基因组DNA提取试剂盒的应用！一、背景基因组DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而破坏细胞壁的特性。试剂盒利用了氯化苄的这一特性，将植物样品冻结融解后，再使用Pipet Tip的jianduan将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用试剂盒从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。剂盒纯化得到的基因组DNA的长度最长可达50kb左右，平均为30kb左右，最短为100bp的DNA也可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括组织或细胞等，可以使用哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒。通过试剂盒获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.7至1.9之间。DNA提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组DNA提取试剂盒、中量全血基因组DNA提取试剂盒、组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、CTAB植物基因DNA提取试剂盒、新型植物基因组DNA提取试剂盒、酵母基因组DNA提取试剂盒、M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒。二、应用用于环介导等温扩增（LAMP）技术检测旋毛虫DNA的研究：通过建立高、中、低3种不同剂量旋毛虫感染小鼠模型,收集感染早期阶段的肌肉、血液、粪便样本进行LAMP检测,验证了该方法的高度敏感性和特异性,特别是对于肌肉中幼虫密度非常低时,该技术更突显其重要的检测和诊断价值。研究证明LAMP法比PCR法更敏感、快速、简便,有望在提高人及动物旋毛虫病的早期诊断,旋毛虫病的现场检测、肉类检疫及流行病学调查等领域发挥更大作用。材料和方法：旋毛虫虫种、实验动物、基因组DNA的提取本实验所用的虫种,旋毛虫河南猪源株(Trichinella spiralis,T1),北方旋毛虫(T.nativa,T2)、伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)、南方旋毛虫(纳氏旋毛虫,T.nelsoni,T7),来自国际旋毛虫参考中心(International Trichinella Reference Centre,ITRC)本实验室昆明小鼠传代保种。其他人体寄生蠕虫标本,包括似蚓蛔线虫、蛲虫、鞭虫、十二指肠钩口线虫、华支睾吸虫、布氏姜片虫、日本血虫、猪带绦虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫,均由本实验室保存。6w龄健康雄性昆明小鼠(SPF级),体重20g~25g,购买并饲养于军事医学科学院实验动物中心。旋毛虫及其他样本基因组DNA的提取采用天根公司的血液/组织/粪便基因组DNA提取试剂盒。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

            胎牛血清和新生牛血清的区别是什么？血清是一种chuntianran培养基，含有细胞生长繁殖所需的多种营养成分，如蛋白质、多肽等，多用于细胞培养、生物制品及诊断试剂的生产。 血清的主要成分是蛋白质，血清的组成成分与含量常常与供血动物性别、年龄、生理条件和营养条件有关。胎牛血清和新生牛血清的区别是什么？下面我们分别详细讲一讲：1、取血年龄不同牛血清按照牛取血时间或牛龄可进行区分。胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹得来的胎牛。 国产胎牛血清（并无明确定义，但通常以此称）的指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的牛，有时还称作国产新生牛。 新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS）指的是出生14天-3个月进行取血的牛。 成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛。 以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。2、组分与比例不同这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说，年龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。胎牛血清培养效果好于新生牛，且因为胎牛未进食过母乳，所以IgG含量低。3、用途与用法不同根据细胞所需生长条件可确定。如何正确保存血清？需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱（未开封血清有效期为5年）。若存放于4℃，请勿超过1个月，若一次无法用完一瓶，建议将血清无菌分装并冷冻。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

             微生物学检验实验室的规则及注意事项！一、微生物学及微生物学检验实验室的规则在进行微生物学实验时，须时刻牢记实验的对象是病原微生物，任何疏忽都可能导致严重的后果，不仅自身有可能招致感染，且有可能将病原微生物传给他人。因此决不能有丝毫侥幸心理，冒任何不必要的危险。进入实验室时必须遵守下列规则。1、进实验室时必须穿白大衣﹒离室时脱下反折，白大衣要经常清洗消毒。2、每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒药水泡手。3、书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、实验指导、笔记等带入后，放在指定的地方。4、每次实验后均用消毒药水擦洗工作台面，并用紫外线灯照射过夜。5、在实验室内不准吃东西、喝饮料和吸烟，不可把任何东西放入嘴中，也不要用手抚摸头面等部位。6、进入实验室要保持安静，禁止高声谈活，不准打闹嘻笑。7、必须按照指定的方法，小心地处理传染性材料、培养物和污染的物质，要正确地使用存放污染器材的各种消毒容器。8、接种环使用前后必须进行烧灼灭菌。9、必须小心地避免任何有菌材料的溅出，若不慎污染了工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师，以便及时作适当处理。10、培养物和传染性材料须放在工作台的安全部位，尽可能保持台面的清洁整齐。11、爱护公物，合理使用实验材料和器材，如不慎损坏了某些器具，应及时报告老师，听候处理。12、实验完毕后清理台面，将需培养的标本及时故入培养箱。关闭水、电、煤气和门窗后离开实验室。 二、实验室意外的紧急处理办法1、皮肤破损∶先除去异物，用蒸馏水或生理盐水洗净后，涂2%红汞或2%碘酒。2、烧伤﹔局部涂凡士林、5%鞣酸或2%苦味酸。3、化学药品腐蚀伤∶若为强酸，先用大量清水冲洗，再以5%碳酸氢钠溶液洗涤中和，强碱腐蚀伤时先以大量清水冲洗后，再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗涤中和。若受伤处是眼部，经过上述步骤处理后，再滴入橄榄油或液体石蜡1～2滴。4、菌液误入口中∶应立即吐入消毒容器内，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口﹔并根据菌种不同，服用抗菌药物预防感染。5、菌液流洒桌面∶将适量2%～3%来苏尔或0.1%新洁儿灭倒于污染面，浸泡半小时后抹去。若手上有活菌，亦应浸泡于上述消毒液3分钟后，再用肥皂和水清洗。6、火警∶如发生火警疫情时须沉着处理，切勿慌张，应立即关闭电闸和煤气阀门。如酒精、乙醚、汽油等有机溶液起火，切忌用水扑救，可用沙土等扑灭火苗。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

