胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的知识与应用！ 一、背景 胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒是一种用于检测胎儿弯曲杆菌性病亚种的分子生物学试剂盒。该试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术，通过扩增胎儿弯曲杆菌性病亚种的DNA序列，从而实现对病原体的检测和诊断。 胎儿弯曲杆菌性病亚种是一种常见的细菌感染，主要通过性接触传播。该病亚种的症状包括尿道分泌物增多、尿频、尿急、尿痛等，严重时还可能导致尿道狭窄和尿路结石等并发症。 胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的原理是利用特异性引物和荧光探针，扩增胎儿弯曲杆菌性病亚种的DNA序列。在PCR反应中，当引物与目标DNA序列结合时，会激活DNA聚合酶进行链式反应，从而扩增出大量的目标DNA片段。荧光探针则会与扩增产物结合，通过荧光信号的检测，可以确定是否存在胎儿弯曲杆菌性病亚种的感染。 胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速准确地检测出感染情况。它在临床上广泛应用于胎儿弯曲杆菌性病亚种的诊断和治疗监测，对于指导临床治疗和预防疾病的传播具有重要意义。 二、胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集尿液、分泌物等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在胎儿弯曲杆菌性病亚种的感染。 三、应用 胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒可以用于空肠弯曲杆菌基因诊断方法的建立及其应用： 根据空肠弯曲杆菌VS1基因的序列设计一对特异引物(VS-F和VS-R)，建立了一种快速从食品和水中检测空肠弯曲杆菌的胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒定性PCR方法，并在此基础上以LightCycler为平台建立了两种定量检测空肠弯曲杆菌的实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR)。一种是利用SYBRⅠ染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性，建立real-time PCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌；另外一种是利用荧光能量传递技术(Fluorescene resonance energy transfer，FRET)和DNA合成酶的5’→3’活性，设计一条TaqMan探针，建立real-time PCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。 研究表明，三种PCR方法对空肠弯曲杆菌能特异的扩增出358bp片段，而其它结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均不能扩增出该片段，并且两种real-time PCR方法整个实验能在60min内完成。三种PCR方法的敏感度分别为8CFU／ml，5CFU／ml和5CFU／ml。用培养法、胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒定性PCR方法和基于TaqMan探针的real-time PCR方法对南京地区的屠宰场、超市和牛奶场等地300份鸡肉、300份生牛奶及300份井水及自来水进行空肠弯曲杆菌调查。定性PCR方法结果表明，30.6％(92／300)的鸡肉为阳性、27.3％(82／300)的生牛奶为阳性、13.6％(41／300)的水为阳性。Real-time PCR定量检测结果表明三种样品受空肠弯曲杆菌污染的程度较重。 对用培养法和胎儿弯曲杆菌性病亚种PCR试剂盒PCR法的检测结果进行比较，提示被PCR检测出来的空肠弯曲杆菌有一部分是死菌或VNC。上述结果说明，居民消费的鸡肉、牛奶和水如果加工不当或饮食习惯不卫生，会对其健康构成潜在的威胁。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 MREC小鼠视网膜内皮细胞的处理方法与培养步骤！ 一、菌种简介平台编号：Bio-132760规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：MREC细胞名称：mREC小鼠视网膜内皮细胞产品类别：小鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：小鼠视网膜内皮细胞完全培养基传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）传代方法：1:2传代 传代情况：2~3天换液 培养体系：温度：37℃ ；  气相：空气，95%；CO2，5% 细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 冻存条件：完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSOPS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。 四、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  开菲尔乳杆菌的培养方法与实验内容及打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-53103规格：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Kefiri菌株名称：开菲尔乳杆菌其他编号：DSM20587=ATCC35411培养基编号：58培养温度：34－37培养时间：48 小时用途：模式菌株用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请在-20°C 保存。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；若直接接种液体培养基，则试管液体以不超过 5ml 为宜）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  大鼠卵巢颗粒细胞的处理与使用方法及注意事项！ 一、产品信息平台编号：Bio-73673规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：大鼠卵巢颗粒细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述卵巢是雌性动物的生殖器官。卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢是分泌雌激素的主要器官。卵巢分泌的雌激素主要是雌二醇。卵巢中颗粒细胞是合成雌激素的场所。其产生过程是使雄烯二酮转变成雌激素：内膜细胞在LH的作用下，使胆固醇转变为雄烯二酮；颗粒细胞在FSH的作用，发育过程中产生芳香化酶，它使雄烯二酮转变成雌激素。形成的雌激素分泌到卵泡液和血液中。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常卵巢组织。2)细胞鉴定：卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞收货处理1、T25:收货→观察细胞状态→酒精消毒→37度平衡2h→取培养基备用→传代或者继续培养。2、血清:收货→酒精消毒→37度平衡2h→接种到完全培养基→ 观察细胞状态→继续培养。3、离心管:收货→酒精消毒→37度平衡2h →离心收集细胞→新培养基重悬→接种观察细胞状态→继续培养。4、干冰:收货→放液氮或-80冰箱→复苏→观察细胞状态→继续培养。 七、注意事项1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞*传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。2、确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。3、建议客户收到细胞后前3天,100X、200X、400X各拍3张细胞照片,记录细胞状态,便于后续和技术支持沟通交流。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                ATCC 51726 少酸链球菌的微生物菌种培养方法！ 少酸链球菌， 细胞圆形呈短链。在含碳水化合物的培养基中,大多数菌抹不能使pH值降低至6以下。从葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸。一般也从麦芽糖,海藻糖产酸。不发酵甘油、棉子糖、菊粉、阿拉伯糖和木糖。由于pH值较高,所以测定发酵反应是困难的。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-091421规格：Freeze-Dried拉丁属名：Streptococcus Acidominimus菌株名称：少酸链球菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Streptococcus acidominimus Ayers and Mudge 拉丁名(ATCC? 51726?) 统一编号Strain Designations 别名 CCUG 11675 [LRA 35.02.80]Biosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌种 noMedium 培养基 ATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37°CName of Depositor 寄存者 CCUGChain of Custody 来源国家 ATCC Cross References Nucleotide (GenBank) : AX109645 Sequence 378 from Patent WO0123604. 