紫色红曲菌的形态特征与培养方法及实验内容！ 紫色红曲菌是Monascus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产。 一、菌种简介平台编号：Bio-84569 规格：冻干粉拉丁属名：Monascus Purpureus 中文名称：紫色红曲菌拉丁名称：Monascus purpureus来源历史：←中国科学院成都生物研究所收藏时间：2017/8/14原始编号：JSM-12.6原产国：中国资源归类编码：15151515101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：麸皮汁琼脂上生长良好，菌落初为白色，老后变为橙红色，放射状，背面红色，菌丝具横隔，多核，分枝甚繁，不规律，细胞内有颗粒，分生孢子着生在菌丝及其分枝的顶端，单生或成链，闭囊壳球形。嗜酸，耐乙醇，在2%乳酸和10%乙醇的培养基中生长良好。具体用途：酿造白酒，产蛋白酶、淀粉酶、酯化酶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：35℃需氧类型：好氧分离基物：浓香型白酒出窖酒醅采集地：江苏省淮安市涟水县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：酿造白酒，产蛋白酶、淀粉酶、酯化酶。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落生长较缓慢，皮膜状，圆形，隆起，有时中间裂开，表面多皱褶，长满粗长的絮状气生菌丝，边缘圆齿形，菌落颜色由豆汁黄色逐渐变为橙红色，背面橙红色。分生孢子很少，梨形，橙红色或无色，多核，表面光滑，内含颗粒，有的颗粒为橙红色；被子器形成比较晚，球形，橙红色或无色；子囊孢子卵圆形，表面光滑，有色或无色。产糖化酶。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               MDA-MB-435人乳腺癌细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、背景 MDA-MB-435人乳腺癌细胞系是一种来源于人类乳腺癌的细胞系，具有高度的增殖能力和侵袭性。它是由MDA-MB-231细胞株经过连续传代培养而得到的亚克隆细胞系，具有与原株相似的形态学和生物学特性。 MDA-MB-435人乳腺癌细胞系在乳腺癌研究中具有重要的应用价值，因为它可以模拟人类乳腺癌的生长和转移过程，为研究乳腺癌的发生机制、诊断和治疗提供了重要的实验模型。此外，MDA-MB-435人乳腺癌细胞系系还可以用于筛选抗肿瘤药物、评估药物疗效和毒副作用等研究。 二、MDA-MB-435人乳腺癌细胞系培养操作 1)复苏MDA-MB-435人乳腺癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MDA-MB-435人乳腺癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MDA-MB-435人乳腺癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MDA-MB-435人乳腺癌细胞系可以用于咖啡酸3，4-二羟基—苯乙基酯诱导乳腺癌细胞凋亡的作用研究： 采用人乳腺癌细胞系，探讨了CADPE的抗乳腺癌作用及其相关机制，发现CADPE可以抑制乳腺癌细胞增殖、诱导凋亡，并有望成为有效的生长因子拮抗剂。 方法： （一）乳腺癌细胞增殖人乳腺癌细胞系MCF-7、MCF-7ADR、MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系体外培养，同时添加CADPE处理细胞，采用单细胞增殖检测试剂盒检测乳腺癌细胞增殖情况。 （二）乳腺癌细胞凋亡检测Hoechst33342染色法、流式细胞术Annexin V-PE/7-AAD双染色检测CADPE作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系的形态学变化及凋亡率。 （三）乳腺癌细胞线粒体凋亡途径相关测定采用不同浓度CADPE作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系，利用DCFH-DA（细胞活性氧检测探针）测定细胞内的活性氧变化，JC-1法测定线粒体膜电位改变，Western blot检测caspase-3，Bcl-2和Bax蛋白表达。 （四）生长因子受体及相关酪氨酸激酶磷酸化检测Western blot方法检测CADPE对VEGF、EGF、PDGF、HGF刺激的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系VEGFR、EGFR、Src及C-Met磷酸化水平的影响。 （五）Her-2、c-myc及maz蛋白表达分析Western blot方法检测CADPE处理乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系后Her-2、c-myc及maz蛋白表达。 （六）裸鼠体内荷瘤实验将人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞接种裸鼠皮下，待成瘤后，每周两次腹腔注射2.5mg/kg的CAPDE，观察CADPE对肿瘤生长及裸鼠体重影响。 结果： （一）CADPE抑制乳腺癌细胞增殖采用CADPE处理乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7和MCF-7ADR细胞，结果显示CADPE10～80μmol/L的CADPE作用24h、48h和72h，均能明显抑制乳腺癌细胞增殖。 （二）CADPE诱导乳腺癌细胞凋亡采用Hoechst33342染色乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系，荧光显微镜下观察CADPE处理后细胞形态变化，结果显示存在细胞核浓缩等细胞凋亡特征。Annexin V-PE/7-AAD双染色结果显示20μmol/LCADPE作用48小时后细胞的凋亡率较对照组显著增高（p （三）CADPE促进乳腺癌细胞活性氧产生CADPE（0～80μmol/L）处理人乳腺癌细胞系MDA-MB-231及MDA-MB-435人乳腺癌细胞系48h，结果显示CADPE能明显增加细胞内活性氧（ROS）产生。 （四）CADPE降低乳腺癌细胞线粒体膜电位JC-1法测定线粒体膜电位，结果显示CADPE处理后乳腺癌细胞的线粒体膜电位明显降低。 （五）CADPE对乳腺癌细胞Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响Western blot检测结果显示CADPE处理后乳腺癌细胞Caspase-3和Bax表达上调，而Bcl-2表达下调。 （六）CADPE抑制配体刺激的乳腺癌细胞VEGFR、EGFR及C-Met磷酸化MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系分别经相应配体刺激后，VEGFR、EGFR、Src、C-Met磷酸化增加，而预先使用CADPE处理组，VEGFR、EGFR和C-Met磷酸化水平相对未处理组增幅较小，但CADPE对Src磷酸化水平无明显影响。 （七）CADPE影响乳腺癌细胞EGFR磷酸化的时间及剂量依赖性MDA-MB-435人乳腺癌细胞系经EGF刺激后，EGFR磷酸化水平增高，这种作用随CADPE孵育时间延长或者CADPE浓度增加而降低。 （八）CADPE抑制乳腺癌细胞Her-2、c-myc及maz蛋白表达CADPE处理乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌细胞系后，可以降低Her-2、c-myc及maz蛋白表达。 （九）CADPE对裸鼠体内乳腺癌细胞瘤生长的影响裸鼠接种乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞成瘤后，给予CADPE处理，第38d、42d肿瘤体积明显小于对照组（P＝0.046,0.025），两组瘤重差别具有统计学意义（P＝0.017），但两组小鼠体重的变化无明显差别。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    检验技术分享：微生物实验室设备的控制和程序！ 设备控制和程序 微生物检验常用需监控的设备和仪器： 1、培养箱（生化培养箱或CO2培养箱等）、干燥箱、高压灭菌锅、净化工作台、pH计、冰箱，（低温冰箱或冷柜）温度计、紫外灯、显微镜、离心机、天平。 2、小计量容器 3、微生物测定仪器、微生物检定仪器、空气采样器、酶标仪专用等。 （一）高压灭菌锅的温度控制 高压灭菌锅：生物指示菌法（常用）、化学变色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检测。 生物指示菌法是一种高压灭菌锅的效果显示法。 高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并做好每一次的作业记录。 高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位体积内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。同时应注意内容物不同耐受温度。总的暴露时间最好不要超过45min。 高压灭菌锅日常工作记录应包含以下信息：高压灭菌的材料、开始时间、压力/温度、取出时间、高压灭菌胶带的颜色变化（日常常用无菌培养代替）。 高压灭菌锅温度波动范围：110，115和121±2℃。 高压灭菌锅校准周期一般在半年。 （二）干燥灭菌箱温度控制 干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息：开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的时间（或关闭时间）。 干燥灭菌箱的温度校准；用参考温度计进行温度测试。 干燥灭菌箱温度要求与精确度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者为灭菌2h，后者为30min。 干燥灭菌箱校准时间一般为一年。 （三）培养基配制用蒸馏水的控制 对于蒸馏水器来说：按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子交换材料。 检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水的特定电导率＜0.5ms/m；细菌数＜50CFU/ml。我们的国家标准要求电导率≤25μS/cm，菌落总数不超过1000CFU/mL。 检测频率：1次/每月。 蒸馏水定点供应，并做好相应的质量控制，记录检测结果。 （四）天平的管理 天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。 天平要有使用及运行检查记录。 天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般1次/年进行检定。 运行检查频率按运行计划或按产品（天平生产厂家）给出的标准重量单位进行对照。 （五）pH计 pH计使用前应用标准液进行校准。 缓冲液使用有效期：PH4.00 约6个月； PH7.00 约6个月； pH9.00 约6个月； pH计的维护：电极外表的定期清洗；电极敏感性检测及极性恢复。 （六）净化工作台的控制 水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为100级。空气沉降30min，细菌数＜1CFU/皿。垂直流净化工作台，细菌数＜0.49CFU/皿. 净化工作台运行检查频次：1次/月主要是细菌沉降检测。 净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。 （七）紫外线灯的控制 检测方法：仪器测试法和生物测试法。前者是通过专用仪器检测紫外灯管发射的紫外光强度。国家消毒技术规范中表明在距离照射下方垂直1米处，要求其强度为大于90uW/cm2。 生物测试法：采用一定的菌培养物，经一定比例稀释，菌量控制在200-250个/0.5ml，涂布平板在紫外灯光下照射，2min，同时设置普通光源的对照组，后置37℃48h，计算其杀灭率。要求杀灭率达99%。 （八）显微镜的控制 显微镜应制定作业指导书，日常维护记录及自校记录。 显微镜应置于无振动，避免灰尘，防潮等要求的环境。 （九）其它微生物检测专用仪器的控制 细菌鉴定仪、酶标仪等设备，工作中常用阳性对照检测其功能正常性。 仪器的检定则按有关的部门检定或按自校作业指导书进行。 仪器的使用登记、校准计划、校准记录等文件存档。 仪器专人使用、操作者应取得相应的岗位培训合格，持证上岗。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 棒杆菌通用PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！ 一、背景 棒杆菌通用PCR试剂盒是一种用于检测棒杆菌属细菌的实验工具，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出棒杆菌属细菌，对于该细菌引起的感染疾病的诊断和治疗具有重要意义。 棒杆菌通用PCR试剂盒的组成通常包括引物、Taq酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与棒杆菌属细菌基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。 使用棒杆菌通用PCR试剂盒进行检测时，首先需要采集感染棒杆菌属细菌的患者的样本，如血液、尿液或组织样本。将样本中的DNA或RNA与试剂盒中的引物和Taq酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA或RNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在棒杆菌属细菌基因，从而确定患者是否感染该细菌。 棒杆菌通用PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够在极低浓度下检测出棒杆菌属细菌基因。此外，该试剂盒还具有快速、简便、易于操作等特点，可以广泛应用于临床诊断和实验室检测领域。然而，试剂盒也存在一定的局限性，如对实验条件和操作要求较高，可能出现假阳性或假阴性结果等问题，需要在使用时注意。 二、棒杆菌通用PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据棒杆菌通用PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在棒杆菌的感染。 三、应用 棒杆菌通用PCR试剂盒可以用于多重耐药纹带棒状杆菌的亲缘性分析及耐药机理研究： 探讨引起医院感染的多重耐药（Multi-drug resistant，MDR）纹带棒状杆菌的亲缘性分析方法，并对其耐药机理进行初步研究。 方法：用棒杆菌通用PCR试剂盒的基因外重复回文序列扩增（Repetitive ExtragenicPalindromic-PCR，REP-PCR）和肠细菌基因间共有重复序列扩增（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR，ERIC-PCR）技术对重庆地区四家综合型医院分离到的纹带棒状杆菌进行分型研究，用NTSYS PC2.1软件对扩增产物的指纹图谱进行聚类分析；用微量肉汤稀释法对菌株进行14种抗菌药物（青霉素、头孢吡肟、头孢噻肟、亚胺培南、美罗培南、万古霉素、庆大霉素、红霉素、环丙沙星、四环素、克林霉素、利奈唑胺、复方新诺明、利福平）的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）检测，根据耐药表型，确定对耐药基因核糖体甲基化酶基因(ermX)、核糖体保护蛋白基因（tet（W））、DNA螺旋酶A亚单位基因(gyrA)和接合型转座子Tn1545整合酶基因（intTn）、L,D-转肽酶基因(ldt1/2)进行扩增并测序分析，研究其与耐药的相关性。 结果：棒杆菌通用PCR试剂盒的REP-PCR和改良ERIC-PCR分型技术分别将32株细菌分为6型和8型，所有菌株的相似系数（Coefficient）均大于0.73，两种方法的分辨指数（DI）分别为0.585和0.696。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   农业生产神器：枯草芽孢杆菌的多重应用方法！  百欧博伟生物：近年来，生物技术和农业生产的结合越来越普遍，微生物菌剂也在农业种植中逐渐受到重视。其中，枯草芽孢杆菌作为一种常见的微生物菌剂，在农业生产中发挥着重要的作用。 枯草芽孢杆菌的基本特性 枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，属于芽孢杆菌科、枯草芽孢杆菌属。它是一种广泛分布的土壤生物，可在不同的生境中生存繁殖，具有较强的适应性和生长速率，可以在较短时间内快速繁殖。此外，它还具有以下特性： 1、强的种子杀灭能力：枯草芽孢杆菌能够在土壤中通过孢子的形式存活，并且有很强的种子杀灭能力。这一特性使得枯草芽孢杆菌可以作为一种高效的病菌防治剂，用于控制种子和病原菌的传播。 2、多重代谢路径：枯草芽孢杆菌可以通过多种代谢途径分解和利用多种有机物质，包括纤维素、木质素、蛋白质等，为植物提供丰富的营养物质和能量。 3、生长快速：枯草芽孢杆菌是一种快速生长的微生物，其生长速率比一般细菌快8倍以上，可以在24小时内迅速繁殖。 4、环境适应能力强：枯草芽孢杆菌可以在不同温度、不同酸碱度和盐度等多种环境条件下生存繁殖，适应性强。 枯草芽孢杆菌在农业种植中的作用及应用 作为一种广泛存在于土壤中的微生物，枯草芽孢杆菌在农业生产中扮演着不可忽视的角色。它的主要作用包括： 1、固氮固磷：枯草芽孢杆菌能够固定空气中的氮气，转化成植物可利用的有机氮。此外，它还能分泌磷酸酶、酸性磷酸酶等酶类，分解土壤中的有机磷酸盐，促进植物的生长和发育。 2、激活磷素：枯草芽孢杆菌还能分泌一些生长物质和植酸酶等酶类，激活磷素的活性，将植物不能利用的无机磷转化为可供植物利用的有机磷，提高植物对磷素的利用效率。 3、改良土壤结构：枯草芽孢杆菌分泌多种酶类，能够分解土壤中的有机物质并转化为养分元素，促进土壤的改良和改善土壤结构，增加土壤的通气性和保水性，提高土壤肥力和作物的产量。 4、控制病害：枯草芽孢杆菌能够分泌多种抗生素和生物活性物质，有效抑制一些病原菌和土传病害，起到一定的防治作用。 5、保护环境：枯草芽孢杆菌可以分解有机物、吸收有害物质，促进土壤有机质的形成和土壤肥力的恢复，可以用于治理贫瘠土地复垦等环境问题。 应用案例 1、以枯草芽孢杆菌的有效菌株，制作枯草芽孢杆菌菌剂，可防治苗期烟草干腐病、叶斑病等多种常见病害。 2、将枯草芽孢杆菌菌剂和其他合适的微生物菌剂复合，用于果树、茶树、花卉等高档经济作物中的防病和肥料施用。 3、使用枯草芽孢杆菌汁肥饲喂家禽、家畜，能够提高饲料利用率、增加体重，改善肉质和蛋的品质。 4、枯草芽孢杆菌菌剂可用于处理油菜籽壳、葡萄枝等农业废弃物，促进其分解过程，并将其转化为农业有机料。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                                          PT-K75猪鼻甲黏膜成纤维细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-105949 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：PT-K75 细胞名称：PT-K75猪鼻甲黏膜成纤维细胞细胞用途：仅供科研使用。用途：种属鉴定正确 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：猪鼻2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。          五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 下面T25瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。  六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                         ATCC VR-1350鼠白血病病毒的特点与优势及培养！ 一、菌种简介平台编号：Bio-50489 规格：Frozen 拉丁属名：Murine Leukemia Virus 菌株名称：鼠白血病病毒用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述ATCC® Number:VR-1350™Classification: Retroviridae,Gammaretrovirus,Mammalian virus groupAgent: Murine leukemia virus deposited as Moloney murine leukemia virusStrain: E-286Original Source: biological clone of the NB-tropic component of Moloney murine lymphoid leukemia (NIH isolate)Depositors: RH BassinBiosafety Level:2Shipped: frozenPermits/Forms: In addition to the MTA mentioned above, other ATCC and/or regulatory permits may be required for the transfer of this ATCC material. Anyone purchasing ATCC material is ultimately responsible for obtaining the permits. Please click here for information regarding the specific requirements for shipment to your location.Host Organism : SC-1 cells (ATCCCRL-1404) mouse mouse cells in tissue cultureIncubation : Duration: 10 days at 37C in SC-1 cells (ATCCCRL-1404)Effect : Yes, in vitro effects: focus formation in mouse S(+)L(-) cells Yes, in vitro effects: plaques on XC cellsStore at : -70C or lowerComments : Ecotropic (NB-tropic) MuLV See Hartley and Rowe (1975. J. Virol. 