血清学试验方法及注意事项！

      血清学试验方法及注意事项！

血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称，故又称抗原抗体反应。它可以用已知抗体(细菌抗血清)检测未知抗原(待检细菌) ，也可用已知抗原(已知病原菌)检测患者血清中的相应细菌抗体及其效价，是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。

一、玻片法

1、原理：用已知的诊断血清或血浆在玻片上与待检菌及生理盐水混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为相应的细菌。

2、方法：取一洁净载玻片，用接种环取待检菌培养物，分别与诊断血清及生理盐水混匀，上下摇动玻片数次， 1~3 min 后观察结果。

3、结果判断：阳性——待检菌明显凝集，对照菌均匀混浊。阴性——待检菌及对照菌均匀混浊。自凝——测定菌、对照菌均凝集(图3 - 46) 。

4、注意事项：某些细菌菌体表面常有一层表面抗原，如伤寒沙门菌的Vi 抗原及志贺菌属的K 抗原等。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于1000C 中煮沸1 h ，以破坏其表面抗原，然后再作试验。

二、试管法

1、原理：此法可排除玻片法凝集试验的非特异性凝集，是一种半定量凝集试验。

2、方法：取小试管1 0 支，第1 管加入生理盐水0.45 时，再加入0. 05 ml 诊断血清混匀，其余各管均加生理盐水0 . 25 ml ，然后从第1 管中吸出0.25 ml 加入第2 管中，棍匀后再吸出0.25 ml 加入第3 管，依次类推直至第9 管，从第9 管吸出0 . 25 ml 弃去，第10 管不加抗血清为对照管。每管加待检菌菌液(10 X 109 CFU/ ml)0 . 25ml 时，充分振荡混匀后，置37℃水浴4 h ， 再置4℃中过夜。

3、结果判断：以血清z高稀释度达到(++)凝集者(管内液体澄清，部分凝集块沉于管底)为该菌的凝集效价。若此效价达所用原诊断血清效价一半以上者为阳性。

4、注意事项：脑膜炎奈瑟菌的菌液必须经56℃ 30 min 灭活，以破坏自溶酶。若试验出现低凝集结果时，应将该菌传代数次后，再做实验。

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