三 、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  COS-1非洲绿猴SV40转化的肾细胞的培养方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-73009规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：COS-1细胞名称：非洲绿猴SV40转化的肾细胞用途：(种属鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍此细胞株源自CV-1细胞株，经带有编码野生型T抗原的起始失活突变的SV40转染得到。 这些细胞含有一个来自SV40基因组全部早期区域的组成型拷贝。 三、细胞特性1）来源：肾，SV40转染2）形态：成纤维样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。        六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM（推荐128-0001含NaHCO3 1.5g/L；GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。注意：该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 THP-1人单核细胞白血病的培养方式与质量检测！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73174规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：THP-1细胞名称：THP-1（人单核细胞白血病）种属：人年龄（性别）：男组织来源：急性单核细胞白血病，单核细胞生长特性：悬浮细胞形态：单核细胞背景描述：该细胞来源于一岁男孩的外周血。THP-1 细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。THP-1 细胞可以用佛波醇、TPA 诱导单核细胞分化。生长培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃用途：（STR鉴定报告）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方式1、培养基：THP-1 专用培养基【RPMI 1640＋10% FBS＋1% P/S】2、培养环境：37℃、5%CO23、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，1~2 天传代一次。（1）用移液器吹打细胞，形成单细胞悬液，然后将其转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心5min；（2）离心完成后，吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（3）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2 培养箱中进行培养。4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 三、质量检测1、STR 鉴定：正确2、细菌检测：阴性3、支原体检测：阴性 四、售后服务1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。如果有以上任何问题，请及时联系本公司。 五、注意事项1、本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2、若使用本产品发表科学论文，请标注：THP-1 由北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）提供。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  凝结芽孢杆菌的作用形式与保健功能及影响因素！ 一、凝结芽孢杆菌作用形式 凝结芽孢杆菌不是动物肠道固有的微生物，当以芽孢的形式进入消化系统后，经过胃的蠕动以及胃酸的刺激，芽孢开始吸水、膨胀，启动萌发过程。当进入萌发阶段的芽孢到达十二指肠后，芽孢体便彻底转变为营养细胞，营养细胞进入小肠后开始生长繁殖，大约每30min 繁殖一代，从而在肠道内迅速增加数量。伴随凝结芽孢杆菌在肠道中的不断繁殖，大量的代谢产物如：Ｌ（＋）－乳酸、凝固素、α－淀粉酶、脂肪酶及蛋白酶等生成，从而有效地发挥其益生功效。作为肠道内的“移民”，凝结芽孢杆菌只能在肠道内做短暂的停留，一次性口服凝结芽孢杆菌后，经过大约４～７ｄ时间肠道内的凝结芽孢杆菌便会通过排便而消失殆尽。所以应定期和持续使用凝结芽孢杆菌菌剂，以保证在肠道中充分发挥其益生作用。 二、如何辨别凝结芽孢杆菌？ 众所周知，凝结芽孢杆菌是一种可以产乳酸的芽孢杆菌，而枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌等芽孢杆菌是不产酸的，而丁酸梭菌虽然产酸，但却是严格厌氧细菌而且产的是丁酸，在有氧气存在的条件下不能生长，因此可以通过好氧培养来区分凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌。 三、影响凝结芽孢杆菌使用效果的因素 1、有效活菌数 产品中活菌数的多少因不同菌株的生理生化特性、代谢产物的不同有一定的差异，最终其作用效果也有很大差别。即使是同菌株在不同的工艺条件下生产的产品，其活菌数以及成孢率也不同。一般说来，在动物基础日粮中芽孢杆菌活菌数达107 CFU/g时效果已比较明显，在此基础上，提高其活菌数，其应用效果就会有较大提高。 2、动物自身生理条件差异 动物的年龄、健康状况、生理功能的发挥程度等因素对使用凝结芽孢杆菌的效果有直接影响。对于体内酶系不健全的动物，生长早期使用凝结芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌产生的多种酶，可促进其对饲料中碳水化合物的降解，有助于动物对营养物质的吸收和利用。 3、其他因素 如果凝结芽孢杆菌制剂水分含量较高（超过10%），饲料中添加的其他抗生素药物或抗氧化剂、防霉剂等会杀死大量凝结芽孢杆菌的活菌。水分对芽孢杆菌的存活率影响很大，随着水分含量的升高和保存期的延长，凝结芽孢杆菌的活菌量也会有所下降，影响其使用效果。因此，凝结芽孢杆菌的水分控制在8%以下，保存期一般为1年，最长不得超过2年，其他芽孢形成率低的乳酸菌产品保存期则更短一些。另外，添加量、添加方法及添加载体的不同，也对使用效果造成影响。 四、凝结芽孢杆菌的保健功能 凝结芽孢杆菌由于能够形成芽孢，具有较好的保存性，因此近年来对凝结芽孢杆菌保健作用的研究日益深入。 1、调节动物肠道微生态平衡 目前，世界各国广泛用于饲料工业的微生态制剂主要有乳酸杆菌类、双歧杆菌类、芽孢杆菌类、酵母菌及其培养物。多数有益菌在发酵生产过程中多为好氧菌，产品进入动物肠道内仍然要消耗大量的游离氧，并在肠道内定殖，降低氧化还原电势，有利于肠道内厌氧菌如乳酸菌、双歧杆菌的生长，从而达到肠道内微生态的菌群平衡。 2、促进营养物质消化 动物摄取的营养物质进入机体后，需要经过一系列的理化作用才能被吸收利用。凝结芽孢杆菌一方面产生多种消化酶，促进对营养物质的消化与吸收，另一方面通过该菌种在动物消化道内生长、繁殖和定殖，直接产生如维生素、氨基酸、短链脂肪酸等多种营养物质，并明显增加小肠蠕动的速度，改善肠道消化功能。 3、改善动物机体免疫功能，提高抗病能力 据报道，将少量凝结芽孢杆菌添加于鸡饲料中或观赏动物饲料中，可以提高鸡或观赏动物的抗病能力，防止感染鸡瘟病和其他微生物引起的疾病，提高鸡的成活率。另外，凝结芽孢杆菌还能降低动物血脂、防止动脉粥样硬化；降低血糖水平，使糖耐量减少，现象好转；提高动物腹腔巨噬细胞的吞噬能力，增强吞噬细胞功能；增强动物NK细胞活性；加快动物免疫器官发育，增加T、B淋巴细胞的数量，提高动物的体液和细胞免疫水平，增大动物肝脏和法氏囊系数等。此外，它对动物的结肠炎也有在临床上具有很好的疗效。 4、促进动物生长，降低死淘率和料重比 研究发现，牛和猪等大牲畜经常喂食以含有凝结芽孢杆菌的饲料，不仅能提高纤维素类饲料的利用转化率，而且同样能防止大牲畜患病，并缩短存栏时间。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                实验室无菌室管理制度的目的与职责及内容与要求！ 1、目的 规范无菌室的使用管理，保持无菌室的卫生环境，保证微生物检测结果的准确性。 2、适用范围 适用于实验室无菌室的使用和管理。 3、职责 3.1实验室检验员负责无菌室的日常使用、维护。 3.2实验室领班负责无菌室的管理。 3.3部长负责对无菌室管理情况进行监督检查。 4、内容及要求 4.1、准备工作 4.1.1 无菌室的准备 4.1.1.1 无菌室应设有无菌操作间、缓冲间和更衣室，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 4.1.1.2 无菌室经常保持清洁，每次使用前用紫外灯照射或臭氧消毒30分钟以上方可使用，并且同时打开超净台进行吹风。 4.1.1.3 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如75%酒精、0.1%的新洁尔灭溶液等。 4.1.1.4 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 4.1.1.5 无菌室要求最大限度保持无菌状态，禁止在无菌室以内从事与微生物检测操作无关的活动。 4.1.2 着装准备 4.1.2.1无菌室用工作服、帽、鞋、口罩用前必须经过紫外灯或臭氧消毒，无菌室的工作服应经常清洗，保持整洁。 4.1.2.2进入无菌室要穿专用无菌工作服、帽、鞋、口罩，不准将无菌室的工作服、鞋、帽穿出室外。 4.1.3操作人员准备 操作人员在进行无菌操作前，双手必须进行洗手消毒（75%酒精、0.1%新洁尔灭溶液等）。非操作人员严禁进入无菌室。 4.2、操作要求 4.2.1 需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 4.2.2 待检样品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。