细胞培养基的几点基本要求！ 百欧博伟生物：现代生物技术均通过细胞作为载体来进行，无论是基因治疗、干细胞、克隆技术都在细胞内进行的。细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基，即指所有用于各种目的的体外培养、保存细胞用的物质，就其本意上讲为人工模拟体内生长的营养环境，使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。细胞培养基其组成成分主要有：水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些入核酸降解物、激素等。 细胞培养基的基本要求 体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 1、营养成分。维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面： 1）氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺，它在细胞代谢过程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的来源，同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。 体外培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。 2）单糖：培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力z高，半乳糖z低。 体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 3）维生素：主要扮演辅酶、辅基的角色，必不可少。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12都是培养基常有的成分。 4）无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。 2、促生长因子及激素。各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。 3、渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg的范围都适宜。 4、无毒、无污染。体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。 5、pH。气体也是细胞生存的必需条件之一，所需气体丰要是氧和二氧化碳。氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH有直接关系。动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7．2~7．4℃在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，PH值发生变化。由于NaHCO3容易分解为二氧化碳，很不稳定，致使缓冲系统难以精确地控制。故这一缓冲系统适合密闭培养。HEPES结合碳酸氢钠使用，可提供更有效的缓冲体系，主要是防止pH值迅速变动，但z大缺点是在开放培养或观察时难以维持正常的pH值。造成pH波动主要是代谢产生的CO2，在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度（5％），与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

       菌落总数的概念及常规检验方法！ 一、菌落总数的概念及卫生意义 1、菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1mL （或1g）检样中形成菌落的总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在平板计数琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 2、细菌总数指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1mL或1cm2样品中的细菌总数来表示。 3、菌落总数在食品卫生质量评价中的意义1）食品中细菌数量可反映该食品被污染的程度 新鲜的食品内部一般是没有或很少有细菌的，但由于外界污染情况不同，食品被细菌污染的多少就有所不同。食品中细菌数量越多，说明被污染的程度就越严重，越不新鲜，对人体健康威胁越大。相反，食品中菌数越少，说明该食品被污染的程度越轻，食品卫生质量越好，对人体健康影响也越小。 2）食品中细菌数量可预测食品耐放程度和时间 一般讲，细菌数越少，食品耐放时间越长；相反，食品耐放时间就越短，例如用O℃保存牛肉，菌落总数为103cfu／cm2时，可保存18天，而当菌落总数增至lO5cfu／cm2时则只能保存7天。另外，用0℃保存鱼时，菌落总数为105cfu／cm2时可保存6天．而菌落总数在103cfu／cm2时则可保存12天。 3）食品中细菌数量可估测出食品腐败状况 一般认为日常食品的活菌数为104～107cfu／g。而当活菌数达到108cfu／g则可认为处于初期腐败阶段。例如，活的家禽，皮肤表面的细菌数可低到1.5×103cfu／cm2。而加工后马上检测可达3.5×104cfu／cm2。当菌落数为107cfu/cm2时表示确已经腐败，鸡肉的细菌数达108cfu／cm2时可有气味并变粘。一般讲，食品中细菌数量越多，则会加速腐败变质过程的进程，甚至可能引起食用者的不良反应。 二、菌落总数的常规检验方法(GB4789．2-2008)：基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培养48（24）小时——计数报告。  （一）样品的处理和稀释：1、操作方法：1）以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，z好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。3）另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。 2、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。 3、采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。 4、稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。 （二）倾注培养1、操作方法： 1）根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。2）将凉至46℃平板计数琼脂培养基注入平皿约15mL，并转动平皿，混合均匀。同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1mL稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。3）待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。  2、倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。 3、为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注z后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。 4、培养温度一般为37℃（水产品的培养温度，由于其生活环境水温较低，故多采用30℃）。培养时间一般为48h，有些方法只要求24h的培养即可计数。培养箱应保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基失重不应超过15％。 5、为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆，不易分辨，可同时作一稀释液与琼脂培养基混合的平板，不经培养，而于4℃环境中放置，以便计数时作对照观察。在某些场合，为了防止食品颗粒与菌落混淆不清，可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培养后菌落呈红色，易于分别。 （三）计数和报告1、操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算出原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。 2、到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。 3、稀释度选择及菌落数报告方式1）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。2）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（l）计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d……………………（1）式中：N―样品中菌落数；∑C―平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n 1―diyi个适宜稀释度接种平板个数n2―第二个适宜稀释度接种平板个数；d―稀释因子（diyi稀释度）。3）若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度z高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以z高稀释倍数计算。4）若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度z低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5）若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以z低稀释倍数计算。6）若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以z接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 4、菌落总数的报告1）菌落数在100以内时，按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字报告。2）大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。3）若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。4）若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5）称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。 （四）特别注意1、不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。 2、当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。 3、当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

        实验室常见菌株保存方式比较！ 一、菌株保存要求 菌种作为一项重要的生物资源，对微生物学教学和研究是必不可少的。菌种保存方法因微生物的不同而异。在菌种保存过程中，必须使微生物的代谢处于z不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，故菌种保存方法多依据这三个因素而设计。 菌种保存方法有多种，z理想的为真空冷冻干燥法，具有保存时间长、成活率高、变异小等优点，但操作技术难度大，花费高，需特殊设备，一般单位不易做到，而一些常规方法，常因传代次数多、易污染、易变异，给保存带来诸多不利。 多年来，微生物学工作者们一直在研究摸索简便而行之有效的菌种保存方法，笔者查阅相关资料并吸取同行工作者们的实践经验，总结了几种方法简便、效果好的保存方法，现介绍如下。 二、需要4℃冰箱保存的保存法 1、液体石蜡保存法先将液体石蜡灭菌，然后放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将需要保存的菌种在z适宜的斜面培养基中培养，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面顶端1cm 为准。试管需直立，置4℃或室温下保存，一般无芽胞细菌可保存1年左右。 2、高层半固体琼脂石蜡保存法将需保存的菌种经平板划线分离后，挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中，经37℃12小时培养后取出，用无菌操作将灭菌的液体石蜡滴加半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度，存放4℃冰箱，1年转种1次。 3、蒸馏水保存法取灭菌蒸馏水6-7ml加于试管斜面上，用吸管研磨，洗下菌苔充分混匀，将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中，或用胶塞密封，置4℃保存可存活数年。 三、需-20℃冰箱冷冻保存的保存法 1、甘油保存法甘油一生理盐水保存液的制备：取甘油(分析纯)8份加入生理盐水2份，充分混合后，经121.3℃ 30分钟灭菌备用。 将纯化后的菌株根据菌种不同分别划线接种于其z适宜生长的培养基上培养后，用接种针取典型菌落接种肉汤管37℃培养6-8小时(链球菌和奈瑟氏菌接种血清肉汤管，5-10%CO2环境下8-10小时培养，真菌直接用接种环取菌洗入肉汤管，不培养)。此为培养液。 将此培养液与保存液以5：2的比例混合分装于灭菌的微量离心管，置-20℃冰箱保存(链球菌、奈瑟氏菌置-80℃冰箱保存)。使用时需37℃水浴中快速解冻。 用上述方法保存一般菌株可存活3年以上，链球菌、奈瑟菌可存活12-15个月，且性状未发生变异。此方法采用幼龄肉汤培养物效果好，且适用于链球菌、奈瑟氏菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种。 2、低温保存法菌种保存液的配制：K2HPO412.6g，柠檬酸钠0.98g，MgSO4·7H2O 0.18g，KH2PO4 3.6g，甘油88g加蒸馏水至1000ml，103.4KPa灭菌30分钟，4℃保存备用。 将细菌接种于肉汤培养基中，37℃ 培养16-18小时，或斜面培养物刮取于生理盐水中，然后加入等体积的菌种保存液，冻存于-70℃或-20℃冰箱中。 此方法也适合甲链、肺球、流感杆菌、百日咳杆菌、绿脓杆菌等耐受力低的细菌。-70℃保存10年以上，-20℃可保存2年以上。 3、细菌湿种牛奶冻存法新鲜牛奶或15%奶粉煮沸，冷却脱脂，分装小试管，每管1ml，8磅15分钟灭菌备用。 将纯种菌接种于平板，37℃16小时培养，以接种环刮取菌苔2-3环于牛奶中混匀，试管用硅胶塞，冻存于普通冰箱冷冻室(-12℃-18℃)。使用时取出室温溶解，待部分溶解时即可取一环接种平板，并将试管再迅速冻存，这样可反复使用3-5次。此法一般菌株可存活48个月，少数如奈瑟氏菌、甲链、白喉等可存活14-30个月。 4、甘油原液保存法将各待保存的菌种纯化后用接种环直接从平板上刮取，置于盛有0.5ml甘油原液的菌种瓶中，-20℃保存，可连续52个月存活良好。 此法尤其适合乙链、破伤风杆菌、产气荚膜梭菌、白色念珠菌等需特殊方法保存的菌种，是一种简便实用的有效保存方法。 四、需低温-30或-70℃冰箱保存 1、脱纤维羊血无菌抽取羊颈静脉血后，沿瓶壁注入无菌的带玻璃的三角烧瓶中，同时立即同一方向振摇约8-10分钟，脱去纤维，然后分装加盖无菌小试管中约1.0-1.5ml。 将脑膜炎双球菌、淋球菌、甲乙型链球菌、肺炎双球菌分别接种于血平板培养基中，前两者置于5-10% CO2 烛缸内，经35℃16-18小时培养，后三者置37℃恒温箱培养24小时，然后无菌操作取一接种环菌苔移种于上述新鲜脱纤维羊血试管中，立即置-3O℃冰冻保存二年转种一次。用时室温自然冰融即可接种。 2、纸片法新华定性滤纸剪成4mm×4mm，1.5ml带盖离心管消毒灭菌备用，用消毒小钳子钳上滤纸片于平板上刮取待保种的纯菌落2-3个。放于离心管内塞盖再用封口胶布将盖边缘封好放于-30℃冰箱保存。保存12个月后取出菌种解冻后用无菌钳取一片放于肉汤管内37℃培养12小时后转种血平板，性状未变异。 3、奶粉液菌种保存法菌种保存液：脱脂奶粉10g，NaCL 10.5g，加双蒸水100ml，121℃ 5分钟高压灭菌后分装于1ml带盖无菌标本杯中(0.5ml)备用。 无菌操作用4mm×10mm 无菌滤纸条蘸取新鲜菌少许，放存含奶粉液保存杯中，盖好，封口胶封口，低温保存。3年存活率达99.2% 。 使用时将标本杯取出，不等全部融化，上层有少许融化即用接种环取一少许接种于血平板分离即可。 五、结论 菌种是细菌工作中所不可缺少而又具有传染性生物学因子。为了保证工作和安全，对菌种必须妥善保存和保管。保存菌种不仅要求不死，还要求其生物学性状、生理特性、抗原性等方面不发生变异，这是保存菌种的重要环节。延长菌种存活期应注意：首先，待保存菌种须选择生长期幼龄培养物，且制成浓菌液保存，以保证存活率。其次，高层半固体培基z好选择不含或含糖量低的培基，可减少或避免因代谢产物产生而造成的细菌死亡。z后，保存温度的高低可影响存活率，切忌反复冻融。 以上介绍的几种方法，取材简单，操作容易，已经反复实践证明保存时间长，变异小，适合中小型实验室使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

