大鼠血管内皮细胞的应用！一、背景大鼠血管内皮细胞分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程，同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠内柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。血管内皮细胞除了吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织等，还参与集体免疫活动，包括：①血管收缩及血管舒张，从而控制血压；②凝血（血栓形成及纤维蛋白溶解）；③动脉硬化；④血管生成；⑤炎症及肿胀（浮肿）；⑥内皮细胞亦控制一些物质，如白血球进出血管。大鼠血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶；细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。二、应用用于α-亚麻酸改善高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞损伤的作用和机制研究：高血压是临床上最常见的心血管疾病之一。具有发病率高和致死率高等特点。最近的研究发现，高血压人群大多数都伴有体内代谢的异常，包括高血糖，高胰岛素血，高血脂，肥胖，糖耐量减低等症状。代谢紊乱加重高血压血管病变，促进血管内皮损伤。人们认为胰岛素抵抗是高血压代谢失调的基础因素，由此将胰岛素抵抗和高血压联系在了一起。近些年来，大量研究证据表明胰岛素抵抗和高血压互为因果相互影响加重了血管内皮损伤，导致血管结构功能的异常，引起组织和靶器官的损害。因此对高血压降压治疗的同时，改善胰岛素抵抗可以显著保护血管内皮细胞减轻内皮损伤，为高血压病的预防和治疗提供了新的思路。α-亚麻酸是一种植物来源的多不饱和脂肪酸，与来其他源于海产品提取物的EPA和DHA一样，均属于ω-3多不饱和脂肪酸的一种。但是与EPA和DHA相比，它又具有价格低廉，可获得性广泛的优势。大量的研究发现膳食中添加α-亚麻酸可以预防和治疗多种心血管疾病。α-亚麻酸具有降低血脂，降低血压，减轻炎症，抗血小板聚集，抑制血栓形成等多种生理作用。内皮细胞对胰岛素的敏感性增强促进了胰岛素诱导的血管舒张功能。HE染色显示，α-亚麻酸的膳食干预可以减轻果糖喂养组造成的平滑肌增生，中膜增厚等动脉血管组织学病理改变。Westernblot检测示：与正常对照组相比，IRS-1蛋白磷酸化水平在果糖喂养组明显升高，α-亚麻酸可以明显降低IRS-1的磷酸化程度。而Akt蛋白磷酸化水平在果糖喂养组较正常对照组明显降低，而α-亚麻酸显著提高了Akt的磷酸化水平。结论：α-亚麻酸对高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮依赖的舒张功能具有明显改善作用，还可以增强内皮对胰岛素的敏感性，胰岛素介导的IRS-1/Akt信号转导通路可能参与其中。α-亚麻酸干预后可以降低AngⅡ诱导内皮细胞的MDA的增高，增加SOD、CAT和NO的表达，显著降低AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡水平。α-亚麻酸+angII组中p-Akt表达增高，IRS-1蛋白磷酸化水平及caspase3的表达降低。给予p-Akt抑制剂LY294002处理后能够明显减弱α-亚麻酸的抗凋亡作用，细胞凋亡率和下游信号分子caspase3表达升高。结论：α-亚麻酸可以抑制AngⅡ诱导的内皮凋亡，p-Akt及下游caspase3共同参与了这一作用的实现。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                       细胞的分选说明及其应用！一、背景随着细胞治疗和基因治疗技术的不断发展，细胞的相关研究已经逐渐成为当前医学乃至整个生命科学领域中的研究热点，细胞培养已经成为科研中一个很重要的技术，而要获得较纯的目的细胞，细胞分选、纯化已成为关键的问题。二、简介细胞分选是把一种细胞从多细胞样品中分离出来。用抗体标记细胞，同时被用的抗体被萤光标记或连接免疫磁珠或其它，利用萤光和免疫磁珠的特性来分离细胞。细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口.上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。三、应用1、利用细胞分选技术分选肿瘤干细胞肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新.无限增殖及多向分化潜能的细胞，这部分细胞虽然只占少部分，但在肿瘤的发生.演进、复发耐药及逃逸免疫系统的识别和清除过程中可能发挥了至关重要的作用。2、利用细胞分选技术分选外周血细胞基于流式细胞仪的分选功能，根据细胞的大小以及颗粒度等特征，对白细胞直接进行分选获取人外周血中的单核细胞的方法，既避免了多次重复离心，又能分选得到纯度在80%-90%之间的单核细胞用于后续实验，为深人研究单核细胞提供了良好的技术平台。3、利用细胞分选技术分选染色体通过流式分选的方法得到高质量的单个染色体，该方法可同时纯化大量染色体,为后续试验，如植物基因组测序等提供了方便。4、利用细胞分选技术分选造血干细胞通过配制HSCs体外培养液并结合流式细胞分选技术，建立了一种在体外不需要基质细胞支持的,稳定的，高通量培养单个HSC形成-个血细胞集落的实验方法。5、利用细胞分选技术分选神经细胞建立了一种较为完善的流式细胞仪分选在体模型中神经细胞的技术方法，该分选方法可以同时获得纯度高、数量多的不同种类的神经细胞。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物检测的生物化学试验汇总！百欧博伟生物：利用生物化学的方法来检查这些代谢产物以鉴别细菌的方法称为细菌的生物化学试验，简称生化试验。一、糖类代谢试验1、糖（醇）类发酵试验不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴别细菌。大致可分为：液体发酵管：无糖肉汤或蛋白胨水中，加入1%糖（醇）类指示剂，一支小玻管，经灭菌后备用。若被检细菌对营养要求较高时，则在试验前加入2%~5%无菌血清。半固体发酵管：在液体糖（醇）发酵培养基中，加入0.3%~0.5%琼脂，溶化后分装试管，灭菌后让试管直立，使琼脂凝固，做成高层培养基，接种细菌应用接种针穿刺接种。固体发酵管：此类培养基一般不常用，仅用于营养要求较高的某些细菌，在含糖类及5%~10%血清琼脂斜面上进行发酵试验。另外固体高层糖发酵管，可用于厌氧细菌糖发酵试验，如产气荚膜杆菌在含糖的固体高层发酵管中出现汹涌发酵（产生大量气体）。双糖（或三糖）高层斜面发酵管：这种培养基含有葡萄糖和乳糖（或再加蔗糖），这两种糖（或三种糖）混在一起，制成高层斜面，其中葡萄糖和乳糖（或蔗糖）比例为1:10。各种糖（醇）发酵管含糖（醇）的浓度，一般为0.5%~1%，有时可达2%。经121℃20~30min灭菌，容易水解变质，特别是在碱性溶液中更易破坏。故糖（醇）发酵培养基常用高压蒸汽115℃15min灭菌。应用的糖（醇）种类很多：单糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木胶糖、半乳糖；双糖：乳糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖；多糖：菊糖、肝糖、糊精、淀粉；醇：甘露醇、卫矛醇、山梨醇、侧金盏花醇、肌醇、丙三醇（甘油）；糖苷：水杨苷等。最常用的指示剂有酚红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、酸性复红。前两者颜色反应较敏感，但稳定性差，后二者比较稳定。特别是一些迟缓发酵的细菌，培养时间长，应用后二者指示剂。酚红pH6.8（黄色）~pH8.4（红色）2、甲基红试验（methyl red）甲基红指示剂变色范围是pH4.4（红色）~pH6.2（黄色），产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，但又很快将丙酮酸脱羧，转化成醇等物质，则培养液的pH值仍在6.2以上，故此时加入甲基红指示剂，培养液呈黄色，此为阴性对照菌。阳性对照菌是大肠埃希氏菌，呈现红色为阳性。3、V-P试验伏-普试验，目的是检查细菌是否能分解葡萄糖，产生乙酰甲基甲醇。阳性对照菌是产气肠杆菌，分解葡萄糖（被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，36℃18~24h）产生丙酮酸，再将丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下（乙液-40%KOH溶液），被氧化为二乙酰，与培养基蛋白胨中精氨酸等所含的胍基结合，通常在10min内形成红色化合物。若不显色，放置于50℃水浴2h，或放置于37℃培养箱中4h，充分摇动，观察培养液反应结果，不显红色为阴性，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。4、ONPG试验邻硝基酚-β-D-半乳糖苷的缩写，利用该试剂可以检查被检细菌有无β-半乳糖苷酶和渗透酶，发酵乳糖的细菌具有这两种酶。渗透酶将乳糖分子带入菌细胞内，而β-半乳糖苷酶可将乳糖的β-半乳糖苷链切断，产生葡萄糖和半乳糖。迟缓发酵乳糖的细菌，缺乏渗透酶，而ONPG渗入菌细胞内，被β-半乳糖苷酶分解产生邻位硝基苯酚，一般在20~30min内显黄色，为阳性，对照菌为枸橼酸盐杆菌和亚利桑那菌。方法：将被检细菌接种到1%的乳糖肉汤琼脂培养基上，37℃培养过夜。取菌苔接种于0.25ml生理盐水中做成悬液。加入1滴甲苯，并充分振摇，使酶释放。在悬液中再加入ONPG液0.25ml，混匀，置于37℃培养箱或水浴箱中，分别在20min和3h后观察培养液反应结果不出现黄色者为阴性，对照菌是沙门氏菌。5、氧化发酵试验测定糖类的氧化或发酵及糖类未被利用的代谢类型。氧化型：细菌在分解葡萄糖过程中，必须有氧分子参加。无氧环境中不能分解葡萄糖。发酵型：在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。产碱型：不分解葡萄糖的细菌。将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡油，高度不少于1cm，37℃培养48h或更长，观察反应结果。培养基变黄色为产酸。两支培养基均产酸为发酵型细菌，仅不加石蜡的培养基产酸的是氧化型细菌，两支培养基均不变化的为产碱型细菌。二、蛋白质、氨基酸及含氮化物代谢试验1、苯丙氨酸脱氨酶试验原理：某些细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，可使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁发生螯合作用，形成绿色络合物。方法：将被检细菌的斜面培养物（先增菌）大量移种到苯丙氨酸琼脂斜面上，37℃培养18-24h，再从斜面上滴加10%三氯化铁溶液4-5滴，使其自斜面培养物上缓缓流下，观察结果。结果：溶液出现绿色为阳性，对照菌是变形杆菌；不变色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。2、脱羧酶试验原理：某些细菌具有某种氨基酸的脱羧酶，可使氨基酸脱去羧基产生胺和二氧化碳，胺使pH值>7，此时指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为蓝色。溴麝香草酚蓝酸性显黄色，碱性显紫色。方法：将被检细菌接种到两支脱羧酶培养基中，其中一支不加氨基酸，另一支加赖氨酸/精氨酸/鸟氨酸，再在培养基上覆盖一层灭菌的液体石蜡，37℃培养18-24h，观察结果。结果：两管培养基均含有葡萄糖，产酸，溴麝香草酚蓝由蓝变黄。含有氨基酸的一管出现脱羧基降解作用，产生碱性反应，溴麝香草酚蓝再由黄变蓝，为阳性。鸟氨酸阴性对照菌为阴沟肠杆菌，显黄色。3、靛基质（吲哚）试验原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚），靛基质与对二甲氨基苯甲醛结合，形成玫瑰红色化合物。方法：将被检细菌接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24-48h后，滴加数滴试剂于培养基液面，轻轻摇动（不可剧烈振动），观察结果。结果：出现红色为阳性，对照菌是大肠埃希氏菌；出现黄色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。4、硫化氢试验原理：某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。方法：将被检细菌以接种针穿刺接种于醋酸铅或双糖铁培养基（乳糖+葡萄糖）中，37℃培养24h，观察结果。结果：有黑色出现为阳性。说明：在硫化氢试验的培养基加入硫代硫酸钠的作用是还原作用，以保持培养基处于还原状态，是产生的硫化氢不被氧化。产硫化氢较少的菌种可在试管口放置醋酸铅试条。5、尿素酶试验原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培养基中，分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，此时培养基中的酚红指示剂显红色。方法：将被检细菌接种的尿素固体斜面培养基上，36℃培养4h检查一次，再每天检查一次，培养5天，观察结果。结果：出现红色为阳性，对照菌为变形杆菌；变色为阴性，对照菌是大肠埃希氏菌。三、枸橼酸盐利用试验1、原理：枸橼酸盐培养基系一综合性培养基，其中枸橼酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵是氮的唯一来源。有的细菌能利用枸橼酸钠为碳源，能在培养基上生长，并且能分解枸橼酸盐，最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用枸橼酸盐为碳源的细菌在该培养基上不生长，培养基不变色。2、方法：将被检细菌的菌悬液（挑取菌苔后，洗至生理盐水中）接种到枸橼酸盐培养基上，37℃培养24h，观察结果。3、结果：培养基上有菌生长，培养基变为深蓝色为阳性，对照菌是产气肠杆菌；若培养基不变色，则继续培养7天，培养基仍不变色者为阴性，对照菌为大肠杆菌。四、呼吸酶类试验1、氧化酶试验原理：某些细菌具有氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化（先使细胞色素C氧化，电子传递体）成红色醌类化合物。方法：取白色洁净滤纸蘸取待测菌落，加盐酸二甲基对苯二胺溶液1滴；Ewing氏改进法，再加α-萘酚溶液1滴。结果：阳性者立即出现粉红色，并逐渐加深，变为淡紫色，再到深紫色，Ewing氏改进法阳性于0.5min内呈现鲜蓝色，对照菌为绿脓杆菌（铜绿假单细胞菌）；阴性者颜色无变化，Ewing氏法阴性为2min内不变色，对照菌为大肠杆菌。