4.2.3 进入无菌室后，随手关好门，操作过程中严禁人员出入。 4.2.4 无菌操作应在超净台上进行，每次操作过程中，均应做空白对照试验样，以检查无菌操作的可靠性。检测过程严格按照检测规程进行，确保检测结果准确无误。 4.2.5 仪器、器械、平皿等物品需从传递窗口传入无菌室。 4.2.6 如有菌液或样品洒在超净台上，应立即用75%的酒精棉球擦拭干净，在消毒处理。 4.2.7 灭菌后物品放在指定位置，注明灭菌日期，高压灭菌物品可存放3天，过期不能再用，需重新包装灭菌。 4.3、清洗要求 4.3.1 带有菌液的吸管、试管、培养皿等器皿应浸泡在盛有0.1%新洁尔灭溶液或其它消毒溶液的消毒桶内消毒。 4.3.2 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 4.3.3 操作完毕，台内物品全部取出并用消毒液喷洒消毒，用后的物品归位，垃圾带出无菌室，再用紫外灯辐照20分钟。 4.4、无菌室的清洁消毒 4.4.1 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 4.4.2 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取无菌培养皿分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露15分钟后，倒置于36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级超净台平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级无菌操作间平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 4.4.3 除每日进行清洁和使用前的杀菌之外，要根据空白样的检测情况，及时对无菌室进行彻底的熏蒸或消毒。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  头状葡萄球菌PCR试剂盒的特点与应用及研究动态！ 一、背景 头状葡萄球菌PCR试剂盒是一种用于检测头状葡萄球菌的专用试剂盒，它采用PCR（聚合酶链式反应）技术，通过对头状葡萄球菌的特异性基因进行扩增，从而快速、准确地检测出样品中是否存在头状葡萄球菌。 头状葡萄球菌PCR试剂盒的组成通常包括PCR反应液、引物、探针等，其中PCR反应液是核心成分，包含了PCR反应所需的各种酶和缓冲液等。引物和探针则是针对头状葡萄球菌特异性基因设计的，用于扩增和检测该菌种的特定基因片段。 使用头状葡萄球菌PCR试剂盒进行检测时，需要按照说明书上的操作步骤进行，通常包括样品处理、PCR反应液的配制、PCR扩增及产物检测等步骤。在PCR反应中，需要控制好反应温度、时间、循环次数等参数，以确保扩增的特异性和敏感性。 二、头状葡萄球菌PCR试剂盒具有以下特点 1、灵敏度高：能够检测到非常低浓度的头状葡萄球菌DNA。 2、特异性强：能够准确区分头状葡萄球菌和其他常见病原体。 3、操作简便：只需要将样本加入到酶标板中，加入PCR反应液和DNA提取液，经过一定时间的反应后即可得到结果。 头状葡萄球菌PCR试剂盒广泛应用于医学、食品安全等领域，可以用于检测食品、水体、土壤等样本中是否存在头状葡萄球菌的污染。 三、应用 头状葡萄球菌PCR试剂盒可以用于头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制及其同源性研究： 探讨头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制及其同源性,为医院感染的预防和控制及抗生素的合理使用提供依据。 方法：35株葡萄球菌收集自7所教学医院的住院患者,包括30株头状葡萄球菌(28株对利奈唑胺耐药,2株对利奈唑胺敏感)和5株对利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌。通过梅里埃Vitek-2 Compact系统对菌株重新鉴定和药敏试验。利奈唑胺耐药cfr和optrA基因则通过头状葡萄球菌PCR试剂盒扩增和产物测序确定。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)检测菌株之间的同源性。S1核酸内切酶脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株携带的质粒数目和大小。基于Illumina和PacBio RSⅡ(SMRT)测序平台,对分离自不同医院携带cfr基因的部分菌株进行全基因组测序,然后利用ResFinder和ISFinder等软件对数据进行分析。染色体和质粒结构分析图采用InkScape0.48.1软件绘制。 结果： ①对利奈唑胺耐药的28株头状葡萄球菌和5株表皮葡萄球菌对青霉素、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率均为100%,而且对苯唑西林的耐药率也分别高达96.4%和80%。 ②经头状葡萄球菌PCR试剂盒扩增和产物测序确认,28株利奈唑胺耐药的头状葡萄球菌和5株利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌携带cfr基因阳性率分别为82.1%(23/28)和80%(4/5),而2株利奈唑胺敏感的头状葡萄球菌未检出。另外,这35株葡萄球菌的optrA基因全部为阴性。 ③PFGE和聚类分析结果显示:30株头状葡萄球菌分为3群(A～C),其Dice相似系数为74.9%～100.0%;5株表皮葡萄球菌的PFGE几乎一致,其Dice相似系数为89.2%～100.0%,而且这5株表皮葡萄球菌的MLST均属于ST 22型。这些结果表明利奈唑胺耐药的头状葡萄球菌和表皮葡萄球菌都在医院存在克隆传播。 ④通过高通量测序技术平台,获得3株头状葡萄球菌(QD2、QD12和QD40)和1株表皮葡萄球菌QD39的染色体和质粒的全序列。生物学信息分析显示:头状葡萄球菌QD2、QD12和QD40各有1条染色体和3个质粒,且携带的cfr基因分别位于质粒上(分别命名为pHJP338-2、pHJP381-2和pHJP410-3);表皮葡萄球菌QD39含有1条染色体(HJP409-chr)和1个质粒,但携带的cfr基因位于染色体HJP409-chr上。 ⑤比较基因组学分析显示,携带cfr基因的质粒pHJP338-2、pHJP381-2和pHJP410-3与携带cfr基因的MRSA菌株LRSA417的质粒pLRSA417(GenBank No:KJ922127.1)的序列高度相似(覆盖率高达100%,核酸一致性99.17%)。另外,表皮葡萄球菌QD39染色体HJP409-chr的cfr区域由ISEnfa4-orf1-cfr-ISEnfa4组成,也与MRSA菌株LRSA417的质粒pLRSA417(GenBank No:KJ922127.1)中相对应的序列高度相似。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系的应用！ 一、背景 SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系是一种常用的实验细胞系，通常用于研究淋巴细胞的生物学特性和基因表达。这种细胞系具有某些独特的特征，例如高增殖能力、稳定的生长特性以及容易进行基因转染等，使其在基础研究和应用研究中具有广泛的应用价值。 SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系是一种小鼠骨髓瘤细胞系，由Ludwig等人在1980年代初期建立。这种细胞系来源于C57BL/6小鼠的骨髓瘤细胞，经过多次传代和适应性培养，使其成为一种适合用于各种实验研究的高质量细胞系。 在细胞形态学方面，SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系为圆形或卵圆形，具有贴壁生长的特性。这些细胞通常处于悬浮状态，但也可以在适当的条件下进行固定和染色，以便进行显微观察和分析。 在遗传学方面，SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系具有稳定的基因组，可以进行各种基因操作，例如基因敲除、转染和表达等。此外，这种细胞系还可以用于制备抗体和其他生物分子，为生物医学研究提供了重要的工具和资源。 二、SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系培养操作 1)复苏SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系可以用于MRL/lpr小鼠骨髓CXCL12表达失调促进B淋巴细胞向骨髓归巢： 研究MRL/lpr狼疮鼠骨髓微环境中成骨细胞(Osteoblasts,OB)表面CXCL12对B淋巴细胞归巢的影响;研究系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓及外周血中CXCR4+B淋巴细胞比例及CXCL12的表达,以及与疾病活动标志物的相关性。 方法： (1)流式细胞术检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠外周血、骨髓及脾脏中CXCR4+B淋巴细胞的比例差异;qRT-PCR法检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠外周血、骨髓及脾脏中CXCL12表达差异;免疫荧光检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠骨髓微环境中CXCL12、成骨细胞OB及B淋巴细胞的空间关系。 (2)在体研究B淋巴细胞归巢实验:体内输注实验分组:1、C57BL/6小鼠;2、MRL/lpr小鼠;3、用CXCL12拮抗剂LIT-927提前12小时灌胃的MRL/lpr小鼠(MRL/lpr+LIT-927)。取MRL/lpr狼疮小鼠脾脏,通过磁珠分选术分选出B220+的B淋巴细胞,通过流式细胞术检测分选出的B淋巴细胞纯度,随后用活细胞染料CFDA-SE对分选出的B淋巴细胞进行荧光染色,流式细胞术检测CFDA染色效率。将CFDA标记的B淋巴细胞(CFDA+B)通过尾静脉分别输注到三组小鼠体内,24小时后通过流式细胞术检测三组小鼠骨髓中CFDA阳性的B淋巴细胞比例。 (3)取发病的同周龄的MRL/lpr小鼠分为两组,一组用LIT-927灌胃(9.2mg/20g),另一组用等量LIT-927溶剂CMC-Na灌胃,每两天一次,共两周。