    志贺氏菌的血清学鉴定方法！ 挑取5%羊血琼脂平板上的菌落，进行志贺氏菌的血清学鉴定，设盐水对照。 一、表面抗原（K抗原）在新分离的某些菌株菌体表面含有此种抗原。不耐热，加热100℃1小时即被破坏。具有此种抗原的菌株，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。 二、菌体（0）抗原1、型特异性抗原：化学组成为多糖，是光滑型菌株所含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常随之消失，根据所含的型抗原不同，可将志贺菌属分为A、B、C、D四个群及39个抗原型。2、群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原的一种。特异性较低，主要存在于B群。根据所含的群抗原不同，可将一些菌型分为多种亚型。人们原来的认识认为血清学试验是特异性的，但是志贺氏菌的 O抗原和大肠埃希氏菌属关系密切，有半数的菌型与大肠埃希氏菌的某些O抗原完全相同。相同抗原菌属间存在血清交叉凝集反应。因此，生化试验对于属的鉴定是非常重要的。 三、抗原的准备志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。抗原构造与分型：志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O）及表面抗原（K）组成。O抗原为糖脂蛋白复合物，可分为型特异性抗原和群特异性抗原。志贺氏菌分为4个群，48个血清型（包括亚型及变种）。K抗原在志贺菌属分类上无意义。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则再用相应各群多价血清分别试验。先用B群福氏志贺氏菌多价血清进行实验，如呈现凝集，再用其群和型因子血清分别检查，福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原鉴别见表4。如果B群多价血清不凝集，则用D群宋内氏志贺氏菌血清进行实验，如呈现凝集，则用其Ⅰ相和Ⅱ相血清检查；如果B、D群多价血清都不凝集，则用A群痢疾志贺氏菌多价血清及1～12各型因子血清检查，如果上述三种多价血清都不凝集，可用C群鲍氏志贺氏菌多价检查，并进一步用1～18 四、各型因子血清检查刮取5%羊血琼脂平板上的单个菌落，进行系统生化鉴定。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

      菌株分离培养特性研究结果分析！   1、菌株分离培养特性和镜检剖检观察病死羔羊肺脏组织，肉眼可见肺脏大部分呈现肉变，并伴有白色化脓灶。分离菌株在绵羊血琼脂平板上生长为均一的灰白色、边缘光滑、湿润的圆形菌落，革兰氏染色呈现阴性短小杆菌。 2、分离菌株生化特性经细菌生化鉴定仪鉴定，分离株与大肠杆菌的生化反应特点一致，包括不产生氧化酶、苯丙氨酸脱氨酶、DNA酶以及硫化氢；能产生赖氨酸脱羧酶；分解乳糖，但不利用柠檬酸盐、D-阿东醇和纤维二糖等，是大肠杆菌的可信度为99% 。在麦康凯平板上生长为红色、湿润圆形菌落；在伊红美兰平板上生长为黑色带有金属光泽圆形菌落；革兰氏染色镜检为阴性杆菌。 3、分离株16S rRNA基因鉴定结果以细菌DNA为模板，PCR扩增大肠杆菌16S rRNA基因序列，经琼脂糖凝胶电泳检测分离株扩增出202 bp大小的目的条带。将测序序列与GenBank数据库E. coli参考株16S rRNA基因序列进行同源性比对。结果显示，分离株16S rRNA基因序列与E. coli参考株CP020933.1、KY906967.1、LC259015.1等相似性均为99%以上。 4、分离株致病性试验结果试验组小鼠感染后双目紧闭，被毛潮湿杂乱，呈腹式呼吸，濒死小鼠表现为全身颤抖，6 h内全部死亡，而对照组小鼠无死亡。剖检发现死亡小鼠肝脏肿大，边缘有出血点，脾脏肿大变黑，肺脏充血及出血，局部出现坏死。无菌采集小鼠肺脏、肝脏、脾脏，均分离到与注射菌一致的大肠杆菌。 5、药物敏感性试验结果按CLSI标准判断分离菌株对青霉素、阿莫西林、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、阿奇霉素和克林霉素等14种抗生素耐药；对头孢唑啉、丁胺卡那和多粘菌素B中度耐药；对头孢他啶、头孢哌酮、氧氟沙星和米诺环素敏感。 6、ExPEC毒力因子扩增结果以细菌DNA为模板，对9种ExPEC毒力因子进行PCR检测，扩增到iutA (314 bp)、fyuA (787 bp)和ireA (254 bp) ，且扩增片段序列与GenBank参考序列的相似性大于99%。未检测到papA、sfaS、focG、hlyD、afa和vaT等基因。 7、病理组织学观察结果病死羔羊肺脏支气管管腔充血，淋巴管扩张，周围淋巴细胞浸润、增生，肺脏肺泡壁毛细血管充血，肺泡腔内淋巴细胞浸润；人工感染小鼠肺脏肺泡腔内充满渗出物，出现肺泡性肺气肿，肺脏血管管腔充血，淋巴细胞增生，肺泡周围炎性细胞浸润。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

        影响培养基灭菌效果的因素！ 培养基灭菌是否彻底，影响因素很多，除了培养基内杂菌的种类和数量，灭菌温度的高低，时间长短外，还取决于： 1、营养成分的保持湿热灭菌时，微生物被杀死的同时，培养基的营养成分也遭到了一定的破坏，特别是氨基酸和维生素。如在121℃，仅20min，就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应，造成培养基中原有营养成分的数量变化，因而影响培养基质量。 2、微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大，灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。 3、pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时，微生物z不易死亡。pH 4、培养基成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性，灭菌较易。例如：大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡，在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候z好选用115℃，30分钟；一般的培养基可选择121℃20分钟。 5、泡沫泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去，杀死其中的杂菌。 6、颗粒颗粒小，容易灭菌，颗粒大，则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基，可用粗滤的方法（不应影响培养基质量）予以除去，培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。 7、灭菌锅内空气是否排净这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点，同样达到了相同的压力的情况下，如果空气未能排净，也就是说不是纯蒸汽灭菌，此时的温度不一定能达到目的要求，会严重影响灭菌效果。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

    百欧博伟醋酸菌培养基知识解析！ 1、醋酸菌斜面培养基：葡萄糖 1克，酵母膏1克，碳酸钙1克，琼脂2.5克，水100毫升。 2、斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用。 3、Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100gYeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000mlAdjust (调) pH to 6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 ⑴斜面培养基　　葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面。 ⑵液体增殖培养基　　葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL 0.1MPa灭菌20min。 ⑶醋酸菌种的制备　　扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。 ①安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次。 ②菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。 ③三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h， ④种子罐培养基同前 配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精，无菌操作接入菌种。接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定 ⑤每次接种前，先将菌种进行外观观察 。有异样情况者，作涂片、染色、镜检观察，菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检2—3个样品，在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。培养醋酸菌时，需要用含糖或酵母膏（维生素B）的培养基，在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源，对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用，不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢，一般为形态近于球菌的短杆菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖，增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-，老龄细胞呈可变性，因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。 醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭。感官判断类似于一种丁香成分，和纯醋酸的嗅感不同。防止方法不外呼改善工厂的环境卫生，加强卫生管理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

       原代细胞骨架的染色方法！ 一、微丝的显示方法步骤：1、用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次，每次30s；2、用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min；3、用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次，每次10min；4、PBS漂洗3次；5、用罗丹明（rhodamine）标记的鬼笔环肽（phalloidin）（1：10）室温中反应15min；6、PBS漂洗3次；7、60%甘油+荧光防淬剂封片；8、荧光显微镜观察； 二、微管的显示方法：1、用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；2、在室温中用3%甲醛/PBS固定20min；3、用PBS液再漂洗3次，每次1min，z后用滤纸吸干多余的PBS液；4、投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；5、用PBS漂洗3次，每次1min，z后用滤纸吸干多余的PBS液；6、向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃温箱中放置45min—1h；7、向碟皿内匀速缓慢滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；8、向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；9、按步骤7和3操作；10、滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；11、将盖片置于荧光显微镜下观察； 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