          乳品中活性益生菌选择性检测方法的研究进展！百欧博伟生物：随着人民生活水平的不断提高，乳制产品的种类日益丰富和多样化，人体所需的乳酸菌如嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌等通常被作为重要成分加入到各种乳产品当中。乳制品被人体摄入之后，其中包含的活性菌也同时进入到人体内部消化系统，它们能够帮助平衡肠胃功能健康，抑制对人体有害的各类细菌繁殖，能够显著提高人的身体健康水平。但不是随便摄入活性菌就能够起到这种效果，而是需要摄入人体内的活性菌达到一定的数量才能够有效发挥作用。科学表明，人体内部活性菌数量要达到 97cfu/ g (m L) 以上才能够具有明显效果。实际上，科学家在对市场上出售的各种乳制品的研究分析发现，大多产品中的包含的乳酸菌的活跃度与浓度都严重偏低，这一方面是由于生产企业不负责任所导致，另一方面也与当缺乏一种行之有效的活性乳酸菌检测工具有关，因此也不难理解当前市面上为什么存在那么多含超低乳酸菌的乳制品。为有效检测出乳制品中活性乳酸菌的活力和浓度，市场上和学术界都有必要尽快找到一种科学有效的计算方法。当前，对于嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等计数方法已有一些研究文献，但都不是在其纯度较低条件下的计数方法，笔者通过文献综述发现，关于其他菌类计数方面的研究也有学者尝试过，但并没有取得突破性进展。对此，本文在已有研究文献的基础上，总结了一种新的非纯度条件下对活性菌计数的方法，能够有效针对嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌进行科学合理的定量分析，为提高软制品产品品质提供可靠度科学测量工具。一、材料与方法1、供试菌种嗜热乳链球菌( Streptococcus thermophilus) 、保加利亚乳杆菌( Lactobacillus bulgaricus) 、嗜酸乳杆菌( Lactobacillus acidophilus) 、双歧杆菌( Bifidobacterium) 、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei) 均由华中农业大学生物科技学院微生物实验室提供。2、仪器与设备厌氧培养箱；厌氧培养罐；好氧培养箱。3、待检样品⑴已知菌样品： 以脱脂乳为培养基,在所需培养条件下分别培养供试的5 种菌,即为已知菌待检样品。⑵乳品样品： 为市售酸乳或乳酸菌发酵乳饮料, 均含有活性乳酸菌。二、结果与分析1、嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌对糖的利用情况将M R S 琼脂培养基中的葡萄糖分别以柳醇、纤维二糖、果糖、甘露醇、山梨醇等糖类代替, 配制成系列不同的M R S 琼脂培养基, 并制成平板, 分别接种ST 、LB、LA和BB 菌株, 在所需条件下培养, 观测平板上菌落的生长情况, 结果如表2 所示。从表2可以看出： 仅LA 可以利用柳醇, 故MRS-柳醇琼脂培养基可用于L A 的选择计数。当柳醇质量浓度为0. 5% 时, LA 便可形成大小合适的菌落。另外, M R S- 纤维二糖琼脂、MRS- 甘露醇琼脂和MRS- 山梨醇琼脂也可用于LA 的计数。2、不同培养基平板上ST、LB、LA、BB 和LC 形成的菌落数检测结果按照国内外文献介绍的zuixianjin的方法制成十种各不相同的实验培养基, 并制成平板,分别接种ST、LB、LA、BB 和LC 的纯培养菌株, 观察检测菌落的形成和数量，并分别做好相关试验数据记录。检测结果表明：s T-琼脂和M17-琼脂适合嗜热乳链球菌的计数; L C- 琼脂适合干酪乳杆菌的计数;M R S- N N L P 琼脂适合双歧杆菌的计数;MRS- pH5. 2 琼脂适合保加利亚乳杆菌的计数。MRS- 柳醇琼脂、MRS- 山梨醇琼脂、MRS-核糖琼脂和MRS- 葡萄糖酸盐琼脂均可用于LA 和LC 的计数, 但因LC- 琼脂培养基能抑制LA 和BB的生长, 从而适宜于L C 的选择计数, 因此当产品中只有L A和LC 存在时, 可用LC- 琼脂测定LC 的菌落数, 再用MRS- 柳醇琼脂或MRS- 山梨醇琼脂或MRS- 核糖琼脂或MRS- 葡萄糖酸盐琼脂测其总数,两者之差即为L A 的数量。3、对几种含LA 和BB 的市售乳品的检测结果通过使用上述培养基进行菌类培养成熟后，在对市面上出售的乳制品进行抽样检测， 从检测结果分析来看： 所选的培养基和培养条件适合对S T 、L B、L A 和B B的选择计数,对照样品的检测结果接近实际菌数, 同时还发现除了对照样品和加LA 与BB的酸乳中LA 和BB 的数量较高外, 其它市售酸乳中含的LA 和BB 菌数均较低。4、对几种市售产品中LC 的选择计数检测结果以L C- 琼脂培养基分别检测9 种市售乳品中干酪乳杆菌的数量, 其结果如表5 所示, 可见在其它乳酸菌存在下LC- 琼脂适合对干酪乳杆菌的选择计数。在所测的9 种产品中, 只有3 种干酪乳杆菌活菌数在106cfu/g( mL) 以上, 其余数量均较低, 而对照样品中的干酪乳杆菌数zuigao, 与实际数接近。三、结束语本文通过设计研究方案，对含活性乳酸菌乳制品中不同活性菌的计算方法进行尝试，并取得了不错的试验效果。本文发现：用R I-琼脂培养基来分离热乳链球菌能够收到显著效果; 可用K L-乳酸菌培养基来分离干酪乳杆菌;用NG V-MMWN氨基培养基分离双歧杆菌; N L H-p C7.1碳酸培养基分离和提取保加利亚乳杆菌; NUL-氧脂酸 分离和提取嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌; 如果只需要提取和分离嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌, 则可在计算其总数量之后，在用N L-碳酸基培养基分离干酪乳杆菌数, 剩余即为嗜酸乳杆菌数量。希望本文的研究能过为有关食品质量监督部门和生产企业提供一种科学可靠的活性菌检测工具，以提高市场上乳制产品的质量。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 质控菌株的分类及其存在的问题！在现代的微生物实验室中，质控菌株的使用不仅可以人员的控制成本，还提高了实验的成功率，那么大家知道它有哪些分类吗？它目前存在的问题又有哪些呢？下面，小编就为大家简单介绍一下。一、质控菌株基本分为两类：一类满足低浓度接种量需求，含菌量一般为　　另一类为满足高浓度接种量需求，含菌量一般在105-106cfu，为对防腐剂、抑菌剂及消毒剂等抗微生物活性物质的效能测试或挑战实验，该类实验对微生物有下降几个对数降的统计需求，因此需要相对浓度较高的菌液。二、质控菌株存在的问题：　　1、溯源问题：因其为商业派生菌株，因此其所使用菌株的可追溯性和分析证书相当重要，生产过程一定要受控并满足标准物质生产商的标准，在使用前其特性及纯度一定要进行确认。　　2、菌量稳定问题：产品应能确保同一批次及不同批次间的菌量稳定;另外在产品复溶后，在其规定条件的保存时间内应尽量使得菌量稳定，应尽量减少标准误差。3、产品运输及贮存时温度问题：因为为活体菌株产品因此其温度，特别高温对产品可能有一定影响，因此在运输及贮存过程中应严格依据产品温度要求进行。　　中国微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。jingzhun接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

                杂交瘤细胞无血清培养基的应用！一、背景杂交瘤细胞无血清培养基是化学成分明确、使用中不需添加血清的培养基，用于杂交瘤细胞的培养，以获取特定的单克隆抗体。使用杂交瘤细胞无血清培养基可简化后期蛋白纯化的环节，获得高表达量的单克隆抗体。无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及一些蛋白质和清蛋白，纤维蛋白，胎球蛋白等，这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能，如提供细胞贴壁所需的基质，抗生物反应器剪切力，作为脂质和其他生长分化因子的载体等。杂交瘤细胞是一种能分泌单一独特抗体的无限传代细胞。杂交瘤细胞技术首先由英国的Kohler和Mistein在1975年通过小鼠骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞融合而建立的。杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体在诊断、免疫、纯化、疫苗生产、治疗和基础研究等方面有着广泛的应用，已成为生物工程方面的重要产品。杂交瘤细胞的培养通常是在有血清培养基中进行的，虽然细胞密度和产物的浓度均较高，但由于血清中蛋白和其它大分子物质太复杂，影响了单克隆抗体的分离和纯化，使单克隆抗体的收率和纯度降低，限制了单克隆抗体的体内应用；同时，由于血清的添加也使生产成本大大提高。因此，许多科研工作者致力于开发无血清或低血清培养基。二、应用用于兔骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞的无血清培养驯化研究：针对兔单抗制备的工程细胞株,包括兔骨髓瘤细胞株和融合后的杂交瘤细胞株,开展无血清培养驯化,以去除培养基中血清成分。首先，选取四种不同种类的无血清培养基对兔骨髓瘤细胞株(240E-W2)进行无血清驯化培养,比较分析直接替换的速降方式和逐步替换的缓降方式,探讨不同驯化方式和不同的培养基的影响。发现1640AB培养基和CD Hybridoma Medium培养基按1:1配比,以缓降培养基内血清含量的方式,在贴壁培养的环境下从9%血清含量降至1%,经72h培养后细胞密度达4.0-5.0×105个/ml。其次，进行无血清悬浮培养驯化,提高初始接种密度为1.2×105个/ml,在悬浮培养条件下从1%血清含量成功降至0,经过72h培养后细胞密度可达4.0-6.0X 105个/ml,细胞状态良好。对细胞株进行多次亚克隆,挑选出最稳定的适应于无血清培养的兔骨髓瘤细胞株(240E-W2-SFM),建库保持。进一步筛选无血清冻存液,进行冻存复苏测试,以确保无血清冻存方式对细胞的生理活性没有负面影响。zuihou，完全适应于无血清悬浮培养的兔骨髓瘤细胞株(240E-W2-SFM)与兔脾脏细胞进行融合,构建杂交瘤细胞株,进行常规9%血清浓度培养和无血清同步维护对比,考察酶联免疫吸附阳性率,蛋白免疫印迹法阳性率、丢失率等,比较分析无血清培养对于杂交瘤细胞株的影响。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