两周后,取两组小鼠外周血及骨髓,通过流式细胞术检测CXCR4+B淋巴细胞及浆细胞的比例及骨髓中pre-pro-B(CD19-B220+)及pro-B(CD19+B220+)细胞的比例。 (4)收取临床上确诊为SLE患者10例和健康对照组3例的骨髓,以及SLE患者4例和健康对照组6例的外周血,流式细胞术检测CXCR4+B淋巴细胞比例;酶联免疫吸附法检测骨髓及外周血中CXCL12的表达;收集SLE患者临床资料,与骨髓CXCR4+B淋巴细胞比例及CXCL12表达水平进行相关性分析。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                PC-3人前列腺癌细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73126规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：PC-3细胞名称：PC-3（人前列腺癌细胞）种属：人年龄（性别）：男；62岁组织来源：前列腺；骨腺癌转移灶生长特性：贴壁细胞形态：上皮细胞样背景描述：PC-3细胞源于一位62岁白人男性Ⅳ级前列腺腺癌患者的骨头转移灶；PC-3细胞的酸性磷酸酶活性和5-α-睾丸激素还原酶活性都低。生长培养基：Ham's F-12K10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：前列腺2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。          四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  用于生产酸奶的瑞士乳杆菌的注意事项有哪些？ 瑞士乳杆菌是革兰氏阳性细菌中的一种，为益生菌，其呈长杆状，无鞭毛，无芽孢，菌落圆形，乳白色，边缘整齐，化能异养性，兼性厌氧，不液化明胶。主要用于生产酸奶。 一、菌种简介平台编号：Bio-67082规格：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Helveticus中文名称：瑞士乳杆菌属名：Lactobacillus种名加词：helveticus来源历史：←日本收藏时间：1968.00.00资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：生产酸奶。特征特性：G+，菌体长杆状，两端钝圆，链状排列，无芽孢，有异染粒。菌落不圆，表面粗糙，平展，边缘不齐，浅黄色，不透明。发酵葡萄糖、乳糖，不发酵木糖、果糖、蔗糖、阿拉伯糖。从葡萄糖酸盐产酸，接触酶阴性，从精氨酸微弱产氨，牛奶反应产酸、凝固、还原，兼性厌氧。45℃生长。产乳酸。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：脱脂奶粉 120.0g， 蒸馏水 1.0L，自然pH。113℃灭菌20min。培养温度：37℃培养时间：48 小时资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；生产酸奶。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请在-20°C 保存。  四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠淋巴瘤细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129593规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：RMA-S细胞名称：小鼠淋巴瘤细胞RMA-S产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：1640+10%FBS+1%双抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：小鼠淋巴瘤细胞RMA-S取自C57BL/6小鼠注释：Characteristics:Deficient in antigen processing.用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   BIC-1人食管腺癌细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133393规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：BIC-1细胞名称：BIC-1人食管腺癌细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：BIC-1人食管腺癌细胞2）含量：>1x106 个/mL3）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）培养基：90%高糖DMEM+10%FBS6）生长特性：贴壁生长 三、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 四、细胞收到后处理细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 五、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   ATCC 208821 新型隐球菌的微生物培养方法！ 新型隐球菌又名溶组织酵母菌，是土壤，鸽类，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中，可侵犯人和动物，一般为外源性感染，但也可能为内源性感染，对人类而言，它通常是条件致病菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-78930规格：Frozen拉丁属名：Cryptococcus Neoformans菌株名称：新型隐球菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Cryptococcus neoformans var. grubii拉丁名(ATCC? 208821?)菌株编号Strain Designations菌株别名: H99 [H99JP, NYSD 1649] /Product Format提供形式: frozenPermits and Restrictions View Permits Deposited As Cryptococcus neoformans (Sanfelice) VuilleminStrain Designations菌株别名： H99 [H99JP, NYSD 1649]Application Biomedical Research and Development Material Emerging infectious disease research Negative control in differential gene expression studies Produces laccaseBiosafety Level生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 生长条件 frozenStorage Conditions 保藏方法Frozen: -80℃ or colderFreeze-Dried冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture活菌: See Propagation SectionType Strain模式菌株 yes Antigenic Properties Serotype APreceptrol? noGenome Sequenced Strain Yes Mating Type Mating type: alpha (Peter R Williamson, personalcommunication)Comments 注释Multigene phylogeny and phenotypic characterization.Facultative intracellular pathogen Genome sequencing strain (Broad Institute, USA) Morphology After 8 days on YM agar at 30℃, colony is cream-colored, smooth, mucoid. Cells globose or subglobose, single or with bud, pseudohyphae not observed.Medium培养基 ATCC? Medium 28: Emmons' modification of Sabouraud's agarATCC? Medium200: YM agar or YM brothATCC? Medium 324: Malt extract agar Growth ConditionsTemperature培养温度: 25℃ to 30℃Atmosphere: Typical aerobic Sequenced Data18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequenceMorphology After 8 days on YM agar at 30℃, colony is cream-colored, smooth, mucoid. Cells globose or subglobose, single or with bud, pseudohyphae not observed. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   粪肠球菌在动物生产中的应用与影响！ 一、粪肠球菌对家禽生产性能的影响 粪肠球菌能够提高家禽的生产性能。有专家研究发现，在日粮中添加粪肠球菌可降低蛋鸭的耗料量和料蛋比，提高总蛋重，进一步发现日粮中添加粪肠球菌对提高蛋鸭的蛋品质同样效果显著。粪肠球菌通过增殖有益菌、抑制有害菌，调控肠道菌群平衡，促进肠道内合成大量的维生素、酶等物质，提高饲料的消化利用率，从而提高生产性能。 二、粪肠球菌对家禽免疫功能的影响 机体的健康水平与免疫力密切相关，粪肠球菌通过提高机体免疫力而提高动物的抗病力和抗应激能力。