      血清学试验方法及注意事项！ 血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称，故又称抗原抗体反应。它可以用已知抗体(细菌抗血清)检测未知抗原(待检细菌) ，也可用已知抗原(已知病原菌)检测患者血清中的相应细菌抗体及其效价，是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。 一、玻片法 1、原理：用已知的诊断血清或血浆在玻片上与待检菌及生理盐水混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为相应的细菌。 2、方法：取一洁净载玻片，用接种环取待检菌培养物，分别与诊断血清及生理盐水混匀，上下摇动玻片数次， 1~3 min 后观察结果。 3、结果判断：阳性——待检菌明显凝集，对照菌均匀混浊。阴性——待检菌及对照菌均匀混浊。自凝——测定菌、对照菌均凝集(图3 - 46) 。                         4、注意事项：某些细菌菌体表面常有一层表面抗原，如伤寒沙门菌的Vi 抗原及志贺菌属的K 抗原等。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于1000C 中煮沸1 h ，以破坏其表面抗原，然后再作试验。 二、试管法 1、原理：此法可排除玻片法凝集试验的非特异性凝集，是一种半定量凝集试验。 2、方法：取小试管1 0 支，第1 管加入生理盐水0.45 时，再加入0. 05 ml 诊断血清混匀，其余各管均加生理盐水0 . 25 ml ，然后从第1 管中吸出0.25 ml 加入第2 管中，棍匀后再吸出0.25 ml 加入第3 管，依次类推直至第9 管，从第9 管吸出0 . 25 ml 弃去，第10 管不加抗血清为对照管。每管加待检菌菌液(10 X 109 CFU/ ml)0 . 25ml 时，充分振荡混匀后，置37℃水浴4 h ， 再置4℃中过夜。 3、结果判断：以血清z高稀释度达到(++)凝集者(管内液体澄清，部分凝集块沉于管底)为该菌的凝集效价。若此效价达所用原诊断血清效价一半以上者为阳性。 4、注意事项：脑膜炎奈瑟菌的菌液必须经56℃ 30 min 灭活，以破坏自溶酶。若试验出现低凝集结果时，应将该菌传代数次后，再做实验。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌！ 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌操作步骤： 1、样品处理冷冻样品应在45℃以下不超过15 min或在2℃～8℃不超过18 h解冻。若不能及时检验，应放于-15℃左右保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验。若不能及时检验，应置于2℃～8℃冰箱保存，在24 h内检验。 2、样品制备以无菌操作取样品25 g（mL），加入PBS 225 mL，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或拍击式均质器拍击2 min。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵中磨碎，然后称取25 g（mL）置合适的容器中，加225 mL PBS，充分振荡混匀。制成1:10的样品匀液。 3、增菌取1：10的样品匀液10 mL（液体样品可以选择原液），加入90 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中，于30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。 4、分离取胰酪胨大豆多粘菌素增菌液划线接种于MYP琼脂平板上。于30 ℃±1 ℃培养24 h～48 h。观察平板上生长的菌落。在MYP琼脂平板上，典型菌落为灰白色至微粉红色，周围有白色至淡粉红色沉淀环。 5、纯培养从每个平板选取至少5个典型或可疑菌落，划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，进行确证实验。营养琼脂平板上，典型菌落在为灰白色，偶有黄绿色，不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边缘常呈扩展状，直径为4 mm～10 mm； 6、样品的稀释吸取1：10的样品匀液1 mL加到装有9 mL PBS的稀释管中，充分混匀制成1：100的样品匀液。据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。 7、平板计数①选择2～3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取0.1mL接种到MYP琼脂平板上，每稀释度接种两个MYP琼脂平板。用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25℃ ～ 50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 ②涂布后，将平板置于30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h后（原标准为36 ℃±1 ℃培养12 h～20 h） ，选取具有15个～150个典型或可疑蜡样芽胞杆菌菌落的平板，进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。如果菌落不典型，可继续培养18 h～24 h再计数。 ③计数后，从每个平板选取至少5个已计数的典型或可疑菌落，如果一个平板上少于5个典型或可疑菌落，则取所有典型或可疑菌落，分别划线接种于营养琼脂平板， 30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，进行确证实验。  ④根据确证实验确定为蜡样芽胞杆菌的菌落数，按比例计算出该平板上蜡样芽胞杆菌菌落数，然后计算同一稀释度两个平板的平均蜡样芽胞杆菌数，再乘其稀释倍数，再乘以10，即得每g（mL）样品中蜡样芽胞杆菌数并作出报告。 欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

        溶血性链球菌的生物学特性及检验和控制！ 溶血性链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。溶血性链球菌制剂，又称沙培林，对热和化学清毒剂均敏感，常引起扁桃体、咽部、中耳等感染。亦为肾盂肾炎、产褥热、猩红热的病原体。 一、生物学特性 1、形态与染色在液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链，由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长。多数菌株在血清肉汤中培养2-4h易形成透明质酸的荚膜，继续培养后消失。该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬后，转为革兰氏阴性。 2、培养特征需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。 3、生化反应分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶阴性。 4、抗原结构链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种：（1）核蛋白抗原 或称P抗原，无特异性，各种链球菌均相同。（2）多糖抗原 或称C抗原，系群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。（3）蛋白质抗原 或称表面抗原，具有型特异性，位于C抗原外层，其中可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是M抗原。 5、分类根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类。（1）α-溶血性链球菌（α-hemolytic streptococcus）：菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，环内红细胞未溶解，血红蛋白变成绿色这类链球菌亦称为草绿色链球菌，也称甲型溶血。此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。（2）β-溶血性链球菌（β-hemolytic streptococcus）：菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血，因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。具体用途是用于研究和质量控制。（3）γ-溶血链球菌（γ-streptococcus）：不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为丙型或不溶血性链球菌（Streptococcus non-hemolytics），该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。 6、抵抗力该菌抵抗力一般不强，60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感，在干燥尘埃中生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素是链球菌感染的shouxuan药物，很少有耐药性。 二、溶血性链球菌食物中毒 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症，呼吸道感染、流行性咽炎的暴发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热、风湿热、肾小球肾炎等变态反应。链球菌食物中毒潜伏期较短(5~12h)，临床症状较轻，表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻，1~2d即可恢复。溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭性酶有关，主要有以下几种。 (1)链球菌溶血素溶血素有O和S两种，O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分子多肽，相对分子质量较小，故无抗原性。(2)致热外毒素曾称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、周身不适。(3)透明质酸酶又称扩散因子，能分解细胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。(4)链激酶又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，能增强细菌在组织中的扩散作用，该酶耐热，100℃50min仍可保持活性。(5)链道酶又称链球菌DNA酶，能使脓液稀薄，促进病菌扩散。(6)杀白细胞素能使白细胞失去动力，变成球形，zuihou膨胀破裂。 三、溶血性链球菌的检验和控制 （一）检验1、样品处理：取25g固体（或25mL液体）检样加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。2、吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线于血平板（如检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤），36℃培养24h，接种血平板，36℃培养24h,挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激酶试验和杆菌肽敏感试验。3、链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃水浴10min，血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。4、杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片置于上述平板上，36℃培养18-24h，如有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株做对照。 （二）控制1、防止带菌人群对各种食物的污染，患局部化脓性感染、上呼吸道感染的人员要暂停与食品接触的工作。2、防止对奶及其制品的污染，牛奶场要定期对生产中的奶牛进行体检，坚持挤奶前消毒，一旦发现患化脓性乳腺炎的奶牛要立即隔离，奶制品要用消毒过的原料，并注意低温保存。3、在动物屠宰过程中，应严格执行检验法规，割除病灶并以流水冲洗；在肉制品加工过程中发现化脓性病灶应整块剔除。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

        支原体分型试验方法！百欧博伟生物 1、代谢抑制试验：根据特异性抗体能阻止支原体的生长及代谢这一特性，可采用已知高效价的免疫血清进行代谢抑制试验 以鉴别各种支原体。测定分解葡萄糖支原体时，可在含0.5——1.0%葡萄糖的支原体培养基中加入抗血清后再接种菌液，培养后未见发酵反应，培养基颜色不变；而未加抗血清的对照管呈发酵反应，培养基变成黄色。如加入的是抗肺炎支原体血清，即被检测的为肺炎支原体。代谢抑制试验还可用于感染支原体的患者血清抗体效价的检测。  2、反向血凝试验：取高效价的支原体抗血清先经50%硫酸铵沉淀初步提纯后，再经DEAE柱层析获得纯化IgG。先预试确定抗体致敏最适浓度，以鞣酸法将抗体包被于戊二醛化的绵羊红细胞上。抗体致敏的血细胞遇到相应抗原时，室温60min，则可出现特异的血细胞凝集反应。试验证明该法快速，1—2h即可获得结果，特异性和灵敏度高。  3、间接表面免疫荧光试验：此法的突出优点是能查出分离物中的混合感染株，而不需对分离物事先纯化。不需要制备各种支原体高免疫血清的荧光标记抗体，只要有一种羊抗兔荧光抗体即可。用特异性荧光抗体直接染色固体培养基上的支原体菌落，荧光显微镜检查被染菌落的荧光。当支原体菌落与同源兔抗支原体抗体结合后，再加羊抗兔荧光抗体，三位一体，在荧光显微镜下即可见典型的黄绿色荧光菌落。     先确定抗血清最适工作浓度，取支原体诊断血清用生理盐水制成不同稀释度（1：20—1：320），分别与已知相应的支原体菌落做间接表面免疫荧光试验，在荧光显微镜下以菌落着色荧光最强、背景最暗的抗血清z高稀释度作为最适工作浓度。     将待检菌株接种支原体固体培养基平板上，置二氧化碳条件下37℃培养5——7d，将带分散菌落的琼脂小心切下，菌面向下贴在洁净的载玻片上，每块玻片可放4—8个菌落。将玻片倾斜45°于80℃&蒸馏水容器中，约1min使琼脂块溶解滑下，立即用80℃蒸馏水清洗，并用pH7.2的PBS浸洗玻片3次；弃去洗液，室温干燥后，加入用pH7.2的PBS稀释至适宜浓度的抗血清；室温作用30min，用pH7.2PBS洗 3 次，每次30min，弃去洗液后加入适宜稀释的羊抗兔荧光抗体，作用30min后，用PBS洗 3 次，z后放4℃冰箱浸洗过夜；弃去洗液，待干后在荧光显微镜下观察菌落的荧光反应。菌落呈亮黄绿色特异性荧光，形态清晰者为阳性反应，属同源菌落；无荧光反应者为阴性。试验时应设阳性对照和加正常兔血清的阴性对照。间接表面免疫荧光试验具有较高的特异性和敏感性，缺点必须是活菌培养。  4、支原体菌数测定法：支原体的计数常采用以下两种方法。 ①菌落形成单位（CFU）。将待检样品用支原体液体培养基以10倍递增稀释10（-1）——10（-12），取3个稀释度（10（-10）——10（-12））菌液0.1ml接种于直径5cm平板固体培养基上，每个稀释度接种平板 3 个，轻轻摇动平板，使菌液均匀铺平成圆形。置二氧化碳条件下37℃培育5—8天；在低倍或倒置显微镜下计数生长菌落，计算每毫升内生长的菌落数（CFU/ml）。  ②颜色改变单位（CCU）。根据支原体生化反应的特性在培养其中添加葡萄糖（0.5%）、精氨酸（0.2%）或尿素（0.1%），同时加0.002%酚红指示剂；对分解葡萄糖支原体，培养基pH值调至7.8；分解精氨酸培养基pH值调至7.0；分解尿素的pH值调至6.0。试验方法是将培养基分装于无菌小试管中，每管1.8ml，第1管加入被检菌液0.2ml，混匀后吸取 0.2ml的至第2管，如此顺序进行10倍递增稀释10（-1）——10（-12），置37℃培育14d。以培养基颜色不继续发生改变为终点判定结果。以发生颜色变化的z高稀释度为颜色改变单位，如当10（-1）——10（-11）发生颜色改变，10（-12）无变化，即试验结果为CCU=10（-11），亦即被测菌液稀释至10（-11）仍有支原体生长。      北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