             微生物菌种的扩大培养及污染的检测与判别！百欧博伟生物：现代工业的生产规模越来越大，每只发酵罐的容积有几十甚至几百立方米。因此要在短时间内完成发酵，必须要有数量巨大的微生物细胞才行。种子扩大培养的任务就是要获得数量足够的健壮的微生物。种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。微生物工业自从采用纯种发酵以来，产率有了很大的提高，然而防止杂菌污染的要求也更高了。人们在与杂菌污染的斗争中，积累总结出很多宝贵的经验。规范了管理措施，设计了一系列设备(例如密闭式发酵罐，培养基灭菌设备，无菌空气制备设备等)和管道，应用了无菌室甚至无菌车间，建立了无菌操作技术，因而大大降低了发酵染菌率。但是某些发酵工业还遭受着染菌的威胁，染菌后轻者影响产率、产物提取收得率和产品质量，重者造成“倒罐” ，不但浪费大量原材料，造成严重的经济损失，还会对周围环境造成破坏。凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染，及早发现杂菌并采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。因此检查的方法要求准确、快速。发酵污染可发生在各个时期。种子培养期染菌的危害zuida，因严格防止。一旦发现种子染菌，均应灭菌后弃去，并对种子罐及其管道进行彻底灭菌。发酵前期养分丰富，容易染菌，此时养分消耗不多，应将发酵液补足必要养分后迅速灭菌，并重新接种发酵。发酵中期染菌不但严重干扰生产菌株的代谢，而且会影响产物的生成，甚至使已形成的产物分解。由于发酵中期养分已被大量消耗，代谢产物的生成又不是很多，挽救处理比较困难，可考虑加入适量的抗生素或杀菌剂。如果是发酵后期染菌，此时产物积累已较多，糖等养分已接近耗尽，若染菌不严重，可继续进行发酵;若污染严重，可提钱放罐。染菌程度越重，危害越大;染菌少，对发酵的影响就小。所以，实际生产中，应当根据污染程度和发酵时期区别对待。一、实验器材与试剂1、器材高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、带摇床的培养箱、显微镜、天平、三角瓶、试管、移液管、培养皿、 接种针、平板涂布器、酒精灯、载玻片2、试剂营养琼脂、葡萄糖、磷酸二氢氨、七水合硫酸镁、氯化钠、磷酸氢二钾、牛肉膏、蛋白胨、0.4%酚红溶液、蒸馏水、番红染液、香柏油、擦镜液3、培养基(1)营养琼脂培养基：直接称量营养琼脂粉4.5g，溶于100mL蒸馏水配制，pH 7.2，分装到试管中，灭菌后摆成斜面。(2)种子培养基：葡萄糖0.5%、磷酸二氢氨0.1%、七水合硫酸镁 0.02%、氯化钠0.5%、磷酸氢二钾0.1%。(3)葡萄糖酚红肉汤培养基：牛肉膏0.3%、蛋白胨0.8%、葡萄糖 0.5%、氯化钠0.5%、0.4% 酚红溶液，pH 7.2。二、实验方法1、种子的扩大培养①斜面培养基的配制配制营养琼脂培养基，分装，灭菌(121℃条件下灭菌 30min)，倒斜面。②菌种的活化⑴将大肠杆菌采用无菌操作的方法接种于斜面上，37℃下培养18h;⑵培养18h后，观察菌落颜色是否一致，若均为黄色，挑取培养皿周边的菌落进行无菌检测;若颜色有黄有白，则两种颜色的菌落均要进行无菌检测。检测方法常用染色镜检，若检测后，没有污染，便可进行扩大培养;若检测到杂菌，要重复上述步骤，直到无菌为止，否则，不能继续下一步操作。③扩大培养在无菌条件下，从检测后的活化培养基上挑取10个左右菌落，用接种针接种到扩大培养基(即种子培养基)中，于37℃下振荡培16-18h，观察菌落形态。然后配合显微镜形态观察，根据结果来判断能否进行下一步。2、污染的检测和判别①显微镜检查⑴取样：用无菌操作方式取发酵液少许,涂布在载玻片上;⑵制片、染色：自然风干后,用番红染液染色1-2min，水洗;⑶干燥后用油镜下观察。②平板检查⑴配制营养琼脂培养基，灭菌，倒平板;⑵取少量待检发酵液经稀释 (大约10–6-10–7) 后涂布在营养琼脂平板上，在37℃下培养24h;⑶观察菌落形态。③肉汤培养检查法(用于检测培养基灭菌是否彻底)将1ml待测液(灭菌处理后的种子培养基)接入葡萄糖酚红肉汤培养基中，于37℃下培养24h，观察培养基的状态和颜色。三、实验结果1、种子的扩大培养观察到在活化培养基上长出大量菌落，且菌落颜色单一，均为淡黄色。挑取边缘菌落及形态一致的菌落少量，制作装片，染色后在显微镜下观察，发现多个视野中都为杆菌，可初步得出活化的菌种中没有污染杂菌。挑取没有污染杂菌的菌落，用无菌操作技术接种，进行扩大培养。在适宜条件下培养18h后，得到了大肠杆菌的种子液，吸取该种子液在显微镜下观察到有大量的大肠杆菌。2、显微镜检查镜检时，多个视野中均观察到的均为杆菌，呈链状或单个存在，没有观察到球菌或其它形态的的细菌，因此可初步认为该种子液中没有杂菌污染。3、平板检查从营养琼脂平板培养基上观察到菌落的形态为圆形、边缘整齐、表面光滑、半透明或乳白色、菌落上有小的突起，这是典型的大肠杆菌菌落，没有观察到其它形态的菌落，因此可初步认为该种子液中没有杂菌污染。4、肉汤检测培养基灭菌是否彻底葡萄糖酚红肉汤培养基中有酚红染液，酚红在酸性环境中呈黄色，碱性环境中呈红色。肉汤培养基中接种的待测液若有菌体存在，则菌体代谢会使培养基呈酸性，显示黄色。该肉汤培养基经培养后，仍呈现红色，没有变为黄色，且澄清，未浑浊，说明待测液中没有菌体存在，因此，所测的灭菌种子培养基中没有被菌体污染。四、实验讨论1、在种子的扩大培养前要对菌种进行活化培养以获得有活性的种子，若菌种已活化则可省略这一步。种子扩大培养时，如果低温保藏的菌种污染了杂菌，则应弃去或用平板培养基纯化后再用来活化和扩大培养。2、采用显微镜检查法，如果从视野中发现有与目标菌株不同形态的菌体则可认为是污染了杂菌，该法简便、快速，能及时检查出杂菌。但是也有其不足之处：①对含杂菌少的样品不易得出正确的结论，故应多检查几个视野;②由于菌体较小，本身又处于非同步状态，应注意不同生理状态下目标菌与杂菌的区别，必要时可用革兰染色、芽孢染色等辅助方法鉴别;③对固形物多的发酵液检查较困难。3、采用平板检查法，若出现与目标菌株形态不一的菌落，就表明可能被杂菌污染;若要进一步确证，可配合显微镜形态观察，若个体形态与菌落形态都与目标菌相异，则可确认污染了杂菌。此法适于固形物较多的发酵液检测，形象直观，肉眼可辨，不需仪器。但需严格执行无菌操作技术，所需时间较长，而且无法区分形态与目标菌相似的杂菌。在污染初期，目标菌占绝大部分，污染菌数量很少，所以要做比较多的平行试验才能检出污染菌。4、肉汤培养检查法只能用来检测培养基的灭菌是否彻底，不适用于发酵液的检查。5、可以用发酵参数判断法来检测是否有杂菌污染。即在发酵过程中，以发酵时间为横坐标，以溶解氧或排气中二氧化碳含量或发酵液的pH为纵坐标，作曲线，若在工艺不变的情况下这些特征性曲线发生变化，则很可能是污染了杂菌。但是，发酵参数判断法很难检查出早期的污染菌。五、结论了解了种子制备的方法和发酵污染的危害，知道染菌不仅浪费大量原材料，造成严重的经济损失，而且污染了环境，所以，在种子活化培养和扩大培养中每一步均需进行无杂菌检查。显微镜直接检查法和平板间接检查法都可以用来检测杂菌污染，方法较为简便、形象直观，但是，若要进行更准确的检测，zuihao再做较多的平行实验。肉汤培养检查法是用于检测培养基灭菌是否彻底的有效方法。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     实验用品的灭菌方法有哪些？微生物实验室常用的培养皿、三角瓶、吸管、试管、过滤器必须彻底灭菌，否则会影响实验结果。 一、实验用品的灭菌 1、高压蒸气灭菌。高压蒸气灭菌用121℃蒸气压力灭菌20-30min即可。高压蒸气灭菌后， 玻璃器皿上常常带有水珠，可再用烘箱烘干。2、干热灭菌干热灭菌用烘箱。通常于150-160℃灭菌2小时。温度不可过高，超过180℃时棉塞和纸张易烤焦起火。器皿放入烘箱之前必须是干燥的，以免引起玻璃的破碎。器皿在烘箱内不宜过满，应留有一定的空隙。温度应从室温逐渐升至所需温度。结束后也应逐步降温直至低于60℃时才可开门取出灭菌的器皿，否则玻璃可能因突然遇冷而破碎。 二、培养基的灭菌 培养基的灭菌可用湿热灭菌或过滤灭菌。湿热灭菌有高压蒸气灭菌和常压蒸气灭菌两种。1、高压蒸气灭菌在高压蒸气灭菌器中进行，利用提高蒸气压力而使温度增高的作用，因而提高了蒸气灭菌效力。蒸气压力和温度关系见表11-2。上表所列的温度是饱和蒸气压力下的温度。但如高压蒸气灭菌器中的空气未排净，那么实际温度就达不到应有的温度。例如，完全不排除灭菌器中的空气，当表压为1kg/cm2，实际温度仅为100℃；如排除灭菌器中1/2的空气，当表压为1kg/cm2气实际温度仅为112℃。因此使用高压蒸气灭菌时务必将其中空气全部排除，才能达到预期效果。一般培养基灭菌时大多使用1kg/cm2，15～20·min。如灭菌器中装填较满、培养基装量较大(1L以上）或培养基污染杂菌较多（如蚨皮）时，可适当延长灭菌时间达30min。个别情况下可用1 kg/cm2以上的蒸气压力灭菌。培养基中如含有高温时易分解破坏的物质（如某些含糖培养基），可采用较低的压力，如0.6～0.8kg/cm2。配制这种培养基时应尽量减少杂菌污染。所用的试管或三角瓶及其棉塞应先行灭菌。培养基中其他的耐热成分也可先行高压灭菌。加入不太耐热组分，分装后再用较低压力灭菌。2、常压蒸气灭菌也称作间歇蒸气灭菌，用于在100℃以上易千破坏的培养基的灭菌，如牛奶、明胶等。常压蒸气灭菌也就是用蒸气蒸。在灭菌器中温度升到100℃时，在不加压力的情况下使水保持沸腾，即保持lOO℃30 min。取出灭菌的培养基，放室温或保温箱中。第二、三日连续如上法于100℃各灭菌30min即可。细菌的营养体可在可在第二日的100℃30min杀死。第三日再将少数残留的细菌杀死，这样可达到完全灭菌的目的。3、过滤灭菌用于不能用热灭菌的培养基， 如某些易破坏或易挥发的物质。