有专家研究粪肠球菌对肉鸡免疫机能的影响，结果表明粪肠球菌可以提高肉鸡的法氏囊和脾脏指数。法氏囊是禽类重要的中枢免疫器官，在法氏囊淋巴干细胞诱导成为免疫活性细胞，并运送至外周免疫器官。粪肠球菌明显提高肉鸡血液中的抗体水平，促进免疫器官的综合发育，使得更多的淋巴细胞分化为浆细胞产生抗体。同时发现粪肠球菌能够预防雏鸡白痢，保护雏鸡免受沙门氏菌的攻击 ，降低雏鸡死亡率 ，提高育雏成活率。粪肠球菌能够提高蛋鸡血清中IgA含量，增强机体免疫机能，其原因可能是粪肠球菌菌体或其代谢产物穿透小肠壁，刺激机体免疫反应，增强巨噬细胞功能，促进B淋巴细胞的增殖或对IgA的分泌。 三、粪肠球菌对猪肠道菌群的影响 肠道菌群失调会导致机体免疫力下降，从而引发各种疾病。当肠道菌群紊乱后，双歧杆菌、乳酸菌等数量显著降低，沙门氏菌和大肠杆菌等数量则显著增加，此时给动物补充益生菌能够显著抑制致病菌的生长，增加有益菌数量，从而建立显著的优势菌群，达到维护或恢复肠道微生态平衡的目的。 四、粪肠球菌对猪免疫功能的影响 动物体液免疫对抵抗疾病有重要作用，血清免疫球蛋白的含量可反映出体液免疫功能。粪肠球菌可提高猪血清中IgG和IgA含量，这表明粪肠球菌对提高猪的体液免疫有积极作用，其原因可能是粪肠球菌产生某些蛋白质和多肽类物质刺激机体的免疫系统。器官指数是生物学指标之一，一定程度上反映机体器官功能的强弱。有专家研究表明，粪肠球菌可在一定程度上促进断奶仔猪肝脏和脾脏的发育，改善其免疫功能，其原因可能是由于粪肠球菌自身作为一种抗原物质，有效刺激肝脏和脾脏的生长发育，另外粪肠球菌在断奶仔猪肠道中生长繁殖，合成的一些有益成分可能会对肝脏和脾脏的发育产生一定的刺激作用。 五、粪肠球菌对反刍动物生产性能的影响 粪肠球菌可提高反刍动物瘤胃微生物活性，改善瘤胃环境，增加有益菌数量，从而提高其生理性能。有专家采用分子生物学方法研究粪肠球菌对断奶犊牛胃肠道纤维分解菌数量的影响，结果表明，粪肠球菌对黄色瘤胃球菌、琥珀酸丝状杆菌、溶纤维丁酸弧菌、脂解厌氧弧菌和白色瘤胃球菌在犊牛消化道中的生长和定植有显著促进作用。粪肠球菌对奶牛产奶量的提高主要表现在其能够促进机体对氨和乳酸的利用，改善瘤胃PH环境，以刺激瘤胃微生物的生长和活性，增强有益菌的繁殖速度，从而调节瘤胃内的微生态平衡；同时加快饲料蛋白质的降解，增加菌体蛋白的产量，增强机体免疫力，提高饲料利用率，最终提高奶牛的产奶量。 粪肠球菌作为一种益生菌，其益生功效较为明显，已被大量试验所证实。粪肠球菌在动物生产中的应用越来越广泛，不仅能够调节肠道菌 群、增强机体免疫功能、提高生产性能，而且具有无残留、无污染和无耐药性等特点，在动物生产中具有广阔的应用前景。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     人原代真皮毛乳头细胞运输和保存及使用方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-135641规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞名称：人原代真皮毛乳头细胞用途：原代细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述真皮毛乳头细胞位于毛囊基底部，是一类成纤维细胞。在毛囊发育早期，真皮细胞向单层上皮细胞发出第一真皮信号，刺激上皮局部形成毛基板。随后毛基板细胞向下方的真皮发出第一表皮信号，诱导其形成有成纤维细胞组成的凝集细胞团。在此过程中，毛母质细胞逐渐包裹凝集细胞团，形成成熟的真皮毛乳头细胞。作为毛囊中的重要细胞群，真皮毛乳头细胞的分子机制和临床应用正在被逐渐认识和解析。 三、细胞特性1)细胞来源于手术切除的正常头皮组织。2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2）T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    草螺菌属的菌株培养与实验内容及保存方法！ 草螺菌属是Herbaspirillum属的微生物，原产地为中国。G‾，菌体杆状，单个排列，运动，发酵型，兼性好氧。主要用途为研究，具体用途为用于环境污水处理研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-58843提供形式：冻干物拉丁属名：Herbaspirillum Sp.中文名称：草螺菌属属名：Herbaspirillum种名加词：sp.来源历史：←北京工商大学化工学院（10128）收藏时间：2006.3.26原始编号：P4资源归类编码：15131128103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：用于环境污水处理研究。特征特性：G￣，菌体杆状，单个排列，运动，发酵型，兼性好氧。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：土壤采集地：北京工商大学培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：20568用途：研究；用于环境污水处理研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备 ，其中(1)～(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人卵巢癌贴壁细胞系的知识与应用及研究动态！ 一、背景 OVISE人卵巢癌贴壁细胞系是一种用于研究卵巢癌的细胞系。这种细胞系由日本学者于2007年建立，来源于一名53岁的女性卵巢黏液性癌患者的腹水。该细胞系具有高度侵袭性和转移性，可以作为研究卵巢癌发生、发展和转移的模型之一。 OVISE细胞系的建立对于卵巢癌的研究具有重要意义。通过使用这种细胞系，科学家们可以研究卵巢癌细胞的生物学特性、分子机制和药物敏感性等。此外，OVISE细胞系还可以作为筛选和评估卵巢癌治疗药物的模型之一，为卵巢癌的治疗提供重要的参考依据。 二、OVISE人卵巢癌贴壁细胞系培养操作 1)复苏OVISE人卵巢癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)OVISE人卵巢癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)OVISE人卵巢癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 OVISE人卵巢癌贴壁细胞系可以用于顺铂对巨噬细胞的调控在卵巢癌转移过程中的作用及机制研究： 研究方法： (1)分别用PMA和M-CSF刺激THP1细胞和人外周血单核细胞(PBMC),使其诱导成为未活化的巨噬细胞Mφ,通过流式细胞术检测诱导效果;然后用LPS/IFN-γ诱导Mφ成为经典活化的巨噬细胞(CAM),并通过Real-time PCR验证诱导效果。Transwell法检测经化疗药物顺铂、卡铂、环磷酰胺和紫杉醇作用的Mφ和CAM的条件培养基(CM)对卵巢癌细胞A2780和SKOV3侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测经顺铂作用的Mφ条件培养基(Cis-Mφ-CM)和CAM条件培养基(Cis-CAM-CM)对A2780细胞的上皮间质转化相关蛋白表达的影响;Real-time PCR检测经顺铂作用后的CAM中极化指标的变化;CCK8法和流式细胞术分别检测Cis-CAM-CM对卵巢癌细胞A2780及SKOV3增殖和凋亡的影响;经Cis-CAM-CM作用后,CCK8法检测卵巢癌细胞对顺铂敏感性的变化。 (2)通过Luminex液体悬浮芯片检测顺铂处理前后的巨噬细胞CM中的细胞因子的浓度,筛选差异蛋白,并通过Real-time PCR和ELISA分别验证差异基因在m RNA及蛋白水平的表达,确定候选蛋白;用候选蛋白的人源重组蛋白作用于卵巢癌细胞,CCK8法检测候选蛋白对细胞增殖的影响,transwell法检测候选蛋白对细胞迁移的影响;采用候选蛋白的中和抗体阻断Cis-Mφ-CM和Cis-CAM-CM中的候选蛋白,transwell法检测其对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响;采用si RNA敲低A2780和SKOV3中的CCR6表达,Real-time PCR及Western blot验证敲低效果,CCK8法检测Cis-CAM-CM对CCR6-KD卵巢癌细胞增殖的影响,transwell法检测Cis-CAM-CM对CCR6-KD卵巢癌细胞迁移能力的影响,Western blot检测Cis-CAM-CM对CCR6-KD卵巢癌细胞上皮间质转化相关蛋白表达的影响。 (3)Real-time PCR和Western blot检测CCR6在人源永生化卵巢上皮细胞IOSE和卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780、HO8910、OVCAR3、OVISE人卵巢癌贴壁细胞系、ES2、HEY)中的表达;CCK8法和Transwell法分别检测rh CCL20对卵巢癌细胞株增殖和迁移的影响;采用si RNA敲低A2780和SKOV3细胞中的CCR6表达,以及Crispr-cas9技术敲除A2780中CCR6的表达,transwell法检测迁移能力的变化,以及rh CCL20对其迁移能力的变化;Western Blot检测A2780和SKOV3细胞经rh CCL20作用后MAPK信号和Akt信号通路的激活情况;构建裸鼠腹腔移植瘤模型,检测CCL20-CCR6轴在体内卵巢癌转移过程中的作用;采用KM plotter分析卵巢癌组织中CCR6表达与卵巢癌病人预后的相关性,采用基因富集分析探讨卵巢癌组织中CCR6表达与转移相关基因集表达的相关性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    OP9小鼠骨髓基质细胞的处理方法与培养步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-54021规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：OP9细胞名称：小鼠骨髓基质细胞用途：(种属鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍OP9细胞株源自新生的op/op 小鼠颅盖。