   脑膜炎奈瑟菌微生物学检查法及防治原则！ 脑膜炎奈瑟菌（学名Neisseria meningitidis），又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌，简称为脑膜炎球菌，是一种革兰氏阴性菌，因其所导致的脑膜炎而闻名，亦会造成脑膜炎球菌血症(一种致命性的败血症)。它只感染人类，并无寄生的动物，是weiyi令细菌性感染脑膜炎成为流行病的病菌。约10%成人的鼻咽中有它的踪迹。 一、微生物学检查法 1、标本取患者脑脊液或刺破皮肤出血瘀斑取渗出物作涂片或培养。血液标本作培养。带菌者检测可取鼻咽拭子。 2、直接涂片镜检脑脊液离心沉淀后，取沉淀物涂片，革兰染色后镜检。或消毒患者皮肤出血瘀斑处皮肤，用无菌针头挑破瘀斑取渗出物制成涂片，革兰染色后镜检。如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰染色阴性双球菌时，即可作出初步诊断。 3、分离培养与鉴定血液与脑脊液标本在血清肉汤培养基中增菌后，接种到巧克力色血琼脂平板上，置于含5%～10%CO2的环境中孵育。挑取可疑菌落涂片镜检，并作生化反应（表13-1）及型特异性多价血清的凝集试验鉴定。 4、生化鉴定主要通过氧化酶、糖类发酵以及培养生长特点进行。①细菌形态呈肾形；②氧化酶试验阳性；③触酶试验阳性；④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。 5、血清凝集法根据荚膜多糖可将脑膜炎奈瑟氏菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群，其中A、B、C群最为多见，约占90%。关于血清凝集法用的诊断血清方面，推荐天津生物芯片公司生产的脑膜炎奈瑟氏菌全套诊断血清产品。这套产品除了包含脑膜炎奈瑟氏菌菌10个常见血清群的诊断血清。 6、核酸扩增法流行性脑膜炎的临床诊断通常以出现发热、呕吐、头痛等临床症状为依据。进一步的确诊则需在病人脑脊液或急性衄液中分离到脑膜炎双球菌。但分离培养方法的检出阳性率较低．并且至少需要2～3 d才能确诊感染．这对疾病的及时治疗极为不利。此外，受抗生素使用及其他非特异性因素的影响．分离培养法的灵敏度不高．极大地降低了诊断结果的可靠性。因此，寻找一种快速、灵敏并且适用于I临床诊断的检测方法已显得非常莺要。近年来，因为具有特异性好、灵敏度高、检测周期短等优点，在PCR的基础上建立的基因诊断技术已广泛应用于多种病原微生物的临床检测。四川大学华西公共卫生学院联合四川省疾病预防控制中心以PCR技术为基础，结合我国流脑的流行现状，建立了Nm ABC群的快速诊断方法。核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。 7、快速诊断法依据是脑膜炎患者脑脊液及血清中存在脑膜炎奈瑟菌可溶性抗原。因此可采用已知的抗体检测有无相应的抗原。⑴对流免疫电泳：此法较常规培养法敏感，特异性高。一般1小时内即可得到结果。⑵SPA协同凝集试验：将待检的患者脑脊液或血清与已知脑膜炎奈瑟菌IgG类抗体标记的产生SPA的金黄色葡萄球菌混合。若标本中存在脑膜炎奈瑟菌的可溶性抗原，则使抗体标记的金黄色葡萄球菌聚集在一起，形成肉眼可见的凝集现象。 二、防治原则预防脑膜炎奈瑟菌感染的关键是要尽快消除传染源、切断传播途径及提高人群免疫力。 我国1980年正式使用A群多糖菌苗，临床观察表明对学龄儿童和成人保护率可达90%。但此种疫苗对2岁以下婴幼儿免疫原性差，其一是因为脑膜炎荚膜多糖抗原属于T细胞非依赖抗原，免疫效果与接种者年龄有明显的依赖关系；其二，多糖菌苗诱导机体产生的IgG抗体主要为IgG2亚类，出现较迟，一般到8～12岁才能上升至成人水平。因此，婴幼儿接种多糖菌苗后往往以产生短暂的IgM抗体为主。国外采用A群和C群多糖与白喉毒素蛋白偶联的偶联菌苗接种8～10周龄的婴儿，证明这种偶联菌苗具有良好的免疫原性及安全性。 流脑的治疗shouxuan药物为青霉素G，剂量要大。对青霉素过敏者，可用氯霉素或红霉素。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           食用菌的主要成分与药用价值！ 中国微生物菌种查询网：食用菌的种类有很多，它是大自然赠与我们的宝，即丰富了人们餐桌上的食材，同时也给身体健康带来非常大的益处。那么，接下来我给大家说说食用菌的主要成分，还有食用菌的药用价值。 一、食用菌的主要成分 1、蛋白质新鲜食用菌，比如蘑菇内含蛋白质为1.5-3.6，是大白菜的3倍、萝卜的6倍、苹果的17倍。一公斤的干蘑菇，所含蛋白质含量等同是2斤瘦肉、3公斤的鸡蛋、12斤的牛奶。 2、氨基酸食用菌类所含有丰富的氨基酸，是蔬菜和水果的几倍，甚至是几十倍以上。食用菌类的赖氨酸含量丰富，含有组成蛋白质的18种氨基酸，还有人体所需的8种微量元素。和谷物相比，食用菌内的赖氨酸含量远远要高出许多。 3、脂肪食用菌类中的脂肪含量虽然很低，只是占据了干品重量的0.2-3.6，但是其实又大量的都是对人体健康有益的不饱和脂肪酸，这些物质成分对于保护心血管健康的帮助是非常大的。 4、维生素食用菌类含有丰富的维生素，比如有维生素B1、B2，这些维生素的含量都明显的高于肉类；就如草菇中含有的VC含量，就明显的比辣椒高3倍，柚子高2-5倍，香菇的17倍之多。 5、矿物质元素食用菌类还含有丰富的矿物质元素，如钙、磷、钾、钠、铁、锌、镁、猛等，还有一些其他的微量元素等。银耳中就含有较多的磷，食用有助于恢复和提高大脑功能。香菇和木耳的含铁量高，食用可以补血。 二、食用菌的药用价值 食用菌的味道不仅鲜美，而且营养丰富，被称为是人们的健康食品，也是促进身体健康的重要食物。比如香菇内有各种人体所需的氨基酸，可以有的降低身体血液中的胆固醇，有治疗高血压的作用；比如香菇、金针菇、蘑菇、猴头菇还含有可以增强体质、防癌抗癌的物质成分。 食用菌类中内含有生物活性物质，如高分子多糖、葡萄糖和RNA复合体，chuntianran有机锗、核酸降解物，CMP和三萜类化合物，这些等对维护人体健康有着非常重要的利用价值。 1、抗癌作用：食用菌的多糖体，可以刺激抗体的形成，提高并且调整机体内部的防御能力，可以降低某些物质诱发肿瘤的发生率，并且对于多种化辽物质有增强效果的作用。 2、抗菌、抗病毒：长期吃食用菌，那么里面的营养物质，可以增强身体的抵抗力，可以起到抗菌、抗病毒的作用。 3、降血压、降血脂、抗血栓、抗心律失常、强心：食用菌类的所有营养物质结合的总功效。 4、止咳平喘、祛痰止咳、利胆、保肝、解毒。 5、健脾益胃、帮助消化。 6、降血糖、通便利尿、增强免疫力。