常用的除去细菌的过滤器有赛氏过滤器和微孔膜过滤器。这两种过滤器的形式大致相同，只是过滤板不同。过滤细菌用的赛氏过滤器的规格为EK,微孔膜的规格为0.22～0.45μm。使用前，将过滤器连同吸滤瓶等按无菌操作的要求装好，用纱布包好，高压蒸气灭菌。使用时用真空泵抽气吸滤，不可将漏斗中的液体抽干。使用过的滤板需弃去。有的微量物质，如指示剂颜色等可能被滤板吸附，从培养基中损失掉。赛氏过滤板尤其易吸附微量物质，使用时应注意。本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十一章。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zui优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     如何打造健康的微生物环境？小小微生物，不仅关乎我们的健康，还能影响我们的情绪和思想。我们对微生物不得不重视起来，如果我们拥有更健康的身心，就离不开一个健康的微生物环境，如何打造这个健康的微生物环境呢，有四个方向我们可以努力。补充益生元益生元是chuntianran、无毒害的补品，它的主要作用就是为微生物提供营养。我们平时在吃水果和蔬菜的过程中，就可以得到益生元的补充。补充益生菌益生菌也是一种细菌，它包括很多种类，比如有酵母菌、乳酸菌等。益生菌能起到促进肠道菌群生长的作用。我们喝酸奶、葡萄酒或者吃一些其他发酵型食物，其实也是对肠道里的益生菌的补充。排泄物移植排泄物移植是一项前沿医疗技术，目前已经应用于治疗腹泻病。不过在实验室中，排泄物移植已经能够治疗小白鼠的肥胖症，我们有理由相信这项技术未来会有更广泛的应用。疫苗疫苗的发明是医学发展中最伟大的里程碑之一。疫苗的zuida好处在于它可以定向杀死有害的微生物，而避开有益的微生物。目前，注射疫苗已经成了一种被大家熟知的公共卫生治疗方式，我们从小也注射过乙肝、麻疹、水痘等疫苗，这些疫苗对特定疾病的预防效果通常在90%以上。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             枯草杆菌黑色变种芽胞悬液的制备方法！1、以无菌操作方式开启菌种管，加入适量营养肉汤培养基，吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，置36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养肉汤培养基，置36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，即为第3代培养物。 2、用10.0 mL吸管吸取5.0 mL～10.0 mL第3代～5代的18 h～24 h营养肉汤培养物，接种于罗氏瓶（或细胞培养瓶）营养琼脂培养基表面，将其摇动使菌液布满培养基表面，将多余肉汤培养物吸出，罗氏瓶（或细胞培养瓶）置36 ℃±1 ℃恒温培养箱内培养5 d～7 d。3、用接种环取少许菌苔涂于玻片上，以改良芽胞染色法染色。改良芽胞染色法：用接种环取菌苔涂于玻片上，自然干燥后，通过火焰加热将菌固定于玻片上；将涂片放入平皿内，片上放两层滤纸，滴加足量的5.0%孔雀绿水溶液，将平皿盖好，置55 ℃±1 ℃加热30 min。取出，去滤纸，用自来水冲去残留液；加0.5%沙黄水溶液，1 min后水洗，待干后镜检。芽胞呈绿色，菌体呈红色。在显微镜（油镜）下镜检，当芽胞形成率达90%以上时，即可进行以下处理。否则，继续在室温下放置一定时间，直至达到上述芽胞形成率后再进行以下处理。4、加10.0 mL无菌蒸馏水于罗氏瓶（或细胞培养瓶）中，以L棒轻轻刮下菌苔，吸出，再加入5.0 mL无菌蒸馏水冲洗培养基表面，吸出。将两次吸出的菌悬液集中于含玻璃珠的无菌锥形烧瓶中，振摇5 min。 5、将烧瓶置45 ℃水浴24 h，使菌自溶断链，分散成单个芽胞。6、用无菌棉花或纱布过滤芽胞悬液，清除琼脂凝块。7、将芽胞悬液置无菌离心管内，以3000 r/min速度离心30 min。弃上清液，加蒸馏水吹吸使芽胞重新悬浮。再离心和重新悬浮清洗，本步骤重复进行3遍。8、将洗净的芽胞悬液放入含适量小玻璃珠的烧瓶内，80 ℃水浴10 min（或60 ℃水浴30 min），以杀灭残余的细菌繁殖体。待冷至室温后，摇匀分装后冷藏保存备用，有效使用期6个月。9、芽胞悬液在使用时，先进行活菌培养计数。10、怀疑有污染时，以菌落形态、革兰染色与生化试验等方法进行鉴定。本文节选自中华人民共和国卫生行业标准《WS/T 683—2020消毒试验用微生物要求》。中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！为更好服务社会，创造双方利益较大化，中国微生物菌种查询网提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。欢迎您的咨询！

                空气中传播的微生物是一种全球现象！百欧博伟生物：新南威尔士大学的研究人员发现，他们先前在南极洲的空气中生活的细菌的发现很可能在全球范围内发生，从而进一步支持了外来行星上微生物生命的潜在存在。在他们对2017年一项引人注目的研究的首次跟踪研究中，该研究表明南极微生物具有独特的基本生存能力，来自悉尼新南威尔士大学的研究人员现在发现，这一过程发生在世界三极的土壤中。具体来说，研究人员发现，负责发现大气化学合成现象的目标基因丰富且广泛分布在兴都库什-喜马拉雅山的南极，北极和青藏高原的极地土壤中。这项新的研究发表在本月的前沿杂志上，它是新南威尔士大学，澳大利亚南极分部和中国青藏高原研究所的合作。该研究的资深作者，新南威尔士大学科学系贝琳达·法拉利(Belinda Ferrari)副教授说，空气中的生存是一种极简主义的生存方式，他们的发现为微生物在其他行星上的生存提供了进一步的潜力。“这就是NASA的“火星2020恒心漫游者”计划的目的-在火星岩石和土壤的核心样本中寻找古代微生物生命的迹象，”法拉利教授说。“未来的任务将把样本带回地球，美国宇航局的科学家将以与我们类似的方式分析土壤，以尝试观察是否有生命指标。”法拉利教授说，研究人员的发现意味着，使用微量气体作为能源和碳源生长的微生物(与利用光的光合作用不同)并不是一个孤立于南极洲的过程。她说：“整个生态系统可能都依赖于这种新颖的微生物碳固定过程，其中微生物利用从大气中呼吸的氢气中吸收的能量，将大气中的二氧化碳转化为碳，以便生长。”“我们认为，当条件发生变化时，例如在没有光照的极地冬季，这一过程与光合作用同时发生。我们在三个极点的土壤中检测到了靶基因，这一事实表明这种新过程很可能发生在世界各地的寒冷沙漠中，但直到现在仍被人们忽略。”分析了南极，北冰洋和青藏高原土壤研究人员分析了南极洲(风车群岛和韦斯特福尔希尔斯)，北极和青藏高原的14个陆地冷沙漠地区的122个土壤样本，他们在2005年至2019年期间收集了这些样本。该研究的主要作者，UNSW博士。候选人安吉丽克·雷(Angelique Ray)说，研究小组在完成之前的研究时遇到的一大问题是，这种大气化学合成的新过程(也称为碳固定或碳汇)是否在世界其他地方也同样发生过她说：“因此，这次我们进行了一项全球研究。我们从三个极点的不同地点收集了土壤的最上层10厘米，这是我们研究的大多数生物被发现的深度。”“这些位置的地面在一年中的大部分时间里都是完全冻结的，土壤也很少，因为主要是岩石。”研究人员从土壤样品中提取DNA，然后对DNA进行测序，以检测负责碳固定过程的目标基因。雷女士说，科学家还对每个地点进行了环境分析，以衡量微生物的生存条件。她说：“通过查看土壤中的环境参数，我们才知道存在低碳，低水分和其他因素。”“因此，我们将碳固定过程的目标基因与不同位点相关联，发现营养较干燥且较低的位置(碳和氮)具有更大的潜力来支持该过程，这是有道理的。”研究发现改变了碳固定的观念法拉利教授说，研究人员的发现将改变科学家对生命存在的局限性以及微生物学的教授方式的思考方式。她说：“通过调查南极洲以外的地方，我们可以确定这种新的化学趋化形式对全球碳预算的贡献有多大。”“在我们发现这种新的碳汇过程之前，已知的两种主要化学趋化形式是光合作用和地热化学趋化-后者是细菌利用诸如硫化氢之类的无机化合物固定碳的方法。但是现在我们发现，该过程涉及的基因丰富在寒冷的沙漠中，尽管我们尚未研究热的沙漠，但我们的发现可能表明大气化学合成正在为全球碳预算做出贡献。”法拉利教授说，很可能仅在空气中存活的细菌已成为其生存环境的关键因素。她说：“这些生态系统中很多都非常干燥，营养缺乏。因此，这些地区大部分是细菌所主导。”“特别是在我们研究过的南极东部原始地点，除了苔藓和地衣(真菌)以外，别无其他。由于这些细菌能够生存并具有利用微量气体生存的能力，因此它们的环境选择了它们成为其生态系统的重要贡献者。”法拉利教授表示，研究人员期待在碳固定技术方面取得新发现。她说：“作为下一阶段的一部分，我们旨在在实验室中分离出一种新型细菌，以获得纯净的培养物。”“这很困难，因为细菌习惯于在极少的地方生长，而且琼脂平板与其自然环境不同。希望那时，我们能够充分了解这些细菌进行这种独特的空气生存过程所需要的条件。”欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 国外农业转基因生物安全管理概述！中国微生物菌种查询网：国际上农业转基因生物安全管理没有统一的模式，有的制定了独立的专门法律（欧盟、澳大利亚等），有的将其纳入现有法规的框架（美国），在管理的具体细节上各国间也存在明显的差异。美国、加拿大、欧盟、澳大利亚、日本等发达国家的生物技术研究和转基因生物安全管理起步早，已经形成了一套较为完善的管理体系，规范了农业转基因生物研究、开发、生产、应用和进出口活动，促进了转基因技术的发展。