1%盐酸二甲基对苯二胺溶液要避免接触含铁物质，防止出现假阳性反应。此试剂应少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，也可购置氧化酶试条。该实验用于分辨革兰氏阴性杆菌中的肠杆菌科（阴性）与弧菌科（阳性）。2、触酶活力试验原理：具有触酶的细菌能催化过氧化酶，放出生态氧，继而形成氧分子，出现气泡。方法：取3%过氧化氢0.5ml，滴加到不含血液的被检细菌琼脂培养物上，或滴加到不含血液的肉汤培养物中，观察结果。结果：培养物出现气泡者为阳性。说明：过氧化氢浓度过高（30%）会产生气泡出现假阳性；血液中含有触酶，容易出现假阳性。3、硝酸盐还原试验原理：某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与α-萘胺结合，生成N-α-萘胺偶氮苯磺酸（红色）。方法：将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1~4天，每天吸取培养物2ml，加甲液（对氨基苯磺酸0.8g，5mol/L醋酸100ml）和乙液（α-萘胺0.5g，5mol/L醋酸100ml）各数滴，同时以为接种细菌的培养基作对照，观察结果。结果：出现红色为阳性。说明：亚硝酸盐在自然界分布很广，容易污染试剂，硝酸盐不纯或保管不妥也可能含有亚硝酸盐，因此必须做空白对照；繁殖迅速而还原硝酸盐能力强的细菌如果培养时间过久，可能将亚硝酸盐全部分解为氨和氮，出现假阴性反应，故需每天试验，空白对照。五、毒性酶类试验1、溶血试验原理：某些细菌在代谢过程中，产生溶血素，能使人或动物的红细胞发生溶解。方法：1）平板法：将被检细菌接种到血液琼脂平板培养基上，37℃培养24h。2）试管法：取被检细菌16-18h肉汤培养物若干，加等量经生理盐水洗涤三次的2%羊红细胞悬液，置于37℃水浴箱中，30min后观察结果。结果：1）平板法：若菌落周围出现透明的溶血环，为完全溶血（β溶血），菌落周围出现绿色溶血环，为不完全溶血（α溶血），无溶血环为不溶血（γ溶血）。2）试管法：液体澄清透明为溶血，阳性。2、链激酶试验原理：A群链球菌在代谢过程中，产生链激酶，能激活血液中的纤维蛋白酶原为溶纤维蛋白酶，促使纤维蛋白凝块溶解。方法：取血浆0.2ml，放入灭菌小试管中，加无菌生理盐水0.8ml，再加被检细菌18-24h肉汤培养物0.5ml，充分混匀后，再加入0.25%氯化钙水溶液0.25ml，置于37℃水浴中，观察结果。结果：10min内血浆先凝固，而后又开始溶解，溶解时间与链激酶含量成正比。链激酶含量多时，20min内凝固的血浆完全溶解。如无变化，应在水浴中持续2h、24h，分别观察结果。血浆凝块完全溶解者为阳性，时间越短表明毒性越强。24h血凝块仍不溶解者为阴性。3、血浆凝固酶试验原理：某些细菌能产生血浆凝固酶，分两种，一种结合在细菌细胞壁上，遇到血浆直接作用于血浆的纤维蛋白，使细菌凝成颗粒状，使用玻片法；另一种分泌到细菌细胞外，称为游离血浆凝固酶，能使血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，使用试管法试验。方法：1）玻片法：取生理盐水2滴，分别滴于载玻片上，以接种环挑取被检细菌菌落，放在2滴生理盐水中，研磨成浓菌悬液。在1滴悬液中加1滴未稀释的血浆，另一滴加入1滴生理盐水作为对照，迅速摇动，观察结果。2）试管法：取3支小试管，每支加1:4稀释的新鲜血浆0.5ml，其中1支加被检细菌生理盐水悬液或肉汤培养物0.5ml，另一支加阳性菌株生理盐水悬液或肉汤培养物0.5ml作阳性对照，再一支加生理盐水或肉汤培养液0.5ml作阴性对照。3支试管置于37℃水浴箱中，每隔30min观察一次结果。结果：1）玻片法：若在加血浆的1滴中迅速出现凝固颗粒，在加生理盐水对照的1滴中未出现凝固颗粒，为阳性；若超过2min才开始出现凝固颗粒者不作阳性（多为非致病性）。2）试管法：6h内，若试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管不出现凝固，为阳性；多数阳性细菌在0.5-1h内发生凝固。六、嗜盐试验原理：在高于3%的氯化钠培养基上不生长或生长不好，但能在无言培养基上生长的，称为非嗜盐菌，如肠杆菌科。能在3%-6%氯化钠培养基上生长，但在无盐培养基上不生长，称为嗜盐菌，如副溶血性弧菌。在无盐和高盐培养基上均能生长，但长得不茂盛，称为耐盐菌，如葡萄球菌、铜绿假单细胞菌。方法：取被检细菌分别接种到1支无盐葡萄糖蛋白胨水和一支5%-6%氯化钠葡萄糖蛋白胨水中，37℃培养6-24h，观察生长情况。结果：培养物出现浑浊生长为阳性。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      空气中微生物的检测沉降法！一、实验原理检查空气中细菌中的方法很多，沉降法是其中常用的一种，它是利用含有细菌的尘粒或液滴因重力自然下降至培养基表面来进行检查。根据推算，每100cm2培养基在空气中暴露5min，其表面接受自然沉降的细菌相当于10L空气中所含的细菌数。二、材料1.培养基：普通琼脂平板。2.仪器：培养皿.三角瓶。三、实验步骤1.取普通琼脂平板5个，分别在其底部标记1、2、3、4与中。2.将标有1、2、3、4的平板分别放置于室内四角，标有“中”字的平板放于室内中央，均离地面约1m高，打开平皿盖，使培养基暴露于空气中，10min后盖好平皿盖。同时放一普通琼脂平板于桌面上不启盖，以作对照。3.将上述6个平皿置37℃恒温箱中培养24h后取出观察结果。四、结果用钢笔于平板底点数每块平板上的菌落数，再计算出100cm2培养上应有的菌落数。100cm2培养基的菌落数=每块平板数÷πr2×100。再将5个部位所得菌落数相加除以5求平均数，并换算出室内每立方米空气的细菌总数。由于100cm2培养基暴露于空气中10min相当于接受20L空气中的活菌，又因1m3等于1000升。所以每立方米空气中的活菌数＝100cm2培养基上菌落平均数÷20×1000。计算菌落时，凡二个或几个菌落边缘有相互重叠者，均分别计算为二个或几个。沉降法检查出的活菌总数，客观地反映了空气污染的程度和卫生通风状况，是判断空气污染的指标之一，亦常用于评价空气消毒除菌的效果。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      抽样检验的相关术语有哪些？1、计数检验：根据给定的技术标准，将单位产品简单地分成合格品或不合格品的检验；或是统计出单位产品中不合格数的检验。前一种检验又称“计件检验”；后一种检验又称“计点检验”。2、计量检验：根据给定的技术标准，将单位产品的质量特性（如长度、重量等）用连续尺度测量出具体数值并与标准对比的检验。3、单位产品：为实施抽样检验而划分的单位体或单位量。4、检验批：作为检验对象而汇集起来的一批产品，也称交检批。一个检验批应有基本相同的制造条件一定时间内制造出来的同种单位产品构成。5、批量：指检验批中单位产品的数量。6、不合格：在抽样检验中，不合格是指单位产品的任何一个质量特性不符合规定要求；7、不合格品：有一个或一个以上不合格的单位产品，称为不合格品；8、抽样方案：规定了每批应检验的单位产品数（样本量或系列样本量）和有关接受准则（包括接受数、拒收数、接收常数和判断规则等）的一个具体方案；9、抽样计划：一组严格度不同的抽样方案和转换规则的组合。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物需要的营养物质有哪些？百欧博伟生物 营养物质应满足微生物的生长、繁殖和完成各种生理活动的需要。它们的作用可概括为形成结构（参与细胞组成）、提供能量和调节作用（构成酶的活性和物质运输系统）。微生物的营养物质有六大类要素，即水、碳源、氮源、无机盐、生长因子和能源。⒈水水是微生物的重要组成部分，在代谢中占有重要地位。水在细胞中有两种存在形式：结合水和游离水。结合水与溶质或其他分子结合在一起，很难加以利用。游离水（或称为非结合水）则可以被微生物利用。⒉碳源碳在细胞的干物质中约占50%，所以微生物对碳的需求zuida。凡是作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，称为碳源。作为微生物营养的碳源物质种类很多，从简单的无机物（CO2、碳酸盐）到复杂的有机含碳化合物（糖、糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、芳香化合物及各种含碳化合物等）。但不同微生物利用碳源的能力不同，假单孢菌属可利用90种以上的碳源，甲烷氧化菌仅利用两种有机物：甲烷和甲醇，某些纤维素分解菌只能利用纤维素。大多数微生物是异养型，以有机化合物为碳源。能够利用的碳源种类很多，其中糖类是zuihao的碳源。异养微生物将碳源在体内经一系列复杂的化学反应，最终用于构成细胞物质，或为机体提供生理活动所需的能量。所以，碳源往往也是能源物质。自养菌以CO2、碳酸盐为weiyi或主要的碳源。CO2是被彻底氧化的物质，其转化成细胞成分是一个还原过程。因此，这类微生物同时需要从光或其他无机物氧化获得能量。这类微生物的碳源和能源分别属于不同物质。⒊氮源凡是构成微生物细胞的物质或代谢产物中氮元素来源的营养物质，称为氮源。细胞干物质中氮的含量仅次于碳和氧。氮是组成核酸和蛋白质的重要元素，氮对微生物的生长发育有着重要作用。从分子态的N2到复杂的含氮化合物都能够被不同微生物所利用，而不同类型的微生物能够利用的氮源差异较大。固氮微生物能利用分子态N2合成自己需要的氨基酸和蛋白质，也能利用无机氮和有机氮化物，但在这种情况下，它们便失去了固氮能力。此外，有些光合细菌、蓝藻和真菌也有固氮作用。许多腐生细菌和动植物的病原菌不能固氮，一般利用铵盐或其他含氮盐作氮源。硝酸盐必须先还原为NH+4后，才能用于生物合成。以无机氮化物为weiyi氮源的微生物都能利用铵盐，但它们并不都能利用硝酸盐。有机氮源有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、玉米浆等，工业上能够用黄豆饼粉、花生饼粉和鱼粉等作为氮源。有机氮源中的氮往往是蛋白质或其降解产物。氮源一般只提供合成细胞质和细胞中其他结构的原料，不作为能源。只有少数细菌，如硝化细菌利用铵盐、硝酸盐作氮源和能源。⒋无机盐无机盐也是微生物生长所不可缺少的营养物质。其主要功能是：① 构成细胞的组成成分；② 作为酶的组成成分；③ 维持酶的活性；④ 调节细胞的渗透压、氢离子浓度和氧化还原电位；⑤ 作为某些自氧菌的能源。磷、硫、钾、钠、钙、镁等盐参与细胞结构组成，并与能量转移、细胞透性调节功能有关。微生物对它们的需求量较大（10-4～10-3 mol/L），称为“宏量元素”。没有它们，微生物就无法生长。铁、锰、铜、钴、锌、钼等盐一般是酶的辅因子，需求量不大（10-8～10-6 mol/L），所以，称为“微量元素”。不同微生物对以上各种元素的需求量各不相同。铁元素介于宏量和微量元素之间。在配制培养基时，可通过添加有关化学试剂来补充宏量元素，其中首选是K2HPO4和MgSO4，它们可提供需要量很大的元素：K、P、S和Mg。微量元素在一些化学试剂、天然水和天然培养基组分中都以杂质等状态存在，在玻璃器皿等实验用品上也有少量存在，所以，不必另行加入。⒌生长因子一些异养型微生物在一般碳源、氮源和无机盐的培养基中培养不能生长或生长较差。当在培养基中加入某些组织（或细胞）提取液时，这些微生物就生长良好，说明这些组织或细胞中含有这些微生物生长所必须的营养因子，这些因子称为生长因子。生长因子可定义为：某些微生物本身不能从普通的碳源、氮源合成，需要额外少量加入才能满足需要的有机物质，包括氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶及其衍生物，有时也包括一些脂肪酸及其他膜成分%A。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！

              分子生物学在食品微生物检测中的应用！百欧博伟生物： 科学技术的发展进步，以分子生物学为典型代表的生命科学也逐渐受到社会的关注，其应用领域也逐渐拓展，现代仪器设备、电子信息技术等技术水平的提升，也是分子生物学的工作效率、工作水平得到明显的提升。食品微生物检测是应用分子生物学进行食品安全检测的重要方式，为保证食品安全检疫工作的便捷性和准确性提供重要保证。一、分子生物学及其应用价值 　　分子生物学是基于分子性质、分子观测等技术方式来研究各种生命现象的基础学生，对不同细胞成分物理以及化学性质都会存在差异，进而引发不同的生命现象。经济社会的发展，食品生产和经营企业将经济利益置于自身经济活动的首位，因而会将各种不符合人类食用标准的物质添加到食品中，或者因为食品生产存储环节没有符合相关的标准，使产品性质发生变化，这些食品物质都会对人类的身体健康造成一定程度的危害，甚至威胁到社会的和谐稳定。经济全球化、食品国际化的经济发展趋势，使食品贸易活动不断频繁，食品安全问题也不仅限于国内经济市场中，也成为世界经济发展关注的重点问题。食品安全检疫是食品进出口监管工作的重点工作内容，传统的食品微生物检测方法工作程序较为繁琐、检测效率较为低下，已经不能满足现代社会的发展需求，分子生物学检测方式为检疫工作人员拓展了更为jingzhun的工作方式，并因为其明显的应用优势使其得到广泛的推广。 　　二、常见的分子生物学方法在食品微生物检测中的应用方式⒈基因探针技术 　　基因探针技术又被称为核酸分子杂交技术，为进行DNA分析技术应用奠定了良好的应用基础，得到了相关学术领域的广泛认可，基因探针技术以对核酸进行基础配对为应用原理，通过对带有不同素位标记以及非同位素标记的DNA片段以及RNA片段进行检测，进而测定是否含有某些微生物物质的核苷酸，这种方法能够准确地检测出病性微生物，并不会对非病性微生物造成干扰，在学术界得到广泛的应用认可，能够检测出一些特异形式的RNA，对任意一种微生物都能够敏感获知。虽然其具有明显的应用优势，但是也要认识到其在应用过程中存在的一些不足之处，比如：对操作人员的身体会造成一定危害、操作过程较为繁琐、检验成本相对较高、废气物难处理等，这些问题的存在也是其应用受到一定程度的限制。 　　⒉ PCR技术 　　PCR技术主要以变性技术和复性技术为理论应用基础，借助DNA聚合酶在外部进行使用，并与引物引导以及DNTP相配，在几个小时内促使模板能够实现数以百万倍的增长，进而对DNA进行选择性的放大，使检测结果能够及时准确，在致病性食品微生物检测领域中的应用作用也愈加明显，技术应用的前提和关键是能够对靶位序列进行准确选择，保证扩增结果的准确性，提升检测工作的灵敏度，避免检测结果出现假性显示结果。在PCR技术应用基础之上还可以应用荧光定量PCR技术，能够实现定时定量的检测结果，主要的应用方式使在PCR技术应用期间的变化情况，利用荧光信号进行直接的测定，在经过科学软件的动态检测，以实现对产物的自动扩增，进而获得精准的检测结果，此种检测方法能够准确的检测乳酸菌、沙门氏菌、志贺菌等微生物。⒊质粒DNA图谱分型技术 　　质粒DNA图谱分型技术是最早进行分型管理与控制技术应用，对微生物的流行病学原理进行分析的技术应用方式。