因编码M-CSF的基因中的一个突变，它不能生成有功能的巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在对胚胎干细胞(ES)分化成血细胞而不是其他巨噬细胞有抑制功能。OP9细胞可以用于与小鼠胚胎干细胞共培养以诱导胚胎干细胞分化成成红血球来源的、骨髓来源的和B细胞谱系的血细胞。与OP9共培养不需要外源的生长因子或复杂的胚胎结构。这个系统对研究造血细胞的发育和分化的分子机理有用。 三、细胞特性1）来源：小鼠骨髓，基质2）形态：成纤维细胞，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                       六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM-a培养基；优质胎牛血清，20%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml。2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  浅黄隐球酵母的培养方法与实验内容及注意事项！ 浅黄隐球酵母是Cryptococcus属的微生物，原产地为中国。菌落粘稠，平伏，奶油状，略带黄色，光滑反光，边缘平滑。主要用途为研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-65187提供形式：冻干物拉丁属名：Cryptococcus Flavescens中文名称：浅黄隐球酵母属名：Cryptococcus种名加词：flavescens来源历史：←自行分离收藏时间：2013.1.21原始编号：Z9资源归类编码：15151111101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落粘稠，平伏，奶油状，略带黄色，光滑反光，边缘平滑。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：野生诺尼种子内培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                食品微生物样品采集所需要的工具和材料有哪些？ 百欧博伟生物：在不同环境下采集微生物样品时,所使用的工具和材料应是清洁的,有需要时应先做灭菌处理。例如,若需检测产品内部的微生物,则采样工具必须灭菌;若检测目的是餐饮或食品加工卫生状况的检查,则可直接使用餐饮器具或食品加工工具取样,无须灭菌。同理,样品的包装是否需要灭菌处理也取决于检测的目的。 用于采集微生物样品的通用工具和材料及其要求如下： (1) 包装、工具,部分样品表面的消毒材料;可使用75%(体积分数)酒精或其他杀菌剂，以及含酒精或其他杀菌剂的湿巾和垫片。 (2) 适宜大小和食用级别的塑料袋:容量应能满足样品的需求,是否无菌取决于检测的目的,最好带有防水标签。 (3) 盒子：用于蛋类及其他易碎产品的采集,是否无菌取决于检测的目的。 (4) 适宜材质及容量的瓶子或试管:用于采集液体样品,是否无菌取决于检测的目的，广口瓶特别适用于采集腐败变质的样品。 (5) 电子温度计：宜带有表面传感器和红外探测器,并经过校准。 (6) 样品标识系统;标签、永久性记号笔等。 (7) 勺子、镊子、刀具、手术刀、插入式取样器、长柄勺以及其他专用器具入(牡蛎刀，开贝器、注射器，移液管﹑开罐器等):是否无菌取决于检测的目的。 (8) 电钻或手钻：用于冷冻产品采集，应配备有适宜的钻头，是否无菌取决于检测的目的。 (9) 电锯或去芯器：用于肉类及奶酪等采集﹐是否无菌取买于检测的目的。 (10) 采样人员防护用品;如工作服、安全帽﹑鞋、手套等。 (11) 便携式冰箱或保温箱：用于样品运输﹐使用保温箱或容器(如泡沫塑料箱等)时，应将足够量的冰袋或制冷剂放在容器的四周，以保证运输过程中样品容器内的温度。 除以上的通用采样工具和材料外,乳及乳制品取样还需要手工混合器具与机械搅拌器具等(参见ISO 707);初级产品阶段取样还需要专用的鞋袜、拖拭子、绳拭子及消毒用火焰喷枪等(参见ISO 13307);环境表面及胴体取样时还需要一定面积的无菌模板(金属、塑料或纸质的)、专用的接触平板和含薄层培养基的蘸片﹑棉拭子、海绵和布垫片等(参见lSO 18593及ISO 17604)。对初级产品阶段采样时,用到多种一次性用品(如手套、靴、塑料袋),在每一个采样的环境场合(如不同的农场)都应该使用新的包装﹐在采样的过程中,应采取预防措施确保未使用的设备/材料不被污染。 根据检测目的,非一次性的采样工具或设备应当在使用前进行灭菌,如高压灭菌或干热灭菌,在某些情况下,也可便用化学去污剂。经过灭菌处理后的设备应当是洁净、无菌,无生物抑制物的。在取样时需要重复使用的工具，可通过灼烧,75%(体积分数)酒精或者其他合适的消毒剂进行灭菌后使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒的应用及操作流程！ 一、背景 诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒是一种专门用于检测诺氏梭状芽孢杆菌的体外诊断试剂。它采用了聚合酶链式反应（PCR）技术，能够在短时间内快速、准确地检测出诺氏梭状芽孢杆菌。 诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒的主要成分包括PCR反应液、DNA模板、引物、酶等。其中，PCR反应液是PCR反应的基础，包含PCR反应所需的各种成分，如缓冲液、离子、酶等。DNA模板是含有诺氏梭状芽孢杆菌特异性基因序列的DNA片段，用于扩增出特异性片段。引物是一段与DNA模板特异性结合的短序列，用于启动PCR反应。酶是热稳定的DNA聚合酶，用于催化DNA合成。 使用诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒时，需要将DNA模板、引物和PCR反应液混合后进行PCR反应。在适宜的温度和条件下，引物与DNA模板特异性结合，并通过酶的催化进行DNA合成，最终得到大量的特异性DNA片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行检测和分析，可以确定是否存在诺氏梭状芽孢杆菌。 二、诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒操作流程 1、整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。 2、为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。 3、每次实验应该设置阴、阳性对照。 4、试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。 5、试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。 6、为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。 7、仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。 8、ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。 9、实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。 三、应用 诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒可以用于诺氏梭菌孢子联合化疗治疗裸鼠移植肝癌的实验研究： 诺氏梭菌孢子(C.novyi-NT)在体外对人肝癌细胞HuH-7细胞系的毒性作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响 研究在体外厌氧条件下,诺氏梭菌孢子(C.novyi-NT)对体外培养的人肝癌细胞HuH-7细胞系的毒性作用及其对VEGF表达与分泌的影响。 材料与方法：采用诺氏梭状芽孢杆菌PCR试剂盒筛选诺氏梭菌菌落收集梭菌孢子；采用细胞培养技术,以人肝癌细胞HuH-7细胞系为靶细胞,将HuH-7细胞随机分成对照组、梭菌孢子组及阿霉素组,厌氧培养条件下分别加入磷酸盐缓冲液(PBS液)、诺氏梭菌孢子C.novyi-NT及阿霉素。处理12小时、24小时、48小时及72小时后,应用WST-1比色法测定各不同处理方法对人肝癌细胞HuH-7细胞系的毒性(0D值)。 应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定反应24小时、48小时及72小时后对照组及梭菌孢子组细胞培养基上清液中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量。应用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)分析厌氧培养72小时后对照组及梭菌孢子组HuH-7细胞的VEGF mRNA表达水平。 结果：将梭菌孢子C.novyi-NT加入体外培养的人肝癌细胞HuH-7细胞后显示出毒性作用和对该细胞系的生长抑制效应。加入梭菌孢子C.novyi-NT作用12小时后,细胞生长开始出现停滞,细胞呈圆形或球形,胞浆中出现颗粒状物质。72小时后,细胞培养基中出现更多细胞碎片。 厌氧培养条件下,细胞损伤随时间的延长逐渐加剧。24小时后,梭菌孢子C.novyi-NT的细胞毒性作用明显强于对照组,两组0D值具有显著差异,与阿霉素组相比无明显差异。24、48、72小时细胞上清液中VEGF的量,梭菌孢子组与对照组相比无明显统计学差异；但72小时后,梭菌孢子组厌氧培养的细胞VEGF mRNA表达水平明显高于对照组(p=0.012)。 结论：在厌氧培养条件下诺氏梭菌孢子(C.novyi-NT)对体外培养的人肝癌细胞HuH-7细胞系有明显的细胞毒性作用,且影响VEGF的mRNA表达。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞的知识与应用！ 一、背景 HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞来源于是一个由正常人胰腺导管上皮细胞（HPDE）衍生的永生化上皮细胞系。HPDE6-C7细胞系的科研应用广泛，常用于3D细胞培养的研究。 