示处，开启电源,注意检查指示灯是否正常工作(即灯亮表示加热),当加热到所需温度时(以锅上的温度计所指示的温度为准),红灯灭绿灯亮,进行恒温加热； C、温度调节旋钮所指示的数值，并非为实际温度值，实际温度值以温度表所指示数值为准，因此在加热过程中应根据温度表的指示，反复调节温度旋钮的数值,直到恒温为止。 D、经常观察锅内的水量，若水量接近电热管平面时，应及时补充水量，以防水位低于电热管，形成干烧损坏设备； E、使用日久后，要对形成的水垢进行清除。 （六） 电热蒸馏水器操作规程 （1）操作规程： A、开启水源，使冷却水器内有水流入杯内，并调整水流大小（水流过大,要溢出；过小则起不到冷却与补充蒸馏水器中所需的水量）。当锅内水位到观察口时，即可开启电源，进行制水； B、制水过程中应有专人照看，随时注意冷却水流量的大小,防止因水过大而溢出,水流过小或断水会烧坏蒸馏水器； C、停止制水时要先关闭电源，冷却水源30min(冷却至桶体不烫后即可关闭冷却水源)后再关闭.(每次用后将蒸馏水器中的水从排水口放出,减少水垢的生成)； D、蒸馏水器在使用一定时间后,要对加热锅内壁及加热管进行检查,及时清除水垢,以保证制水能力； E、贮水箱内如有铁锈，应及时打扫清除。 （七） 双目生物显微镜操作规程 （1）操作规程： A、电源，将灯源插头插入插座内，开启光源开关； B、将标本放置于移动台上，用标本夹板夹紧，扳动辅助镜手柄，打开孔径光阑； C、并在标本上滴入香柏油一滴，并将油镜头旋转至固定卡口进行观察； D、慢慢旋转粗调手轮，使移动台上升，在适当接近标本时，一方面用眼观察视场，另一方面利用粗调手轮缓慢向下或向上调焦，直到视场中出现模糊细菌图像后再用微调手轮直至把细菌形状调节清晰，然后停止微调； E、观察结束后，切断电源，抬起物镜。先用擦纸擦去镜头上的香柏油，再用沾有二甲苯的擦镜纸擦一遍，最后再取干净的擦镜纸擦净； F、旋转粗调手轮，将移动台降至最低固定位置，将镜头旋转至“八”字形固定卡口位置； G、用塑料套将其罩没，轻轻放回箱中。 （2）注意事项 A、标本表面滴上的香柏油不可太多，否则影响观察效果； B、在旋转粗调手轮，移动台上升或镜头下降接近标本时，必须小心调节，仔细观察，以免碰坏镜头，造成损失； C、显微镜使用或存放，必须避免灰尘、潮湿、过冷、过热及有酸有碱的蒸气，存放的箱中应有硅胶干燥剂防潮； D、透镜表面有垢时，可用清洁擦镜纸沾少量二甲苯揩拭，切忌用酒精，否则，透镜下的胶将被溶解； E、显微镜结构精密，零件决不能随意拆卸。 （八） 电热恒温培养箱操作规程 （1）操作规程： A、使用前开启箱门，将感温探头头部的保护帽去掉，放置好试件，关闭箱门； B、接通电源，检查仪器是否通电、漏电、温控仪是否正常； C、使用时，将仪器控温器调节至所需的温度，并拧开箱顶的气阀，并将经过校准的温度计插入气顶内，以此对照电热恒温培养箱的温控仪是否完好； D、将物品放入，注意不要将温度计和温控仪的探头弄坏； F、使用完毕后，应将仪器进行打扫干净； G、若长时间不用，请将箱顶气阀关闭，并将保护帽套好。 （九） 电热恒温干燥箱操作规程 （1）操作规程： A、使用前开启箱门，将感温探头头部的保护帽去掉，放置好试件，关闭箱门； B、接通电源，检查仪器是否通电、漏电、温控仪是否正常； C、使用时，将仪器控温器调节至所需的温度，并拧开箱顶的气阀，并将经过校准的温度计插入气顶内，以此对照电热恒温培养箱的温控仪是否完好； D、将物品放入，注意不要将温度计和温控仪的探头弄坏，同时需要打开鼓风装置； E、当温度升到规定温度时，开始计时； F、当物品达到所需时间时，切断电源，让其自然冷却； G、用毕后，取出仪器并将仪器进行打扫干净； I、若长时间不用，请将箱顶气阀关闭，并将保护帽套好。 （十） 离心机操作规程 （1）操作规程： A、将仪器放在坚固的平整的台面上，以免运转时产生不必要的麻烦； B、不能在盖门放置任何物品，以免出现凹凸不平，影响仪器的使用效果； C、使用前必须经常检查离心管是否有裂纹，老化现象，如有应及时更换； D、将物品和离心管一起两两进行平衡，并对称放入离心机中，以免损坏仪器，并盖好安全盖； E、调节好离心时间，并先从低转速调起，至所需的转速为止，并让其自然停止； F、小心取出物品，不可剧烈摇晃，否则需重新离心。 G、实验完毕后，将调速旋钮调为零，并将转头和仪器擦干净，以防止试液沾污而产生腐蚀和损坏。 （十一） 马弗炉（高温炉）操作规程 （1）操作规程： A、接通电源，将马沸炉在相对低的温度（100℃）下进行预热十分钟； B、将所需高温的物品放入相应的坩埚中； C、调节温度按钮至所需温度，达到温度后，将装有物品的坩埚用专用钳送入炉堂内，并迅速关闭炉门；注意手不得进入炉堂以免烫伤，必要时需戴好防护手套； D、如需要中途调温，应小心调节，手不得接触炉体，以免烫伤； E、如需中途将物品取出时，需用专用钳取出，同时面部应避于一旁，以免高温灼伤脸部。 （2）注意事项： A、使用中，周围不得放有易燃易爆物品，更不得将易爆物品放入炉中； B、马弗炉必须放在通风较好的地方，以免产生的灰尘污染其它仪器； C、在使用时，需有人在旁观察，以免发生异常情况。 （十二）分光光度计操作规程 （1）操作规程： A、将分光光度计接通电源预热二十分钟； B、将温度旋钮调至当时室内所示温度的刻度； C、通过打开和关闭吸光室的盖子，进行调节“零”和“满度”旋钮； D、重复调节，直至两个旋钮不再调动为止； E、将标准液/样液分别加入已用相应的标准液/样液洗过的比色皿中，并将比色皿外部的液体用吸水纸吸干，尤其是光滑面需用吸水纸擦拭干净； F、将比色皿放入吸光室内，并盖好盖子，进行读数； G、读数完毕，将仪器擦拭干净，并将比色皿用蒸馏水进行清洗。 （十三）pH计操作规程 （1）操作规程： A、电源线插入电源插座，按下电源开关，预热30min； B、把选择开关旋钮调到PH档，并调节温度补偿旋钮，使旋钮指示线对准溶液温度值； C、在测量电极插座处拨去短路插座； D、用蒸馏水清洗电极，清洗后用滤纸吸干； E、在测量电极插座处插上复合电极； F、标定：一般来说，仪器在连续使用时，每天要标定一次； 1）把斜率调节旋钮顺时针旋到底（即调到100%位置）； 2）把清洗过并吸干的电极插入pH＝6.86的缓冲溶液中； 3）调节定位调节旋，使仪器显示读数与该缓冲溶液当时温定下降时的PH值相一致（如用混合磷酸定位温度为10℃时，pH=6.92）; 4）用蒸馏水清洗过的电极，再插入pH＝4.00（或pH＝9.18）的标准溶液中，调节斜率旋钮使仪器显示读数与该缓冲溶液中当时温度下的pH值一致； 5）重复如上1--4直至不用再调节定位或斜率两调节旋钮为止。 