进行这种技术應用需要对检测进行质粒DNA的提取，并对DNA进行技术分离，不同菌株会存在质粒DNA的排列差异，在此技术应用的过程中需要根据不同物质的不同质粒DNA图谱来保证分离工作的有效性，进而实现对技术的合理应用。质粒图谱的再现性和分辨性能够通过限制位内切酶消化质粒得以提高，不同质粒的位内切酶的位点位置以及频率是存在差异的，但是非染色体物质却是能够很容易获得，根据不同的质粒指纹图谱能够对流行病学菌株进行判定，进而得到准确的检测效果。此技术的应用局限行为，不具备质粒或者中分离株中只含有一到两个质粒的病原微生物检测不能应用此项技术。⒋基因芯片技术基因芯片技术是借助显微打印技术的综合技术应用手段，将核酸探针固定与支持物质的表面，并能够使其与待检样本进行基因杂交，对杂交的信号进行技术检测，能够大幅提升基因检测的速度和准确性性。芯片探针与待检样本中的靶基因片段实现特异性杂交，首先将芯片的表面放置寡核苷酸点样，并对其进行微生物技术处理，将核酸进行扩增，应用荧光素进行标记各种基因，使其能够进行杂交，在利用显微扫描仪对荧光分布方式进行科学分析，进而对待检样本中的微生物进行分析。基因探针技术与基因芯片技术存在一定相似之处，但是基因芯片技术需要以探针技术进行一定程度的应用，只需要能够通过一次基因杂交过程便能够快速的检测出靶基因，提升其检测效率和准确性，这种方式是进行有害微生物检测重要技术应用方式。 　　此外，还有很多微生物检测技术在食品微生物检测中也有广泛的应用空间，比如：SNP技术、RFLP技术，但是不同的应用技术都有自身的应用优势和应用缺陷，也便体现不同的应用范围，因而分子生物学应用还有更为广阔的技术改进和提升空间。 　三、结论 　食品安全问题日趋严峻的形势之下，应用分子生物学进行食品微生物检测已经是必然发展趋势，只有不断将技术应用与实践工作相结合，不断总结技术应用经验，针对不同的检测范围应用针对性技术，促进检测工作效率的提升，并对新型技术积极进行学习和应用实践，为食品检疫工作水平的提高提供保证。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               高效液相色谱仪的操作步骤和注意事项！一、高效液相色谱仪操作步骤：⒈过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。⒉对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。⒊打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。⒋进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。⒌有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。⒍调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。⒎设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间，随不同的样品而不同。⒏进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。⒐关机时，先关计算机，再关液相色谱。⒑填写登记本，由负责人签字。二、操作注意事项：⒈柱子是非常脆弱的，diyi次做的方法，先不要让液体过柱子。⒉所有过柱子的液体均需严格的过滤⒊流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。⒋压力不能太大，zuihao不要超过2000 psi。因为每个品牌的仪器和操作界面都不一样，根据其原理和操作的要求，以上步骤仅为企业的一般仪器操作步骤，企业可根据自身的仪器操作说明书进行。北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。中国微生物菌种查询网

                   杀死体内大肠杆菌的方法与步骤！大肠杆菌或大肠杆菌是主要存在于消化系统中的细菌。细菌实际上是肠道的正常菌群; 在大多数情况下它是无害的和有益的; 然而，一些菌株可能导致严重的细菌感染，导致腹泻和可能的肾衰竭。虽然没有特效药可以“治好”疾病，但您可以采取措施避免脱水并缓解症状。方法/步骤⒈认识症状。 大肠杆菌主要影响成人的胃肠道。它引起水样腹泻，或在更严重的情况下引起血性腹泻，导致其他并发症如肾衰竭。大肠杆菌感染在旅行到卫生较差的地区时比我们在北美的地区频繁出现。它通过粪便污染食物，水等传播。大肠杆菌感染的症状包括：腹痛恶心和/或呕吐腹泻发热腹部绞痛⒉不要服用腹泻和抗生素。理解大肠杆菌感染不能被“治愈”（并且细菌不能被“杀死”）与典型的医疗药物如抗生素或甚至止泻药是重要的。相反，医疗专业人员提供的治疗是“支持性的”，这意味着它由休息，液体和药物治疗症状，如疼痛和/或恶心组成。对许多人来说，这是违反直觉的，他们经常认为医疗药物可以治愈诸如大肠杆菌感染等疾病。止泻药物没有帮助，因为它们延缓了感染的传播和症状的恶化。zuihao的办法就是让腹泻继续尽快摆脱感染。也不建议使用抗生素 - 它们已被证明会恶化疾病，因为当细菌死亡时，它们释放更多的毒素，导致更大的伤害⒊用你的免疫系统自然杀死细菌。由于大肠杆菌感染不建议使用抗生素，因此免疫系统会阻止感染。幸运的是，如果有足够的时间和适当的支持，你的免疫系统能够做到这一点。休息一下，遵照医生的指示，让你的免疫系统完成它的工作！与你的医生谈谈你可以采取的支持措施，以通过感染。保持水分是很重要的，因为当你生病的时候你会失去大量的液体。方法/步骤⒈治疗大肠杆菌感染休息。听起来很简单，但休息是尽快恢复大肠杆菌感染的关键。由于传统医学疗法所能做的并不多，因此休息变得非常重要，可以让您的身体利用自身的自然防御力来抵御感染。抽出时间下班或上学。不仅重要的是要留在家中，为自己的康复而休息，作为避免污染工作场所或学校中的其他人员的手段也很重要。你应该保持孤立的社会地位，因为大肠杆菌感染非常具有传染性，你不想因为这种不愉快的细菌感染你的整个办公室或班级。请务必经常洗手，并尽可能避免其他病人（在一周内应该好转）。大肠杆菌通过排泄物传播，所以在使用厕所后彻底洗手⒉保持水分。 大肠杆菌感染往往会导致大量腹泻。因此，重要的是用水和含有碳水化合物和电解质的液体补充水份，以补偿腹泻中流失的液体。在极端年龄段脱水更严重。如果患有大肠杆菌的人是婴儿或老年人，请考虑带他去看医生治疗⒊尝试使用口服补液盐。口服补液盐（ORS）是一种含有人体所需盐类和电解质的粉末。说到补液，它比普通水更有效。将粉末与一升水混合，然后在接下来的24小时内将溶液喝醉。这种粉末可以在线购买，也可以在药店和大多数杂货店购买。或者，ORS可以在家中通过将4汤匙糖和半茶匙小苏打和盐溶解在1升水中来制备。欲了解更多信息，请阅读wikiHow的如何制作口服补液盐饮料。粉末应在安全水中混合以避免进一步感染。如果需要煮沸⒋去严重脱水病例的医院。您将获得静脉输液，以替代在腹泻和呕吐期间失去的电解质和离子。指示何时去医院是因为恶心，或者每天有超过四次腹泻时不能再忍受口腔液体。如果有疑问，最好看医疗专业人员评估静脉输液是否有助于加速康复。电解质是在身体中发现的物质，有助于维持身体的正常功能。您可能需要在严重血性腹泻（一些大肠杆菌可能导致的病例）的情况下进行输血。你的血液将被检查以确定血红蛋白水平。这有助于了解已经失去的血液量，以便血液可以回输。⒌根据需要服用止痛药和止痛药。为了缓解症状，您可以服用止痛药，如对乙酰氨基酚（泰诺），以减轻腹痛。这可以在您当地的药店或药店柜台买到。按照瓶子上的加药方向。您也可以尝试抗恶心药物，如Dimenhydrinate（Gravol）来帮助消除恶心。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

             普洱熟茶在发酵渥堆过程中微生物的作用！百欧博伟生物：熟茶微生物发酵的微观世界中还有着许多未解之谜，但是对于普通消费者来说，了解一些熟茶发酵一般性的工艺流程，对于进一步认识熟茶、品鉴熟茶确是有着深远意义的。一是：微生物对茶叶的直接作用，主要与构香，构色有关；二是：由微生物产生的胞外酶对茶叶的间接作用，主要与构味有关。微生物在渥堆叶中大量繁殖，新陈代谢过程从茶叶中吸收可溶性物质并放出热量，分泌有机酸等代谢产物，使叶温升高，酸度增加。渥堆过程中嗅到的“甜酒香”，是由酵母菌作用产生的。渥堆叶的酸度到了一定程度，就会产生“酸辣味”，辣味可能来自酪氨酸，组氨酸的腐败转化物酷氨和组氨，与有机酸的酸味和氧化生成的醛，酮组成酸辣味，工艺上，把这种气味作为渥堆适度的表征；微生物的胞外酶，是对渥堆叶起作用的外源酶，是渥堆后期的优势霉类产生的，如纤维素酶，果胶分解酶，氧化酶，蛋白酶等。微生物分泌的酶类对渥堆叶的有机物质起分解，水解，氧化作用，如氧化酶引致儿茶素氧化聚合，进而转化为茶黄素，茶红素等有色物质，这是黑茶汤色转红的原因。是滋味变纯和的原因之一；各种酶的作用，使部分纤维素分解。多酚类含量下降，可溶性糖减少（作为微生物能源）。此外，作为渥堆的连带效果，是茶叶氨基酸被微生物作用为氮源利用，部分氨基酸减少的同时，有一些对人体有益的氨基酸明显增加，如赖氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸等。普洱茶具有陈香，有研究认为，是由于初制日晒和渥堆微生物的作用，茶叶中脂肪酸，胡萝卜素氧化降解，使某些醛类物质和沉香醇氧化物增加的结果。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  PH计的正确使用与维护注意事项！酸度计简称pH计，由电极和电计两部分组成。使用中若能够合理维护电极、按要求配制标准缓冲液和正确操作电计,可大大减小pH示值误差，从而提高化学实验、医学检验数据的可*性。一、正确使用与保养电极目前实验室使用的电极都是复合电极，其优点是使用方便，不受氧化性或还原性物质的影响，且平衡速度较快。使用时，将电极加液口上所套的橡胶套和下端的橡皮套全取下，以保持电极内氯化钾溶液的液压差。下面就把电极的使用与维护简单作一介绍：1清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而应用滤纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交*污染，影响测量精度。2测量浓度较大的溶液时，尽量缩短测量时间，用后仔细清洗，防止被测液粘附在电极上而污染电极。3电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。4测量中注意电极的银—氯化银内参比电极应浸入到球泡内氯化物缓冲溶液中，避免电计显示部分出现数字乱跳现象。使用时，注意将电极轻轻甩几下。5复合电极不用时，可充分浸泡3M氯化钾溶液中。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗。6使用前，检查玻璃电极前端的球泡。正常情况下，电极应该透明而无裂纹；球泡内要充满溶液，不能有气泡存在。7严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。二、标准缓冲液的配制及其保存1pH标准物质应保存在干燥的地方，如混合磷酸盐pH标准物质在空气湿度较大时就会发生潮解,一旦出现潮解,pH标准物质即不可使用。2配制好的标准缓冲溶液一般可保存2—3个月，如发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时，不能继续使用。3配制pH标准溶液应使用二次蒸馏水或者是去离子水。如果是用于0.1级pH计测量，则可以用普通蒸馏水。4配制pH标准溶液应使用较小的烧杯来稀释，以减少沾在烧杯壁上的pH标准液。存放pH标准物质的塑料袋或其它容器，除了应倒干净以外，还应用蒸馏水多次冲洗，然后将其倒入配制的pH标准溶液中，以保证配制的pH标准溶液准确无误。5碱性标准溶液应装在聚乙烯瓶中密闭保存。防止二氧化碳进入标准溶液后形成碳酸，降低其pH值。三、pH计的正确校准pH计因电计设计的不同而类型很多，其操作步骤各有不同，因而pH计的操作应严格按照其使用说明书正确进行。在具体操作中，校准是pH计使用操作中的一重要步骤。表1的数据是精度为0.01级、经过计量检定合格的pH计在未校准时与校准后的测量值，从中可以看出校准的重要性。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━标准pH┄┄┄校准前误差（pH）┄┄┄校准后误差（pH）━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━13.000┅┅┅ 00.0600┅┅┅┅ 00.000012.000┅┅┅ 00.0450┅┅┅┅ 00.000511.000┅┅┅ 00.0500┅┅┅┅ 00.001010.000┅┅┅ 00.0300┅┅┅┅ 00.00009.000 ┅┅┅ 00.0200┅┅┅┅ 00.00058.000 ┅┅┅ 00.010┅┅┅┅ 00.00057.000┅┅┅ 00.0015┅┅┅┅ 00.00006.000┅┅┅ -00.0100┅┅┅┅ -00.00055.000┅┅┅ -00.0105┅┅┅┅ 00.00054.000┅┅┅ 00.0150┅┅┅┅ 00.00003.000┅┅┅ -00.0300┅┅┅┅ 00.00002.000┅┅┅ -00.0200┅┅┅┅ -00.00031.000┅┅┅ -00.0350┅┅┅┅ -00.0001━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━尽管pH计种类很多，但其校准方法均采用两点校准法，即选择两种标准缓冲液：一种是pH7标准缓冲液，第二种是pH9标准缓冲液或pH4标准缓冲液。先用pH7标准缓冲液对电计进行定位，再根据待测溶液的酸碱性选择第二种标准缓冲液。如果待测溶液呈酸性，则选用pH4标准缓冲液；如果待测溶液呈碱性，则选用pH9标准缓冲液。若是手动调节的pH计，应在两种标准缓冲液之间反复操作几次，直至不需再调节其零点和定位（斜率）旋钮，pH计即可准确显示两种标准缓冲液pH值。则校准过程结束。此后，在测量过程中零点和定位旋钮就不应再动。若是智能式pH计，则不需反复调节，因为其内部已贮存几种标准缓冲液的pH值可供选择、而且可以自动识别并自动校准。但要注意标准缓冲液选择及其配制的准确性。智能式0.01级pH计一般内存有三至五种标准缓冲液pH值，如科立龙公司的KL-016型pH计等。其次，在校准前应特别注意待测溶液的温度。以便正确选择标准缓冲液,并调节电计面板上的温度补偿旋钮,使其与待测溶液的温度一致。不同的温度下，标准缓冲溶液的pH值是不一样的。