65:128) for information on propagation in SC-1 cells. Ecotropic (NB-tropic) MuLV. -70C or lower 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                保健食品生产线霉菌污染的原因与危害及应对措施！  百欧博伟生物：保健食品作为一种特殊的食品，其质量和安全性直接关系到消费者的健康。然而，在保健食品生产过程中，霉菌污染是一个不容忽视的问题。霉菌是一种常见的微生物，具有广泛的分布和适应性，一旦在保健食品生产线上生长繁殖，将对产品质量和安全性造成严重影响。因此，了解保健食品生产线霉菌污染的原因、危害及应对措施，对于保障产品质量和消费者健康具有重要意义。 一、保健食品生产线霉菌污染的原因 原料污染：保健食品的原料中可能含有霉菌，这些霉菌在原料中繁殖并进入生产线，导致污染。 设备污染：保健食品生产过程中使用的设备，如发酵罐、混合机、干燥机等，在清洗过程中可能存在死角，导致霉菌残留。 环境湿度高：保健食品生产线上的环境湿度较高，有利于霉菌的生长繁殖。 操作不当：在操作过程中，如果操作人员没有严格遵守操作规程，如没有及时更换过滤器、没有定期清洗设备等，都可能导致霉菌污染。 二、保健食品生产线霉菌污染的危害 影响产品质量：霉菌污染会导致保健食品中产生异常代谢产物，从而影响产品的质量和稳定性。 降低生产效率：霉菌污染会导致生产过程受到干扰，发酵周期延长，生产效率降低。 增加生产成本：为了消除霉菌污染，需要进行额外的清洗、消毒等操作，增加了生产成本。 对人体健康造成威胁：如果产品中含有霉菌毒素等有害物质，将会对人体健康造成威胁。 三、保健食品生产线霉菌污染的应对措施 加强原料管理：在采购原料时，应选择信誉良好的供应商，确保原料中不含有霉菌。同时，对原料进行严格的检验和筛选，确保原料质量符合要求。 严格设备清洗和消毒：在设备使用前和使用后，应进行严格的清洗和消毒操作。采用过氧化氢银离子化学消毒剂（奥克 泰士）对设备进行彻底消毒，确保设备表面无霉菌残留。 规范操作流程：制定并执行严格的操作规程，确保操作人员遵守操作规程。定期对过滤器进行更换和清洗，定期清洗设备等设备，以减少霉菌污染的风险。 加强监控和检测：定期对保健食品生产线上的环境、设备等进行检测和分析，及时发现并处理霉菌污染。采用灵敏度高的检测方法，如PCR等方法对生产线上的霉菌进行检测和鉴定。 建立应急预案：针对可能出现的霉菌污染情况，建立应急预案并进行演练。一旦发现霉菌污染，应立即采取措施进行隔离和处理，防止污染扩散。 提高员工素质：加强员工培训和教育，提高员工对霉菌污染的认识和防范意识。通过培训和教育，使员工掌握正确的操作方法和应对措施，减少人为因素导致的霉菌污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒的应用及其相关研究！ 一、背景 鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒是一种用于检测鹦鹉喙羽病病毒的实验工具，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出鹦鹉喙羽病病毒，对于该病毒的预防和控制具有重要意义。 鹦鹉喙羽病病毒是一种由病毒引起的鹦鹉疾病，会导致鹦鹉的喙和羽毛异常生长，影响鹦鹉的外观和生活质量。该病毒可以通过感染鹦鹉的消化道和呼吸道传播，也可通过接触感染病毒的鹦鹉或其粪便、羽毛等传播。因此，及时检测出鹦鹉喙羽病病毒对于预防和控制该病的传播具有重要意义。 鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒的组成通常包括引物、Taq酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与病毒基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。 使用鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒进行检测时，首先需要采集感染病毒的鹦鹉的组织或排泄物等样本，然后提取其中的病毒DNA或RNA。将DNA或RNA与试剂盒中的引物和Taq酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA或RNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在鹦鹉喙羽病病毒基因，从而确定鹦鹉是否感染该病毒。 鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够在极低浓度下检测出病毒基因。此外，该试剂盒还具有快速、简便、易于操作等特点，可以广泛应用于鹦鹉养殖场、动物园、宠物商店等领域。然而，试剂盒也存在一定的局限性，如对实验条件和操作要求较高，可能出现假阳性或假阴性结果等问题，需要在使用时注意。 二、应用 鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒可以用于CIAV和PBFDV核酸斑点杂交检测方法的建立及其应用： 研究分别建立了检测CIAV和PBFDV的核酸斑点杂交方法,并对鉴定为阳性的CIAV和PBFDV进行了全基因组测序和分析,以期为类似不同物种间同科相近病毒的通用型筛选检测提供借鉴模式并为相关病原分子变异提供参考数据。1.CIAV和PBFDV核酸斑点杂交检测方法的建立本研究分别设计了以地高辛标记的CIAV核酸探针和PBFDV核酸探针分别对疑似感染CIAV商品肉鸡病料和疑似感染PBFDV鹦鹉病料进行斑点杂交检测,同时分别应用针对CIAV和PBFDV的引物进行鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒PCR检测。 结果显示： 1、核酸斑点杂交检测方法具有较高的灵敏性和良好的特异性,其检测结果与鹦鹉喙羽病病毒PCR试剂盒PCR检测结果高度一致。本研究为在我国开展CIAV和PBFDV感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感、特异的检测方法,为进一步了解CIAV和PBFDV奠定了基础。 2、阳性样品中CIAV和PBFDV的全基因组测序及分析用本研究所建立的核酸斑点杂交检测方法对疑似感染CIAV商品肉鸡病料和疑似感染PBFDV鹦鹉病料进行斑点杂交检测,根据已发表的CIAV和PBFDV基因序列,分别设计合成了用于扩增两种病毒全基因组的引物,对鉴定为阳性的CIAV和PBFDV进行了全基因组扩增和测序,并对其进行同源性比较和遗传进化分析。 结果表明：完成全基因组测序的5株CIAV序列之间同源性为97.5%-99.2%,而两个PBFDV序列之间其同源性更是高达100%,这进一步显示了感染家禽和鸟类的圆环病毒高度保守的分子特质。同时,本研究加深了对CIAV和PBFDV进化途径的了解,有助于进一步研究其流行病学特点和分子生物学特点,对于预防和控制CIAV和PBFDV的感染有重要意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                盐亭鞘氨醇单胞菌的培养条件与注意事项及打管说明！ 盐亭鞘氨醇单胞菌是Sphingomonas属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性菌，短棒状，过氧化氢酶和氧化酶阳性，产脂肪酶，该酶具有耐高温和耐盐稳定性。主要用途为分类；研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-57173 提供形式：冻干物拉丁属名：Sphingomonas Yantingensis 中文名称：盐亭鞘氨醇单胞菌拉丁名称：Sphingomonas yantingensis其它保藏中心编号：=DSM 27244=CCTCC AB 2013146=JCM 19201来源历史：←DSMZ←中国南京农业大学收藏时间：2014/7/21原始编号：1007T原产国：中国资源归类编码：15131139103模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：革兰氏阴性菌，短棒状，过氧化氢酶和氧化酶阳性，最适生长温度和pH：28-30℃、6.0-7.0。(G+C)mol%：67±0.7 % ，泛醌类：Q-10，聚胺：高精脒，极性脂：神经鞘糖脂类、C14:0 2-OH和3-羟基脂肪酸，16S rRNA gene：JX566547。产脂肪酶，该酶具有耐高温和耐盐稳定性。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：紫土采集地：四川省盐亭县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：分类；研究； 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃。 三、培养条件1、培养基编号： 营养肉汁琼脂2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mgMnSO4・H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：28℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 人非小细胞肺癌细胞耐紫杉醇细胞的培养操作规程！ 一、产品信息平台编号：Bio-109768 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：A549/Taxol 细胞名称：人非小细胞肺癌细胞耐紫杉醇细胞细胞用途：仅供科研使用。 用途：（STR（A549）鉴定） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍这株细胞是用药物剂量增选法筛选获得的A549细胞耐药亚株。 三、细胞特性1）来源：肺癌2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 四、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。             六、细胞培养操作规程，供参考1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备  F12K培养基；优质胎牛血清，10%；添加1ug/ml DDP；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。3、轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。4、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                桂花耳的形态特征与产地生境及繁殖方法与主要价值！ 一、菌种简介 桂花耳为花耳科桂花耳属的桂花耳子实体胶质。