以产品为基础的美国模式 对转基因生物的管理依据产品的用途和特性来进行，在原有法规的基础上增加基因工程的内容，由分管部门负责制定相应的管理规章，认为转基因生物与非转基因生物在安全性方面没有本质的区别，一般只要求转基因产品达到与传统产品一样的安全标准，但是对一些安全性还缺乏充分认识的转基因生物及其产品（如质量性状、多基因和复合性状的转基因作物，医药和工业用转基因植物）就有十分严格的安全管理规定。 以过程为基础的欧盟模式 对转基因生物的管理基于研制过程来进行，着眼于研制过程中是否采用了转基因技术，认为转基因技术本身具有潜在的危险，所以采取单独立法的形式建立转基因生物安全管理法规体系、执法体系和技术体系。 中间模式 加拿大比较接近美国模式，澳大利亚接近欧盟模式，但都有自己的特点，甚至声称是世界上最好的管理体制。其突出的特点是：在加拿大农业转基因生物由农业部牵头统一管理，而在澳大利亚，国家颁布基因法，基因产品由新建立的基因技术行政长官及其办公室全权负责管理。 一、美国转基因生物安全管理美国有5个机构负责对转基因生物进行协调管理。其中，国立卫生研究院（NIH）早在1976年即制定了《重组DNA分子研究准则》，对实验室研究进行安全管理。职业安全与卫生管理局（OSHA）负责生物技术从业人员劳动保护方面的安全管理。而真正对农业转基因生物及其产品从研发到应用实施生物安全管理的政府部门主要是农业部（USDA）、环境保护局（EPA）和食品药物管理局（FDA）。这3个部门的管辖范围是按照转基因产品的用途来分工的，其中，农业部负责植物、兽用生物制品以及一切涉及植物病虫害等有害生物的产品的管理；环境保护局负责植物性农药、微生物农药、农药新用途及新型重组微生物的管理；食品药物管理局负责食品及食品添加剂、饲料、兽药、人药及医用设备的管理。因此根据产品性质和用途的不同，一个产品可能受一个部门管理，也可能受2个甚至3个部门管理。在转基因植物的管理上，农业部负责作物种植生产的安全性，食品药物管理局负责食品和药物的安全性，环境保护局负责涉及农药应用的环境安全性，3个部门相互协调工作。二、欧盟转基因生物安全管理欧盟对转基因生物及其产品的安全管理经历了一个比较复杂的变化过程。欧盟转基因生物安全管理法规、执法管理机构和技术支撑体系都先后发生了较大的变化，但其以 技术为基础实施安全管理的根本思想没有发生变化，即产品研发过程中是否采用了转基 因技术。欧盟与农业转基因生物安全相关的主要法规包括两大类：一类是横向系列的法规；另一类是与产品相关的法规。前者包括基因修饰微生物的封闭使用指令，基因修饰生物（GMOs）的有意释放指令，基因工程工作人员劳动保护指令；后者则包括基因修饰生物及其产品进入市场的指令，基因修饰生物与病原生物体运输的指令，饲料添加剂指令，医药用品指令和新食品指令等。自1990年始，欧盟由第十一总司（环境、核安全以及公民保护）负责转基因生物安全横向系列法规管理。而涉及产品相关法规的管理机构较多，包括工业总司、农业总司、运输总司。此外，还有科学、研究与发展总司，欧盟联合生物技术联合研究中心，以及环境系统、信息、安全联合研究中心，为研究开发、安全评价、检测等工作提供服务；消费者政策与消费者健康保护及植物科学委员会负责转基因生物及其产品应用于人类、动物及植物的相关科技问题，以及除食品外的可能影响人类、动物健康或环境的转基因产品如杀虫剂的管理。2004年开始，欧盟对转基因生物及其产品实行集中管理，主要由新成立的食品安全管理局（EFSA）负责农业转基因生物安全管理。现行的转基因生物安全管理法规依然有水平系列和产品系列两类法规，主要包括《关于转基因生物有意环境释放的指令》（2001/18/EC指令）、《关于转基因微生物封闭使用的指令》（98/81/EC指令）、《关于转基因食品和饲料条例》（1829/2003条例）及其实施细则（641/2004条例）、《关于转基因生物的可追踪性和标识及由转基因生物制成的食品和饲料产品的可追踪性条例》（1830/2003条例）。此外，欧盟各国还有本国各自的农业转基因生物安全管理法规体系。各国的国内法一方面随着欧盟法规的变化而进行相应的修订和调整，同时也根据各自具体情况，制定了适于本国国情和利益的转基因生物安全管理法规、程序和要求。总体而言，欧盟及其成员国转基因生物安全管理法规体系比较复杂，意见难以统一，决策时间长。三、国际组织农业转基因生物安全管理自20世纪80年代后期开始，联合国粮农组织（FAO）、世界卫生组织（WHO）等国际组织就开始制定关于转基因植物及其产品的安全评价规范，致力于转基因生物安全的国际协调管理。联合国粮农组织（FAO）、工业发展组织（UNIDO）、经济合作与发展组织（OECD）、国际食品法典委员会（CAC）、世界卫生组织（WHO）以及环境规划署（UNEP）等国际组织组织制定了一系列有关农业转基因生物安全管理的法规和准则。国际食品法典委员会针对转基因食品安全管理制定了一系列指导原则和规范。在《21世纪议程》《生物多样性公约》《关于环境与发展的里约宣言》和《卡塔赫纳生物安全议定书》中，分别对转基因生物及其产品安全管理的原则和程序进行了规定。世贸组织（WTO）则考虑在《卫生与植物卫生条约》（SPS）和《贸易技术壁垒条约》（TBT）的基础上，制定有关转基因产品（特别是转基因农产品）安全管理和标识制度的规定。国外转基因生物安全管理特点与趋势尽管各国农业转基因生物安全管理的制度不同，但是，美国、欧盟、加拿大、澳大利亚、日本等均已形成了稳定和比较完善的转基因生物安全管理法律法规体系。在这些发达国家之间存在一些共同的特点。了解这些特点对于我国加强转基因生物安全管理具有重要的参考意义。一、法律法规体系不断完善，与保障安全维护国家权益相适应自1980年代中期以来，各国政府和国际组织纷纷立法，从最大程度维护本国利益出发，制定了一系列明确、具体的法规、程序和规范，对转基因生物从研发、应用到上市后监管和进出口活动实施全面的安全管理。随着转基因技术研究及其产业化的不断发展，转基因生物安全知识和管理经验的不断积累，各国有关转基因生物安全管理的法规也不断修订、补充和完善，经过近20年的发展，现已形成一套比较完善的转基因生物安全管理法律法规体系。欧盟则针对转基因技术单独立法。欧盟转基因生物安全管理法规主要包括两大类: 一是水平系列的法规，包括《关于转基因生物有意环境释放的指令》（2001/18/EC指令）和《关于转基因微生物封闭使用的指令》（98/81/EC指令）；二是与产品相关的法规，包括《关于转基因食品和饲料条例》（1829/2003条例）及其实施细则（641/ 2004条例）和《关于转基因生物的可追踪性和标识及由转基因生物制成的食品和饲料产品的可追踪性条例》（1830/2003条例）。澳大利亚、新西兰、日本、韩国、俄罗斯和印度等国对转基因产品的研究和应用进行严格管理，并（拟）对转基因食品实行标识制度。澳大利亚发布了《基因技术法》和《基因技术管理条例》。 二、行政监督管理有效，与生物产业发展相适应依法加强行政监管是世界各国推进转基因生物安全管理的共识。美国、加拿大、欧盟等发达国家（集团）均以法律为武器、行政监管为手段，加强管理机构建设，形成了一套机构健全、队伍稳定、责职分明、全程监管、应变迅速、高效可靠的转基因生物安全行政监管体系，以适应其经济和产业发展需要，保护本国生物安全和经济发展。日本对转基因产品的监督单位主要是农林水产省下设的独立法人单位“农林水产 消费技术中心”。该中心在全国设有7个分中心，分别负责不同地区产品标识情况的调查和监督。 三、技术支撑体系健全，与风险分析要求相适应为了确保生物安全风险分析的高水平和高质量，世界各发达国家纷纷投巨资加强农业转基因生物安全研究和安全评价与技术检测监测机构能力建设，已经形成了与风险分析相适应、实力强、水平高、中立、权威的转基因生物安全技术支撑体系。近年来，欧盟、美国和日本等国在已有良好基础的条件下，继续加大对农业转基因生物安全性科学研究的力度，持续增加有关生物安全评价、检测、监测和监控机构建设等相关基础设施的投入和政策支持。这些国家的生物安全技术支撑体系健全，无论是国家级安全研究、 安全评价、安全检测机构，还是地方级安全监控单位与生态环境监测点，都拥有专职的技术人员、先进的实验设施条件、现代化的信息服务网络，以及安全、配套的转基因生物测试、示范和监测基地（基点）。 四、公众广泛参与，与社会发展相适应国外十分重视转基因生物管理过程中的科学性和透明度，本着公开透明、尊重民意、以人为本的思想，采取多种有效形式方便公众参与，有的国家甚至在转基因生物安全管理的全过程都有社会公众的参与。近年来，日本十分重视公众对转基因生物安全管理的态度，针对消费者对转基因产品的认识、担心、信赖等问题，开展广泛的社会调查。农林水产省设立了消费者接待室，用图、文、实物展示生物技术的原理、过程，以消除消费者的疑虑。厚生劳动省则由专家、生产者和消费者代表组成常任机构对转基因生物的安全评价结果进行审议。