如表2所示：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━温度（℃）┄┄ pH7 ┄┄ pH4 ┄┄ pH9.2━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━10┄┄┄┄┄┄6.92 ┄┄ 4.00 ┄┄9.3315┄┄┄┄┄┄6.90 ┄┄ 4.00 ┄┄9.2820┄┄┄┄┄┄6.88 ┄┄ 4.00 ┄┄9.2325┄┄┄┄┄┄6.86 ┄┄ 4.00 ┄┄9.1830┄┄┄┄┄┄6.85 ┄┄ 4.01 ┄┄9.1440┄┄┄┄┄┄6.84 ┄┄ 4.03 ┄┄9.0150┄┄┄┄┄┄6.83 ┄┄ 4.06 ┄┄9.0250┄┄┄┄┄┄6.83 ┄┄ 4.06 ┄┄9.02━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   测试食品中蛋白质的操作方法！      蛋白质是一种必需的营养素，建立在身体的肌肉。下面是一个简单的测试食物中的蛋白质。物料 : 氧化钙（生石灰建筑供应商店出售）,红色石蕊试纸（或其他方法来测试pH值）,水,蜡烛，燃烧器或其他热源,滴管,试管,牛奶或其他食物，以测试.程序首先，测试牛奶，其中包含酪蛋白和其他蛋白质。一旦你理解了什么期望从测试，可以检查其他食品。少量的氧化钙和5滴牛奶加入到试管中。加入三滴的水。石蕊试纸浸湿了水。水的pH值呈中性，因此它不应该改变纸张的颜色。如果纸张不变色，开始再次用蒸馏水而非自来水。小心加热试管在火焰中。保持潮湿的石蕊试纸在试管口，观察颜色的变化。如果蛋白质在食品（正面测试为蛋白质），石蕊试纸会改变颜色，从红色到蓝色。此外，如果你闻到试管中，你应该能够检测氨的气味，如果蛋白是存在的如果蛋白质是不存在于食物中，或者是，浓度不足以产生足够的氨测试（负蛋白质测试），石蕊试纸变成蓝色。笔记氧化钙与蛋白质发生反应，把它分解成氨。氨改变样品的酸度，导致pH值的变化。如果你的食物已经是非常碱性，你将无法使用这种测试来检测蛋白质。测试你的食物，然后再进行测试，看它是否改变石蕊试纸。牛奶是一个简单的测试，因为它是一种液态的食物。测试固体，像肉类或蔬菜，首先用手研磨食物或使用搅拌器。您可能需要将其与一些水，使您可以测试样本。测试寄存器的pH值，这是在含水或水基溶液的氢离子浓度的变化。大多数食品中含有的水，这样他们罚款的测试工作。不过，油腻的食物可能无法正常工作。例如，您不能测试纯植物油，因为它不包含任何水。如果你测试的油腻食物，如薯条或薯片，你会需要捣碎它们，并把它们用一点水。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                生物杀菌剂四霉素的优势及使用方法！四霉素也是一种光谱性的生物杀菌剂，对作物绝对安全，经常被用来防治苹果树病害，那么与其它杀菌剂相比，四霉素的优势在哪?四霉素的使用方法又是什么呢?一、四霉素的优势：1.源于自然纯生物药剂，高度的安全，特别适用于绿色无公。2.杀菌谱广对三大类病原真菌(子囊菌、担子菌、半知菌)，两大类病原细菌(革兰氏阴性，革兰氏阳性)均有极强的杀灭作用，一药多治。3.作用独特四霉素不同于波尔多液、代森锌、硫酸铜、绿乳铜、代森锰锌、百菌清等保护型杀菌剂，可以从植物表皮渗人植物组织内部，杀死或抑制已经浸入植物体内病原，具有治疗和保护的双重作用。4.增产显着本品在发酵过程中形成多种养份，增强抗逆能力、促进新组织再生，促使作物早生快发，提高品质，增加产量。二、四霉素的使用方法：1.防治苹果树腐烂病：稀释5倍，涂抹病疤。2.防治苹果树斑点落叶病：稀释600~1000倍，喷雾。3.防治水稻稻瘟病：稀释1000~1250倍，喷雾。4.用于防治稻瘟病和苹果树斑点落叶病时，应在发病前或发病初期用药，连续喷施2~3次，间隔7天。施药应均匀，施药后4小时内遇雨应补施。安全间隔期21天，每季施用2~3次。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

            小鼠原代海马神经元细胞的分离培养方法！海马体主要负责记忆和学习，日常生活中的短期记忆都储存在海马体中。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起，由细胞体和细胞突起构成。小鼠海马神经元细胞的组织来源于实验小鼠的正常脑组织，因为海马神经元细胞类似于干细胞属于高分度分化的细胞特性，具有不能传代，不能增殖等特点，所有收到细胞后尽快使用。为了更好的服务于广大科研工作者，百欧博伟生物技术人员特提供了海马神经元细胞分离培养方法，技术因人而异仅供参考：1、试验所需仪器设备及试剂（1）仪器生物安全柜CO2细胞培养箱荧光倒置显微镜高速冷冻离心机电热恒温鼓风干燥箱（2）试剂耗材T25细胞培养瓶血球计数板细胞培养孔板红细胞裂解液神经元完全培养基0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）多聚甲醛（PFA）DAPITriton X-100山羊血清NSEGoat anti-Rabbit lgG（H+L）Cross-Adsorbed Secondary antibody，Alexa Fluor 594Fluoromount-G荧光封片剂2、分离培养方法1) 取1-10 d的新生小鼠。用75%的乙醇浸泡，2) 在冰浴的PBS中分离海马，PBS洗涤3次，剪碎，3) 用0.25% Trypsin + 0.1% Ⅰ型胶原酶37℃水浴振荡消化30min，4) 用FBS终止消化，轻轻吹打，5) 过100 μm 滤网，6) 收集滤液，300 g离心5 min，7) 用完全培养基重悬沉淀，铺瓶。3、免疫荧光3.1.实验步骤（1）细胞爬片取3片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。（2）固定细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗1遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。（3）破膜封闭将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，玻璃片封闭液配置：0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合，再加10% 血清，取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。（4）一抗孵育一抗配制：抗体与PBS 1:100（200）稀释破膜封闭后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），将玻片（有细胞的一面）盖上置于4℃（最多可放置一周）（5）二抗孵育室温避光孵育二抗（二抗:PBS=1:500）2h后，PBS洗3×5min/次，染DAPI（DAPI:PBS=1:1000）5min，PBS洗3×5min/次。（6）包埋玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。鉴定细胞为P1代细胞3.2.检测结果（1）细胞免疫荧光鉴定照片阴性100X-DAPINSE100X-DAPI（2）检验基本情况：经免疫荧光鉴定，该细胞纯度达到90%以上。除了上述的细胞分离方法以外，百欧博伟还有很多关于其他细胞的分离方法，想要学习的小伙伴可以来百欧博伟进行现场学习，如果想要其他原代分离培养方法，可打电话或咨询相关技术人员哦。

                  食品检验用一般器皿的要求有哪些？1、器皿的选用分析检验时离不开各种器皿，所需的各种器皿应根据检验方法的要求来选用。一般应选用硬质的玻璃器皿；有些试剂对玻璃有腐蚀性（如NaOH等），需选聚乙烯瓶贮存；遇光不稳定的试剂（如AgNO3 /I2等）应选择棕色玻璃瓶避光贮存。选用时还应考虑到容量及容量精度和加热的要求等。检验中所使用的各种器皿必须洁净，否则会造成结果误差，这是微量和容量分析中极为重要的问题。2、器皿的洗涤常用洗涤液的配制：①肥皂水、洗衣粉水、去污粉水：根据洗涤的情况具体配制。②王水：3份HCL与1份HNO3混合③HCL洗液（1+3）：1份HCL与3份水混合。④铬酸洗液：称取50gK2CrO7，加170~180ml水，加热溶解成饱和溶液，在搅拌下徐徐加入浓H2SO4至约500ml。⑤碱性酒精洗液：用体积分数为95%的乙醇与质量分数为30%的NaOH溶液等体积混合。器皿的洗涤方法：①新的玻璃器皿：先用自来水冲洗，晾干后用铬酸洗液浸泡，以除去粘附的其他物质，然后用自来水冲洗干净。②有油污的玻璃器皿：先用碱性酒精洗液洗涤，然后用洗衣粉水或肥皂水洗涤，再用自来水冲洗干净。③有凡士林油污的器皿：先将凡士林擦去，再在洗衣粉水或肥皂水中烧煮，取出后用自来水冲洗干净。④有锈迹、水垢的器皿：用（1+3）HCL洗液浸泡，再用自来水冲洗干净。⑤比色皿：先用自来水冲洗，再用稀HCL洗涤，然后用自来水冲洗干净。⑥聚乙烯塑料器皿：用稀HCL洗涤后，再用自来水冲洗干净。为了保证器皿洗涤后能达到洁净的要求，要用蒸馏水冲洗掉附着的自来水，一般用蒸馏水淋洗2~3次，蒸馏水淋洗时应少量多次，以达到节约蒸馏水和洁净器具的目的。仪器、设备的要求：①玻璃量器的要求：检验方法中所使用的滴定管、移液管、容量瓶、刻度吸管、比色管等玻璃量器均须按国家有关规定及规程进行校准或检定。玻璃量器和玻璃器皿须经彻底洗净后才能使用。②控温设备的要求：检验方法中所使用的恒温干燥箱、恒温水浴锅等均须按国家有关规程进行测试和校准或检定。③测量仪器的要求：天平、酸度计、温度计、分光光度计、色谱仪等均应按国家有关规定及规程进行校准或检定。注：检验方法中所列仪器为该方法所需要的主要仪器，一般实验室常用仪器不再列入。北京百欧博伟生物技术有限公司是一家拥有独自科研力量,实验团队及研发团队的高科技高品质的生物技术工程公司，主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务！

             微生物菌剂防治根结线虫的方法与注意事项！一、土壤处理：1、耕地前首先将园内的根瘤结清理干净。2、耕翻地施底肥时，增施地力旺EM菌剂40kg。3、整畦前每亩用5000ml地力旺EM菌液配淡紫拟青霉1000ml，喷地然后整畦。二、蘸根处理：凡能蘸根的瓜果菜秧苗，定植时亩用100倍地力旺EM菌液配100倍淡紫拟青霉稀释液蘸根。三、灌根处理：1、定植后随水冲施地力旺EM菌液5000ml。2、以后浇水可用5000ml地力旺EM菌液代替冲施肥使用。四、叶面处理： 缓苗后，开始用地力旺EM菌液100ml配50ml氨基酸叶面肥兑水20kg均匀喷叶面，每10-15天一次。五、注意事项：1、作基肥或冲肥时要避开杀菌药物，最少间隔7天以上。2、叶面喷施首先将喷雾器冲刷干净，然后配兑以上两种喷施剂。3、叶面喷施一定要避开高温，30℃以上气温zuihao在下午4点半以后进行。4、要避开铜、锌制剂，以免杀灭有效活菌。5、不能与杀菌剂及碱性药物同时使用。六、技术特点：用本技术防治根结线虫，不再需用任何药物，按上述剂量施用，并严格按技术要求操作，当季防治效果达70%以上，第二茬继续使用此技术，根结线虫可有效防治。以上生物菌剂及氨基酸对瓜菜的增产效果极为明显，用此法不仅减少了药物投资，降低了农残，有效保护了土壤水源环境，又提高了产品品质，增加了产量，大大提高了经济效益。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              微生物实验开始前玻璃器皿的清洁与灭菌！百欧博伟生物 食品微生物检测实验室使用的玻璃器皿种类很多，应按不同的使用要求选择不同的玻璃品种，大多数选用中兴硬质玻璃（硼酸盐玻璃），硬质玻璃能耐高热、高压、抗温度急变性好、耐腐蚀性好，同时其中游离碱含量低，不会影响培养基的酸碱度。现将玻璃器皿的清洁与灭菌介绍如下。一、玻璃器皿的清洁1.新购进玻璃器皿的处理新购进玻璃器皿上一般附有游离碱性物质，不能直接使用，应在2%盐酸溶液中浸泡几小时，把表面的碱性中和后，再用肥皂水或洗衣粉洗刷玻璃器皿的内外，然后用清水反复冲洗，来出去残留的酸质，最后用蒸馏水冲洗干净。2.对反复使用的玻璃器皿的处理常用的玻璃器皿，如平皿、试管、烧杯、烧瓶等，要先高压灭菌（121℃、30min），趁热倒掉容器中的废弃物，以温水冲净，再加5%肥皂水煮沸5min，然后趁热洗刷干净，最后用蒸馏水冲洗干净。3.载玻片与盖玻片新买的载玻片与盖玻片，以新购进的玻璃器皿处理方法清洗;用过载玻片的可以放入2%来苏尔或5%石碳酸溶液中浸泡好后，取出后水洗，再用5%肥皂水煮沸20min，然后用毛刷蘸肥皂刷洗，最后用清水反复冲洗干净。载玻片浸泡在95%的酒精1min，取出用软布擦干，再放入盛蒸馏水的烧杯中浸泡5min以除去溶剂，烘干备用。4.清洁剂的种类及使用玻璃仪器常用的清洁剂是洗衣粉、去污粉、肥皂、洗液、有机溶剂等。对于可以用刷子直接刷洗的玻璃器皿，可用肥皂、洗衣粉、去污粉的水溶液直接刷洗。对于蒸馏瓶、容量瓶、移液管、滴定管等不容易用刷子刷的仪器，用洗液洗。洗液还可以用来洗刷子刷不下的顽固污渍和久置不用的器皿，洗刷顽固污渍时，要有足够的浸泡时间。使洗液与仪器表面的污物充分发生化学作用；有机溶剂可以用来去除器皿表面的油脂，如甲苯、二甲苯、汽油等；有的也可利用能与水混合又易挥发的特点去除仪器上的水，如酒精、乙醚等。5.玻璃仪器的洗涤方法与要求（1）人工清洗：带干净的手套或洗净手，用清水冲洗器皿；选择合适的洁净剂洗刷或浸泡；先用自来水冲洗，再用蒸馏水顺壁冲洗充分震荡，直至玻璃器皿上挂不住水珠，用指示剂检查为中性。（2）超声波清洗：加入清洗剂，利用清洗剂的化学作用和超声波的物理作用，达到对玻璃器皿的成分清洗的目的，超声波在30℃~40℃时净化效果最好，在实际工作中一般采用40℃~60℃的工作温度。用清洗剂洗刷完后，再用清水洗，直至达到玻璃器皿清洗要求。6.玻璃器皿洗刷应注意的问题含油脂（石蜡油、凡士林）的玻璃器皿要单独清洗，洗刷前尽量先去油，单独高压灭菌后，趁热倒掉污物，然后将玻璃器皿倒置于铺有粗吸水纸的铁丝筐内，放于100℃烘箱内0.5h，取出后再放入5%碳酸氢钠水中煮两次，然后用肥皂水刷洗干净，最后用蒸馏水冲洗干净。用来做荧光分析的玻璃器皿仪器应避免用洗衣粉洗，因洗衣粉中的荧光增白剂会影响实验结果。二、玻璃器皿的包扎玻璃器皿在灭菌前，应用纸或金属桶等包裹，防止消毒灭菌后，被外界的杂菌所污染。1.烧杯、三角瓶、试管等可用做好的合适的棉塞塞好，外面再用纸和细绳包扎一下，以防棉塞掉下。烧杯可用纸和绳包扎即可。烧杯、三角瓶和试管包扎见下图。2.培养皿可用牛皮纸或双层报纸单个或数个包成一包，也可直接放入特制的培养皿灭菌金属桶内，加盖灭菌。用牛皮纸或报纸包扎的过程如下图。（1）将12个玻璃培养皿按图2~4个堆放在牛皮纸或双层报纸（4开，39cm×54cm）上，两头拧紧。（2）用双手拇指和食指将纸边裹在平皿堆表面，同时用双手的无名指和小指挤紧平板。将平皿堆向前滚，顺势将纸紧紧包裹在平皿堆的外面，整个推进的过程中双手无名指和小指都要挤紧平板。包裹的松紧程度直接决定最终的包扎质量。（3）当纸全部包裹在平板堆表面后，将平板堆数值放在桌面上。将平板堆两头的纸依次叠好别紧。3.移液管在包装前先用长针等在上口处塞少量的棉花（勿用脱脂棉），既可防止吸取液体时，液体被吸出造成污染，又可对吹入吸管的空气起一个过滤作用。塞入的棉花的量要适宜，距管口约0.5cm左右，棉花的长度约1cm~1.5cm。棉花要塞得松紧适度，吹时既能通气又不能使棉花下滑。移液管可用纸分别卷包，也可用多支包成一束或装入金属桶进行灭菌。单支移液管的包装可先将牛皮纸（或报纸）剪成约5cm的长纸条，再将移液管的尖端放在纸的一段，约成45°角，折叠包好尖端，一手拿管身，一手压紧管和纸，在桌上向前搓滚，使纸成螺旋状把管包起来，上端剩余的纸条折叠后打结即可。见下图。三、玻璃器皿的灭菌1.干热灭菌玻璃器皿干燥包装后可在电热干燥箱内进行干热灭菌，加热160℃~180℃，维持2h。包装放置在干燥箱内，不要和箱壁接触，打开电源后，先把箱顶部的通气孔打开一点，让湿空气逸出，当箱内温度达到100℃后，关闭通气孔。调节温度控制旋钮到设定的温度，升温至所设定的温度时，维持1h~2h进行灭菌。灭菌完成后，关掉电源，冷却到60℃时，再打开箱门。温度控制旋钮归位，并打开顶部通气孔。灭菌后的器皿，要1周内用完。2.高压蒸汽灭菌在高压蒸汽灭菌器内进行，是一种最普遍的、有效的灭菌方法。