G、测量：将电极插入样液内，待显示屏上的数字不再跳动为止； H、读数； I、测量完毕，关闭电源。 （十四）酶联免疫检测仪操作规程 （1）操作规程： A、机器开启后，自检后，根据提示，输入密码（原始密码为000000）后按输入键进入机器的操作界面； B、按编辑菜单里面的程序设置，进行新的试验程序的编辑； C、阈值设置； D、报告种类设置； E、标准品设置； F、试验模式的设定； G、试验名称的设置； H、时间设置：在此界面可设置年，月，日，以及具体的时间，小时，分钟，秒等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               一起来探寻巨大芽孢杆菌在现代农业中的崭新蓝图！ 巨大芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，被认为是一种重要的植物生长促进剂。在农业生产中，巨大芽孢杆菌作为一种生物农药和生物肥料的应用越来越受到重视。 一、生物肥料成分 巨大芽孢杆菌作为一种生物肥料，含有丰富的氮、磷、钾等植物营养元素，同时还能产生生长激素和有机酸等植物生长促进物质，对作物的生长发育具有积极影响。 二、促进根系发育 巨大芽孢杆菌能够分解土壤中的有机物质，释放出植物生长所需的营养元素，同时分泌生长激素，促进作物根系的发育和生长。强健的根系系统能够增加作物吸收水分和营养的能力，提高作物的抗逆性和生长速度。 三、抑制土壤病原微生物 巨大芽孢杆菌具有较强的抗菌作用，能够产生一系列抗生素和抗菌物质，对土壤中的病原微生物如真菌、细菌等具有一定的抑制作用。通过抑制土壤病原微生物的生长，可以减少作物的病害发生率，保证作物的健康生长。 四、提高作物产量和品质 应用巨大芽孢杆菌可以显著提高作物的产量和品质。其促进作物生长的作用可以使作物生长周期缩短，增加产量；同时，作物生长过程中吸收的营养更加充足，作物品质更加优良，有利于提高作物的市场竞争力。 五、生态友好 与化学肥料和农药相比，巨大芽孢杆菌作为一种生物农药和生物肥料，对环境的影响更小，不会造成土壤和水体的污染，有利于保护生态环境，促进农业的可持续发展。 六、应用方法 1、土壤施用 将巨大芽孢杆菌制剂通过土壤施用的方式添加到作物根际或整体土壤中，促进土壤微生物的多样性，改善土壤环境。 2、种子处理 将种子浸泡或喷洒巨大芽孢杆菌制剂，增加种子表面的有益微生物群落，提高种子萌发率和生长势。 3、叶面喷施 将巨大芽孢杆菌制剂稀释后喷施在作物叶面，促进作物的叶绿素合成和光合作用，增强作物的光合效率。 综上所述，巨大芽孢杆菌作为一种重要的生物农药和生物肥料，在作物增产中发挥着重要作用。其促进作物生长、抑制土壤病原微生物、提高作物产量和品质等优点，使其成为现代农业生产中不可或缺的生物利器。同时，巨大芽孢杆菌的深入研究和应用也将促进农业生产方式的转变，推动农业生产向生态友好型和可持续发展的方向发展。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              NCI-H1435人非小细胞肺癌细胞的处理方法与培养步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-133639 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：NCI-H1435 细胞名称：人非小细胞肺癌细胞生长特性：贴壁生长，松散培养体系：ACL-4medium（serum-free）传代方法：1：2传代冻存条件：无血清细胞冻存液用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞描述本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 三、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 四、细胞培养步骤1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3、细胞冻存：（1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；（2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；（3）用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；（4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                食品微生物检验技术之微生物能力验证能力考核要点！ 一、要树立科学必须真实的观念，实验态度要端正。 要怀着一颗为了出具真实、准确，可信数据而敬畏的心去申请能力验证。 实验要求科学严谨,实验要预先充分练习和实践。能力验证是对实验室综合实验水平（人员，设备，环境等多因素）的评价。 首先要选好实验项目，找到与之配套的方法，进行充分的方法验证，从检测员能力，仪器设备性能，校检结果是否能满足实验需要，实验检测多次实验，检测环境是否进行了充分的考虑，实验确认好实验项目，认真学习标准，理解标准，并做到标准所规范的步骤，并对自己实验有了一定的信心后再去申请能力验证为宜。 举例：某实验室未经过充分实验方法确认，实验平时做的也少，直接申请了能力验证。实验过程生疏，照方抓药，手忙脚乱，造成稀释梯度不够，平板干燥，菌落蔓延，无法出具具体数值，实验失败。 二、实验室收到盲样菌株标本后，首先应做的事情。 1、检查标本的性状和确认包装情况，然后按照要求去能力验证网站提交收到样品情况。 2、仔细阅读参指导书，包括标本如何保存的信息，进行实验室内部工作分配，明确工作任务和要求。 3、实验前应严格按照作业指导书的要求制订检验流程，认真做好准备工作，包括实验中需要使用的器皿，须提前做好清洁灭菌。 三、能力验证样品处理。 1、定量项目，西林瓶内样品不可分割，应全部用于检测。一般参考书指导的是加40mL稀释液制成40mL样品。 2、定量项目样品稀释。指导书标明了稀释范围的，在稀释范围左右各加1个稀释度进行；书上没有稀释范围的，多做稀释倍数，选择合适的稀释倍数计数（一般可稀释至10-8）。 3、定量项目，除了要多做稀释倍数外，同时同一稀释度要多倒几皿，从原理上来讲，检测过程属于随机抽样检查，平板越多，数据越接近真值。考虑性价比，又不可能一直疯狂一个稀释度很多平板，所以能力验证时候多倒几皿，求好结果。 4、定性项目有一些重要步骤。 a、增菌及分离步骤尤其重要。