子实体高0.6-1.5厘米，柄下部粗0.2-0.3厘米，子实体微小，匙形或鹿角形，上部常不规则裂成叉状橙黄色，干后橙红色，不孕部分色浅，光滑；有细绒毛，基部栗褐色至黑褐色，延伸入腐木裂缝中。因其体形似桂花，故而得名“桂花耳”。  桂花耳分布于中国的吉林、河北、福建、云南、香港、浙江、四川等地区。多生于杉木等针叶树倒腐木或木桩上，往往成群或成丛生长。一般采用芽殖方式产生次生孢子或芽孢子的方式来进行繁殖。  桂花耳的实体虽小，但色彩鲜，便于认识，该种属含类胡萝卜素等，可在体内转化为维生素A，有降低致癌的作用，还有一定的有保健作用。将其子实体清洗后，在开水中烫一下，在清水中多次浸泡后，可拌凉菜或炖菜食用。  二、植物学史 因其体形似桂花，故而得名“桂花耳”。  三、形态特征 花耳科桂花耳属的桂花耳子实体胶质。子实体高0.6-1.5厘米，柄下部粗0.2-0.3厘米，子实体微小，匙形或鹿角形，上部常不规则裂成叉状，橙黄色，干后橙红色，不孕部分色浅，光滑。有细绒毛，基部栗褐色至黑褐色，延伸入腐木裂缝中。担子2分叉。孢子2个，无色，光滑，初期无横隔，后期形成1～2横隔，即成为2～3个细胞，椭圆形近肾形，(8.9～12.8)μm×(3～4)μm，担子叉状，(28～38)μm×(2.4～2.6)μm。  四、产地生境 桂花耳分布于中国的吉林、河北、福建、云南、香港、浙江、四川等地区。春至晚秋多生于杉木等针叶树倒腐木或木桩上，往往成群或成丛生长。  五、繁殖方法 一般采用芽殖方式产生次生孢子或芽孢子的方式来进行繁殖。  六、主要价值 桂花耳的实体虽小，但色彩鲜，便于认识，该种属含类胡萝卜素等，可在体内转化为维生素A，有降低致癌的作用，还有一定的有保健作用。将其子实体清洗后，在开水中烫一下，在清水中多次浸泡后，可拌凉菜或炖菜食用。  桂花耳（学名：Guepinia spathularia），又称花耳、匙盖假花耳、桂花菌、黄耳等，属于花耳科桂花耳属的真菌。这种食用菌子实体较小，色彩鲜艳，易于识别。桂花耳常见于春季至秋季，生长在杉木等针叶树上，常常成群或成丛生长。它们生长在倒腐木或木桩上，能够适应不同类型的木材，包括那些经过人工防腐处理的材料。 桂花耳的子实体形状多样，可以是匙形或鹿角形，上部通常不规则裂成叉状，颜色为橙黄色，干燥后会变为橙红色。它们的外观类似桂花，这也是其名称由来之一。桂花耳不仅口感鲜美，而且具有较高的营养价值，含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物以及多种维生素和矿物质。 在中国，桂花耳的分布较为广泛，从东北到西南各省区均有记录。由于其独特的风味和多样的营养，桂花耳不仅可以单独食用，还可以与其他食材搭配烹饪，如炖汤、炒菜、凉拌等，适合作为日常饮食的一部分。此外，桂花耳还具有药用价值，能够滋阴养胃、清肺热、济肾燥，适用于治疗肺热痰多、感冒咳嗽、慢性支气管炎等症状。 综上所述，桂花耳是一种食用菌，以其鲜艳的色彩、独特的形态和美味的风味而受到人们的喜爱，同时也是一个重要的药用资源。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  JM109感受态细胞的知识与应用及使用方法！ 一、背景 JM109感受态细胞来源于E.coli K strain，是提取高质量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验；High5TM系列JM109感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率可达1×109cfu/μg。 JM109感受态细胞源自于JM109,它含有T7RNA聚合酶基因的染色体拷贝。如果克隆至载体上的基因包含了核糖体结合位点，JM109(DE3)就可以对位于T7启动子下游的基因序列进行高水平的表达。但是要注意的是JM109(DE3)不能用于蓝白斑实验，JM109(DE3)采用经常使用的LB培养基，在37℃有氧的条件下培养，然后使用20%甘油，在-80℃的条件下进行菌种保藏。JM109(DE3)转化质粒采用的是42℃热激处理的方法。 二、使用方法 1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。 2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。 3、42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。 4、每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。 5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。 三、应用 用于OATP-B和OATP-D的mRNA及其蛋白在肺癌中表达的定量研究及意义研究： 建立用荧光定量RT—PCR法检测肺癌组织中人类有机阴离子转运多肽（organic anion transporting polypeptide,OATP）B和D mRNA的表达,并用免疫组化及图像分析技术定量分析肺癌组织中蛋白表达水平,分析其mRNA及蛋白表达与病理分型等临床资料的关系。 方法： 1、荧光定量PCR标准曲线的建立及优化:（1）组织总RNA提取:用Tiozol试剂分别提取不同病理分型肺癌组织和正常肺组织中的总RNA。（2）cDNA的合成:以所提取的组织的总RNA为原料进行逆转录反应,获得cDNA。（3）PCR反应及重组质粒的构建:以逆转录的cDNA为模板,进行普通PCR扩增。扩增后的PCR产物用琼脂糖凝胶回收法进行纯化。用PGEM-T Easy质粒载体连接PCR纯化产物,构建重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选重组质粒。（4）标准曲线的建立及优化:优化荧光定量PCR体系和条件,以重组质粒为标准品建立检测OATP mRNA的标准曲线,并以此对40例肺癌标本中OATP-B和OATP-D mRNA的含量进行测定。 2、免疫组化:采用链霉亲和素—过氧化酶法（S—P法）,DAB显色液显色,以抗OATP-B和抗OATP-D为一抗,PBS作为阴性对照,鉴定肺癌中OATP-B和OATP-D蛋白的表达。用IPP4.0图像分析软件对免疫组化结果进行分析。 3、临床资料分析:结合临床资料,分析OATP-B和OATP-D的mRNA及蛋白表达与病理分型、性别、年龄、肿瘤大小以及有无淋巴结转移等的关系。 4、统计学分析:采用SPSS11.5统计学软件包对所得实验数据进行统计学分析,实验数据均用（?）±S表示,多组均数间的比较采用方差分析,多组均数间的两两比较采用q检验。P＜0.05,差异有统计学意义。 结果：构建了OATP基因的重组质粒,并且成功转化大肠杆菌JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选提取重组质粒,对质粒进行梯度稀释,以稀释的质粒为模板优化荧光定量PCR体系和条件,建立定量检测OATP-B和OATP-D mRNA的荧光定量PCR体系。荧光定量PCR结果显示,OATP-B和OATP-D的mRNA在不同病理分型肺癌中表达上调,P＜0.05,差异有统计学意义;OATP-B和OATP-D的mRNA在有无淋巴结转移肺癌中的表达差异有统计学意义,P＜0.05。免疫组化法显示,与正常肺组织相比,OATP-B和OATP-D蛋白在不同病理分型肺癌中高表达,P＜0.05,差异有统计学意义;OATP-B和OATP-D蛋白在有淋巴结转移肺癌中的表达明显无高于淋巴结转移肺癌,P＜0.05,差异有统计学意义。OATP-B和OATP-D的mRNA及其蛋白在不同病理分型、性别、年龄及不同大小肺癌标本间的表达无统计学差异,P＞0.05。 结论： 1、建立并优化检测OATP-B和OATP-DmRNA表达的荧光定量PCR体系。 2、OATP-B和OATP-D的mRNA及其蛋白在不同病理分型肺癌及淋巴结转移肺癌中均高表达;OATP-B和OATP-D的mRNA及其蛋白的表达与肺癌标本的不同病理分型、性别、年龄及大小无关。提示OATP-B和OATP-D在肺癌的发生、发展中发挥了重要作用,一方面可能为肿瘤发生及药物治疗的分子机制提出新的理论,另一方面为其他肿瘤多种基因的大规模临床检测提供了迅速可靠的mRNA荧光定量方法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物的营养物质及其主要功能有哪些？ 百欧博伟生物：通过对微生物细胞化学组成和代谢产物的化学成分分析，我们可以大致地看出微生物在生长繁殖过程中所需要的营养物质。这些营养物一般包括碳素化合物、氮素化合物、无机盐类、维生素和水分等。下面分别介绍。 一、碳源  凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的物质称为碳源。它的作用有两点：  ①提供细胞物质中的碳素来源。  ②提供微生物生长繁殖过程中所需要的能量。    正因为碳素有双重作用，所以在微生物的营养需要中，对碳的需要量最大。    碳源的种类很多，从简单的无机碳化合物，如CO2，到复杂的有机碳化合物，如糖类、醇类、有机酸、蛋白质及其分解产物、脂肪和烃类等，都可以被不同的微生物所利用。大多数微生物是以有机碳化合物作为碳源和能源，而糖类则是最好的碳源，特别是葡萄糖。有些微生物能利用烃类化合物如石油作为碳源；有些微生物能分解许多极毒物质，如氰化物、酚等，它们正被人类用来消除“三废 ”；有些微生物能利用CO2或碳酸盐作为唯一或主要的碳源 。在生产实践中，发酵工业所需要 的碳素原料主要是 山芋粉、玉米粉、麸皮、废糖蜜、野生植物淀粉等。为了节约粮食、物尽其用、化废为宝，已经开展利用豆腐水、发酵废液、酱渣、酒糟、石油等作为微生物碳源 的研究，有些已取得了显著的成绩。  二、氮源     凡是构成微生物细胞物质或代谢产物中氮素来源的物质，称为氮源。氮源的主要功能是提供合成细胞物质和代谢产物中的氮素来源，一般不作为能量提供，但硝化细菌是利用铵盐或硝酸盐作为氮源和能源的。     氮源的范围很广。无机氮源如铵盐、硝酸盐、氮气等，有机氮源如蛋白质及各种分解产物、尿素、嘌呤碱、嘧啶碱等。在生产实践中，常用作氮源的有鱼粉、蚕蛹粉、各种饼粉、玉米浆等；在实验室中，常用蛋 白胨、牛肉膏、酵母浸出汁等。一般地说，蛋白质不是微生物的良好氮源，因为蛋 白质必须首先经过菌体的胞外酶水解后才能被利用。     微生物利用氮源的能力表现出很大的差异。大多数微生物只能利用铵盐、其他含氮盐、有机含氮化合物作为氮源，而有些少数固氮微生物则能利用分子态氮作为氮源合成自己的氨基酸、蛋 白质。这就是生物固氮作用。 三、能源    凡是能提供微生物生命活动过程中需要的能量来源的物质，称为能源。顾名思义，能源的功能是为微生物的生命活动提供能量。     能源因微生物种类不同而有所差别。对异养微生物而言，碳源就是能源，只在少数情况下，氮源充当能源或利用日光作为能源。对自氧微生物而言，光能自养菌需要日光作为能源，化能 自养菌则氧化无机物而获得能量。 四、无机盐     无机盐也是微生物生长过程中不可缺少的营养物质。它在微生物生命活动过程中起着重要的作用，主要表现在：  ①构成细胞组成成分，如磷是核酸的组成元素之一。  ②作为酶的组成成分或酶的激活剂，如铁是过氧化氢酶、细胞色素氧化酶的组成成分，钙是蛋白酶的激活剂。  ③调节微生物生长的物化条件，如细胞渗透压、氢离子浓度、氧化还原电位等。磷酸盐就是重要的缓冲剂。  ④作为某些自养微生物的能源。    微生物需要的无机盐一般包括硫酸盐、磷酸盐、氯化物、含钾、钠、镁和铁等的化合物。从量的角度，可分主要元素和微量元素两大类。前者一般指磷、硫、钾、镁、钙、钠和铁等，后者包括锌、锰、钼和钴等。  现将一些无机元素的生理作用列于表3。  