                     微生物菌种保藏的具体方法！一、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。　　一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。二、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。三、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。②砂土保存法：取清洁的砂，筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2～3cm深，再经干热灭菌后，加入1mL菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌，再进行菌种保藏。③硅胶保存法：以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热灭菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。④磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，z后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。⑤麸皮保存法：在麸皮内加入60%的水，经灭菌后接种培养，z后干燥保藏。⑥纸片(滤纸)保存法：将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。四、悬液保存法：即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的方法有：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。五、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。六、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，当采用这种保藏方法时，应注意以下几点：①要选择适于冷冻干燥的菌龄细胞。②要选择适宜的培养基，因为某些微生物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差异。③要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长。④z好在菌液内不添加电解质(如食盐等)。⑤可在菌液内添加甘油等保护剂，以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样，也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更有效。⑥原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静置一段时间后再进行处理。⑦就动物细胞而言，应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度；而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构较为复杂的原虫则可在-35℃范围内进行缓慢降温，而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻。⑧若进行长期保存，则贮藏温度越低越好。⑨取用冷冻保存的菌种时，应采取速融措施，即在35～40℃温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说，则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后，应尽量避免再次冷冻，否则菌体的存活率将显著下降。常用的冷冻保存法包括：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存；③液氮保存法(-196℃)：是适用范围z广的微生物保存法。其操作步骤如下：a、装安瓶管：使用尽量浓厚的菌体悬浮于含有适当防冻剂(保存霉菌不用防冻剂)的灭菌溶液中，将0.2～1mL的这种溶液分装于安瓶中，或在装有分散剂的安瓶中直接接种，或将菌丝体琼脂块直接悬浮于分散剂中。b、熔封安瓶管：若直接贮存于气相液氮中(-150℃～-170℃)时，则不需熔封。c、检查安瓶管是否熔封良好：即在4℃下，将熔封安瓶管在适当的色素溶液中浸泡2～30分钟后，观察有无色素进入安瓶。d、缓慢冷却：将熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮气以约1℃/min的速度冷却至-25℃左右，也可在-20℃～-25℃的冰箱内缓慢冷却30～60min。e、速冷：z后浸入液氮中快速冷却至-196℃。七、冷冻干燥保存法：其原理是首先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。事实上，从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种(包括噬菌体和立克次氏体等)的保存。在进行冷冻干燥时，需注意以下几个问题：　a、冷冻干燥前的培养条件：首先检验菌种纯度。一般地说，将待保存的微生物在营养丰富且容易增菌的培养基上进行培养为宜;菌龄以达到对数生长期为好;若为有芽孢或孢子的微生物，则以芽孢和孢子形成以后进行保存为好;菌液浓度以高为好，如细菌应达到109～1010/mL。b、菌株号码等的标记：可在安瓶外侧标记或在安瓶内封入标签。c、安瓶的准备：将安瓶在2%HCl中浸泡过夜，自来水冲洗3次后，蒸馏水刷净，干燥，塞棉塞，贴标签，干热灭菌或温热灭菌后，60℃恒温干燥。d、添加保护剂：常用的保护剂有脱脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的普通肉汤以及加7.5%葡萄糖的血清等。甘油管保藏法：在5mL菌种保藏管中，将等体积的菌悬液和40%的甘油充分混匀后，于-20℃冰箱中保存。八、甘油管保藏法：在5ml菌种保藏管中，将等体积的菌悬液和40%的甘油充分混匀后，于-20℃冰箱中保存。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    细胞和组织保持其形状的方法！百欧博伟生物：长期以来，科学家一直在思考身体的组织如何在面对生长，受伤和其他力量时保持僵硬。在一项新研究中，耶鲁大学的研究人员描述了这一神秘过程，这是健康细胞和组织功能的关键。为了探讨这个话题，zishen作者Stefania Nicoli和她的同事Martin Schwarz首先关注人体细胞，特别是控制动物组织刚性的成纤维细胞。他们发现，除了能够正向调节组织硬度的基因外，还有一个微小的RNA网络可以抵消这种僵硬。这些microRNA控制蛋白负责维持组织收缩，粘附和结构。这些基因一起创造了“机械稳态”或平衡，在压力下保持组织稳定性。研究小组在小鼠和斑马鱼的细胞中观察到了同样的现象，表明这种机制在脊椎动物中是常见的，可追溯到数百万年前。这一发现可以提供对纤维化发展的了解 - 可导致疾病的组织增厚和瘢痕形成。Nicoli说：“它可能能够解释早期纤维化疾病，”这是癌症和高血压等疾病的一个因素。“如果你足够早地发现纤维化过程，你可以逆转它。”欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   毛细管色谱柱的特点及分类方法！百欧博伟生物 毛细管色谱技术目前已用于各种复杂混合物分析，包括大气及环境污染物质、生物试样、食品、矿物燃料、宇宙物质和一些无机物及金属有机物等。 毛细管色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成，其两端的柱接头内装有筛板。今天小编主要给大家介绍一下毛细管色谱柱的特点及分类。一、毛细管色谱柱的特点色谱柱温度极限：一根色谱柱通常有两个温度极限，温度下限和温度上限。如果在低于温度下限的条件下实验，得到的色谱峰又圆又宽(柱效降低)。但是色谱柱并不会受到什么损坏。这样并不能发挥色谱柱的正常功能。在达到下限温度或者高于下限温度时，得到的色谱峰会有明显的好转。色谱柱容量：色谱柱容量是指色谱柱对一种溶质可容纳的zuida量值，一旦超过此数值，该溶质的色谱峰就会发生畸变，也就是说该溶质超载。超载的色谱峰并不均衡而且沿固定方向变化。一般我们称之为“鲨鳍”峰。二、毛细管色谱柱分类毛细管色谱柱可分为空心柱、填充毛细管柱、微填充柱及多孔层空心柱等类型。 1、空心柱又可分为涂壁空心柱（WCOT）和涂载体空心柱（SCOT）等：（1）WCOT柱是将固定液涂在经过预处理的毛细管内壁上，现在多数毛细管柱属于这种类型。（2）SCOT柱是先将载体（多用硅藻土）粘着在厚壁玻璃管内壁上，然后加热拉制成毛细管。载体均匀分布在毛细管的内壁上，再涂上固定液即成SCOT柱。它的柱容量比WCOT高。空心柱渗透性好，分析速度快。因无涡流扩散项，且传质阻力小，所以柱效极高，理论板数可达106.但柱容量低，进样量少，常需采用分流器。 2、填充毛细管柱将粒状固体如载体、吸附剂（Al203）装入玻璃管中，然后拉制成毛细管，使固体融入毛细管内壁，这样制成的填充毛细管柱既可以作为吸附柱，也可涂上固定液使用。其渗透率介于填充柱和毛细管柱之间，所以填充毛细管柱兼有填充柱和空心柱两者的优点，是较好的一类色谱柱。 3、微填充柱（micro-packed column）柱内径一般为0.5~1mm。与填充毛细管柱不同，它是先拉成毛细管后、再填入微粒固定相的。对填充物的机械强度、热稳定性要求不高，且填充物可涂任何固定液。由于固定液的用量较少，颗粒间空隙也小，故柱效高，理论板高可达0.3mm。微填充柱的优点是载气线速对柱效影响不大，故可提高载气流速，以进行快速分析；柱效高；试样处理量较大，可以不分流进样。 4、多孔层空心柱（PLOT）即在空心毛细管内壁上，用适当的方法沉积一层多孔性物质，它可以是吸附剂，也可以是涂固定液的载体。PLOT柱使空心柱的优越性得到更充分的发挥。与WCOT柱比较，PLOT柱柱容量大，内表面积大。它综合空心柱和填充毛细管柱的优点，因此有利于高效快速分析。 北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。中国微生物菌种查询网

                 食物中兽药残留的主要来源及危害！百欧博伟生物： 近年来，畜牧业的快速发展，兽药在畜牧业中的应用日益广泛，其在降低发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和改善产品品质方面的作用是十分明显的，已成为现代畜牧业中不可缺少的物质基础。但是兽药的使用无疑会导致动物体内的滞留或蓄积，并以残留的方式进入人体及生态系统。随着人们生活水平、生活质量的日益提高，广大民众越来越关注食品中兽药残留问题，无公害、绿色食品已摆到重要的议事日程上来。动物食品中的兽药残留已成为影响畜产品质量安全的主要因素，所谓兽药残留是指给动物用药后蓄积或贮存在细胞或器官内的药物原形、代谢产物和药物杂质。兽药残留对人体的危害有多种：如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和诱导耐药菌株等。其作用是慢性的、长期的和累积性的，往往易被人们所忽视。一、兽药残留的主要来源（一）兽药使用不当1、用药不当 用药的品种、剂型、剂量、部位或是超大剂量用药。2、标签外用药或药物标签上的用法指示不当。3、屠宰前用药物来改善症状、逃避屠宰前检查。4、不遵守休药期的规定。休药期指停止给药到允许动物屠宰或其产品上市的间隔时间，可以理解为从停止给药到保证所有食用组织中总残留浓度至安全浓度以下所需的时间。影响休药期的因素都可能导致兽药在动物性食品中残留。（1）剂型与给药途径不正确  剂型和给药途径能影响生物利用度、分布或代谢程度，最终使药物从体内消除时间发生变化。如长效制剂的使用，使药物从动物体内排泄时间延长，注射部位的组织中常滞留大量的药物，消除缓慢。如肌肉注射磺胺类药物30天内，有半数动物在注射局部组织中仍可检出药物。超剂量用药增大用药剂量可使兽药排泄延长。（2）日粮的影响  胃肠道充盈程度和日粮成分影响药物的吸收。如油脂能促进脂溶性药物的吸收，钙、镁等二价离子能与一些药物形成螯合物使吸收降低，如四环素类药物、氟喹诺酮类药物等。蛋白质、脂肪和维生素的摄入量会影响代谢酶的活性。（3）年龄、性别、种属、个体的影响  通常是综合性的，如肝的代谢功能、肾和胆管的排泄功能、药物分布容积和蛋白质结合率。这些直接影响药物在体内的代谢、结合和排泄。性别这种差异主要是由性激素水平认定的，一般雄性动物的药物代谢功能高于雌性动物。不同种属动物的代谢和排泄功能及其发育阶段有很大差异，如保泰松在人、牛、羊、猪和兔体内的血浆半衰期分别为72、55、19、4和3小时。当改变用药对象时对WDT的影响可能非常明显。个体差异，如代谢机能、体重等。妊娠由于受性激素的影响。妊娠动物的药物代谢能力下降。一些疾病能使肝、肾功能、药物分布容积和蛋白质结合量发生变化，有时可使WDT延长2倍以上。5、休药期结束前屠宰动物或是不遵守弃蛋期、弃奶期的规定。（二）违规使用饲料添加剂如瘦肉精的使用（盐酸克伦特罗）,对于动物可促进生长，提高瘦肉率，而对于人可导致食物中毒。（三）饲养、环境因素等1、饲料中存在药物、添加剂、防腐剂、镇静剂等，未在产品标签中示明，被动物养殖者误用。2、饲料加工过程中的设备污染而导致饲料被污染，如用盛装药物的容器来储存饲料。3、用抗生素发酵过的残渣饲喂动物。4、环境因素 动物在饲养过程中接触到一些被污染的水、粪、尿，如水或土壤中含有重金属汞、铜、镉和铅等。二、 畜产品中兽药残留的危害（一）对消费者健康的危害。1、一般毒性反应。外源性物质毒性作用与剂量和接触时间密切相关，主要是由于长期摄入可产生慢性或蓄积中毒。婴幼儿的药物代谢功能不完善，因此比较敏感。