二、HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞收到后处理 细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞培养步骤 1）复苏HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 四、应用 HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞可以用于MLCK在实验性高甘油三脂血症性胰腺炎胰腺导管上皮细胞中作用的初步研究： 高脂环境对胰腺导管上皮细胞MLCK及细胞间紧密连接的影响目的:用油酸(oleic acid,OA)和软脂酸(palmitic acid,PA)与HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞共培养,模拟体内的高脂环境,观察在高脂环境下HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞中MLCK,TJ相关蛋白和Ca2+通道mRNA的表达水平变化。 方法：分别用不同浓度的OA(100,200,300,400,500μM/L)和PA(100,200,300,400,500μM/L)处理HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞24h。采用CCK-8法检测细胞增殖;q PCR法检测MLCK、ZO-1、Claudin-2、Occludin、Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1、Cav3.2的mRNA表达水平。 结果： 1、(1)OA:在浓度为300μM,400μM和500μM时抑制HPDE6增殖,以500μM时抑制最明显(P 2、(1)OA:在浓度为400μM增加MLCK mRNA表达(P0.05)。(2)PA:增加MLCK mRNA表达,呈浓度依赖性(P 3、(1)OA:浓度在400μM和500μM时增加Cav2.2 mRNA表达(P0.05)。(2)PA:浓度在200μM和500μM增加Cav1.2和Cav2.1 mRNA表达(P 结论： 1、OA和PA抑制HPDE6-C7细胞系|人正常胰腺导管上皮细胞增殖,以500μM时抑制作用最明显。 2、OA和PA上调HPDE6C7细胞中MLCK及Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1 mRNA表达,减少ZO-1、Occludin和Claudin-2 mRNA表达。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                潮湿纤维单胞菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 潮湿纤维单胞菌是Cellulomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-52512规格：冻干物拉丁属名：Cellulomonas Uda中文名称：潮湿纤维单胞菌拉丁名称：Cellulomonas uda来源历史：收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：NRS 136原产国：美国模式菌株：是生物安全级别：一级其它保藏中心编号：ACCC 11097=CGMCC 1.1916=ATCC 491=BCRC 14868=CCUG 24088=CECT 4284=CFBP 4256=CGMCC 1.1916=CIP 102089=DSM 20107=IAM 12111=IFO 3747=KCCM 12156=KCTC 1441=LMG 16327=NBRC 3747=NCAIM B.01382=NCIMB 8200=NRRL B-404培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：堆肥采集地：弗吉尼亚州保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  二、形态特征该菌革兰氏阳性，兼性厌氧，接触酶阳性。最适生长温度为２５℃，pH 7.0。在幼龄培养物中，为不规则杆状，到生长后期出现少量球形细胞，以一根或多根侧生鞭毛运动或不运动，不形成芽孢。在正常生长情况下可利用精、肝糖、乙酸、丙酮酸等为碳源物质。  三、培养基* 营养琼脂培养基（NA）* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）* LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可） 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 七、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 食药用菌——雷丸菌的药理作用与注意事项有哪些？ 雷丸菌是Laccocephalum属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为木腐菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-089540提供形式：斜面培养物拉丁属名：Laccocephalum Mylittae中文译名：雷丸菌拉丁学名：Laccocephalum mylittae原始编号：1菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：应建浙直接来源国家：中国保藏时间：3/0/1963生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：木腐菌培养温度：25℃培养基：0017    采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征食药用菌，又称竹铃芝、雷实、竹苓、竹兜菌。具有软坚化瘤，缩小肿块，减毒增效，激活免疫等多种功效。干燥的菌核为球形或不规则的圆块状，大小不等，直径1~8cm。表面呈紫褐色或灰褐色，全体有稍隆起的网状皱纹。质坚实而重，不易破裂；击开后断面不平坦，粉白色或淡灰黄色，呈颗粒状或粉质。质紧密者为半透明状，可见有半透明与不透明部分交错成纹理。气味无，味淡，嚼之初有颗粒样感觉，微带粘液性，久嚼则溶化而无残渣。 三、典籍记载1、《本草经疏》：“雷丸，其主杀三虫，白虫、寸白自出者，肠胃湿热甚也。逐毒气，胃中热邪气，恶风，汗出，皮中热结积者，肠胃邪热盛也，苦寒能除二经（手足阳明）湿热邪气，则上来诸证自除。作摩膏治小儿百病者，以小儿好食甘肥，肠胃类多湿热虫积，苦能杀虫除湿，咸寒能清热消积，故主之也。”2、《本经》：“主杀三虫，逐毒气，胃中热，利丈夫，不利女子，作摩膏，除小儿百病。”3、《别录》：“逐邪气，恶风汗出，除皮中热、结积，白虫、寸白自出不止。”4、《药性论》：“能逐风，主癫痫狂走，杀蛔虫。”5、《玉楸药解》：“清热疏肝，杀寸白虫，祛风除痫，止小儿汗。”6、《陕西中药志》：“消积杀虫，清热解毒。治虫积腹痛，小儿疳积，胃中热，对绦虫病疗效较显著。”7、《本草述》：“雷丸，为竹之余气所结。缘清阴之气味而又能疏利，其于行气血之热，岂非良剂。第通用不无有伤元气也。悉此义则能善用此味矣。”8、《本经逢原》：“雷丸，《千金》治小儿伤寒，不能服药，治方中恒用之，取其逐毒气之功也。” 四、药理作用1、驱绦虫作用。雷丸中含有一种能使绦虫虫体坏死的蛋白酶，所含蛋白酶约3%，可溶于水，在肠道弱碱性（pH8）的环境中，具有较强的分解蛋白质的作用。加热失效，能破坏绦虫头节，对牛肉绦虫、猪肉绦虫和犬绦虫均有作用。临床也证明内服20g雷丸粉，每日3次，连服3d，基本可根治。2、抗滴虫作用。单味雷丸粉除驱除绦虫外，对肠道滴虫也有效。在含5%雷丸煎剂的培养液中，大部分滴虫颗粒化变形。10%的雷丸煎剂，药液与培养基成1 : 1的浓度，5分钟后大部分阴道毛虫体颗粒化变形，个别虫体仍有活动。3、对蛔虫和钩虫的作用。50%乙醇提取物在体外对猪蛔虫产生明显的抑制，但对蛔虫感染者无效。雷丸粉内服对钩虫病有明显疗效。4、增强免疫作用。雷丸多糖（S4001）对多种动物实验模型，具有明显的抗炎症作用，用后血浆皮质酮含量明显增高，但肾上腺中抗坏血酸含量却无改变，可能S4001不影响肾上腺皮质激素的合成，而是促进皮质激素释放或阻止其代谢消除。小鼠皮下注射S4001，能明显增加刚果红染料在血中的廓清；对绵羊红细胞免疫的小鼠能明显增加其血清半数溶血值。表明S4001能增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能和体液免疫功能。5、抗癌作用。雷丸提取出的蛋白酶（含量约5%）肌注或腹腔注射，对小鼠肉瘤S180的抑制率为33.3%-69.3%，显示有一定的抑制作用。 五、培养条件综合马铃薯培养基（PDA）马铃薯浸取液 1L pH 自然马铃薯浸取液配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。  六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 七、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  葡萄糖蛋白胨琼脂的分类与检验原理及使用方法！ 一、背景 葡萄糖蛋白胨琼脂是一种常用的培养基，可以用于真菌检验。葡萄糖蛋白胨琼脂的成分包括葡萄糖、蛋白胨和琼脂，具有提供营养、维持培养环境、保持培养基湿度和提供细菌生长附着表面的作用。在制作过程中，需要将各成分混合在一起，加热溶解，然后分装到培养皿中，凝固后即可使用。 葡萄糖蛋白胨琼脂的用途广泛，可以用于分离和培养不同类型的微生物，如细菌、酵母菌和霉菌等。葡萄糖蛋白胨琼脂是一种合成培养基，其中的各种成分都是已知的化学物质，因此具有精确的组成成分和重复性，适用于科学研究。 二、葡萄糖蛋白胨琼脂是一种常用的细菌培养基，它的化学成分包括以下几类 碳源：葡萄糖是主要的碳源，能够提供微生物生长所需的能量。 氮源：蛋白胨是主要的氮源，能够提供微生物生长所需的氨基酸和蛋白质。 无机盐：琼脂是胶状凝固剂，能够提供微生物生长所需的附着表面；溴甲酚紫是一种指示剂，能够指示培养基的酸碱度；磷酸二氢钾、硫酸镁等则是微生物生长所必需的无机盐。 三、在使用葡萄糖蛋白胨琼脂时，需要注意以下几点 保持培养基的清洁和无菌，防止污染。 在使用前，需要将培养基加热至融化，然后迅速冷却至室温，以保持其物理性质和营养成分的稳定性。 