表3 一些无机元素的生理作用元素名称   占干物质百分数   主要的生理作用磷 3  1、核酸、磷脂、某些辅酶（辅酶I等）的组成成分       2、高能磷酸键在能量贮存与传递中起重要作用       3、缓冲剂 硫 1  1、蛋白质、某些辅酶（辅酶 A 等）的组成成分      2、某些自养微生物的能源  钾 1  1、细胞中的主要无机阳离子      2、许多酶的激活剂      3、与原生质胶体特性和细胞膜通透性密切相关镁 0.5  1、细胞中重要的阳离子         2、许多酶（己糖磷酸化酶等）的激活剂        3、细菌叶绿素的组成成分钙 0.5  1、某些酶（如蛋 白酶）的激活剂        2、细菌芽孢的组成成分        3、降低细胞膜的通透性，调节酸碱度 铁 0.2  1、细胞色素、某些酶（如过氧化氢酶）的组成成分         2、影响细菌毒素的形成         3、铁细菌的能源 铜、钴、锰、钼、锌 微量  1、某些酶的组成成分                         2、酶的激活剂                         3、促进固氮作用 五、生长因子     许多微生物除了需要碳源、氮源、能源和无机盐以外，还必须在培养基中添加微量有机营养物质才能生长或生长良好。这种微生物本身不能自行合成，但生命活动又不可缺少、必须外界添加的特殊营养物，称为生长因子。从广义上讲，生长因子包括氨基酸、嘌呤和嘧啶、维生素。从狭义上讲，专指维生素。它的作用在于，或者构成细胞的组成成分，如嘌呤、嘧啶构成核酸；或者调节代谢，维持生命 的正常活动，如许多维生素是各种酶的辅基成分，没有这些物质，酶就失去活力，新陈代谢就无法进行。     并不是所有的微生物都需要生长因子。 自养微生物能自行合成生长因子，不需要外界补充。根据是否需要生长因子情况，异养微生物可分为3种类型：第一种类型的异养微生物需要生长因子，如产谷氨酸的短杆菌，需要添加生物素才能使菌体生长良好。第二种类型的异养微生物不但不需要，反而在细胞内能积累某种维生素，如肠道微生物能在肠道内分泌 . 族维生素，供机体吸收。第三种类型的异养微生物可要也可不要生长因子。      在科研和生产中，应用酵母膏、玉米浆、蔬菜汁、肝浸出液等作为生长因子的来源。如果用天然培养基，如麸皮、米糠、肉汤等本身已含有较丰富的生长因子，所以不必另外补充生长因子。  六、水分    水分是微生物细胞的主要组成成分，一般为70%—90% ，所以微生物细胞不能脱离水而生存。在代谢过程中，水起着重要的作用。它不仅参与反应，而且溶解参与代谢的物质，提供反应场所，使代谢反应得以顺利进行。微生物所需要的营养物质，也只有溶解于水后，才能被微生物很好地吸收。此外，由于水具有热传快、比热容高、热容量大等优点，所以它又有利于细胞温度的调节而保持生活环境温度的恒定。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  胶冻样类芽孢杆菌的培养与保存方法及注意事项！ 胶冻样类芽孢杆菌是Paenibacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为转化土壤无效磷、钾。 一、菌种简介平台编号：Bio-52495 规格：冻干物拉丁属名：Paenibacillus Mucilaginosus 中文名称：胶冻样类芽孢杆菌拉丁名称：Paenibacillus mucilaginosus来源历史：收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原产国：中国模式菌株：否主要用途：细菌肥料生物安全级别：一级其它保藏中心编号：CGMCC 1.232培养基编号：3培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上三种任选一种即可） 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  LN229人大脑神经母瘤细胞的培养步骤与处理方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-136972 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：LN229 细胞名称：人大脑神经母瘤细胞用途：STR鉴定正确注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍该细胞建系于1979年，细胞来源于一个右额顶枕叶胶质母细胞瘤患者。细胞显示p53突变，同时在p16及p14ARF 肿瘤抑制基因可能存在缺失。他们均含有野生型PTEN 基因。 三、细胞特性1）来源：胶质母细胞瘤2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。   六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM 培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml。2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   产氨棒杆菌的培养方法与使用范围及打管说明！ 产氨棒杆菌是Corynebacterium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为磷酸单脂酶产核苷。 一、菌种简介平台编号：Bio-56479 提供形式：冻干物拉丁属名：Corynebacterium Ammoniagenes 中文名称：产氨棒杆菌属名：Corynebacterium种名加词：ammoniagenes来源历史：←上海工业微生物研究所抗原课题组筛选（B65）收藏时间：1979.00.00资源归类编码：15131531101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：磷酸单脂酶产核苷。特征特性：G+，菌体短杆，单个排列，无芽孢，不运动。菌落圆形，表面光滑，凸起，边缘整齐，黄色。培养液轻度混浊，无沉落物，无气味。不液化明胶，产浅黄色非水溶性色素。不发酵葡萄糖、乳糖，吲哚反应阴性，脲酶阴性，接触酶阳性，牛奶反应微碱性、不凝固、不胨化、还原，利用硝酸盐，好氧。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：28-30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：10202用途：研究；生产；磷酸单脂酶产核苷。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  四、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。  五、培养及打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    节菱孢霉菌的产毒培养与外界影响及分类鉴定！ 节菱孢霉菌是在自然界中不常见的一类霉菌，它是分布世界各地的一种植物腐生菌。节菱孢霉菌在甘蔗产区(广东、广西)和变质甘庶中毒发病区(主要是北方地区)的甘蔗样品中均有分布。在实验条件下，以麦芽汁-酵母膏产毒培养基，20℃培养21天，pH值4. 5时产毒量最高，可作为节菱孢霉菌在实验室的最佳产毒条件。 节菱孢霉菌 节菱孢霉菌是在自然界中不常见的一类霉菌，它是分布世界各地的一种植物腐生菌，我国主要从以下几方面对其进行了研究。 节菱孢霉菌在我国部分地区的分布 1987年罗雪云等对节菱孢霉菌在我国部分地区的分布进行了调查研究。结果发现，节菱孢霉菌在甘蔗产区(广东、广西)和变质甘庶中毒发病区(主要是北方地区)的甘蔗样品中均有分布。在甘蔗产区的110份土壤样品中均未分离出节菱孢霉菌，在中毒发病区的74份土壤样品中，有3份样品检出节菱孢霉菌占4.0%，这也说明，变质甘庶中毒主要是由于发病区贮存不当造成霉坏变质所致。 节菱孢霉菌的产毒培养 从麦芽汁、马铃薯汁、蛋白胨、酵母膏和蔗糖等成分组成的培养基中，筛选出了麦芽汁-蛋白脉、麦芽汁-酵母膏和马铃薯-酵母膏-蔗糖三种节菱孢霉菌产毒培养基。节菱孢霉菌产毒株的三种培养物对小鼠的LD50分别为54.0lml/kg，55.0lml/kg和52.0ml/kg。采用正交试验设计对影响产毒节菱孢霉菌产毒的因素进行研究表明，实验室中影响产毒因素的程度大小排列顺序为菌株>温度>时间>培养基>pH值。在实验条件下，以麦芽汁-酵母膏产毒培养基，20℃培养21天，pH值4.5时产毒量最高，可作为节菱孢霉菌在实验室的最佳产毒条件。通过研究还发现，产毒培养物在9个月的放置过程中，其3-NPA的含量未发生变化。 外界因素对节菱孢霉菌的影响 对此研究成果较少。通过甘蔗产区与中毒发病区中毒季节气温的对比研究发现，外界环境气温对甘蔗中毒的发生影响不大，间接说明了温度对节菱孢霉菌的影响不大，与实验室的研究结果不一致，需做进一步的研究。对甘蔗霉变环节进行调查研究证明，不同销售方式、甘蔗贮存条件及贮存期的长短是影响霉变的重要因素。提示今后应进一步加强对影响节菱孢霉菌繁殖产毒因素的研究，为预防中毒提供依据。 节菱孢霉菌的分类鉴定 节菱孢属自1817年命名，该属已分为20个种，很多学者从变质甘蔗和中毒甘蔗中分离到了产毒节菱孢霉。但使甘蔗变质而引起中毒的节菱孢霉菌究竟属何种，这是需要解决的问题。刘兴阶等对163株从中毒甘庶和变质甘蔗样品中分离的产毒节菱孢霉菌进行了分类鉴定，其中98株为甘蔗节菱孢，占60.1%；43株为蔗生节菱孢，占26.4%;22株为暗孢节菱孢，占13.5%。甘蔗节菱孢和蔗生节菱孢在我国未曾报道过，属于国内新纪录。通过对来自河北、河南、内蒙、辽宁、广东和广西的甘蔗分离出的菌株研究发现，自南方和北方采集的甘蔗中皆分离出甘蔗节菱泡和暗孢节菱孢，而蔗生节菱孢皆自北方样品中分离出。由于甘蔗产地是广东和广西，北方采集的样品中分离出的菌株是来自南方抑或运至北方后才污染的，尚需进一步研究。 3-NPA 3-NPA除是某些霉菌的代谢产物外，也是几种高等植物中的有毒成分，在这方面的研究成果主要有: 1、3-NPA的检测方法 检测方法的建立，不仅可为实验研究提供方便，而且对日常甘蔗监测也提供了依据。胡文娟等建立了薄层色谱3-NPA测定法，按该方法测定甘蔗及甘蔗样品中3-NPA的最低检出量为2ppm，其回收率范围为80.0%-106.0%。刘勇等建立了血浆中3-NPA的气相色谱-热能检定器测定方法，该方法灵敏度为2ng，回收率为99.23%士6.38%。 2、3-NPA的毒性 用刚断乳小鼠按Horn法测定一次节菱孢毒素的LD50，毒素用水配制，每只小鼠灌胃0.5ml。一次毒素灌胃的LD5o，雄性小鼠为100mg/kg，雌性小鼠为68.1mg/kg。刘兴阶等采用Horn剂量递增法测定刚断乳小鼠的LD50为65、-121mg/kg。同时发现，小鼠、大鼠、猫和狗为该毒性物质的敏感动物，能引起急性神经中毒和死亡。根据对引起中毒的样品检测，推算出人类对3-NPA的中毒剂量为12.5mg/kg。由此可见，3-NPA对人类的毒性属剧毒级，人类较啮类动物的敏感性高约5倍。 3、3-NPA在甘蔗中的分布 通过对病区河南、河北以及非病区广东、广西和福建的399份市售甘蔗样品进行3-NPA的检测证明，北方和南方各省样品中3-NPA的阳性率无多大差别，然而在3-NPA的含量方面其差别显著，南方无报告。由此可见，在刚收割不久的甘蔗中有约10%已被节菱孢污染，但毒素的含量则是随贮存时间的延长增加，因此控制甘蔗的贮存期是预防中毒的关键。