                 微生物实验室的管理制度有哪些？一、实验室管理制度 1、实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理、使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。2、进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。3、实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。4、各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出。5、禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水电，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。6、负责人严格执行本制度，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。二、仪器配备、管理使用制度1、食品微生物实验室应根据情况配备下列仪器：培养箱、高压灭菌锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、冷冻干燥设备、均质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH计、高速离心机等。2、实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。3、实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，由经理同意填报修理申请、送仪器维修部门。4、各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。5、一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。6、仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。7、使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。三、药品管理、使用制度1、依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立账目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。2、药品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。3、领用药品试剂，需填写请领单、由使用人和室负责人签字，任何人无权私自出借或馈送药品试剂，本单位科、室间或外单位互借时需经科室负责人签字。4、称取药品试剂应按操作规范进行，用后盖好，必要时可封口或黑纸包裹，不使用过期或变质药品。四、玻璃器皿管理、使用制度1、根据测试项目的要求，申报玻璃仪器的采购计划、详细注明规格、产地、数量、要求，硬质中性玻璃仪器应经计量验证合格。2、大型器皿建立账目，每年清查一次，一般低值易耗器皿损坏后随时填写损耗登记清单。3、玻璃器皿使用前应除去污垢，并用清洁液或2%稀盐酸溶液浸泡24 h后，用清水冲洗干净备用。4、器皿使用后随时清洗，染菌后应严格高压灭菌，不得乱弃乱扔。五、安全制度1、进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。2、在进行高压、消毒等工作时，工作人员不得擅自离现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行，试验过程中如产生毒气时应在通风橱内操作，检测致病菌必须在生物安全柜内操作。3、严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。4、实验完毕，即时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理。5、每日下班，尤其节假日前后认真检查水、电和正在使用的仪器设备，关好门窗，方可离去。六、环境条件要求1、实验室内要经常保持清洁卫生，每天上下班应进行清扫整理，桌柜等表面应每天擦拭，保持无尘，杜绝污染。2、实验室应井然有序，不得存放实验室外及个人物品、仪器等，实验室用品要摆放合理，并有固定位置。3、随时保持实验室卫生，不得乱扔纸屑等杂物，测试用过的废弃物要倒在固定的箱筒内，并及时处理。4、实验室应具有优良的采光条件和照明设备。5、实验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙壁和地面应当光滑和容易清洗。6、实验室布局要合理，一般实验室应有准备间和无菌室，无菌室应有良好的通风条件，如安装空调设备及过滤设备，无菌室内空气测试应基本达到无菌，检测致病菌应建有生物安全实验室。7、严禁利用实验室作会议室及其他文娱活动和学习场所。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               几种常见的微生物基础实验原理与方法！百欧博伟生物：本文介绍几种常见的微生物基础试验的目的、原理、内容等，以便刚刚接触微生物的同志们对试验有个基本的认识。 实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的1、掌握配制培养基的一般方法和步骤;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。2、了解培养基的配制原理;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法。二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物.培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水.根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。三、试剂与器材1、器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。2、试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂。四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温摇床→降温→开箱取物3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1、要严格按配方配制。2、调pH不要过头。3、干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物。4、高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。5、过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。六、思考题1、培养基配好后,为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么？3、培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么？4、培养基的配制原则是什么？实验二 土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的1、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术;掌握微生物培养方法。2、了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征;进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化.常用的分离、纯化方法:单细胞挑取法,稀释涂布平板法,稀释混合平板法,平板划线法.稀释涂布平板法步骤:倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落.平板划线法步骤:倒平板－标记培养基名称－划线.三、试剂与器材1、器材 盛9ml无菌水的试管、盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。2、试剂 牛肉膏蛋白胨培养基,高氏1号培养基,查氏培养基四、实验内容1、土壤稀释液的制备2、微生物分离纯化:稀释涂平板法,平皿划线分离法,微生物培养技术五、关键步骤及注意事项1、掌握含菌培养基的配制,严格控制温度.2、平板划线应防止染菌,同时应注意划线深度及密度.六、思考题1、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤.2、如果要分离得到极端嗜盐细菌,在什么地方取样品为宜？并说明理由. 实验三 菌种保藏一、实验目的1、学习并掌握菌种保藏的基本原理.2、掌握常用的几种不同的菌种保藏方法.二、实验原理微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快,如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染,甚至导致细胞死亡等现象.因此,保存好菌种是非常必要和重要的.常用的菌种保藏方法包括传代培养法、载体法、悬液法、冷冻法和真空干燥法。三、试剂与器材1、材料 大肠杆菌、青霉菌、放线菌2、试剂 液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰3、器材 无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿;安额管、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条(0.5X1、2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。