葡萄糖蛋白胨琼脂在接种微生物时，需要保证操作的无菌性，以避免污染。 葡萄糖蛋白胨琼脂在培养过程中，需要保持适宜的温度和湿度条件，以促进微生物的生长和繁殖。 四、葡萄糖蛋白胨琼脂检验原理 胰酪蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵的糖，溴甲酚紫是酸碱指示剂；琼脂为凝固剂。 五、葡萄糖蛋白胨琼脂用法 称取本品30.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。 六、应用 葡萄糖蛋白胨琼脂可以用于不同环境条件对球孢白僵菌菌株SJ-05的影响： 使用葡萄糖蛋白胨琼脂分离培养来自沙棘木蠹蛾虫体上的5个菌株SJ-01、SJ-02、SJ-03、SJ-04和SJ-05的产孢量、生长速率、萌发率等指标进行了测定。并研究了优良菌株在不同培养基上的产孢量、生长速率及人工继代培养的稳定性。 实验结果表明,SJ-05产孢量大,生长速率快,萌发率高。该菌株在不同培养基上各指标的测定表明,最适合菌株生长的培养基为马铃薯蔗糖蛋白胨琼脂培养基及葡萄糖蛋白胨琼脂。在分光光度计测菌株孢子含孢量的实验中,确定了菌株高孢粉的适宜稀释倍数为1000倍,菌株含孢量与吸光度值之间的方程为:y=100.9589x+0.2838(r2=0.9195)。菌株在50℃热胁迫下的拟合方程Is=1.0089/[1+exp(-3.6571+0.207812t)],半衰期LT50=18.2min,表明菌株耐热力较强。将菌株分生孢子置于不同萌发条件下,测定其萌发率。 测定结果表明：继代培养会延长菌株孢子萌发的时间,菌株孢子萌发的最适营养液为加入1%蚕蛹的微胶囊剂溶液,最适温度在25-30℃,最适pH值为6-8之间。在低湿度对萌发率的影响实验中,RH=72%时孢子均能萌发,但完全萌发的时间为RH=100%的3倍,而RH=61%的条件下,孢子未萌发。在光保护剂对孢子的保护作用实验中,照射时间在10h以内,光保护剂浓度为0.10%的荧光增白剂和浓度为0.15%的抗坏血酸Vc的保护作用最强,超过10h后,浓度为0.15%的抗坏血酸Vc的保护作用则超过浓度为0.10%的荧光增白剂,最后选择0.15%的抗坏血酸Vc为最适光保护剂。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   多主棒孢菌的形态特征与优势特点及培养方法！ 多主棒孢是Corynespora属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学，具体用途为教学科研。 一、菌种简介平台编号：Bio-27671规格：培养物拉丁属名：Corynespora Cassiicola中文名称：多主棒孢菌拉丁属名：Corynespora种名加词：cassiicola (Berk. & M. A. Curtis) C. T. Wei收藏时间*：2007-12-7来源历史：中国林科院热带林业研究所转原产国：中国资源归类编码：15151500000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：分生孢子梗顶端有时膨大，长达600微米，直径3.8到11.3微米；分生孢子顶生，单生，偶尔2－6个孢子结成短链，倒棍棒形，有时圆筒形，稍微弯曲，有隔膜4－16个，32－220×8.4－22.4微米。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：喜树采集地区：福建三明采集具体地点：山林培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：28资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征分生孢子梗直或弯曲，褐色或橄榄色，不分枝，光滑。产孢细胞圆筒形或桶形，单孔生式产孢方式，顶端生分生孢子。分生孢子成熟后，分生孢子梗子孢子痕处继续伸长，长出新的分生孢子，可继续生长多次。分生孢子单生或串生，多数倒棍棒形，少数圆筒形，近无色，或淡褐色至深褐色，有多个隔膜，光滑，偶尔有微刺。 PDA培养7天，菌落绒状，墨绿色平展。分生孢子梗110-850微米×4-11微米，分生孢子倒棒状至圆柱状，直或弯，光滑，具4-20假隔膜，61-152微米×8.7-13.6微米。 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系的培养操作及应用！ 一、背景 CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系是一种来源于人舌鳞癌组织的贴壁细胞系。这种细胞系在培养过程中能够保持其生物学特性，并可用于研究人舌鳞癌的发生、发展、治疗和药物筛选等方面的实验。 CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系的保存条件通常为低温避光，并且需要在高纯度的条件下进行培养。这种细胞系具有一定的异质性，可以作为研究其他肿瘤细胞的模型之一。 二、CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞培养操作 1)复苏CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系可以用于辛伐他汀通过钙激活氯通道TMEM16A抑制口腔鳞状细胞癌增殖的机制研究： 通过一系列的实验验证TMEM16A在口腔鳞癌中的表达和临床意义,研究TMEM16A对口腔鳞癌细胞增殖的影响,以及辛伐他汀对口腔鳞癌细胞增殖的影响及其作用机制。 研究方法：通过对TCGA数据库中305例口腔鳞癌标本和30例癌旁组织标本的临床数据和TMEM16A m RNA表达数据进行生物信息学分析,对GEO数据库中40对口腔鳞癌标本和癌旁组织标本的TMEM16A m RNA表达数据进行生物信息学分析。对84例口腔鳞癌组织切片及12例正常口腔黏膜组织切片的免疫组织化学染色分析并结合患者的临床资料,来研究TMEM16A在口腔鳞癌组织与非癌组织中的表达差异及其与口腔鳞癌患者各项临床指标的关系。 通过全细胞膜片钳技术验证TMEM16A在CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中是否介导钙激活氯电流。通过CCK-8实验分别研究敲低TMEM16A、TMEM16A抑制剂、过表达TMEM16A对口腔鳞癌细胞增殖的影响。通过全细胞膜片钳技术研究不同浓度的辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中TMEM16A通道功能的影响。通过Western blot实验研究辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中TMEM16A蛋白表达量的影响。通过CCK-8实验研究辛伐他汀对口腔鳞癌细胞CAL-27、CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系和人永生化表皮细胞Ha Ca T细胞增殖的影响。 通过CCK-8实验研究不同浓度的辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞增殖的影响以及加入过量MVA、敲低TMEM16A或过表达TMEM16A对辛伐他汀增殖抑制作用的影响。结果:数据库生物信息学分析结果表明,口腔鳞癌组织中TMEM16A m RNA的表达量显著高于癌旁组织。TMEM16A m RNA的表达量与口腔鳞癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期显著相关。T3与T4分期、N1-N3分期、临床分期Ⅲ期及Ⅳ期的口腔鳞癌患者中TMEM16A m RNA的表达量分别高于T1与T2分期、N0分期、临床分期Ⅰ期及Ⅱ期的口腔鳞癌患者。Kaplan-Meier生存分析结果表明,TMEM16A m RNA高表达的口腔鳞癌患者的总生存时间显著低于TMEM16A m RNA低表达的患者。 免疫组织化学染色结果表明,口腔鳞癌组织中TMEM16A蛋白的表达量显著高于正常口腔黏膜组织。TMEM16A蛋白的表达量与口腔鳞癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期显著相关。T3与T4分期、N1-N3分期、临床分期Ⅲ期及Ⅳ期的口腔鳞癌患者中TMEM16A蛋白的表达量分别高于T1与T2分期、N0分期、临床分期Ⅰ期及Ⅱ期的口腔鳞癌患者。Kaplan-Meier生存分析结果表明,TMEM16A蛋白高表达的口腔鳞癌患者的总生存时间显著低于TMEM16A蛋白低表达的患者。TMEM16A在CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中介导钙激活氯电流。TMEM16A的敲低、TMEM16A的抑制剂T16Ainh-A01(20μM)可以显著抑制CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖。TMEM16A过表达可以显著促进口腔鳞癌细胞CAL-27的增殖。 辛伐他汀可以显著抑制CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中的钙激活氯电流,且抑制效果呈现剂量依赖性。辛伐他汀的IC50为5.605±1.512μM。此外,辛伐他汀(10μM)对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中TMEM16A的蛋白表达水平没有显著的影响。辛伐他汀(10μM)可以显著的抑制口腔鳞癌细胞CAL-27和CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系的细胞增殖,对Ha Ca T细胞的增殖没有显著的影响。辛伐他汀(10μM)对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖性。加入过量的MVA(500μM)可以显著减少辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖抑制作用。TMEM16A的敲低可以显著减少辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖抑制作用。TMEM16A过表达可以显著的提高辛伐他汀对CAL-27细胞的增殖抑制作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！