选择合适的增菌液和分离用培养基对目标菌的检出非常关键，选择两种以上的增菌液和分离用培养基对菌株作直接分离和增菌后分离。 b、划线分离十分重要，要把增菌液中的目标菌尽量多的表达出来，要分出单个菌落并尽可能多挑取可疑菌落，确保分离到目标菌。 c、生化试验和血清学试验以营养琼脂平板上的纯培养细菌为好。 四、实验过程一定要做阴阳对照，全程空白对照。 再厉害的高手也有失手和看走眼的时候，所以阴阳对照就是一面镜子。对于一些荧光染色后进行判读的实验显得尤为重要。 这里扫盲一个误区，定量计数测菌数时，我们会认为空白就是直接取1mL无菌水然后加入到平板里，然后混菌倒皿，这是错误的。因为这样做的话，只能模拟证明稀释后倒平板这一步有没有污染。而无法证明从样品称取-样品稀释时候的污染质控情况。所以要做全程空白对照。 全程空白的含义就是把无菌液当成样品，然后走一遍实验过程。如果严格这么做的话，又会走向另一个极端，所以全程空白只从取样开始至稀释10-1做了简化，而不做后续稀释空白样的混菌实验。 在有些其他实验时候，会有样品空白以及稀释液空白，比如大气环境NOx和SO2的检测，有兴趣的可以去看看，对于全程空白的意义理解有更好的帮助。 五、培养基方面需要注意的地方。 1、培养基配制充分混匀后再灭菌。 正确做法是用一部分水搅拌均匀后，再加入剩余水量，混匀后灭菌或分装。 2、混菌法倒皿要充分混匀。 培养基倒完要左5圈右5圈（混匀速度一定要慢，目的是——避免培养基波动到二皿接触的缝隙部分造成后续污染），找较水平位置冷却凝固。 3、培养基要不要覆盖问题。 覆盖的目的是为了阻止活菌在培养基表层通过鞭毛移动，造成片状生长，无法计数这一不利现象的发生。这里可以发挥主观能动性-对于不运动的菌，可以不覆盖，对于运动的菌覆盖。 总结一下： a.长期检测同一种样品，不覆盖并无蔓延现象，不覆盖；长期检测蔓延选择了覆盖，一直覆盖。 b.未知样品，进行覆盖和不覆盖的比对实验，然后决定以后同样的样品是否需要覆盖。养成经验。 c.能力验证实验，覆盖和不覆盖的都做，不要吝惜那么一点点培养基或耗材，毕竟能力验证实验做的漂亮才是实验室（是室而不是人！）能力的综合体现。 4、培养过程防止平皿干燥。 培养过程中培养基可以倒的适当厚一些，比如25mL。培养箱底部接一个不锈钢盆，装上足量无菌水（没有就去买几瓶哇哈哈怡宝什么的水倒里面）。 5、培养完成要保留实验平皿和其他相关材料。 作为能力验证，原始记录及实验报告还没出具完成，各种材料还是保留至数据出具后较好，便于出现问题现查原因，马上补救。 题外话：很多检测员等结果出了问题然后到网络上来求救，结果一问平皿已经洗掉了，那就不知道是什么状况了。有时候你问她她还会振振有词的讲：10-1，10-2都蔓延了，不洗掉干嘛，10-5，10-6没长菌，不洗掉干嘛？我当时真的无语，也不想多说话就没继续讲了。现在我回答一下这个问题：我要你一套完整梯度浓度的平皿，可以看出你10倍稀释梯度是不是稳定，还有蔓延是个什么状况，到底有多少，是一片还是局部还是很小一部分，然后根据整体数据估算结果（当然实验做成这样也基本算失败了，因为实验没有做到你可控的范围），是补救的一种（并不可取，属于垂死挣扎）。定量实验时，当天做完的稀释样品也要放冰箱里，虽然实验要求不能复检或重复检测，但作为微生物专业你是知道菌放在2-8℃下并不会长多少，如果第二天一看数据有蔓延或疑问，马上再做一次，这样也应该在误差范围内出数。 6、实验培养过程勤观察。 微生物培养过程一般需要几小时到几十小时，要利用这段时间观察培养箱及菌生长情况，比如温度是否稳定，培养室内湿度如何等等，多思多看，准备预案。方有可能得到与盲样一致的实验结果。 原始记录应有条理、思路清晰,完整准确地记录菌株鉴定检验的全过程,原始记录要包含时间、试验现象、试验结果三个要素，方便试验出现问题的查找。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  实验室中玻璃仪器的洗涤及各种洗液的配制方法！ 百欧博伟生物：实验中所使用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验结果，往往由于仪器的不清洁或被污染而造成较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。因此，玻璃仪器的洗涤清洁工作是非常重要的。 1、初用玻璃仪器的清洗 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用洗涤灵稀释液、肥皂水或去污粉等洗刷再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不少于4 小时），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3 次，在80～100℃烘箱内烤干备用。 2、使用过的玻璃仪器的清洗 （1）一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等（包括量筒），先用自来水洗刷至无污物；再选用大小合适的毛刷沾取洗涤灵稀释液或浸入洗涤灵稀释液内，将器皿内外（特别是内壁）细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲洗2～3 次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。凡洗净的玻璃器皿，不应在器壁上带有水珠，否则表示尚未洗干净，应再按上述方法重新洗涤。若发现内壁有难以去掉的污迹，应分别试用下述各种洗涤剂予以清除，再重新冲洗。 （2）量器：如移液管、滴定管、量瓶等。使用后应立即浸泡于凉水中，勿使物质干涸。工作完毕后用流水冲洗，去附着的试剂、蛋白质等物质，晾干后浸泡在铬酸洗液中4～6 小时（或过夜），再用自来水充分冲洗、最后用水冲洗2～4 次，风干备用。 （3）其他：具有传染性样品的容器，如病毒、传染病患者的血清等沾污过的容器，应先进行高压（或其他方法）消毒后再进行清洗。盛过各种有毒药品，特别是剧毒药品和放射性同位素等物质的容器，必须经过专门处理，确知没有残余毒物存在方可进行清洗。 3、洗涤液的种类和配制方法 （1）铬酸洗液（重铬酸钾-硫酸洗液，简称为洗液）广泛用于玻璃仪器的洗涤。常用的配制方法有下述四种： ①取100mL 工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后小心慢慢加入5g 重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解后冷却，贮于具玻璃塞的细口瓶内。 ②称取5g 重铬酸钾粉末置于250mL 烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解。慢慢加入浓硫酸100mL，随加随搅拌。冷却后贮存备用。 ③称取80g 重铬酸钾，溶于1000mL 自来水中，慢慢加入工业硫酸100mL（边加边用玻璃棒搅动）。 ④称取200g 重铬酸钾，溶于500mL 自来水中，慢慢加入工业硫酸500mL（边加边搅拌）。 （2）浓盐酸（工业用）：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。 （3）5％草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高猛酸钾的痕迹。 （4）5％～10％磷酸三钠（Na3PO4·12H2O）溶液：可洗涤油污物。 （5）30％硝酸溶液：洗涤CO2 测定仪器及微量滴管。 （6）5％～10％乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Na2）溶液：加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。 （7）尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛蛋白质制剂及血样的容器。 （8）酒精与浓硝酸混合液：最适合于洗净滴定管，在滴定管中加入3mL 酒精，然后沿管壁慢慢加入4mL 浓硝酸（比重1.4），盖住滴定管管口，利用所产生的氧化氮洗净滴定管。 （9）有机溶剂：如丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗去油脂、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脱油漆的污垢。 （10）氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液：是两种强碱性的洗涤液，对玻璃仪器的侵蚀性很强，清除容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长。使用时应小心慎重。上述洗涤液可多次使用，但是使用前必须将待洗涤的玻璃仪器先用水冲洗多次，除去肥皂、去污粉或各种废液。若仪器上有凡士林或羊毛脂时，应先用纸擦去，然后用乙醇或乙醚擦净后才能使用洗液，否则会使洗涤液迅速失效。例如：肥皂水，有机溶剂（乙醇、甲醛等）及少量油污都会使重铬酸钾-硫酸洗液变成绿色，减低洗涤能力。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  酵母基因组DNA提取试剂盒的纯度检测与操作方法！ 一、背景 酵母基因组DNA提取试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。 酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 二、原理 采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合破壁酶特异消化酵母细胞壁，能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 三、产品特点 1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2、不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 3、快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。 4、多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。 四、操作方法 酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 五、保存条件 室温保存，12个月内有效。ProteinaseK与Lyticase-20℃保存。 六、纯度检测 基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时，OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。 七、注意事项 1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的片段较小且提取量下降。 2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65度水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。 3、洗脱缓冲液的体积好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右可用NaOH将水的pH值调至此范围值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防降解。 八、应用 酵母基因组DNA提取试剂盒可用于酵母基因组DNA提取： 在光滑球拟酵母基因组规模生物模型的构建与应用研究中以丙酮酸工业生产菌株Candida glabrata CCTCC M202019为研究模型,在完成全基因组测序、基因组功能注释和比较基因组学研究的基础上,构建了基因组规模代谢网络模型(Genome-scale metabolic model,GSMM)、转录调控网络模型(Transcriptional regulatory network,TRN)和工业微生物辅因子代谢网络模型(Genome-scale cofactor metabolic model,GSCMM)。 结合上述基因组规模生物模型,运用基于约束的优化算法,从基因、代谢、转录、辅因子等层面上解析了C.glabrata的生理特征(如丙酮酸的高产、低致病性相关的生物安全性等),并发展了优化其生产性能(如丙酮酸、富马酸等丙酮酸去路中代谢物)的方法。 主要研究结果如下:1.运用二代高通量测序技术,对C.glabrata CCTCC M202019进行全基因组测序,其基因组特征包括:12.1 Mbp基因组大小、38.47%GC含量、5345个基因、191个t RNA、6个r RNA和1.15%的重复序列等。