      传代细胞株体外培养、鉴定与形态观察！ 1、标本采集　在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带， 挤出脐带血管中的血液，放入装有含青链霉素的PBS液瓶中，2h之内行脐静脉内皮细胞培养。双抗：青霉素100u/ml; 链霉素100μl/mlPBS：KCl 0.2 g/L, KH2PO4 0.24 g/L, NaCl 8.0g/L, Na2HPO4•7H2O 1.56g/L或Na2HPO4 1.44 g/L。 在800ml蒸馏水中加入上述质量物质，用盐酸调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1L，高压蒸汽灭菌20分钟，室温保存。 2、原代血管内皮细胞的获取与培养　在无菌条件下取新生儿脐带，剪去钳痕和凝血块阻塞部分，找到脐静脉。一端插上带有胶管的玻璃管结扎固定，经胶管接注射器，用生理盐水灌洗。待脐静脉内的残血除净后，用37℃ PBS，冲洗两次，将另一端用铁夹夹闭，向脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶8～10ml，夹闭胶管放入已灭菌的大平皿中。37℃孵育12min，在此期间经常翻动脐带使酶溶液在血管内流动以促使内皮细胞均匀与酶接触。取出脐带后轻轻挤压管壁，将含有内皮细胞的胰蛋白酶注入50ml锥形离心管中，加入小牛血清2ml终止酶反应。再以30ml PBS冲洗管腔，流出液一并入离心管，1000r/min离心10min，弃上清，加入含有10%小牛血清的DMEM [或IMDM（Dibco）？]培养液，充分混合制成细胞悬液。取0.1ml细胞悬液在血细胞计数板计数。zuihou调细胞数，以1×105/ml接种至24孔培养板中，每孔1ml。置于5%CO2，37℃静止培养24h更换培养液，以除去未贴壁的细胞。以后每隔2d换液1次，以维持细胞的营养和内环境的稳定。胰蛋白酶溶液（100ml）配制：1）将D-Hanks（橙红色）液高压消毒灭菌，用NaHCO3液调节pH至7.2左右。 2）称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许消毒的盐溶液调成糊状，然后再补足盐溶液，搅拌混匀，置室温4小时或冰箱内 ，并不时搅拌振荡。 3）次日先用滤纸粗虑，再过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱或－20℃保存备用，常用浓度为0.25％或0.125％；胰蛋白酶溶液（深红色）偏酸，使用前用NaHCO3调pH至7.2左右。D－Hanks液配制：KCl 0.4g/L, KH2PO4 0.06 g/L , NaCl 8.0g/L, NaHCO3 0.35 g/L,Na2HPO4•7H2O 0.06g/L, 酚红 0.02 g/L 3、传代内皮细胞的培养　原代内皮细胞融合后用培养液冲洗两次，然后用0.25%胰酶加入到内皮细胞中，每孔0.3ml。边消化边在倒置显微镜下观察。细胞皱缩、彼此分离或呈大片状分离即可终止消化。加入含有10%小牛血清的培养液，吸管吹打，制成细胞悬液，计数后按105个细胞/ml，继续培养。 4、血管内皮细胞的鉴定 　1）倒置显微镜观察细胞的形态特点。2）VWF相关抗原免疫荧光检查：在24孔塑料培养板孔内放置无菌的盖玻片0.5cm×0.6cm，每孔中种植1ml含有105个细胞的原代或传代内皮细胞悬液。待内皮细胞生长至近融合状态时，取出盖玻片，用PBS冲洗3次，投入冷丙酮中（-18～-20℃），细胞面向上，作用7min，用PBS冲洗3次，每次1min，而后进行间接免疫荧光检查，diyi抗体为鼠抗人VWF单克隆抗体，1∶20倍稀释，加入50μl于盖玻片上，放入湿盒内4℃ 。同时不加一抗做阴性对照。用PBS冲洗3次后，加入异硫氢酸标记的二抗50μl，放入37℃2h后，用PBS洗涤3次。然后立即在荧光显微镜下观察，摄片。 血管内皮细胞鉴定结果：　VWF相关抗原间接免疫荧光检查，原代及传代培养的内皮细胞浆中有黄绿色的荧光着色，胞核呈黑绿色，整个细胞轮廓清楚。作为对照的内皮细胞片子中，偶见绿色斑点散发荧光，未见细胞轮廓。 5、内皮细胞体外生长情况　 用胰蛋白酶消化的人脐静脉内皮细胞，接种在24孔塑料培养板各孔内4h后，大部分细胞贴壁。早期细胞呈小多角、球形、呈团状，少数细胞伸展，48～72h生长最快，逐渐生长成梭形，有些细胞排列呈鱼贯状相连，间有旋祸状排列。核清晰，呈圆形或椭圆形，核分裂相多见，1～2核仁，胞浆丰富，内含小颗粒。于3～4d后融合，7～10d胞体呈多角形，相互嵌合，为单层呈铺路石状排列。 北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

         生物安全柜的选择和使用！  一、生物安全柜 “安全柜是一种设备，它的作用就是有效地降低实验室获得性感染的机会，减少人与样品或样品与样品之间交叉污染的机会，用于保护操作人员，保护实验室环境，保护实验材料的生物安全。在临床实验室，操作感染性标本时或作病原体分离培养、制备菌种时会因为样品的振荡、摇动、倾注、搅拌、移液等操作或液体的洒落，产生肉眼看不见的直径 二、生物安全柜的种类及特点 在过去的几年中，生物安全柜的设计已经过几次改进。主要的改进包括两方面:一是在排风系统增加高效微粒空气滤器(high．efficiency particulate air HEPA)。HEPA滤器可以捕捉99．97％的直径在0．3 ban的粒子；对>0．3肿粒子的捕获达99．9％。这使所有已知的感染因子均可被有效地截留，保证排出的气体中不含微生物；其二，经HEPA滤过的气体覆盖工作台表面，使台面上操作器材免受污染。根据对生物遏制程度的不同，目前设计的生物安全柜有3种类型：工、Ⅱ级(A1、A2、B1、B2型)、Ⅲ级(图1。4)。购买时可根据各自工作性质确定需要防护的类型，选择相应的生物安全柜(表1)。 1、工级生物安全柜I级生物安全柜(图1)允许实验室内空气从前面开口处以0．38 m／s的z小速率进入生物安全柜，并经排风管排出安全柜。定向流动的空气可以将工作台上形成的气溶胶迅速带离，不与操作人员接触，直接经管道再经HEPA过滤后排出。有3种排放形式：①排入实验室，再通过实验室排风系统排到建筑物外面；②直接通过建筑物的排风系统排到建筑物外面；③直接排到建筑物外面。HEPA滤器可以装在生物安全柜的压力排风系统内或装在建筑物的排风系统内。有的生物安全柜有一体式排风扇，其他的借助建筑物排风系统的排风扇。I级生物安全柜的设计简单，应用广泛。可提供个人和环境的保护作用，也可用于接触放射性核素或挥发性化学物质的操作。由于进入的气体是实验室未净化的空气，因此对操作物品不具防污染保护作用。                                                                2、II级生物安全柜Ⅱ级生物安全柜又称为层流生物安全柜。与工级生物安全柜不同之处是进入的空气先经HEPA过滤，保证覆盖台面上的空气是无菌的，不仅提供个人防护，也保护样品不受污染。Ⅱ级生物安全柜共分Ⅱ级A和Ⅱ级B型2种，又可进一步再分为Ⅱ级A 1、Ⅱ级A 2、Ⅱ级B 1、Ⅱ级B2型。Ⅱ级生物安全是自遏型的。流动空气中的70％可以反复循环再利用。此种生物安全柜适合于细胞或组织培养、接触2～3级危险等级病原体的操作，如果穿正压防护服可在Ⅱ级生物安全柜上从事接触4级危险等级感染因子的操作。(1)Ⅱ级A型生物安全柜Ⅱ级A型生物安全柜(图2)有1个内置风机将实验室空气以0．38 m／s的速率吸入安全柜，通过HEPA滤器后向下，在距工作台表面6．18 cm处分开，一半通过前面的排风格栅，另一半通过后面的排风格栅。所有实验中产生的气溶胶或液滴均被向下气流带走。气流经排出通道到达安全柜顶部的2个HEPA滤器之间，此时，约70％的气体经供风HEPA过滤器重新返回柜内操作区域被再利用，其余30％的气体经排风过滤器后被排到实验室再反复利用，或通过建筑物的排风系统排到外界。                                      (2)外排风Ⅱ级A2型、B1型、B 2型生物安全柜外排风Ⅱ级A2型、B1型、B 2型生物安全柜都由Ⅱ级A1型生物安全柜变化而来。这些生物安全柜各有特点(见表2)，包括从开口吸人空气的速度、工作台面上再循环的空气量、柜内空气的排出量、安全柜的排风系统、压力装置，不同型别的生物安全柜可用于不同的实验目的(表1)。Ⅱ级生物安全柜A型与B型的差异在于：覆盖工作台表面的循环气体和排出气体的量不同，排出系统不同，详细材料可以从制造商的说明书中获得(图3)。 3、Ⅲ级生物安全柜Ⅲ级生物安全柜(图4)整个环境是完全密闭的，进入的气体经HEPA过滤，排出的气体经2层HEPA过滤。有1个专门的系统保持柜内压力在124．5Pa，呈负压状态，可提供z好的个人防护作用，用于4级危险程度病原体的操作。实验时可容2位操作人员将手伸人手套箱内进行操作。柜旁配备1个可以灭菌的装有HEPA过滤排风装置的传递箱。柜底下有化学消毒剂浸泡的盒子，安全柜可与双门的高压灭菌器连接，接受已灭菌的物品并将用过的材料移出安全柜作灭菌处理。可以将几个手套箱连在一起以增大工作面积。Ⅲ级生物安全柜适用于Ⅲ级或Ⅳ级生物安全水平的实验室。                                                                      4、生物安全柜的通风连接Ⅱ级A1型和A2型外排式生物安全柜有“套管式”或“伞形排气罩式”的连接。套管安装在安全柜的排风管上，将安全柜内排出的气体，引入建筑物的排气系统。在套管与安全柜排风管之间留有1个直径差为2．5 cm的开口，以便让实验室内的空气一起抽人建筑物的排风系统中。建筑物的排风能力必须能满足房间和柜中排风的要求。套管必须是可拆卸的或设计成可对生物安全柜进行操作测试类型。通常，建筑物气流的波动对套管式连接的生物安全柜的功能不会有太大的影响。Ⅱ级B1和B2型生物安全柜通过硬管，亦即没有任何开口地、牢固地连接到建筑物的排风系统，或者z好是连接到专门的排风系统。建筑物排风系统的排风量和静压必须与生产商所指定的要求正好一致。对硬管道连接的生物安全柜进行认证时，要比将空气再循环送回房间或采用套管连接的生物安全柜更费时。 5、生物安全柜的选择购买生物安全柜时应考虑所提供的生物防护作用是针对操作人员个人的还是针对实验样品的；若是针对操作人员的防护应明确是针对病原微生物的还是针对有毒化学物质或两者兼而有之。若是针对病原微生物的还应强调微生物的生物危害级别；若是针对有毒化学物质的可按照以下原则作选择：工级或Ⅱ级A型生物安全柜中不进行挥发性或毒性化学物质操作。Ⅱ级B1型生物安全柜只可用于少量的挥发性或毒性化学物质的操作，如要进行一定量的挥发性或毒性化学物质的操作必须使用Ⅱ级B2型生物安全柜。不同型别的生物安全柜排气特点不同，见表2。                            三、生物安全柜的正确使用 1、安放进入生物安全柜的空气速率约是0．45 m／s，按照这种速率，气流的完整性很容易受附近人员的走动、窗户的开关、门的开启和关闭、空调运行等因素的影响。为避免上述因素的干扰，生物安全柜应放在远离人员活动、物品流动以及可能会扰乱气流的地方。为了方便起见，应在安全柜的后面、左右两侧面各留30 cm的空间，以利于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排风过滤器的速度及排风过滤器的更换。 2、操作人员使用生物安全柜时，操作人员手臂的伸入或取出时应缓慢，垂直于前端开口处，从而保证安全柜前端气流的完整性。应在手或胳膊伸入柜中1 min后开始操作，以便安全柜对手或胳膊表面的空气进行净化处理。实验所需器材应一次性放人生物安全柜，尽量减少或限制操作人员手在安全柜中的进出次数。 3、实验材料的放置Ⅱ级生物安全柜前端开口处严禁被纸张、设备或其他物品覆盖。物品放人生物安全柜后，表面要用70％的乙醇擦拭。柜内应备有1块浸过消毒剂的毛巾，以便蘸吸溅出的液体。实验材料尽量放在柜的后面，笨重的物品放在一边，产生气溶胶的物品也应放在柜的后面。实验器材应按顺序从清洁的排放到污染的。污染的实验材料不。应随时拿出柜外，操作者的手也不应频繁地进出安全柜。 4、操作和维持大多数的生物安全柜设计成一天24 h开机，调查发现连续开机有利于控制实验室灰尘和粒子。Ⅱ级A型不用时可以关闭。Ⅱ级B型在使用时要保持实验室空气平衡，因此一天中若有数个操作过程，其间不应中断运行。实验开始前5 rain就应启动生物安全柜，净化局部空气。使用中若出现任何故障均应及时向上级人员报告并请专职技术人员维修。 5、紫外线生物安全柜中不需要紫外灯。假女盯要用，每周应对灯管作清洁，除去尘埃，保证杀菌效果。应定期监测紫外灯的辐射强度。要防止紫外线对眼睛或皮肤的灼伤。 6、明火生物安全柜内近似无菌的环境中应避免使用明火，一方面它可干扰气流运行，其次，若操作中使用挥发性或易燃物质时会造成危险。操作时需用接种环的，尽可能地用一次性的塑料接种环，使用金属接种环的应该用微型燃烧器或电炉灭菌而不应该使用明火。 7、溢出在实验室工作的每一个人都应熟知含微生物的样品溢出时的处理程序。一旦生物安全柜中发生有生物危害的物品溢出时，应在安全柜处于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶生成。实验完毕后，柜中所有接触病原体的材料均应作消毒灭菌处理。 8、清洁和消毒工作完毕后，柜中所有的物品都应清除表面污染并移出柜外，柜内工作台表面和柜的内壁应用含氯石灰(漂白粉)或70％乙醇消毒。若用腐蚀性的化学剂消毒后还应用灭菌水再擦洗。关机前应运行5 min，以便对残留气体进行净化。 9、清除污染滤膜更换之前生物安全柜要由专业人员用甲醛熏蒸消毒。 10、个人防护设施使用生物安全柜的操作人员应穿工作服。在生物安全1～2级实验室中工作的人员可穿普通的工作服；在3～4级实验室工作的人穿反背式实验隔离衣具有更好的保护效果。手套应能包住腕关节上的防护服。有些操作可能要戴口罩和眼罩。 11、警报生物安全柜有发出1种或2种警报的功能。一当窗框移动时，警报会响，表明操作者将窗框移到一个不合适的地方去了，纠正以后警报解除。气流警报表明柜中正常气流运行模式中断，对操作者的保护作用和对样品防污染的作用减至z低，存在危险。警报响时，应立即停止工作并迅速报告上级人员。作为制造商，在产品的使用说明书的操作部分应详细论述这一内容，对有关人员使用生物安全柜的培训材料中也应有此内容。 12、生物安全柜的认证每台生物安全柜功能的完整性和操作的有效性能都应检定。安装时应按国家或国际标准检定，以后应根据制造商说明书定期由专职技术人员检定。对生物安全柜使用有效性的评价应包括以下内容：功能完整性实验，HEPA滤器密封性试验，对向下气流速度、正面气流速度、负压／换气次数、气流的烟幕模式，以及警报和互锁系统进行测试。还可选择漏电、光照度、紫外光辐射强度，噪音级别，振动性等试验。检测人员要经过专门的培训，采用专门的技术和仪器设备。建议由有资质的专业人员来进行测试。 对医学实验室的管理人员而言，正确选择生物安全柜的类型，合理安放，正确使用，每年认证是一·个复杂但又必要的过程。这些活动应在有经验并训练有素的专家的指导下进行。这些专家应熟悉相关文献，受过与生物安全柜有关方面的培训。作为操作人员则应在使用前接受操作、保养、维护的正规培训。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