有学者报道了甘蔗外观与其含毒素的关系，外观正常的甘蔗3-NPA阳性率明显低于外观严重变质的甘蔗，平均含3-NPA的量也有明显的差别。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   拒霉素链霉菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 拒霉素链霉菌，孢子丝长，顶端圈卷，初旋至螺旋形。孢子卵圆形至长形，表面光滑。产生抑制革兰氏阳性细菌、分枝杆菌的拒霉素(resistomycin)。 一、菌种简介平台编号：Bio-00635 提供形式：冻干物拉丁属名：Streptomyces Resistomycificus 中文译名：拒霉素链霉菌拉丁学名：Streptomyces resistomycificus原始编号：ISP 5133菌株来源：←Newcastle University保藏人：刘志恒直接来源国家：英国保藏时间：11/1/1996其他保藏编号：=ATCC 19804 =BCRC 13755 =CBS 556.68 =DSM 40133 =JCM 4409 =NBRC 12814 =NRRL 2290生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；Produces resistomycin培养温度：28℃培养基：0038    分离源：土壤用途：模式菌株；产生抗霉素 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株性质甘油硝酸盐琼脂：气丝烬灰色。基丝黄褐色至暗褐色。可溶色素红褐色。葡糖天冬素琼脂：气丝烬灰色。基丝黄褐色。可溶色素黄褐色。淀粉琼脂：气丝灰白色，后红灰色。基丝浅黄色至红褐色。可溶色素无或红褐色。甘油苹果酸钙琼脂：气丝烬灰色至红灰色。基丝暗褐色。可溶色素灰色至暗褐色。无机盐淀粉琼脂(ISP)：气丝灰色。基丝反面灰黄色至微粉黄色，非pH指示剂。无可溶色素。甘油天冬素琼脂(ISP)、燕麦粉琼脂(ISP)：气丝灰色。基丝反面灰褐色至红褐色，非pH指示剂。酵母精麦芽精琼脂 (ISP)：气丝灰色。基丝反面红褐色，非pH指示剂。营养琼脂气丝无或铅灰色。基丝暗褐色。可溶色素暗褐色。葡萄糖蛋白胨琼脂：气丝白色。基丝暗褐色。可溶色素微红色至暗褐色。马铃薯块：气丝红白色。基丝褐黑色。可溶色素暗褐色。明胶液化好，栗褐色素。牛奶胨化无或轻度，暗褐色素。纤维素上不生长。产生类黑色素。利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、L-鼠李糖、棉子糖、肌醇、D-甘露醇。产生抑制革兰氏阳性细菌、分枝杆菌的拒霉素(resistomycin)。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   TK-1小鼠T淋巴瘤细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133316 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：TK-1 细胞名称：TK-1小鼠T淋巴瘤细胞产品类别：小鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特点小鼠T淋巴瘤细胞胞体直径为12~15μm，圆形或类圆形。胞核椭圆形，常偏一侧。核染色质紧密而均匀，无核仁，胞浆较多，呈透明的淡蓝色，常有少许嗜天青颗粒。T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。 三、细胞的运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞收到后的处理方法  细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）   五、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO   对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：  方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。  方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项 1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。 3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。 4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      ATCC 51145小牛葡萄球菌特点与优势及培养！ 一、菌种简介平台编号：Bio-75153 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Staphylococcus Vitulinus 菌株名称：小牛葡萄球菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Staphylococcus vitulinus Webster et al.拉丁名(ATCC® 51145™)菌株编号Permits and Restrictions View Permits Deposited As Staphylococcus vitulus Webster et al.Strain Designations菌株别名 DD756Isolation分离源  Animal-derived foodstuffBiosafety Level 生物安全等级1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format提供形式 freeze-driedPreceptrol® noType Strain模式菌株 yes (type strain)Medium培养基 ATCC® Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothGrowth Conditions生长条件Temperature培养温度: 37.0℃Name of Depositor WE KloosChain of Custody来源国家  ATCC Isolation分离源  Animal-derived foodstuffReferences参考文献  Webster JA, et al. Identification of the Staphylococcus sciuri species group with EcoRI fragments containing rRNA sequences and description of Staphylococcus vitulus sp. nov.. Int. J. Syst. Bacteriol. 44: 454-460, 1994. PubMed: 7520736type strain ground lambtype strainCross References Nucleotide (GenBank) : AB009946 Staphylococcus vitulus gene for 16S ribosomal RNA. Nucleotide (GenBank) : AF053576 Staphylococcus vitulus ATCC 51145 heat shock protein 60 gene, partial cds. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                    球孢链霉菌的知识概述及实验内容与操作流程！ 一、菌种简介平台编号：Bio-51878 规格：冻干物拉丁属名：Streptomyces Globisporus(Krassilnikov) Waksman 中文名称：球孢链霉菌拉丁名称：Streptomyces globisporus(Krassilnikov) Waksman来源历史：CGMCC收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：69.0原产国：中国模式菌株：否主要用途：产异放线菌酮生物安全级别：一级其它保藏中心编号：CGMCC4.744培养基编号： 12培养温度：28℃培养时间：3-5d需氧类型：好氧保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、知识概述高氏合成1号琼脂：气丝粉状，秸草色或微绿黄色。基丝无色。无可溶色素。高氏有机2号琼脂：气丝不多，粉状，乳脂色，罕绿黄色。基丝无色或微黄色。可溶色素略微黄色。马铃薯块：气丝丰茂，绿黄色。基丝好，无色或微褐色。可溶色素无或略微褐色。明胶液化相当快，无色素。牛奶7—14天胨化，无或浅黄色素。淀粉水解弱。纤维素上大部分不生长。硝酸盐还原。抑制革兰氏阳性和阴性细菌、酵母、丝状真菌。少数菌株只抑制革兰氏阳性细菌。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1)所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2)隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    香肠乳杆菌的形态特征与主要价值及注意事项！ 香肠乳杆菌是Lactobacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为泡菜发酵，产乳酸。 一、菌种简介平台编号：Bio-03625 提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Farciminis 中文译名：香肠乳杆菌拉丁学名：Lactobacillus farciminis原始编号：XM-133菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：周宇光直接来源国家：中国保藏时间：6/20/2010生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：30℃培养基：0006    分离源：养猪场发酵床垫料采集地点：厦门采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征MRS琼脂培养基上菌落圆形、边缘整齐，呈半透明状，表面湿润易挑起。细胞短杆状，成对排列，G+。MRS液体培养基发酵可产乳酸。 三、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 四、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  小鼠脑周细胞永生化细胞的使用方法与注意事项！ 一、产品信息平台编号：Bio-134001 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：永生化细胞 产品名称：永生化ICR小鼠脑微血管周细胞细胞来源：原代ICR小鼠脑微血管周细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介虽然原代小鼠脑微血管周细胞最更能真实地反映脑微血管周细胞在小鼠体内的生理状态，但是一方面原代分离培养小鼠脑微血管周细胞周期长及对技术人员经验要求较高，另一方面此原代细胞在体外的生长增殖能力非常缓慢有限，以至于此细胞不能多次传代，这些不利因素制约了原代小鼠脑微血管周细胞在实验室的广泛应用。