与C.glabrata CBS138进行比较基因组分析,发现虽然两菌基因组具有高度相似性,但也存在差异如:中心碳代谢(营养物质和二羧酸的转运、氧化磷酸化和丙酮酸分解代谢)和黏附性代谢(凝集素蛋白的低复杂度重复区和功能结构域的缺失和变化)。 在此基础上,借助在四种培养基上的丙酮酸发酵实验、哥伦比亚血平板上生长实验、96孔微孔板内壁和内皮细胞的黏附实验,证明了C.glabrata CCTCC M202019比CBS138菌株具有更强的丙酮酸生产能力和更弱的黏附性和细胞毒性。2.根据C.glabrata氨基酸序列、文献挖掘和专业数据库,构建了C.glabrata的GSMM i NX804。模型i NX804包括804个基因、1025个代谢物和1287个生化反应,分布于细胞质、线粒体、过氧化物酶体、高尔基体、液泡和胞外区间。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  芦笋状肠道梭状菌的培养方法与实验内容及操作步骤！ 一、菌种简介平台编号：Bio-099448 规格：平板 拉丁属名：Enterocloster Asparagiformis 菌株名称：芦笋状肠道梭状菌培养基：哥伦比亚平板 特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化钠：5.0，琼脂：10.0，pH：7.3±0.2（25℃）生长条件：37℃；48-72h；厌氧存储条件：2-8℃安全等级：1形态：菌落直径为0.5-1mm，圆形，边缘不规则，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌。分离基物：human faeces模式菌株：yes用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、操作步骤①准备上述平板 1-2 块；②平板表面消毒后在安全柜中打开；③吸取 1-3ml 无菌水（置于厌氧环境平衡24h）打入平板中，用无菌涂布棒在平板表层来回刮取菌苔，制成菌悬液；④用巴氏吸管吸取菌悬液，打入到新鲜的平板上，涂布均匀；⑤将平板置于上述培养条件下培养即可。 五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                MCF-12F人乳腺上皮细胞的知识与应用及相关研究！ 一、背景 MCF-12F人乳腺上皮细胞系，英文名称是MCF-12F cell line。以下是其相关信息的简介： MCF-12F人乳腺上皮细胞系的保存条件为低温避光，纯度规格为1×10(6)viable cells/ml，产品类别是有机化学品。MCF-12F细胞系来自女性乳腺上皮细胞，其细胞形态为上皮细胞样。体外细胞培养实验证明，该细胞系可以持续进行贴壁生长。在实验操作中，为预防细胞污染，需要进行无菌操作，如实验前对超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。 MCF-12F细胞系的主要特点是表达高水平的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)，同时缺乏人类表皮生长因子受体2(HER2)的表达。这些特性使得该细胞系成为研究乳腺癌内分泌治疗的重要工具之一。此外，MCF-12F细胞系还可以用于研究乳腺癌的发生机制、药物筛选、肿瘤生物学等方面的问题。 二、MCF-12F人乳腺上皮细胞系培养操作 1)复苏MCF-12F人乳腺上皮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MCF-12F人乳腺上皮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MCF-12F人乳腺上皮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MCF-12F人乳腺上皮细胞系可以用于Caveolin-1单倍不足对人乳腺上皮细胞周期蛋白调控的影响： 利用基因捕获技术得到稳定传代的Cav-1单倍不足(haploinsufficiency)乳腺细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3),Cav-1的mRNA和蛋白质表达均明显降低,并且也已经证实Cav-1的单倍不足足以诱导人乳腺上皮细胞发生部分转化。但是,其细胞机制尚不完全清楚。乳腺癌细胞的生长受多种因素调控,如细胞周期失调,细胞增殖过度以及内分泌失衡等。近来的研究表明,CyclinD1过表达是乳腺癌细胞恶性转化的重要事件。在乳腺癌发生过程中,CyclinD1的聚集持续存在于乳腺癌进展的各个方面阶段,它作为细胞周期调节因子之一,在乳腺癌发生过程中起着关键性作用。 本实验以正常人乳腺上皮细胞株(MCF10A)、MCF-12F人乳腺上皮细胞系、Cav-1单倍不足乳腺上皮细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3)以及乳腺癌细胞系(MCF7)和MCF-12F人乳腺上皮细胞系为研究对象,应用流式细胞仪检测细胞周期时相,Westernblot方法检测了细胞周期相关蛋白及转录因子的表达以及RT-PCR的方法观察CyclinD1mRNA水平的变化,探讨了Caveolin-1的表达水平与乳腺细胞周期调控的关系及其可能的分子机制。阐明Caveolin-1在人正常乳腺细胞早期转化中的部分作用机制,为进一步揭示乳腺癌发病机理提供直接的科学依据。 结果如下：(1)Cav-1在单倍不足细胞株MCF10A-ST3和MCF10A-ST1的表达分别为MCF10A的50%和30%,而在乳腺癌细胞系MCF7和MCF-12F人乳腺上皮细胞系中几乎没有检测到Cav-1的表达;(2)Cav-1单倍不足细胞时相发生改变,MCF10A-ST3细胞株G1期和S期细胞数分别为35.4%和56.4%;(3)Cav-1单倍不足乳腺细胞株中,随着Cav-1的下调,CyclinD1的蛋白和mRNA水平均增加,P21的表达下调,而P16的表达水平没有受到影响;(4)Cav-1单倍不足可以激活c-Jun、ER-α的表达,从而促进细胞增殖,肿瘤发生。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  无害李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌打管说明书！ 无害李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌，是Listeria属的微生物，原产地为中国。