注射部位和一些代谢器官（如肝）常含有高浓度药物，摄入后出现中毒的机会将大大增加。有多种药物可产生毒性作用：氯霉素能导致严重的再生障碍性贫血，是diyi个被禁止使用的药物。人体对氯霉素较动物敏感，婴幼儿的代谢和排泄机能尚不完善，对氯霉素比较敏感，可出现致命的“灰婴综合症”。四环素类药物能够与骨骼中的钙结合，抑制骨骼和牙齿的发育。大环内酯类药物如红霉素，泰乐菌素多属碱性和脂溶性药物，在体内分布容积较高，易发生蓄积和慢性中毒，如肝损害和听觉障碍。氨基糖苷类药物如链霉素，庆大霉素和卡那霉素主要损害前庭和耳蜗神经，导致眩晕和听力减退。磺胺类药物组织残留和饲料污染严重，如磺胺二甲基嘧啶在连续给药中能够诱发啮齿动物甲状腺增生。对心血管的危害，引起心血管疾病。最常见的为“瘦肉精”，对于动物具有提高饲料转化率和瘦肉率的作用,它在肝、肺、和眼部组织中残留量高。人一次摄入100～200 g，组织所含的即可达到治疗剂量，往往出现副反应或其它危害，表现为头痛、狂燥不安、心动过速、血压下降等中毒症状。2、特殊毒性反应，引起“三致”效应。具有“三致”（致癌、致畸、致突变）作用的药物有多种如四环素、链霉素、黄曲霉毒素、多染类化合物等等。链酶素、治疗量的四环素具有致畸作用；黄曲霉毒素具有致肝癌作用；喹恶啉类，硝基呋喃类和硝基咪唑类药物急性中毒性较高，安全范围小，临床上中毒病例较多。多数药物在动物试验中具有“三致”效应，如喹乙醇，卡巴氧，硝基呋喃，一般要求在食品中不得检出。苯丙咪唑类药物能干扰细胞的有丝分裂，具有明显的致畸作用和潜在的致癌和突变效应。磺胺类药物具有致肿瘤倾向。喹诺酮类药物大部分具有光敏作用，个别品种在真核细胞内已显示致突变作用。杀虫剂特别是有机氯杀虫剂具有较高的脂溶性，可通过皮肤进入体内，或通过被污染的饮水、饲草等进入体内，并在体内积蓄，具有“三致”作用，尽管有机氯杀虫剂的应用范围已很有限，但仍需引起重视，因其能在外界环境中长期存在。激素类添加剂（促生长剂）残留的主要危害表现为：致癌，多数激素类药物都具有潜在的致癌作用。3、发育毒性（激素样效应）：女性化（雌激素类物质）或男性化（雄性激素类物质）。也就是对发育方面的影响，主要是激素类物质如人工合成激素类。4、过敏反应和变态反应：青霉素类药物使用广泛，其代谢和降解产物具有很强的致敏作用，轻的变态反应引起皮炎或皮肤瘙痒，严重的变态反应能导致过敏性休克，甚至危及生命。（二）诱导耐药菌珠由于滥用抗微生物药物的现象，尤其是使用治疗量抗微生物药（如饲料中抗生素添加剂），导致了耐药菌珠的产生，这可能给兽医临诊和医学临诊带来严重后果，将来可能出现对主要抗生素耐药的所谓“超级细菌”。这给临床治疗带来困难，给新药开发带来压力，由于耐药菌株的产生，使医疗费用过高，导致一些企业无利润或亏本。被诱导的耐药菌珠，特别是携带多抗性R-质粒的菌株，这些耐药菌株可通过食物链向人传播，组织残留物可能干扰人肠道内的正常菌群和诱导耐受的病原菌株。（三）免疫抑制   不少药物可以引起免疫抑制或免疫毒性，如使用作物杀虫剂后，作物籽实内可能存在没有降解的杀虫剂残留，这些残留物在动物体内引起淋巴细胞中毒而使免疫活性下降。另外一些重金属亦能引起淋巴细胞中毒而使免疫功能下降。（四）对环境和生态的影响动物排泄物中的抗微生物药物和耐药菌株被释放入环境后仍然具有活性。进入环境中的兽药残留，在多种因子的作用下，可产生转移、转化或在动植物中蓄积，污染环境、水源，对人类健康造成潜在的危害。（五）对其它方面的影响 兽药残留对经济和政治、食品加工、大众心理和养殖业自身等方面都有影响。三、 控制措施（一）建立健全法律法规，依法控制兽药残留。（二）规范兽药使用管理，建立质量安全追溯机制。（三）贯彻《兽医管理条例》，严格执行休药期规定。（四）加大兽药市场检查力度，严厉打击非法使用违禁药品、乱用滥用抗生素和药物添加剂等违法行为。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    实验室空间消毒灭菌方式与途径！实验室即进行试验的场所，是科技的产出地，是科学的摇篮，是科学研究的基地，科技发展的源泉，对科技发展起着非常重要的作用。进入二十世纪，各类实验室如雨后春笋，研究工作广泛开展。在科技发达的今天，对于实验室微生物的控制却是束手难测，实验室对洁净度要求比较高，必需严格控制空间微生物数量，防止杂菌污染目标菌种及器皿，且实验完毕后要对样本进行销毁、空间及器材进行消毒防止微生物对外环境污染。实验室的消毒，一直都是工作人员很头疼的问题。但是又必须做好，否则工作就没法很好的开展。即要达到灭菌消毒效果同时又不能使人员和设备受到危害。所以一般考虑用杀菌效果好的灭菌消毒剂，还要安全无毒副作用的。一般情况下，实验所用的物质都带有毒性，经常会产生各种难闻的，有腐蚀性的、有毒的或易爆的气体。这些有害气体如不及时排除室外，会造成室内空气污染，影响实验人员的健康与安全；影响仪器设备的精度和使用寿命。一、实验室空间污染源（1）在实验室当中的大部分实验员来自不同的生活环境，可能有一部分实验员缺少很好的自我卫生习惯，因此进入房间当中，所需要标本、模型让其操作道具，每一种模型会有很多人进行接触，标本在我们不知不觉当中已经变成了无形病毒的传播能够存在的介质，再加上某些实验员的不良习惯，尤其是部分实验员有吃食物的爱好，就能够使得病从口腔进入身体的情况出现。（2）实验室当中标本、物品很多，在实验员运用后，对于标本、模型采用置之不理得态度，能够使得标本以及道具沾染细菌。（3）实验室的消毒产品并不能进行全面杀毒灭菌，甚至一部分的实验室没有进行消毒杀菌。（4）实验室人员没有完全使用实验室制度来进行操作或者没有依照实验室的相关要求学生进行试验。（5）有些试验要求使用“菌罗”以及储存“菌落”的实验室不可以完全按照要求，在实验室操作实验员决定没有必要完全按照操作进行，因此对自我造成伤害。二、实验室空间污染分类实验室生物源危害主要是由微生物。尤其是病源微生物引起的。包括细菌。病毒。寄生虫等。在实验室内做试验、研究等操作时。实验人员需要处理大量的病源微生物，很容易引起污染。根据生物污染的对象，为空气污染、水污染、人体污染、物体表面污染等种类。1．对空气的污染：根据污染空间，可分为实验室内环境空气污染、实验室外环境空气污染。许多操作可产生气溶胶。气溶胶（aerosol），是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，又称气体分散体系。其分散相为固体或液体小质点，其大小为10﹣3cm～10﹣7cm，分散介质为气体。当气溶胶不能安全有效地限定在一定范围内，便导致实验室内空气污染。2．对水的污染：实验中会产生大量污水，医院污水尤其是传染病医院，综合医院传染病房的污水，有大量的有机悬浮物和固体残渣，还不同程度的含有多种细菌、病毒和寄生虫虫卵。这种污水不经处理直接排入江河、池塘或直接灌溉，可污染环境和水源。当人们接触成食用污染水时，可能使人致病或引起传染病的流行。3．对人体的感染：人是实验室污染最容易侵袭的对象。其污染途径包括接触污染物或吸入病源微生物气溶胶。原因有几下几种：（1）实验室事故引起的污染，通过器械、破碎且污染的玻璃器皿、针头刺破伤而发生。（2）实验室动物引起的感染。（3）气溶胶引起的感染，通过呼入被污染的气溶胶而感染。（4）其他：工作区与生活区相混，下班或餐前不洗手而感染。4．对物体表面的污染：实验人员的皮肤、鞋底、感染性物溢出或溅出后处理不当可造成墙壁、地面、台面、仪器和其他等物体表面的污染。三、实验室常用消毒剂1、紫外线灭菌　在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。紫外线的波长为200-300nm，其中以260nm的杀菌能力最强，但是由于紫外线的穿透物质的能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2m为宜。2、熏蒸灭菌　用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。它们使微生物的蛋白质变性，或竞争其酶系统，或降低其表面张力，增加菌体细胞浆膜的通透性，使细胞破裂或溶解。一般说来，温度越高，作用时间越长，杀菌效果越好。另外，由于消毒剂必须溶解于水才能发挥作用，所以要制成水溶状态，如升汞与高锰酸钾。还有消毒剂的浓度一般是浓度越大，杀菌能力越强，但石炭酸和酒精例外。常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5-8ml/m³用量，将甲醛置于广口容器中，加5g/m³高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。3、臭氧灭菌　臭氧极不稳定，分解时释放出自由基态氧，自由基态氧具有强氧化能力，可以穿透细胞壁，氧化分解细菌内部氧化葡萄糖所必须的葡萄糖氧化酶；也可以直接与细菌、病毒发生作用，破坏其细胞器和核糖核酸，分解DNA、RNA、蛋白质、脂质类和多糖等大分子聚合物，使细菌的物质代谢生长和繁殖过程遭到破坏；还可以渗透细胞膜组织，侵入细胞膜内作用于外膜脂蛋白和内部的脂多糖，促进细胞的溶解死亡，并且将死亡菌体内的遗传基因、寄生菌种、寄生病毒粒子、噬菌体、支原体及热原（细菌病毒代谢产物、内毒素）等溶解变性灭亡。实验室空间灭菌，消毒，是实验室的一个重点，也是难点，就算在严格的生物安全柜里操作也难以避免病毒气溶胶以气体扩散的形式逸散在空气中，还有阳性动物的呼吸等途径都会有机会给空气传上病毒分子。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              芽孢杆菌对水产养殖环境的净化作用！百欧博伟生物 近年来,随着水产养殖业的蓬勃发展,养殖品种的老化和退化,水产动物疾病的频繁发生,养殖水体环境的日益恶化,这三大问题已成为阻碍我国水产养殖业发展的瓶颈。尤其是以投饵为主的养殖模式,残饵、粪便、死亡生物的残体、养殖池塘底物的沉积物、氮(N)、磷(P)等富营养因子排入水体,养殖水体中的化学需要量(COD)、生物需要量(BOD)严重超标,使水体日益严重恶化,水产动物疾病频繁发生。据报道,人工投饵输入虾池的氮占总输入的氮的90%左右,其中仅有19%转化为虾体内的氮,其余的62%~68%的氮积累于虾池底部淤泥中,此外有8%~12%以悬浮颗粒氮溶解有机氮、溶解无机氮等形式存于池水中,这造成池塘水质的严重恶化。改善水生养殖环境,实行生物修复势在必行。 芽孢杆菌作为一种简易的细菌(真细菌),是土壤中的优势种群,能强烈地分解碳系、氮系、磷系、硫系污染物,分解蛋白质和复杂多糖,对水溶性有机物分解也有重要的作用,同时可以与养殖环境中的有害藻类及水产致病菌竞争,形成优势种群,抑制有害藻类及水产致病菌。由于它的特性与功能优于光合细菌而有望成为光和细菌的替代品,已成为当前国际净水界的研究热点。 ⒈芽孢杆菌的种类: 目前,可利用的芽孢杆菌有:枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、东洋芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、芽孢乳杆菌、丁酸梭等。 ⒉芽孢杆菌对水质净化的作用机理： 芽孢杆菌类净水微生物的使用,使养殖者在不中断养殖过程的情况下,清除长时间残留于养殖水域底部废物,尤其是老虾池底部积累的大量残余饵料、排泄废物、动植物残体以及有害气体(氨,硫化氢等),使之先分解为小分子(多肽、高级脂肪酸等),后分解为更小分子有机物 (氨基酸、低级脂肪酸、单糖、环烃等),最终分解为二氧化碳、硝酸盐、硫酸盐等,有效降低了水中的COD、BOD,使水体中的氨氮(NH4+-N)与亚硝酸氮(NO2--N)、硫化物浓度降低,从而有效地改善水质。同时还能为以单细胞藻类为主的浮游植物提供营养物质,促进繁殖。这些浮游植物的光合作用,又为池内底栖水产动物的呼吸、有机物的分解提供氧气,从而形成一个良性生态循环。 由于芽孢杆菌大量繁殖,在池内形成优势种群,可抑制病原微生物的繁殖,减少疾病发生。 ⒊芽孢杆菌对水生生态系统作用效果 ⑴去碳功能 芽孢杆菌具有丰富的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、脱氢酶、脱羧酶、氧化酶等能强烈的分解碳系污染物,分解蛋白质和复杂多糖,对水溶性有机物分解也有重要的作用。 养殖池塘内的悬浮物(简称“絮团”)和底泥严重恶化了水环境,引起动物发病。其中悬浮物由有机碎屑、细菌、藻类和矿物质等细微颗粒组成的胶粘状物;底泥由有机碎屑、细菌和藻类组成,含纤维素15%~60%,半纤维素10%~30%,木素5%~30%和蛋白质2%~15%,还含有可溶性物质如糖、氨基糖、有机酸和氨基酸,占干物质重的10%。而芽孢杆菌通过其酶的作用,能分解悬浮物和底泥,从而维持水生生态环境平衡。把芽孢杆菌(菌液浓度≥1010个/g)投入养殖池,能降低水中COD、BOD,有效改善水质和周围环境。 ⑵去氮、去硫功能 高密度集约化养殖给养殖池塘生态环境带来了严重的污染,研究表明,池塘每生产1吨虹鳟池塘总磷和总氮的负载分别为25.6kg和124.2kg。 过量的N、P排入水体引起池塘富营养化,在池塘内也易形成对水产动物有毒性的NH4+-N、H2S,影响动物的生长,甚至死亡。而芽孢杆菌可利用其丰富的酶,强烈分解氮系、硫系污染物,净化养殖水体。应用芽孢杆菌为主导菌的复合微生态制剂,含活菌数为109个/g,首次用量为1.5~5.0mg/L,结果增加溶解氧(DO),降低NH4+-N、NO2--N及H2S,改善了养殖环境,池水和底沙中的异养细菌数量明显增加。 ⑶分解淤泥 用芽孢杆菌为主的微生物复合制剂,其活菌数为109个/g,用量为1.5~4.5 mL/m3,经1个月试验表明,池底淤泥被分解了3~125px。利用芽孢杆菌制剂改良底质的应用实验结果表明,有机碳未出现积累,芽孢杆菌降解有机碳效果显著;总氮出现积累现象,处理组与实验组之间差异不显著;碳氮比在底质中呈下降趋势。 ⑷絮凝作用 芽孢杆菌有很好的絮凝作用,且复合芽孢菌株比单株芽孢杆菌的絮凝效果好。 这种絮凝作用可以将水体中的有机碎屑互相粘连在一起,构成菌胶团,担负氧化分解的任务,将有机物结合成絮状,使重金属离子、P元素沉淀,水体净化。 ⑸硝化作用 NO3-在芽孢杆菌作用下,经NO2-,NO,N2O被还原为N2,即芽孢杆菌是好氧菌和兼性厌氧菌,以分子氧为载体,在供氧不充分的时间与空间,可以利用硝酸盐为最终电子载体产生NO2--N和N2,而起反硝化作用,将硝酸盐移出系统外,提高pH。 总的来说,芽孢杆菌具有强烈的分解碳系、氮系、磷系、硫系污染物,分解蛋白质、复杂多糖、水溶性有机物的能力,已被广泛应用。为更好服务社会，创造双方利益zuida化，我们特设了中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