        脆弱拟杆菌的致病性与研究进展！ 脆弱拟杆菌是定殖于哺乳动物肠道中的共生菌，同时也是临床感染bingli中常见的条件致病菌。本文从致病及益生特性两大方面综述脆弱拟杆菌的研究现状，着重讨论了脆弱拟杆菌作为潜在益生菌在预防和治疗糖尿病及免疫性疾病中所起的重要作用，从而为筛选及应用益生脆弱拟杆菌菌株提供一定的参考。 科学的进步使人们深入认识肠道菌群成为可能，对于这一天然的健康“保护伞”，科学家们逐渐对其实现了从无到有、从浅到深的探索研究。目前已认识到人体肠道菌群主要由硬壁菌门、拟杆菌门、变形菌门以及放线菌门构成。肠道菌群的组成和结构与宿主健康状况息息相关，在正常状况下，大多数的肠道微生物与宿主是互利共生的，可以说是人类的“微生物器官”，起到保护宿主上皮细胞免受伤害、调节脂肪储存、提供人体所需营养物质等作用。然而当人体肠道菌群的组成受到外界环境、饮食习惯以及疾病等的影响而失衡时，会对宿主的健康产生威胁。从婴儿到成人，肠道菌群的构成经历了从兼性好氧菌到厌氧菌的转变，最终形成以厌氧菌为优势菌的成人肠道菌群结构。 在人和动物肠道内定殖的厌氧菌群中，拟杆菌是优势菌，约占到肠道菌群总数的1/4，对于维持宿主的健康状态不可或缺。脆弱拟杆菌作为拟杆菌属的模式种，常见于哺乳动物的下消化道，目前科学家们已对其有了较为全面的认识，z先在致病部位分离到脆弱拟杆菌，认为其是有害菌，但随着研究的深入，科学家们逐渐认识到在长期的进化过程中，定殖在肠道的脆弱拟杆菌与宿主建立了互利共生的友好关系，是维持宿主健康必不可少的组分，尤其对于肥胖、糖尿病以及免疫性缺陷疾病有着良好的治疗前景。 一、脆弱拟杆菌的分类学地位和表观特性的描述 脆弱拟杆菌隶属于拟杆菌门，拟杆菌科，拟杆菌属。它的最初描述是从腹部溃疡导致阑尾炎的病灶部位所分离到的菌株，是革兰氏阴性非生孢的杆菌，不运动或以周生鞭毛运动，代谢类型为化能异养菌，能利用糖或蛋白胨，DNA的G+C摩尔含量为40%?55%。  二、脆弱拟杆菌的致病特性 1、脆弱拟杆菌的致病性脆弱拟杆菌是哺乳动物肠道正常定殖的细菌，然而当机体某一部位受损或预先有病理改变时，脆弱拟杆菌易位成为机会致病菌。在人的结肠中，脆弱拟杆菌只占正常菌群的1%左右，而引起的感染占全部厌氧菌感染的60%?90%，常见于软组织感染、腹部脓肿、菌血症等bingli中。2000年，Brook等对22例腹部脓肿患者病灶的微生物分布情况进行了研究，结果显示：需氧菌以及厌氧菌引起的混合感染占77%，厌氧菌引起的感染占18%，需氧菌占5%，其中脆弱拟杆菌是引起感染z常见的厌氧菌。2007年Lassmann等研究了梅约诊所1993?2004年由厌氧菌引发的菌血症bingli的发展态势，得出该病的患病率随着时间递增，且脆弱拟杆菌是从致病部位分离到的z常见的微生物。此外，研究表明脆弱拟杆菌与结直肠癌的发生以及宿主的腹泻症状有关。 2、脆弱拟杆菌的耐药性脆弱拟杆菌引起的临床感染可采用高敏感的抗生素进行治疗。然而随着耐药菌株的出现，且耐药情况复杂多变，从而给治疗带来了挑战。目前抗生素治疗常建立在已有的经验上，研究者们也一直致力于更新脆弱拟杆菌的耐药现状。2004年，Snydman等研究了美国10所医院1997?2004年脆弱拟杆菌的耐药性情况，结果表明脆弱拟杆菌对克林霉素、莫西沙星的抑制作用显著增强，对碳青霉烯类抗生素敏感。2011年，Trevi?o等报道临床分离的脆弱拟杆菌对碳青霉烯类抗生素(尼他培南、亚胺培南)的耐药性增强。2013年，首次在阿根廷发现脆弱拟杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药。2014年，Wang等对来自中国台湾两所医院的11 105株临床常见感染菌株的耐药性进行了研究分析，同样发现脆弱拟杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药。 虽然上述研究表明一些地方分离得到的脆弱拟杆菌对碳青霉烯类等常用抗生素表现出耐药性，但是具有多重耐药的脆弱拟杆菌菌株却特别罕见。Aldridge等对临床分离得到的556株厌氧菌进行抗生素敏感性试验分析，结果表明脆弱拟杆菌均对哌拉西林-三唑巴坦和甲硝唑敏感。在美国，研究者分离得到的脆弱拟杆菌菌株，几乎总是对甲硝唑、碳青霉烯类、β-内酰胺类敏感。因此抗生素治疗仍是临床感染的shouxuan，尤其是敏感且无不良反应的药物，Odou等报道retapamulin对脆弱拟杆菌有较好的抑制作用，其中retapamulin是由担子菌产生的天然抗生素——截短侧耳素的结构类似物。替硝唑是新一代硝基咪唑的衍生物，对脆弱拟杆菌有良好的抑菌效果，是甲硝唑的升级替代产品，对人体副作用小，是治疗临床感染的shouxuan药物之一。 值得注意的是，已有的脆弱拟杆菌耐药资料只是一个相对参考值，关键是要对临床常见感染菌株的药敏模式定期检测并制定一个公认的药敏试验标准。而随着微生物研究方法的日益深入，不基于传统培养的新型分子生物学方法正在为临床上脆弱拟杆菌的检测提供更为快速准确的信息。Tong等分别采用传统培养方法以及quantitative real-time polymerase chain reaction (QRT-PCR)技术对临床感染样本中的拟杆菌进行分析鉴定，结果表明通过传统培养方法在8%的样本中发现了目标微生物，而通过QRT-PCR方法在33%的样本中发现了目标微生物，这表明新型分子生物学方法检测临床感染标本不仅节省时间，同时可获得准确的临床资料。2014年，Veeranagouda等利用Illumina测序技术鉴定了致病脆弱拟杆菌株B. fragilis 638R在脑心浸出液培养基上存活的关键基因，这一研究的发现使得研究者从基因水平干预致病脆弱拟杆菌株成为可能。 三、脆弱拟杆菌的益生特性联合国粮食与农业组织和世界卫生组织(FAO/WHO)共同定义益生菌是通过摄入一定的量，对食用者的健康发挥有效作用的活性微生物。益生菌对宿主的积极作用已十分明确，如改善肠道菌群结构、抑制病原菌的定殖、提高机体免疫力。然而目前国内益生菌种类较少，z常见的益生菌是乳杆菌和双歧杆菌，因此筛选潜在益生菌具有重要意义。 1、脆弱拟杆菌的益生作用脆弱拟杆菌是宿主体内正常定殖的共生菌，当脆弱拟杆菌数量下降时，机体表现异常。炎症性肠炎主要包括溃疡性结肠炎(ulceraive colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’s disease，CD)两种类型，它们的发生与肠道菌群失衡有关。沙素梅对确诊的炎症性肠炎患者肠道优势菌群定量检测发现：与健康对照者相比，脆弱拟杆菌在活动期UC和CD患者中均偏低。由此可见，脆弱拟杆菌在维持人体健康状况方面至关重要。 ⑴拟杆菌与糖代谢的关系：肥胖以及由其引起的慢性疾病一直困扰着人类。研究表明：肥胖者肠道菌群的组成与非肥胖者不同。2005年Ley等对遗传性肥胖小鼠和瘦型小鼠的盲肠微生物群的16s rRNA基因进行测序分析，结果表明两者之间的显著区别是肥胖型小鼠肠道内拟杆菌相较于非肥胖型小鼠减少了50%。2006年，Ley等利用16s rRNA基因测序技术分析了12名肥胖志愿者在进食为期一年低热量饮食的过程中肠道菌群组成的变化，得出随着样本体重的减少肠道中拟杆菌的数目显著增加。由此可见，与肥胖者相比，非肥胖者肠道内拟杆菌数量更多，这表明拟杆菌在维持宿主正常体重方面起着重要的作用，而具体的调控机制很可能是由于拟杆菌与机体肠道内糖代谢密切相关。张勇在研究益生菌改善大鼠糖耐量受损机制时指出，脆弱拟杆菌可间接促进糖代谢，主要的机理可能是摄入益生菌Lactobacillus casei Zhang保持了肠道中维生素K2主要产生菌Bacteroides fragilis的较高数量，维生素K2可促进骨钙素的分泌，从而改善口服糖耐量水平。同时脆弱拟杆菌能够利用多糖促进自身增殖，曾艳华等选用大蒜多糖研究其对拟杆菌生长的影响，指出消化大蒜多糖的主要是位于结肠的脆弱拟杆菌类群。2010年，De Filippo等对比研究了以高纤维膳食为主的非洲儿童和以高蛋白、高脂肪饮食为主的欧洲儿童肠道菌群的组成差异，发现前者肠道内拟杆菌群的数量显著高于后者，故非洲儿童虽然以高纤维膳食为主，但由于拟杆菌利用多糖的能力突出，仍能通过消化机体不能利用的多糖获取能量。鉴于拟杆菌代谢多糖的能力突出，故可能成为解决肥胖、糖尿病的新突破口。 ⑵拟杆菌分泌的多糖A与宿主健康的关系：脆弱拟杆菌的表面具有多种荚膜多糖，其中表面荚膜多糖A (PSA)对宿主具有益生作用。研究者以无菌老鼠为实验模型，发现无菌老鼠的CD4 T细胞发育欠佳，当移殖缺少PSA的脆弱拟杆菌到无菌老鼠体内时，CD4 T细胞的发育水平几乎与无菌老鼠一样差，而移殖野生型脆弱拟杆菌到无菌老鼠体内时，CD4 T细胞的水平恢复到正常值，这就表明带有完整PSA的脆弱拟杆菌校正了无菌老鼠的免疫缺陷，具体表现在PSA激活了对免疫反应至关重要的CD4 T细胞，并且调节了Th1 (T helper 1)和Th2 (T helper 2)细胞之间的平衡关系，这对于免疫系统发育以及稳态的维持必不可少。此外，PSA可以抑制由于肠道菌群平衡破坏而引起的肠炎的发生，2008年Mazmanian等以由于肝螺杆菌感染而患结肠炎的动物为实验模型，证明肠道中的共生 菌——脆弱拟杆菌可阻止这一肠炎的发生，这是因为脆弱拟杆菌可作为免疫激活剂激活调节性T-细胞，后者通过分泌IL-10 (Interleukin-10)达到有效抑制促炎因子IL-17 (Interleukin-17)的目的，从而抑制肠炎的发生。2010年Ochoa-Repáraz等研究表明宿主体内的PSA通过间接诱导IL-10的分泌达到预防中枢神经脱髓鞘类疾病的目的，如脑脊髓炎(encephalomyelitis)。2011年Round等的研究成果显示：定殖在粘膜表面的脆弱拟杆菌，通过释放PSA激活Toll-like receptors (TLR)途径，这有助于免疫系统正确识别致病菌与非致病菌，保护宿主的健康。2012年，Sommese等指出脆弱拟杆菌的分子分泌物PSA可保护机体免受汉式巴尔通体的损害，而汉式巴尔通体能够通过内化内皮祖细胞抑制内皮祖细胞对致病菌的防御作用。 2、益生脆弱拟杆菌的安全性评价现状脆弱拟杆菌在糖代谢及免疫调节方面起着重要的作用，但同时不可忽视的是脆弱拟杆菌是条件致病菌，z常见的毒力因子是脆弱拟杆菌肠毒素(BFT)，共有bft-1、bft-2和bft-3三种基因型，鉴于此我们在筛选益生脆弱拟杆菌时，必须对其进行安全性评价。益生菌安全性评价试验包括与毒力相关的表型以及毒力因子的检测、是否携带抗生素抗性基因以及抗生素敏感性检测等体外试验、动物试验以及人体试验。到目前为止，关于益生脆弱拟杆菌株安全性评价的试验鲜有报道，已有的2篇报道是关于分离自人体肠道中隶属于拟杆菌属的Bacteroides xylanisolvens初步安全性评价以及人体试验的研究结果。国外曾开展过关于脆弱拟杆菌安全性评价的类似试验，2008年Mazmanian等利用来自国家标准菌库的B. fragilis NCTC 9343对患结肠炎动物模型健康状况的改善进行验证，效果显著。在国内张季阶以及刘洋洋等分别对分离自健康婴儿粪便中脆弱拟杆菌进行了系统安全性评价，并指出筛选出的菌株仍需要进一步证实对于人及动物有无长期毒性影响。 3、益生脆弱拟杆菌的研究与应用1983年9月，中国最早的细菌专家之一——张季阶教授从发育非常良好的儿童粪便中分离出量大而又较纯的细菌，并结合生理生化鉴定以及动物毒力试验的研究结果认定该细菌是一株无毒的脆弱拟杆菌，是来源于人体的益生菌，具有增强免疫、预防肠道和呼吸道疾病、促进儿童身体生长发育等功效。张季阶等进而将这株菌命名为BF-839，并运用于生产上，由其发酵制得的图腾益生液，填补了拟杆菌作为益生菌的空白。2012年朱延旭等将筛选出的BF-839应用于肉仔鸡的饲料中，经对照试验得出脆弱拟杆菌BF-839显著改善了肉仔鸡的免疫功能。2013年Hsiao等报道脆弱拟杆菌NCTC 9343不仅能够通过调节一些特异性物质的代谢水平改变肠道渗透性，恢复正常肠道菌群结构，而且还改善了患抑郁症小鼠的异常行为，这一发现无疑为以肠道菌群为靶点的治疗手段提供了理论依据。 四、展望正常情况下，脆弱拟杆菌是定殖于哺乳动物肠道内的共生菌，对于维持宿主正常机能必不可少，且其分泌的PSA的益生作用已成为共识，因此脆弱拟杆菌作为潜在益生菌株具有良好的开发前景。大量的相关研究表明安全且投入生产的益生菌菌株种类有限，筛选新的益生菌株将有助于扩大益生菌生产市场，同时，脆弱拟杆菌与炎症性肠炎以及免疫性疾病密切相关，将其作为抗生素的替代品并制成益生菌片或动物微生态制剂，将可能成为保护人及动物免遭上述疾病的“撒手锏”。正如英国Fuller博士的观点，肠道细菌与宿主存在特异性的相互选择关系，理想益生菌菌种的z佳来源是同源动物的肠道，因此，我们可以做出一个大胆设想，脆弱拟杆菌益生菌株的筛选是否有可能推进与国人肠道结构特点相适应的益生菌产品的开发进程。不可否认，将脆弱拟杆菌作为益生菌进行广泛应用仍需解决一些现存的问题，目前，我实验室已对来自7个民族的314份健康人体粪便样本中拟杆菌属进行了定量分析，结果显示壮族、汉族、藏族、哈萨克族、蒙古族、白族中均含有脆弱拟杆菌，且以壮族样本中脆弱拟杆菌的含量z高，在此定量结果的基础上，作者利用传统分离方法以及现代分子技术相结合的方法筛选益生脆弱拟杆菌株，以此为契机，对益生脆弱拟杆菌菌株进行系统安全性评价分析以及进一步地全基因组测序分析和功能分析，以期将筛选出的脆弱拟杆菌菌株尽快投入生产，开创肠道疾病和代谢疾病患者治疗的新篇章。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