革兰阳性，有鞭毛，无芽孢，可产生荚膜。营养要求不高，在室温中动力活泼，但在37时动力缓慢，能发酵多种糖类、与多种革兰阳性菌有共同抗原。主要用途为研究，教学，具体用途为用于科研。 一、菌种简介平台编号：Bio-56577 提供形式：冻干物拉丁属名：Listeria Innocua 中文名称：无害李斯特氏菌(英诺克李斯特氏菌)拉丁名称：Listeria innocua其它保藏中心编号：=ATCC 33090来源历史：←美国ATCC收藏时间：2005-10-21资源归类编码：15131320102模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究；分析检测具体用途：API验证用菌（检测李斯特菌）。生物危害程度：四类培养基编号：CM0217培养基名称：脑心琼脂培养基成分：心提取物 5.0g，脑提取物 12.5g，月示 胨10.0g，葡萄糖 2.0g，NaCl 5.0g，Na2HPO4 2.5g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.4。推荐使用商品化成品培养基。培养温度：37℃需氧类型：好氧保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：分类；研究；分析检测；API验证用菌（检测李斯特菌）。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基（血平板琼脂培养基） 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、注意事项1) 首次活化，干粉粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   胶孢炭疽菌的特点与优势及微生物培养方法！ 胶孢炭疽菌为炭疽菌属的一种。引起植株炭疽病。病害症状主要为害叶片。多从叶尖、叶缘发病，或于叶片表面着生近圆形的病斑。病斑圆形或不规则形，边缘黑褐色，内部凹陷，灰褐色或灰黑色；后期着生小黑点，病健交界明显。  一、菌种简介平台编号：Bio-15401 提供形式：斜面培养物英文名称：Colletotrichum gloeosporioides Penz.中文名称：胶孢炭疽菌属名：Colletotrichum种名加词：gloeosporioides Penz.来源历史：←中国农业科学院农业资源与农业区划研究所←中国热带农业科学院环境与植物保护研究所收藏时间：2007-12-31原始编号：CATAS EPPI2061, Z20070061原产国：中国 CN资源归类编码：15151911101模式菌株：非模式菌株主要用途：a:4:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教学;i:3;s:4:生产;}特征特性：菌丝初期无色，后期变为浅褐色。圆筒形，有隔膜和分枝，直径2～7um。在培养基中产生黑色素。分生孢子盘多在叶面散生或不规则排列，浅褐色，圆形或卵圆形，扁平或隆起，直径100～250um。分生孢子盘内密生短小的分生孢子梗，梗上有分生孢子。孢盘上有时长有硬而长、直或弯的深褐色刚毛。刚毛有1～2个隔膜，大小为500～1000um×4～7um；有时缺少这种刚毛。分生孢子单胞，无色，椭圆形或圆筒形，有油点或无；孢子大小因培养基种类或寄生部位不同而有差异，一般大小为12.2～15.8um×4.0～5.4um。叶片受害后，多在叶尖或叶缘出现，初为水渍状褐色的小斑，后向下，向内扩展成椭圆形或梭形至不规则形褐斑，斑面有明显或不明显的云纹。数个病斑连合成斑块，叶片变褐干枯。潮湿时斑面出现小黑点，即病菌分生孢子盘。具体用途：教学科研，分类生物危害程度：四类致病对象：植物致病名称：闭鞘姜炭疽病传播途径：以菌丝体和分孢盘在病部或随病残体遗落在土中越冬。以分生孢子作为初侵与再侵接种体，借助雨水溅射等传播，从伤口或孔口侵入致病。在南方特别是在广东，病菌可在田间多种寄主作物间辗转传播危害，并无明显越冬期。分离基物：闭鞘姜叶片采集地：海南省儋州市培养基编号1：0014培养温度：N19.30′资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:3:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:8:矿物油法;i:2;s:4:其他;}共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}用途：教学科研，分类 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用；2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   微生物菌种的代码与复苏及保藏方法与注意事项！ 一、菌种代码的意义 国内常见微生物检验所用的菌种代号是： CMCC（F）或 CMCC（B） CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 B —— 代表细菌 F ——代表真菌 大肠杆菌：CMCC (B) 44102； 乙型副伤寒沙门杆菌：CMCC (B) 50094； 铜绿假单胞菌：CMCC (B)10104； 金黄色葡萄球菌：CMCC (B)26003； 生孢梭菌：CMCC(B)64941； 白色念珠菌：CMCC(F)98001。 二、菌种的复苏 按照菌种的使用说明将复苏液在超净工作台或生物安全柜内进行复苏。 三、常用菌种保藏方法 1、琼脂斜面低温保存法 （1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸包好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月传代一次。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年至一年。 （2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。 （3）特点：优点是简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用；缺点是保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。 （4）注意事项： a.