             组织石蜡包埋切片实验步骤与注意事项！百欧博伟生物：组织包埋是将客户组织标本通过固定，取材，脱水等过程后，用石蜡作为包埋剂，将组织标本包埋在石蜡中。组织石蜡包埋切片实验步骤1、取材：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。2、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。3、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。4、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。 切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。 实验注意事项：1、固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的10∽15倍。2、根据组织的不同和实验目的的不同，选取不同的固定剂。3、固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可从1小时到几时小时，有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的硬化作用较强，作用时间应严加控制，不能过长。4、取材切面要平整，厚度不易超过2mm，否则脱水效果不能， 5、对于有特许要求的组织，取材时要对目的组织的保留要完整。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                大鼠骨骼肌细胞原代分离培养方法！一、实验材料SD大鼠，细胞培养板，培养皿，小牛血清等二、实验步骤之固定⒈组织取材   SD 大鼠乙醚吸入麻醉后腹腔内注射氯胺酮(22 mg/kg)。 以左侧第 4 肋水平作横切口, 取胸大肌约 1 cm3 , 并将其修剪成 1 mm3 大小的肌小粒 。反复用Hanks 液洗去血细胞 , 将肌小粒小心贴附于事先用明胶包被的细胞培养瓶底部 , 加入适量成肌细胞增殖培养液(Ham' s F-10 培养基中加入15 %小牛血清、青霉素100 U/ml 、链霉素 100 U/ml)。将瓶底向上轻置于37℃、5 %CO2 、饱和湿度的培养箱中, 4 h 后轻轻翻转培养瓶 , 使肌小粒浸浴于培养液中。 3 d 换液一次 , 待细胞长满瓶底即可传代。 ⒉成肌细胞的培养 采用组织块培养法贴块 2 d 后即可见有细胞从肌小粒边缘爬出 , 细胞呈梭形, 胞浆透明。1 周后细胞可长满瓶底的 60 %～ 70 %, 其数目可达 105 , 此时细胞可呈多角形 , 充分伸展, 部分细胞密集区可见细胞呈向心性生长 , 相互间排列整齐 , 类似骨骼肌的纵切面。 ⒊成肌细胞的分化鉴定  将传代后的细胞接种至 6 孔板, 加入增殖培养液 , 待细胞长至80 %满时, 换入成肌细胞诱导分化液(低糖DMEM培养基中加入 2 %马血清、0 .5%鸡胚提取物、青霉0100 U/ml 、链霉素 100 U/ml), 换用诱导分化液后细胞可在 3 d 内分化 , 融合交织形成肌纤维, 可观察到收缩现象;并且部分细胞分化形成细长的肌管, 高倍镜下可见多个核及核分裂象。这些现象为成肌细胞所特有, 可以作为简便的鉴定方法。⒋成肌细胞的免疫荧光鉴定     免疫荧光在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min。PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min。水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗（Desmin结蛋白）并放入湿盒，4℃孵育过夜；加荧光二抗：PBS浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min。滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。 三、注意事项（1）原代培养材料的选择，尽量选取完整的组织。（2）要注意无菌操作。小心操作，避免污染细菌。其操作要求应高于外科手术。（3）整个取材操作要迅速，不能过长，以细胞活性。（4）运用消化法时胰酶温度应低于37℃，浓度只需平时消化细胞浓度的一半。所以胰酶不能作用过强，否则这些细胞易被损伤而不易生存。（5）使用组织块法，则应待组织块略干燥，能黏附于瓶壁时再使之与培养液接触，不要使组织块漂浮起来。如果组织块没有黏壁，则细胞不易生长，即使生长也因没有贴在瓶壁上，从而因不能观察到而无法收集到生长的细胞。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   常用的微生物染色方法有哪些？一、简单染色不同的细菌，或者由于观察者所侧重观察的内容不同一，所以所使用的染料也有差异，但是简单染色的方法是一样的。先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上菌膜区域，以覆盖菌膜为准。按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤(见图5-2)。zuihou得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。二、芽孢染色法芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌能产生内孢子，这些孢子耐高温、干旱及有毒化学试剂。内孢子还能抵制细菌染色液的进入，在革兰氏染色法涂片染色时，革兰氏阳性菌的芽孢呈现无色。然而，芽孢一旦着色后就很难脱色。虽然芽孢通常可在革兰氏染色片中看到(芽孢由于不易让染料进入多呈现无色),但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，更便于观察。其实验的操作方法与革兰氏染色类似。主要的芽孢染色法有以下两种。(一)孔雀绿染色法(1)将生有芽孢的斜而菌苔按革兰氏染色法涂片后，用饱和孔雀绿水溶液(约为7.6%)染10 min。(2)用自来水冲洗。(3)用0.5%番红液复染30%.(4)水洗，吸干。(5)镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈绿色。(二) 石炭酸复红染色法(1)按常规涂片。(2)滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。(3)涂片冷却后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。(4)彻底水洗。(5)用吕氏美蓝复染2 min -3 min。 (6)水洗、吸干。(7)镜检：镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。具体实验时，在对一些特殊芽孢染色时，需要对染色液和复染液进行修改。三、鞭毛染色鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，直径一般为10nm~20 nm,超出了光学显微镜的观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到鞭毛。通过使用特殊的染色技术，可以将染色液附加到鞭毛的周围，增加它的直径，从而能够在光学显微镜下观察到鞭毛，而且能检测鞭毛在细菌中的分布。尤其是鞭毛染色可用于区分假单胞菌科的一些有两极鞭毛的细菌和肠杆菌科有周身鞭毛的细菌(在运动时)。鞭毛十分细小，很容易从细菌上脱离，所以要得到非常满意的鞭毛染色玻片十分困难。另外，很多染色方法会产生沉淀物，这又使得观察鞭毛十分困难。鞭毛染色一般分为两类：一种是银盐法，使银在鞭毛上堆积；另一种是使用复红沉积在鞭毛上。(一)银盐沉积法(改进的Fontana方法)应使用绝对干净(无油脂)的载玻片进行染色，zuihao是新的无油载玻片。用过的载玻片要在酪酸洗液中浸泡，并用蒸馏水冲洗干净后方可再次使用。细菌在琼脂斜面上，比zuijia生长温度低3℃~5℃的温度下培养，可在斜面上加1滴~2滴灭菌的生理盐水保持湿度。(1)将载玻片在火焰上快速灼烧5s,放在染色架上冷却，用蜡笔分成两个区域(用镊子夹住载玻片的一端)。(2)用移液管或巴斯德移液管移取2mL无菌水加入到幼龄(通常为18 h)、生长活跃的斜面菌株中，慢慢振荡并旋转试管使菌株悬浮。建议尽量避免使用接种环。然后转移到干净的试管中，通过悬滴试验检查菌体的运动性。用无菌水将悬浮液稀释至略有浑浊为止。放入20 ℃ -30 ℃培养箱中培养30 min,然后移取一满环悬浮液加在已冷却的载玻片一端。倾斜载玻片让液滴流到蜡笔画的中心线。在空气中自然干燥，不要加热玻片。(3)用媒染色剂媒染5 min。(4)慢慢用蒸馏水充分漂洗掉所有的媒染液。(5)用热的Fontana银液覆盖，染色5 min,每隔1 min更换1次染色液( Fontana银液在沸水浴中加热)。细菌涂层的每一部分都始终要浸在染色液中，不能裸露。(6)用水冲洗，在空气中晾干，镜检。(二) Leifson替代染色法下述Leifson鞭毛染色法可以代替上述方法的(3) ~(6)。(1)滴加1 ml的Leifson鞭毛染色液，注意不要使染色液干燥，直到玻片上形成细微的铁锈色沉淀(约10 min) 。(2)慢慢地用蒸馏水充分冲洗干净。(3)用1%的亚甲基蓝复染5 min ~10 min。(4)用水洗净，空气中干燥，镜检。没有复染时，细胞和鞭毛都呈现桃红色，复染后，细胞染成蓝色，鞭毛染成红色。实验中需要注意的是鞭毛很容易脱落，若观察时视野中大多为周身鞭毛细胞，说明该菌是周毛菌，但若观察到一个明显的极端鞭毛细胞时，并不一定说明不是周毛菌。注意事项：(1)适宜的培养基、温度和通气条件下，以短期内多次连续接种培养的幼龄菌种鞭毛情况zuihao。因此，用于鞭毛染色的菌种常常用幼龄菌，菌龄老化或某些培养条件变化常导致鞭毛脱落或丧失。(2)玻片应清洁无油污。鞭毛非常纤细且容易脱落，故操作过程动作要轻。(3)染色法的染料须当日配制， 4 h内效果zuihao。所以鞭毛染色液zuihao现用现配。四、荚膜染色荚膜是某些细菌在新陈代谢过程中形成的，分泌于细胞壁外的一层胶状黏液性物质，主要化学成分是多糖类物质。荚膜的折光性低，易溶于水，与染料亲和力低，但荚膜的通透性比较好，某些染料可透过荚膜而使菌体着色。因此染色后在菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即为荚膜。一般采用负染色的方法，使背景与菌体之间形成一透明区，将菌体衬托出来便于观察分辨，故又称衬托法染色。因荚膜薄，且易变形，所以不能用加热法固定。具体操作步骤(见图5-8)。(一)制片加1滴6%葡萄糖水溶液于载玻片一端，无菌操作，挑取细菌斜面上培养72 h左右的胶质芽孢杆菌与其混合。(二)推片法制片加1滴墨汁充分混匀。用推片法制片，将菌液铺成薄层， 自然干燥。(三)固定滴加1滴~2滴无水乙醇覆盖涂片，固定1 min, 自然干燥；也可以不加处理， 自然干燥。注意：不能用火加热干燥。(四)结晶紫染色在已自然晾干的涂面上，滴加1%结晶紫染色液染色。(五)冲洗2 min后，以20%硫酸铜冲洗数次。再用自来水冲洗1次。(六)拭干水分后镜检用擦镜纸拭干水分后镜检。有荚膜的菌菌体呈紫色，背景灰黑色，荚膜不着色呈无色透明圈。无荚膜的菌，由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能出现一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜，荚膜不着色的部分宽。五、死活染色在显微镜下活细胞细胞膜完整、立体感强，细胞质透明度好，颗粒状物质少；死细胞膜破裂，无立体感，细胞通透性差，有颗粒状物质、空泡。染色排除法是生物研究中判断细胞活性的一种常用方法，简便，易于操作，实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。原理：因为活细胞的细胞膜具有选择透过性，细胞不需要的物质通常不进入细胞，染色剂中如台盼蓝能进入死细胞，从而可以使死细胞染色。依此染色便可以判断细胞的活性。活细胞必须要通过控制物质进出细胞膜来保持内部生理环境的稳定性。细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。常见的细胞染料有：中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双乙酸酯等。台盼蓝染料正常情况下被活细胞拦在细胞膜外，只有细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞，从而与解体的DNA结合，使其着色，因此，活细胞一般不被台盼蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。通过显微镜观察很容易识别出死亡的染色细胞，并可用细胞计数板进行计数。用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别。美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。活的酵母因为新陈代谢不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞不染色。因此，用美蓝对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，蓝色的为死细胞。需要注意的是：一个活细胞的还原能力是有限的，必须严格控制染色的时间和染料的浓度。方法：取0.1%美蓝液一滴，滴在玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混匀。染色3 min ~5 min后，加盖片制成水浸标本片，即可镜检，这种方法也适用于细菌和霉菌。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               微生物菌剂与微生物菌肥的区别与联系！微生物肥料：含有特定微生物活体的制品，应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。微生物肥料包含微生物接种剂（农用微生物菌剂）、复合微生物肥料、生物有机肥。1、农用微生物菌剂：目标微生物（有效菌）经过工业化生产扩繁后加工制成的活菌制剂，它具有直接或间接改良土壤、恢复地力，维持根际微生物区系平衡，降解有毒、有害物质等作用；应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长、改善农产品品质及农业生态环境。2、复合微生物肥料：目的为生物经工业化生产增殖后与营养物质复合而成的活菌制品。3、生物有机肥：特定功能微生物与主要以动植物残体（如畜禽粪便、农作物秸秆等）为来源，并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。微生物菌剂与微生物菌肥的区别：菌剂是农用微生物菌剂的简称，对应的标准是《农用微生物菌剂》（即微生物接种剂）（GB 20287-2006），是指1种或1种以上的目标微生物经工业化生产扩繁后直接使用或仅与利于该培养物存活的载体吸附所形成的活体制品，它是菌肥大类的其中一种。菌肥是老百姓和部分经销商对微生物肥料的简称，是指目标微生物经工业化生产扩繁后与营养物质等复合而成的、含有该培养物活体的制品，它在单位面积上的用量较大，目前可分为复合微生物肥料、生物有机肥和农用微生物菌剂，即涵盖菌剂。