欣润生物的研究团队拥有多年原代细胞分离培养及细胞永生化服务研究经验，成功建立了永生化小鼠脑微血管周细胞。周细胞是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。在大脑中周细胞帮助维持血脑屏障，周细胞是大脑神经血管单位的重要组成部分。此外，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用。本公司生产的永生化ICR小鼠脑微血管周细胞采用酶解法和SV40T慢病毒制备而来，细胞总量约为1×106/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 三、培养基信息我们推荐使用欣润生物研制的永生化ICR小鼠脑微血管周细胞完全培养基（DMEM/F12+10%FBS+1%双抗）作为体外培养永生化ICR小鼠脑微血管周细胞的培养基。 四、使用方法1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：取出 T25 方瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2细胞培养箱中静置 2-3 小时，以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的完全培养液（备注：先使用瓶子中完全培养液培养及尽快冻存保种细胞，保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡），最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。2、细胞传代：1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1200rpm/min，离心 5min；3）弃上清，沉淀细胞用 12ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。3、细胞冻存：1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入完全培养液终止消化，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1200rpm/min，离心 5min；3）用适当量的冻存液（完全培养液：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。4、细胞复苏：1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 完全培养液无菌离心管中，1200rpm 离心5min，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞，将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中，放置于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；3）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。  五、注意事项1、培养基于 4℃条件下可保存 3-6 个月；2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；3、该细胞只可用于科研； 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   丁酸梭菌在水产养殖中的具体应用及前景与展望！ 百欧博伟生物：水产养殖业作为重要的经济支柱，在满足人们对海鲜产品需求的同时，也面临着诸多的挑战，包括疾病防控、环境保护等方面。而丁酸梭菌作为一种独特的益生菌，为水产养殖业带来了全新的解决方案。 水产养殖中的挑战和疾病防控的重要性 水产养殖业是我国重要的经济支柱之一，但同时也面临着疾病防控的挑战。常见的水产养殖疾病包括细菌、病毒和寄生虫等，它们会给养殖产业带来巨大的经济损失，同时还会对水体环境造成污染。因此，寻找有效的疾病防控方法是水产养殖业面临的紧迫任务。 丁酸梭菌的特点与优势 丁酸梭菌是一种常见的无害肠道菌，在水产养殖中具有重要的应用潜力。它是一种益生菌，具备以下特点和优势： 1、丁酸梭菌具有良好的附着性，可以在宿主体表面形成菌群，在养殖环境中起到防护作用。 2、丁酸梭菌产生丁酸，能够降低肠道pH值，促进益生菌生长，抑制病原菌的繁殖，从而维护肠道健康。 3、丁酸梭菌还具有分解纤维素的能力，有助于提高水产动物对饲料的消化吸收率，减少养殖过程中的资源浪费。 4、丁酸梭菌是一种广谱抗菌剂，具有抵抗细菌和病毒感染的能力，对水生生物免疫系统有一定的调节作用。 丁酸梭菌在水产养殖中的具体应用 1、养殖水体的处理：将丁酸梭菌添加到养殖水体中，可以有效降低水质中的氨氮、硫化物等有害物质的浓度，减少水体的污染程度，保障水产动物的健康生长。 2、饲料添加：将丁酸梭菌加入饲料中，可以促进水产动物的消化吸收，提高饲料的利用率，减少养殖过程中的浪费。 3、病虫害防治：丁酸梭菌作为一种益生菌，在水产养殖中具有抑制病原微生物生长的能力。通过添加丁酸梭菌，可以有效降低水产动物患病的风险，减少对抗生素等化学药物的依赖，降低环境风险。 4、养殖环境改善：丁酸梭菌能够降低饲养密度带来的环境压力，通过降解鱼缸或池塘底部的有机废物，减少氮、磷等营养物质的积累，改善水体质量。 5、抗逆性增强：丁酸梭菌的应用可以增强水产动物的抗逆能力，使其对养殖环境的变化、气候波动和疾病压力等应激因素具有更好的适应性。 6、生态平衡维护：丁酸梭菌能够调节养殖水体的微生物组成，减少有害细菌的生长，提高好氧和厌氧条件下有益微生物的数量，维持良好的生态平衡。 7、减少化学药物广谱使用：通过丁酸梭菌的应用，可以减少饲料中抗生素等化学药物的使用，降低在水产养殖过程中对化学药物的依赖性，减少药物残留问题，提高海产品的安全性。 丁酸梭菌应用的前景与展望 丁酸梭菌在水产养殖中的应用前景广阔。随着人们对海鲜产品的需求不断增加，对养殖品质和环境可持续性的要求也越来越高。丁酸梭菌作为一种生态友好的养殖工具，具备多重益生功效，能够提高养殖动物的健康水平，减少疾病发生，优化养殖效益。同时，丁酸梭菌还能降低化学药物的使用，减少对环境的污染，符合现代人们对绿色生态养殖的追求。因此，丁酸梭菌必将在水产养殖行业中发挥越来越重要的作用。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   化脓放线菌PCR试剂盒的主要用途与操作步骤！ 一、背景 化脓放线菌PCR试剂盒是一种用于检测化脓放线菌的PCR试剂盒。该试剂盒包含多种引物和探针，可以同时扩增和检测多个化脓放线菌的基因序列，从而提高检测的准确性和灵敏度。 化脓放线菌PCR试剂盒利用聚合酶链式反应（PCR）技术，对疑似化脓放线菌感染的样本进行快速、灵敏和特异的检测。该试剂盒包含一系列必要的成分，如引物、酶、染料等，用于扩增化脓放线菌的特异性基因片段，从而实现对目标病原体的快速鉴定和检测。 二、化脓放线菌PCR试剂盒的主要用途包括 快速检测：该试剂盒可以快速、准确地检测出化脓放线菌的存在，有助于临床医生及时诊断和治疗。 高通量检测：该试剂盒可以同时扩增和检测多个化脓放线菌的基因序列，适用于大规模样本的检测。 灵敏度高：该试剂盒具有较高的灵敏度，可以检测到极低浓度的化脓放线菌DNA。 特异性强：该试剂盒具有较强的特异性，可以区分不同的化脓放线菌种类。 总之，化脓放线菌PCR试剂盒是一种非常有用的工具，可以帮助临床医生快速、准确地诊断和治疗化脓放线菌感染。 三、化脓放线菌PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据化脓放线菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在化脓放线菌的感染。 四、应用 化脓放线菌PCR试剂盒可以用于猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株全基因组测序及HSP100/Clp基因转录水平差异分析： 化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)又名化脓放线菌或化脓棒状杆菌。化脓隐秘杆菌可通过侵染易感动物的黏膜和皮肤诱发化脓性炎症,该菌也可与其他病原菌混合感染。建立的间接ELISA方法可用于调查猪群中化脓隐秘杆菌抗体情况,该方法可作为化脓隐秘杆菌抗体检测的一种新手段。 本研究采用二代加三代测序技术分别对猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株进行全基因组测序,完成了猪源化脓隐秘杆菌强毒株(TP-2849;NZCP029004.1)与弱毒株(TP4479;NZCP029001.1)的基因岛预测、致病菌毒力因子预测、抗生素抗性基因预测、COG注释、KEGG注释、GO注释与基因组圈图的绘制,以上结果填补了猪源化脓隐秘杆菌全基因组的相关数据。Virulence Factors Database(VFDB)数据库预测结果中发现,猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株中均存在5种HSP100/Clp基因。本研究以猪源化脓隐秘杆菌强毒株TP-2849与弱毒株TP4479对BABL/c小鼠进行攻毒试验,以化脓放线菌PCR试剂盒实时荧光定量PCR检测5种HSP100/Clp基因在BALB/c小鼠的7种脏器组织和血液中的表达量,结果显示,猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株的5种HSP100/Clp基因表达量差异极显著。绘制猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株生长曲线,化脓放线菌PCR试剂盒结果显示,弱毒株的迟缓期长于强毒株;强毒株的稳定期长于弱毒株的稳定期。综上所述,猪源化脓隐秘杆菌毒力的强弱及生长速率的快慢与5种HSP100/Clp基因转录水平表达量有着紧密的联系。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系的应用！ 一、背景 NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系是一种用于研究人非小细胞肺癌的细胞系。这种细胞系通常用于肺癌的生物学特性、药物筛选和化疗药物敏感性等方面的研究。 NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系的上皮样细胞呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散在斑片状生长。这种细胞系的培养实验室的具体要求主要取决于开展的研究类型。例如，专业从事癌症研究的哺乳动物细胞培养实验室与从事蛋白质表达工作的昆虫细胞培养实验室等。 二、NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞培养操作 1)复苏NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于L1CAM促进肺腺癌转移及其调控机制： 阐明L1CAM(L1 cell adhesion molecule)对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并揭示调控L1CAM功能的分子机制。 