保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。 b.保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。 c.每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。 d.保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 %为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。 e.铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。 2、液体石蜡保存法 （1）方法：将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分。 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端1cm为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。 （2）适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。 （3）特点：本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。 （4）注意事项：  a.保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏。 b.使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上即可使用。 c.将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染. d.液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1cm为宜。 e.制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多，否则分装到菌种培养基中易造成污染。 3、磁珠保存法 将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。 本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。 磁珠保存时间更长，使用方便，大大减轻操作人员的工作。 四、常用菌种保藏方法 方法一：斜面传代 冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入超净工作台或生物安全柜。 点燃酒精灯（灭菌器），用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住试管塞，拨开试管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。 堵上试管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开试管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。 取出接种棒，在火焰旁将试管塞堵上，然后将接种棒在火焰上烧灼灭菌。 将已接种完的斜面置35~37℃培养22~24小时，霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般 3个月转种一次。  方法二：斜面-营养肉汤-分离平板-斜面 用接种环取上述斜面菌苔少许接种置营养肉汤中(5ml/支，已灭菌)，置35~37℃培养18~24小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液，接种于分离平板，置35~37℃培养18~24小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。 常用分离平板： 大肠埃希菌——EMB琼脂平板； 铜绿假单胞菌——溴化十六烷三甲铵琼脂培养基； 金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基。 五、菌种保管 菌种保管应有专人负责，双人双锁，确保菌种安全。 菌种领用、传代、保存都要有记录，包括名称、入库、领用、传代日期、鉴定者、主要鉴定性能及灭活或销毁情况。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   牛原代小肠黏膜上皮细胞的使用方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-77296 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：牛原代小肠黏膜上皮细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连。小肠与心互为表里。是食物消化吸收的主要场所，盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，全长约5－6米，张开有半个篮球大，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。其管壁由黏膜，黏膜下层，肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，黏膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常小肠组织。2）细胞鉴定：细胞角蛋白-19（CK-19）免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法检测鲜乳中抗生素残留！ 一、检验原理 培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢，并含有 pH 指示剂（溴甲酚紫）。加入样品并温浴后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽孢将在培养基中生长并利用糖产酸，pH 指示剂的紫色变为黄色。相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽孢不会生长，pH 指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。 