四、实验内容1、斜面保藏法2、液体石蜡法3、穿刺保藏法4、砂土管保藏法5、冷冻真空干燥保存法五、关键步骤及注意事项1、清楚各种保藏方法的优缺点,针对不同要求选择适宜的保藏方法.2、熔封安瓶时防止封闭不严.3、液氮冻存操作应防止冻伤.六、思考题根据你自己的实验谈谈1--2种菌种保藏方法的利弊？实验四 细菌形态观察及单染色一、实验目的1、了解简单染色法的原理,并掌握其操作方法.2、学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术.3、巩固显微镜(油镜)的使用方法.4、初步认识细菌的形态特征.二、实验原理细菌个体微小,且较透明,必须借助染色法使菌体着色,与背景形成鲜明的对比,以便在显微镜下进行观察.根据实验目的不同,可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等.简单染色法是最基本的染色方法,是利用单一染料对细菌进行染色.此法操作简便,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察.常用碱性染料进行简单染色。三、试剂与器材1、材料 大肠杆菌,枯草芽孢杆菌2、试剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)、齐氏石炭酸复红染液.3、器材 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等.四、实验内容简单染色法:涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检五、关键步骤及注意事项1、涂片时,生理盐水及取菌不宜过多,涂片应尽可能均匀,2、水洗步骤水流不宜过大,过急,以免涂片薄膜脱落.六、思考题1、你认为制备细菌染色标本时,尤其应该注意哪些环币?2、为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?3、如果你的涂片未经热固定,将会出现什么问题?如果加热温度过高。实验五 放线菌及霉菌形态观察一、实验目的 　　1、了解放线菌、霉菌形态观察的原理; 　　2、学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法; 　　3、初步了解放线菌、霉菌的形态特征.二、实验原理 　　放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌.常见放线菌大多能形成菌丝体,紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”),基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”),并进一步分化产生孢子丝及孢子.有的放线菌只产生基丝而无气丝.在显微镜下直接观察时,气丝在上层、基丝在下层,气丝色暗,基丝较透明.孢子丝依种类的不同,有直、波曲、各种螺旋形或轮生。　　霉菌可产生复合分枝的菌丝体,分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子.霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝) 及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据.霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多,常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察.人们设计了各种培养和观察方法,这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征.本实验采用插片法。　插片法：将放线菌接种在琼脂平板上,插上灭菌盖玻片后培养,使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上.观察时,轻轻取出盖玻片,置于载玻片上直接镜检.这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征,而且便于观察不同生长期的形态。三、试剂与器材 　　1、材料 黑曲霉、青霉和根霉,细黄链霉菌或青色链霉菌,灭菌的高氏I号琼脂和灭菌的查氏培养基。　2、实验器材 经灭菌的:平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒,以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。四、实验内容 　　倒平板→接种→插片→培养→镜检五、关键步骤及注意事项 　　1、倒平板要厚一些,接种时划线要密. 　　2、插片时要有一定角度并与划线垂直. 　　3、观察时,宜用略暗光线;先用低倍镜找到适当视野,更换高倍镜观察. 　　4、如果用0、1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察,效果会更好.六、思考题 　　1、镜检时,你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？　　2、你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？实验六 革兰氏染色及芽孢染色一、实验目的1、了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理,并掌握其操作方法;2、了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性;3、学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术;4、学习显微镜(油镜)的使用方法;5、初步认识细菌的形态特征.二、实验原理革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行染色,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染.经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌.革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,为保证染色结果的正确性,采用规范的染色方法是十分必要的.芽孢染色法的基本原理,用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。三、试剂与器材1、材料:枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物,大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物2、试剂 革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液).5％孔雀绿水溶液3、实验器材 小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等.四、实验内容1、革兰氏染色法 制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检.2、Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检.五、关键步骤及注意事项1、涂片时,生理盐水及取菌不宜过多,涂片应尽可能均匀。2、乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,严格掌握脱色时间。六、思考题1、你认为要得到正确的改良的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪一步？为什么？2、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应.你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色,以证明你的染色结果正确性。3、你的染色结果是否正确？如果不正确,请说明原因。4、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢,很少看到芽孢囊及营养细胞,你认为这是什么原因？5、说明芽孢染色法的原理.用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式,并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。2、学习鉴别死活细胞的实验方法。二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物,菌体比细菌大而且不运动.酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种,以无性繁殖为主.芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式,少数为裂殖;有性繁殖是产生子囊和子囊孢子.本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色.用美蓝对酵母活细胞染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型,而对代谢作用微弱或死细胞,无此还原能力或还原能力极弱,而被美蓝染成蓝色或淡蓝色.