研究方案： 1、L1CAM与肺腺癌的临床相关性研究收集经手术完整切除的,并有配对癌旁正常组织的88例肺腺癌标本,使用免疫组织化学技术检测L1CAM的表达水平,并分析其表达量与患者预后的临床相关性。 2、LICAM对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响 (1)在肺腺癌细胞A549、NCI-H1299及NCI-H1770中,过表达或沉默L1CAM,通过Transwell、细胞增殖和细胞划痕等实验检测L1CAM对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响; (2)采用转座子系统构建sh L1CAM的小鼠原位肺癌模型,注射6周后处死小鼠,取肺组织标本计数肿瘤形成数量; (3)在H460SM细胞过表达或沉默L1CAM,通过经支气管肺内原位接种构建裸鼠气管内原位肿瘤模型,达到预期终点后处死裸鼠,并比较实验组与对照组肿瘤大小及转移情况。 3、鉴定肺腺癌中上调L1CAM表达的通路及其对生物学功能的影响 (1)在NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系中通过si RNA干扰技术及Western blot检测沉默PAK4、Slug后,L1CAM表达情况; (2)在先前收集的肺癌患者手术标本中通过Western blot验证PAK4、Slug的蛋白表达水平; (3)通过生物信息学分析探索在抑制PAK4的mi RNA; (4)通过RNAi技术在SPC-A-1,SPC-A-1sci转染mi RNA或其抑制剂,采用q PCR,Western blot实验检测PAK4、Slug、L1CAM表达情况以及EMT相关蛋白(E-cadherin和Vimentin)的表达水平。 (5)采用Transwell及划痕试验验证转染后的SPC-A-1及SPC-A-1sci细胞侵袭和迁移能力。 (6)在裸鼠中尾静脉注射转染后的SPC-A-1sci或SPC-A-1细胞,7周后测量肺部转移瘤数量,进一步验证mi RNA通过PAK4/Slug/L1CAM途径在肺腺癌中发挥的生物学功能。 研究结果： 1、在收集的肺腺癌组织标本中,癌组织L1CAM表达水平高于与其配对的癌旁组织;患者生存分析表明L1CAM高表达组较之于低表达者预后差(P 2、在A549,NCI-H1299,NCI-H1770人非小细胞肺癌贴壁细胞系中过表达L1CAM后,肺腺癌细胞侵袭和迁移能力较对照组明显增强;沉默L1CAM,上述三组肺腺癌细胞的侵袭和迁移能力显著降低,并可抑制小鼠肿瘤模型中原发性肺癌及转移瘤的数量。然而细胞增殖实验结果表明敲低或者过表达L1CAM后细胞增殖能力较对照组没有显著差异。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    HEI193人神经鞘瘤细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133621 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HEI193 细胞名称：人神经鞘瘤细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS细胞形态：上皮细胞样  传代方法：1:2传代  传代情况：2~3天换液  培养体系：温度：37℃；气相：空气，95%；CO2，5%  细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  冻存条件：无血清冻存液  用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞的运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 三、细胞收到后的处理方法  细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）   四、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO   对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：  方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。  方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 注意事项 1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。 3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。 4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 五、注意事项1、收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。3、由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。4、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      CMCC（B）44939 产志贺毒素大肠埃希氏菌 产志贺毒素大肠埃希氏菌，菌体杆状，单个或成对排列，革兰氏阴性。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-133980 规格：冻干物拉丁属名：Escherichia Coli STEC 中文名称：产志贺毒素大肠埃希氏菌拉丁名称：Escherichia coli STEC模式菌株：是其它保藏中心编号：=CMCC（B）44939来源历史：←中国食品药品检定研究院←疾控中心收藏时间：01 4 2022 12:00AM原始编号：FC7791原产国：中国特征特性：菌体杆状，单个或成对排列，革兰氏阴性。毒力基因检测结果：escV（+），stx1（-），stx2（+），bfpB（-），uidA（+）。参考用途：GB 4789.28 《培养基和试剂的质量要求》标准菌株生物危害程度：三类致病对象：人畜共患致病名称：腹泻传播途径：经消化道分离基物：人培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：CM0002:蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4・H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。培养温度：37 ℃需氧类型：好氧用途：研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 三、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     如何去确保食品在微生物检测工作的质量呢？ 百欧博伟生物：随着人们生活水平的提高和生活质量的改善，人们越来越重视食品质量和安全，因此确保食品微生物检测工作的质量是确保食物安全的重要举措，但是目前我国的食品检测工作还有待加强。食物微生物检测对于保证食品质量和安全意义重大。该文将会对食品微生物检测工作的内容、影响食品微生物检测工作质量因素和如何确保食品微生物检测工作的质量进行深入研究和探讨，为我国食品安全工作的总体进展做出更大的贡献。  一、食物微生物检验工作的内容  1、食物微生物检测概述  食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。食品微生物检验方法是食品质量管理不可少的重要组成部分，它是贯彻“预防为主”的方针，可以有效地防止或者减少食物人畜共患病的发生，保障人们的身体健康。食品微生物检测是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品是否有食用价值的科学依据之一。通过食品微生物检测，可以判断食品加工环境及食品卫生情况，并且能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。  2、食物微生物检测的指标  目前，我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。菌落总数主要是指食品检样在经过样品处理、培养基及其pH值、培养温度与时间、计数方法等条件的严格控制下的培养后，单位重量、容积或表面积上，所生成的细菌菌落总数;大肠杆菌来自人或温血动物肠道，这些细菌是寄居于人及温血动物肠道内的常居菌，它会随着大便排出体外。食品中如果大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。故以大肠菌群作为粪便污染食品的卫生指标来评价食品的质量，具有广泛的意义;致病菌是能够引起人们发病的细菌。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。不同的食品和不同的场合，应选择的参考菌群进行检验。  二、确保食品微生物检测工作的质量的策略  1、提高检测人员的专业素质  食物微生物检测工作具有很强的专业性，需要对检验工作的各个方面进行严格的把握和科学的控制。为确保食品微生物检测工作的质量需要提高微生物检测人员的专业素质。检测人员具备严谨的工作态度和较强的责任感，还要注重不断的提升自己。检测人员要接受定期的专业培训，丰富自己的专业知识和专业技术，及时的发现和处理食物微生物检测工作中的问题，注重提高自身工作质量和工作效率。  2、保证食品微生物检测的设施和环境的质量  进行食品微生物检测工作的实验室环境的优劣会对检测结果造成重大的影响，实验室环境要保持清洁卫生，这样可以减少交叉污染，同时还要对它的湿度、温度和光照等进行合理的控制，保证食物微生物检测工作环境的质量。食品微生物检测的设施要齐全，不仅要保证食品微生物检测工作的顺利进行，还要对检测人员配备的保护设施，使他们免受伤害，也有效的避免环境污染，提高食品微生物检测工作的质量。  3、保证食品微生物检测仪器设备的质量  食品微生物检测仪器设备需要有专人保管并要对它们的使用和维护进行及时的记录，定期对这些仪器和设备的性能进行检查，保证其能准确的为食品微生物检测工作服务。还要注意对食品微生物检测仪器设备进行杀菌处理和保存，确保检测结果的准确性。  4、对食品微生物检测过程进行质量保证  在对食物进行微生物检测时，要严格按照科学的操作规程进行，规范检测过程。从食物微生物的取样、培养一直到得到检验结果，中间的各个环节和相应的操作流程和规范都需要检测人员的严格履行。在食品微生物检测结束后，及时的清理垃圾，将实验室消毒清洁。对食品微生物检测过程进行质量保证可以确保食物微生物检测工作的质量，进而保证食物安全和人们的生命健康。  三、结语  确保食品微生物检测工作的质量，提高我国的食品质量与安全的任务较为艰巨，需要采取科学有效的策略对食品微生物检测工作进行质量上的控制，保证食品微生物检验结果的正确性和可靠性，同时也需要提高相关人员的素质和工作能力，不断完善食品微生物检测工作，努力实现食品安全的目标。总之，食品安全和食品质量与人们的生命健康息息相关，食品检验部门要不断提高自身工作质量，更好地为广大人民服务。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！