二、检验程序 1、芽孢悬液： 将嗜热脂肪芽孢杆菌菌种划线移种于营养琼脂平板表面，56 ℃培养 24 h 后挑取乳白色半透明圆形特征菌落，在营养琼脂平板上再次划线培养，56 ℃培养24 h 后转入 36 ℃培养 3 d～4 d，镜检芽孢产率达到 95%以上时进行芽孢悬液的制备。每 块平板用 1 mL～3 mL无菌磷酸盐缓冲液洗脱培养基表面的菌苔（如果使用克氏瓶，每瓶使用无菌磷酸盐缓冲液 10 mL～20 mL）。将洗脱液 5 000 r/min离心 15 min。取沉淀物加无菌0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.2）制成 10 ９ cfu/mL 芽孢悬液，置 80 ℃恒温水浴中 10 min 后，密封防止水分蒸发，置冰箱保存备用。 2、测试培养基： 在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基中加入适量芽孢悬液，混合均匀，使最终的芽孢浓度为 8×10 ５ ～2×10 ６ cfu/mL。混合芽孢悬液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基分装小试管，每管 200 μL，密封防止水分蒸发。这样配制好的测试培养基可以在冰箱保存 6 个月。 3、培养操作： 吸取样品100 μL加入含有芽孢的测试培养基中，轻 轻旋转试管混匀。每 份检样作二份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管为 100 μL 青霉素 G 参照溶液，阴性对照管为 100 μL 无抗生素的脱脂乳。于 65℃水浴培养 2.5 h，观察培养基颜色的变化。如果颜色没有变化，须再于水浴中培养 30 min 作最终观察 4、判断方法： 在白色背景前从侧面和底部观察小试管内培养基颜色。保持培养基原有的紫色为阳性结果，培养基变成黄色或黄绿色为阴性结果，颜色处于二者之间，为可疑结果。对于可疑结果应继续培养30 min 再进行最终观察。如果培养基颜色仍然处于黄色－紫色之间，表示抗生素浓度接近方法的最低检出限，此时建议重新检测一次。 5、报告: 最终观察时，培养基依然保持原有的紫色，可以报告为抗生素残留阳性。 培养基变为呈黄色或黄绿色时，可以报告为抗生素残留阴性。 本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素3 μg/L，链霉素 50 μg/L，庆大霉素 30 μg/L，卡那霉素 50 μg/L。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      微生物培养基的概念与分类及储存与制备！ 1、培养基的制备    培养基是指人们根据微生物生长繁殖所需的各类营养物质，按一定的浓度由人工方法混合配合而成的用于培育微生物生长的一类营养基质而称之。培养基是微生物生长的物质基础，是微生物检测工作的重要基础工作。按使用时的不同物理状态，培养基可分为：液体培养基、半固体培养基、固体培养基3种。根据不同用途（使用目的），培养基又可分为：基础培养基、富集培养基（营养或增殖培养基）、选择性培养基、鉴别培养基、厌氧培养基5类 。另外按其营养成分和浓度是否已知可分为：合成培养基（营养成分和浓度已知）、天然培养基（营养成分和浓度未知）2种。有关培养基的基础知识可参考有关专著和其他有关微生物学教科书。  2、培养基的储存     一般来说，未开封的脱水培养基应避光储存于25℃下阴凉干燥处，开过封的脱水培养基应盖紧瓶盖注意密封储存。已配制好的培养基、缓冲液一般可储存于2—25℃阴凉干燥处，有条件置冰箱冷藏储存更好，否则必须在2d内使用完毕。USP中有明确规定：置2—25℃阴凉干燥处如果培养基分装并储存于非密闭性容器内（如试管、三角烧瓶），则其使用期限为1个月，但该培养基 的灵敏度试验和其他 的相关质量检查务必在距使用时的前2周内完成；如果培养基储存于密闭性容器（如螺旋盖瓶）内，则其使用期限为1年，但该培养基的灵敏度试验和其他的相关质量检查须在距使用前3个月内完成：如果实验室购买的成品型培养基储存于密闭容器内，实验室可抽取部分代表性样品进行无菌检查试验和灵敏度试验。并根据自己的储存条件来制定合理的培养基储存期，对培养基的存储环境条件进行监控和记录，并且要对相应的储存期和储存条件进行确认。     灭菌后的培养基等物品应置适当条件下保存至规定的有效期，并对保存条件进行确证。 表  无菌物品的存储条件 类型                        存放条件              无菌保效期（年、月、d） 输液瓶密封装培养基          2—8℃                1年 输液瓶密封装淋洗液、缓冲液  室温                  2年 螺旋盖瓶装培养基            2—8℃                3个月螺旋盖瓶装淋洗液、缓冲液    室温                  3个月 试管装无菌培养基（固液）    2—8℃                14d                试管装有其他的无菌试剂      室温                  14d 平皿琼脂培养                25—35℃下培养3d后，存于2—8℃   14d 取样用螺旋盖瓶              室温                  7d过滤器等无菌操作用物品      室温，洁净室 内或层流台内   7d                      表  培养基 2—8℃条件 保存期限 培养基种类        保存条件     保存时间 平板培养基        不袋装        2周                   袋装          6—8周 试管培养基        不袋装        2—4周 （棉塞）          袋装          8—10周 试管培养基        不袋装        8周 （软木塞或蜡封）  袋装          16—18周     有效期已过的培养基、缓冲液、稀释液、淋洗液和试剂必须立即丢弃，不得再用于检测中。实验室应建立简易的库存控制系统，有专人保管和建立台账，包括品名、规格、批号、数量、有效期、进货日期、使用日期和数量、以及领用人等信息，以随时掌握有关信息。   北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！