         动物实验中遇到紧急情况的处理方案！ 实验动物科学发展的最终目的，就是要通过对动物本身生命现象的研究，进而推用到人类，探索人类的生命奥秘，控制人类的疾病和衰老，延长人类的寿命。    动物实验中常见病种： 实验动物人畜共患烈性传染病病种：大鼠-仙台病毒；大鼠-仙台病毒、肝炎病毒、鼠病毒、汉坦病毒；豚鼠-仙台病毒；兔-出血症病毒；犬：狂犬病毒 实验过程中被动物咬伤后应怎样处理？ 凡被犬（猫）鼠等动物咬、抓、舔伤及因宰杀、剥皮而污染的伤口，除去伤口的病毒要分秒必争，应立即挤压伤口（或拔火罐，但绝不能用嘴去吸伤口处的污血），排去带毒液的污血。 啮齿类 1、用20%的肥皂水或0.1%的新洁尔灭彻底清洗伤口（两者不可同时使用），对较深的伤口可用纯针头注射器或插入导管加压冲洗多次。 2、挤出创口处血液 3、0.3%双氧水棉球消毒伤口，对较深或面积较大的伤口应适当清创。 4、外贴创可贴 5、重时通报动物动物饲育管理室任 犬 1、 挤出创口处血液 2、0.3%双氧水棉球消毒伤口，对较深或面积较大的伤口应适当清创。 3、反复冲洗 4、外贴创可贴 5、详细了解该批犬的来源和疫苗接种情况 6、对咬人犬进行至少二周的密切观察，如有疑似狂犬病症状时，应立即捕杀，局部消毒，动物尸体焚烧处理。 注：从事动物饲养与使用动物做实验，捉拿动物难免会有被咬伤事件的发生，不论伤度轻重多少，必须做到： （1）向上级报告。 （2）接受适当治疗与防治，严重者速送往医院。 （3）必备急救卫生箱，箱内装有紧急救护所需要的基本物品，如棉花、纱布、胶布、消毒 水和清洁剂，75％酒精、碘酒、双氧水和抗生素等。 （4）向有关医师与兽医师报告，并采取相应的治疗措施。 中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！ 为更好服务社会，创造双方利益较大化，中国微生物菌种查询网提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。欢迎您的咨询！