菌肥一般包装较大，多为40kg，也有25kg和50kg包装的，一般亩用量较大，按照目前全国各地亩有机质含量在1.0%左右的情况，一般果树要200-500公斤左右。大肥料菌肥目前的市场价格比较集中在2000-3000之间，以逐步成为市场的主流肥料。一般复合微生物肥料和生物有机肥的每亩使用量超过200kg，而农用微生物菌剂在单位面积上的用量少，一般每亩用量2-5kg。一般农用微生物菌剂简称菌剂，是小肥料，是配剂。把复合微生物肥料和生物有机肥简称菌肥，是大肥料。微生物菌剂与微生物菌肥的联系：在国家标准制定中，微生物菌剂是微生物肥料中的一类，目前在微生物菌剂产品登记的152种菌种中，使用频率较大的前10位菌种分别为：枯草芽孢杆菌、胶冻样类芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、酿酒酵母、侧孢短芽孢杆菌、细黄链霉菌、植物乳杆菌、黑曲霉，其中芽孢杆菌占75%。目前在市场上推广时，微生物菌剂按内含的微生物种类或功能特性分为：根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂；剂型以液体为主，也有粉剂、颗粒型。根据不同地区不同作物，微生物菌剂大多以4种方式使用，作底肥每亩用量2kg，耕地时均匀撒施；作追肥，每亩用量1-2kg追施；作滴灌与冲施，取清液配合常规肥料浇灌，残渣作基肥用，改良土壤；作种肥，适量拌种，按常规育苗或播种方法使用。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               大肠菌群平板计数法的常见问题有哪些？1、VRBA培养相关问题（1）所用器皿是否需要灭菌？答：不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留。煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般常用的卫生纸（软纸）覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。（2）如何保持“煮沸2min”？答：可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸，在该培养基即将煮沸时调低温度。实际操作时，不需要严格按照此要求进行，加热煮沸数秒即可。原因：本培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。（3）若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？答：不可以。4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌（即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象）。（4）倾注完成后是否需要“覆盖一层”？如何覆盖？答：一般情况下不需要覆盖。在实际操作过程中，若检验员初次接触该食品（或食品品类），则有必要在倾注培养基后再覆盖一层（原因是不清楚该样品是否会发生蔓延）。而如此往复测试几次后，若该样品或食品品类均不存在蔓延现象，则以后的实验中都不需要进行覆盖。若重复多次测试后都有蔓延现象，则以后的检验中zuihao都进行覆盖，zuihao是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。 2、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？答：建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验简单易操作，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心。3、两个梯度都长了菌，如何选取？答：选取15-150CFU之间的平板（指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围），挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明：若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间，则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验，实际操作时，可灵活操作，如：1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123，1:100的两个平板的菌落数分别为16、18，严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验，如此需要40根GBLB肉汤管。建议使用镍合金接种环（即传统的接种环，而不是一次性塑料接种环），因为VRBA上生长的菌落（无论典型或可疑）大部分长在底层、且菌落一般较大，被培养基覆盖，传统的接种环较细，用以刮去上层培养基较方便，挑取菌落也较方便。 4、如何进行证实试验？菌落选取数量？答：同上所述，建议新手们VRBA上的所有不同形态的菌落都进行证实试验。每种不同形态都挑取5-10个进行证实试验（若BGLB管足够，建议多挑取几个进行试验）。注意：A.每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1管GBLB管中；B.“产气者，记为大肠菌群阳性管”，就要求在实验前须认真筛选BGLB管，凡产气的GBLB管应弃去不用。 5、结果如何计算？答：首先，在VRBA培养24h后进行计数，分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群（何为可疑、何为典型？同“2”，检验员多进行几次实验后自然很清楚典型的大肠菌群是何种形态）的数量。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个，典型大肠菌群有6个；其次，进行证实试验，挑取上述可疑和典型大肠菌群各5个（或者全部挑取），假如10个可疑大肠菌群中有3个证实为阳性，6个典型大肠菌群中有5个证实为阳性，则计算方法如下：最终大肠菌群数=经证实的大肠菌群数=可疑大肠菌群经证实的数量+典型大肠菌群经证实的数量=10×（6/10）×10+6×（5/6）×10=110。 6、若平板上很多菌落，最终证实全部为阴性，结果如何计算？答：根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落（建议可疑和典型菌落分别挑取10个）进行证实试验，若第二次证实试验均呈阴性，以＜1乘以zuidi稀释度进行计算，如：1:10的平板菌落数分别为120、123，1:100的平板上菌落数分别为16、18，首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验，若全部为阴性，再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验，若1:10的平板上的菌落数证实为阴性，则最终计算过程为＜1x10，最终结果为＜10；若1:10的的平板上的菌落有阳性管，则按照第5条进行计算。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                  动物血清的常见问题及处理方法！          百欧博伟生物：最近在培养细胞中使用胎牛血清,由于发现有沉淀,不知是否变质,在查阅相关文献也没有得到确切的答案.因此不敢再用原来的血清,导致浪费.在这提醒大家做细胞培养时,要注意血清的分装.   血清是细胞培养中最重要的元素之一。在实验室操作中要注意的事项及处理方法如下：1. 血清保存 : 建议血清应保存在-5至-2O。然而，若存放于4时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2. 解冻血清的方法 : 建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4. 为什么要热灭活血清?加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 5. 有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量! 6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?胎牛血清没有预老化，储存在2－8时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20储存胎牛血清，避免反复冻融。7. 如何避免沉淀物的产生?解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20至4至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20至37)，实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。请勿将血清置于37太久。若在37放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

            表皮葡萄球菌的生物学性状与微生物检测！表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）是滋生于生物体表皮上的一种革兰氏阳性球菌，存在于人体的皮肤，阴道等部位，因常堆聚成葡萄串状，故命名为表皮葡萄球菌。该菌属正常菌群类型，多数为非致病菌，极少数可导致其他疾病，是医院发生交叉感染的重要来源。表皮葡萄球菌是临床上最常见的凝固酶阴性的葡萄球菌，是一种条件致病菌，一般粘附于人体的皮肤和黏膜组织。近年来，随着临床上侵袭性操作的增加，该球菌的临床感染率越来越高，已成为了目前医院重要的感染病原菌。随着临床上抗生素的广泛使用甚至滥用，导致表皮葡萄球菌耐药菌株日益增多，甚至出现多重耐药，给临床治疗带来巨大的困难。一、生物学性状1、形态与培养特性革兰氏阳性球菌，直径约0.5~1.5微米。因在多个不规则平面上进行分裂，故排列成葡萄状。营养要求不高，普通培养基上生长良好。需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适pH7.4。具有耐盐性，生长时需要生物素。在肉汤培养基中经37℃24小时孵育后，呈均匀混浊生长。在普通琼脂平板上形成凸起、光滑不透明的圆形菌落，直径1~2毫米。表皮葡萄球菌一般产生白色或柠檬色色素，故菌落呈现白色或柠檬色。自1955年起，在北美陆续发现少数产生紫色色素的表皮葡萄球菌。2、细胞壁化学组成表皮葡萄球菌细胞壁的基础成份是粘肽，间肽桥中的甘氨酸可以被一个或多个L丝氨酸代替。表皮葡萄球菌胞壁中也有磷壁酸，多数株是含有带α葡萄糖残基的甘油磷壁酸，仅个别株中发现核糖醇磷壁酸。细胞壁组成与金就菌的另一不同点是表皮葡萄球菌没有SPA。3、生化反应在有氧或无氧下，都可分解葡萄糖，产酸不产气。一般也分解乳糖和麦芽糖产酸。在厌氧下，一般不分解甘露醇。还原硝酸盐。可以通过精氨酸水解酶，分解精氨酸产氨。水解马尿酸。不能水解溶素（lysin）或鸟氨酸。很多表皮葡萄球菌株都产生磷酸酯、脂蛋白类脂酶和酯酶。有些菌株可产生溶菌酶和不耐热的核酸酶。二、分类与分型表皮葡萄球菌包括白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。在普通琼脂平板培养基上生长的菌落产生白色脂色素，呈白色菌落者，称为白色葡萄球菌，而产生柠檬色色素，使菌落呈柠檬色者，称为柠檬色葡萄球菌。现统称为表皮葡萄球菌。三、抗原结构葡萄球菌抗原构造复杂，已发现的在30种以上，其化学组成及生物学活性了解的仅少数几种。1、葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal protein A,SPA）。存在于菌细胞壁的一种表面蛋白，位于菌体表面，与胞壁的粘肽相结合。它与人及多种哺乳动物血清中的lgG的 Fc 段结合，因而可用含SPA的葡萄球菌作为载体，结合特异性抗体，进行协同凝集试验。A蛋白有抗吞噬作用，还有激活补体替代途等活性。SPA是一种单链多肽，与细胞壁肽聚糖呈共价结合，是完全抗原，具属特异性。2、多糖抗原。具有群特异性，存在于细胞壁，借此可以分群，A群多糖抗原体化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡胺核糖醇残基。B群化学组成是磷壁酸中的N-乙酰区糖胺甘油残基。3、荚膜抗原。几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别是菌株有此抗原。四、微生物学诊断不同病型采取不同检材如脓汁、血液、可疑食物、呕吐物及粪便等。1、直接涂片镜检取标本涂片，革兰氏染色后镜检，根据细菌形态，排列和染色性可作出初步诊断。2、分离培养与鉴定将标本接种于血琼脂平板，甘露醇和高盐培养基中进行分离培养，孵育后挑选可凝菌落进行涂片、染色、镜检。致病性葡萄球菌的主要特点：凝固酶产生阳性，金黄色素，发酵甘露醇。食物中毒病人的呕吐物，粪便或剩余食物在作细菌分离鉴定的同时，接种于肉汤培养基中，孵育后取滤液注射于6～8周龄的幼猫腹腔，注射后4小时内发生呕吐、腹泻、体温升高或死亡提示有肠毒素存在的可能。这年来，采用免疫学方法检测葡萄球菌肠毒素繁多，如反向间接血凝、ELISA、放射免疫等方法较快速敏感。五、致病性表皮葡萄球菌一般不产生外毒素（溶血毒素）、杀白细胞毒素和肠毒素，故侵袭力较弱，属于非致病性葡萄球菌。但在一定条件下，也可致病，引起化脓性感染，甚至引起败血症。另外，少数表皮葡萄球菌在适宜的条件下也可产生凝固酶、溶血毒素、肠毒素、杀白细胞毒素和红疹毒素，引起化脓性感染，成为细菌侵入血液，引起败血症的重要原因，特别多见于新生儿、早产儿、乳幼儿、老年人和某些慢性疾病，营养不良，免疫功能低下，发育不全，或是严重外伤、烧伤、大型手术、长期卧床、昏迷的病人。另外，也发现表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌一样，容易产生耐药性。表皮葡萄球菌由于产生广泛的耐药性，对过去敏感的常用抗生素产生耐药，因此，常使治疗无效，使病情恶化，并可引起严重毒血症引起中毒性休克、DIC、出血、中毒性心肌炎、中毒性脑病、中毒性肾炎，或发生迁徙性脓肿，引起多器官损害和功能衰竭，病情也极为严重和复杂，也可造成死亡。同时也是表皮葡萄球菌感染和败血症发病率增高的重要原因，也是目前临床治疗中的一个难题。所以对表皮葡萄球菌败血症，应给予足够的重视，积极采取有力的治疗和预防措施，防止病情的发展和恶化。六、防治原则加强卫生宣传教育，讲究个人卫生，皮肤创伤应及时处理，注意中西医结合，合理用药，避免滥用抗生素。