      微生物实验室标准化操作规程！ 一、目的 本规程旨在为微生物实验室操作提供一个标准化规程； 二、适用范围 微生物实验室； 三、责任人 实验室、微生物检测员； 四、安全注意事项 严格遵循无菌操作，防止微生物污染;操作人员进入微生物实验室应先关掉紫外灯。 五、微生物实验室标准化操作规程 1、微生物实验室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%，超净台洁净度应达到100级。 2、微生物实验室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 3、严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 4、微生物实验室应备有工作浓度的消毒液(75％的酒精)。 5、微生物实验室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证微生物实验室的洁净度符合要求。 6、需要带入微生物实验室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 7、工作人员进入微生物实验室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入微生物实验室进行操作。 8、微生物实验室使用前必须打开微生物实验室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理微生物实验室，再用紫外灯辐照灭菌30分钟。 9、供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。 10、每次操作过程中，均应做空白对照，以检查无菌操作的可靠性。 11、吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 12、接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 13、带有菌液的吸管，试管，培养皿于高压蒸汽灭菌锅121℃保持20min后取出清洗。 14、如有菌液洒在桌上或地上，应立即用75%酒精溶液覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 15、凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 16、微生物实验室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3-5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对微生物实验室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

      细胞增殖检测的技术与应用！ 一、背景 细胞增殖检测是判定细胞活力的重要指标，有多种显示方法，除实验的细胞计数法之外，还可以进行细胞分裂指数的测定。细胞分裂是细胞增殖的方式，能比较确切地反映细胞增殖度。细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行分裂的一系列过程。细胞增殖检测技术广泛应用于分子生物学、遗传学、肿瘤生物学、免疫学、药理和药代动力学等研究领域。                              二、检测细胞增殖的技术主要包括： 1、渗透实验。这种方法用来染细胞膜破损的细胞，活细胞不会被台盼蓝染成蓝色。然后通过细胞计数器手动计数细胞数目。此方法快速、便宜、仅仅需要一少部分细胞。细胞传代、冻存、或其它实验可以用这种方法。或者也可以通过流式细胞仪来计数细胞数目。检测前可以染PI排除死细胞。 2、直接增殖测定。这种方法利用DNA整合来测定细胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸类似物来检测。比如：Brdu免疫化学染色法需要将细胞或组织标本经过变性处理，这就影响了标本的结构,使标本不适合下游实验，也使得染色结果及程度过分地依赖于不同实验所应用的不同条件。 3、细胞代谢法。这种方法是将四唑盐加入细胞培养基内，这些四唑盐可以被活细胞转化为有颜色的甲瓒，用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量。此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测,生物活性因子的活性检测，大规模的抗肿瘤药物筛选，细胞毒性试验等。 三、应用 用于细胞膜荧光染料用于定量检测体内外细胞增殖和肝脂肪酶在肿瘤细胞耐药中的作用研究： 在同一群肿瘤细胞中定量测定了各亚群细胞分裂次数，同时保持细胞完整性，可继续进行细胞功能的测定，也可提取细胞蛋白和RNA进行测定。 有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上调节大肠癌的肝转移，其阳性预示着大肠癌存在肝转移。另一项研究显示非小细胞肺癌中LIPC表达水平可能具有一个独立的预后价值。 因此,本实验利用这种新的DiO染色方法研究了LIPC在肿瘤细胞耐药中的机制。主要方法及结果1DiO的研究1.1DiO和DiD同属亲脂性羰花青染料。它们是由两个对称的环，每个环连接一个长的碳氢链，环中间由奇数个次甲基连接构成。双环结构及连接双环的次甲基数目的不同决定了荧光分子的特性。 碳氢链的长短决定了它们与膜脂质双层结构的亲疏性。DiO的z大吸收和释放波长分别是484nm和501nnm,DiD的z大吸收和释放波长分别是644nm和665nm。1.2MTT测定DiO染色后细胞的增值情况。 结果显示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2细胞在1、2、3天不影响其增殖P>0.05。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

      质控菌株：淋病奈瑟菌 中科院XXX研究所-梁XX：您好，我想咨询一下淋病奈瑟菌平台编号：bio-67645这个售价是多少？李果：淋病奈瑟菌 bio-67645 ATCC 49226 Neisseria gonorrhoeae 5040元ATCC原装进口货期10周左右中科院XXX研究所-梁XX：国内有吗李果：国内有其他编号的中科院XXX研究所-梁XX：那您帮我查看一下，国内其他编号的有价格低一些的吗李果：淋病奈瑟菌 bio-67921=ATCC19424 Neisseria gonorrhoeae 1850元这个是国内的 款到3个工作日发出中科院XXX研究所-梁XX：好的，那我订购的时候与您联系？还是直接在网站上下单呢李果：直接联系我 或者在我们官网下单都可以李果：我是李果，18610886853 （同微信）QQ：2852776742中科院XXX研究所-梁XX：好的，需要订购的时候我联系您李果：好的 您这边什么单位呢 我备注一下中科院XXX研究所-梁XX：中科院XXX研究所李果：好的中科院XXX研究所-梁XX：李老师，上午刚跟您联系过，淋病奈瑟菌那个菌株我订一个李果：好的 地址联系方式发我中科院XXX研究所-梁XX：吉林省长春市XXXX研究所 梁XX 17XX33XX1X6fapiao信息 名称：中国XXXX研究所纳税人识别号：121XXX00XX5XXX0XX7地址、电话：长春市XXX号  04XX-85XX2XX2开户行及账号：工行长春市XXX支行4200221409XXX10XXX8李果：对方已成功接收了您发送的离线文件“中科院XXX研究所-梁.doc”(28.50KB)。不好意思现在才发您 您看看没有修改的 我在给您盖章中科院XXX研究所-梁XX：汇款的单位怎么和您这个公司名字不一样呢？李果：我们子公司李果：图片中科院XXX研究所-梁XX：哦哦，我问一下，是我先付钱拿fapiao报账还是直接公对公转账李果：需要先付款的 中科院XXX研究所-梁XX：我们单位付款比较慢李果：也可以先邮寄fapiao 但是要报账后才准备菌种 中科院XXX研究所-梁XX：那我先付款吧李果：可以的 那您怎么付款方便 对公 微信 还是zhifubao 个人转账中科院XXX研究所-梁XX：zhifubao，您给我的方式我稍后打过去李果：图片中科院XXX研究所-梁XX：1880我已经转过去了，您看一下李果：好的

         用来生产酱油酵母的鲁氏酵母 成都XX股份有限公司-张XX：图片  这个有吗李果：Zygosaccharomyces rouxii需要的是这个拉丁名吗成都XX股份有限公司-张XX：不清楚对应的拉丁文是什么成都XX股份有限公司-张XX：或者你有产品说明吗  我和使用人确认下李果：菌种已拉丁名为准 您问问用户李果：鲁氏酵母 bio-65082  Saccharomyces rouxii  1600元成都XX股份有限公司-张XX：有没产品说明书呢李果：对方已成功接收了您发送的离线文件“bio-65082.doc”(23.50KB)。成都XX股份有限公司-张XX：怎么下单做合同呢李果：地址联系方式发我 我给您合同成都XX股份有限公司-张XX：公司全称：成都XXX股份有限公司地址：四川省XXX号 电话：028-8XXX8017开户行：兴业银XXXX侯支行 帐号：4310XXX01XXX9X71信用代码: 915XX100XXX10XXXM收货地址：四川XXX高新区九兴XX号收（货）人：张XX 137XX89XX40李果：好的  稍等李果：对方已成功接收了您发送的离线文件“成都XX股份有限公司.jpg”(642.86KB)。李果：您看看成都XX股份有限公司-张XX：哦  运费算在单价里面吧李果：可以成都XX股份有限公司-张XX：需要提供菌种鉴定  这个可以提供吗李果：只有说明书成都XX股份有限公司-张XX：说明书就是你发给我的那个吗李果：是的 菌种出库前做过复核 确定是这个菌种才给您发出成都XX股份有限公司-张XX：好的成都XX股份有限公司-张XX：您看看是这个吗 图片 因我们的样品含糖量已经达到40%李果：嗯 只确定是这个菌种  后续没有做过相关实验成都XX股份有限公司-张XX：货款已付李果：收到成都XX股份有限公司-张XX：请安排货票李果：好的

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