因此,不仅用此法可观察酵母细胞形态,也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。三、试剂与器材1、材料 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。2、试剂 0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。3、器材 显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。四、实验内容1、美蓝浸片观察 酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2、水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1、染液不宜过多或过少,否则,在盖上盖玻片时,菌液溢出或出现大量气泡。2、用镊子取一块盖玻片,先将一侧与菌液接触,然后慢慢将盖玻片放下,使其盖在菌液上,盖玻片不宜平着放下,避免气泡产生。六、思考题1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同,对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因.2、在显微镜下,酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？ 实验八 微生物直接计数法及测微技术一、实验目的1、了解血球计数板计数原理,并掌握计数方法。2、掌握用测微尺测定微生物大小的方法。二、实验原理显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法.因为计数板是一块特别的载玻片.其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大方格,一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44);另一种是一个大方格分成16个中方格,每个中方格又分成25个小方格,无论哪种每个大方格中的小方格都是400个.每一个大方格边长为0.1mm,所以计数室的容积为0.1mm³.计数时,通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可.然后求出每个中方格的平均值,再乘上25或16,得出一个大方格中的总茵数,再换算成lml菌液中的总菌数.若设5个中方格中总菌数为N,菌液稀释倍数为M,如果是25个中方格计数板,则计算方法为：lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N•M(个)微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一.微生物大小的测定,需要在显微镜下,借助于特殊的测量工具——测微尺,包括目镜测微尺和镜台测微尺.镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般是将1mm等分为100格,每格长0.01mm(即10pm).镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小,而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。三、试剂与器材1、材料 酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。2、实验器材 细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。四、实验内容1、微生物直接计数法 菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板2、微生物测微技术 装目镜测微尺→校正→菌体大小测定五、关键步骤及注意事项1、防止加样空气泡产生。2、调节显微镜光线的强弱适当。六、思考题1、根据你的体会,说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力求准确？2、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率,请设计1～2种可行的检测方法。3、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？ 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  支气管上皮细胞的应用与研究方法！一、背景支气管上皮细胞分离自正常支气管上皮组织，气管管壁分粘膜、粘膜下层和外膜三层。粘膜表面为假复层纤毛柱状上皮，由纤毛细胞、杯状细胞、基细胞、刷细胞和弥散的神经内分泌细胞等组成。纤毛细胞呈柱状，游离面有纤毛，每个细胞约有300根，核卵圆形，位于细胞中部。纤毛向咽侧呈快速摆动，将粘液及附于其上的尘粒，细菌等异物推向咽部被咳出，故纤毛细胞有净化吸入空气的重要作用。杯状细胞也甚多，其结构与肠道上皮的杯状细胞相似，顶部胞质内含大量粘原颗粒，细胞分泌的粘蛋白（mucin）是一种大分子糖蛋白，它与管壁内腺体的分泌物在上皮表面共同构成一道粘液性屏障，粘附吸入空气中的异物，溶解吸入的SO2、CO等有害气体，随粘液咳出。基细胞呈锥形，位于上皮深部，是一种未分化的细胞，有增殖和分化能力，可分化形成前述两种细胞。刷细胞（brush cell）呈柱状，游离面有许多排列整齐的微绒毛，形如刷状。刷细胞的功能尚不清楚，可能有一定吸收作用。细胞顶部可见基粒，因此认为它可能是一种未成熟的纤毛细胞。有的刷细胞基部可见与传入纤维构成的突触，故它还可能有感受刺激的功能。气管及其以下分支的导气部管壁上皮内还有弥散的神经内分泌细胞，细胞呈锥体形，散在于上皮深部，胞质内有许多致密核心颗粒，故又称小颗粒细胞（small granule cell）。免疫细胞化学研究证明，细胞内含有多种胺类或肽类物质，如5－羟色胺、蛙皮素、降钙素、脑啡肽等，分泌物可能通过旁分泌作用，或经血液循环，参与调节呼吸道血管平滑肌的收缩和腺的分泌。二、应用用于Th2/Th17偏转微环境对人支气管上皮细胞重塑的作用及其机制研究：研究IL-4/IL-17A介导的Th2/Th17偏转微环境对气道上皮重塑的影响。并探讨其信号转导途径及逆转上皮重塑的可能途径。三、方法1、TGF-β1、IL-4和IL-17A对气道上皮细胞的增殖抑制作用：以人支气管上皮细胞株16-HBE细胞为研究对象,采用CCK-8法检测TGF-β1、IL-4和IL-17A对16-HBE细胞上清液中OD值的影响。2、IL-4/IL-17A介导的Th2/Th17偏转微环境对气道上皮细胞间质转变的影响：以16-HBE细胞为研究对象,使用光学显微镜观察TGF-β1、IL-4和IL-17A作用下16-HBE细胞的形态学变化；采用免疫细胞化学法检测TGF-β1、IL-4和IL-17A作用下16-HBE细胞中a-SMA蛋白表达水平的变化；采用RT-PCR、Western Blot方法检测TGF-β1、IL-4和IL-17A作用下16-HBE细胞中上皮-钙粘蛋白(E-cad)、a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)mRNA和蛋白表达水平的变化；采用ELISA法检测TGF-β1、IL-4和IL-17A作用下16-HBE细胞上清液中Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)表达水平的变化。3、TGF-β1、IL-4和IL-17A在促气道上皮EMT中的信号转导通路研究：以16-HBE细胞为研究对象,采用Western Blot方法检测不同时间点TGF-β1、IL-4和IL-17A作用下16-HBE细胞中EGFR和p-EGFR、Smad3和p-Smad3、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平的变化；使用U0126(ERK途径拮抗剂)抑制TGF-β1、IL-4和IL-17A共同刺激所诱导的16-HBE细胞中ERK1/2活化,采用RT-PCR、Western Blot方法观察U0126在上皮间质转变中的作用。4、PPAR-γ激动剂抑制气道上皮细胞间质转变的研究：使用PPAR-γ激动剂罗格列酮(RGZ)干预TGF-β1、IL-4和IL-17A共同刺激所诱导的16-HBE细胞,采用RT-PCR、Western Blot探讨罗格列酮对气道上皮EMT的作用及可能机制。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

           冷冻饮品吃着爽，其微生物检测你知道多少？夏天的太阳像个大火炉，把大地烤得发烫，就连空气也是热烘烘的，人一动就浑身冒汗。为了解暑，冷饮的销售和需求也大幅度增加，但对于冷冻饮品微生物检测，你了解多少呢？一、根据GB/T 4789.21-20031、检样的处理瓶装饮料：用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌，用石碳酸纱布盖好，塑料瓶口可用75%酒精棉球擦拭灭菌，用灭菌开瓶器将盖启开，含有二氧化碳的饮料可倒入另一灭菌容器内，口勿盖紧，覆盖一灭菌纱布，轻轻摇荡。待气体全部逸出后，进行检验。冰棍：用灭菌镊子除去包装纸，将冰棍部分放入灭菌广口瓶内，木棒留在瓶外，盖上瓶盖，用力抽出木棒，或用灭菌剪刀剪掉木棒，置45℃水浴30分钟，溶化后立即进行检验。冰淇淋：将冰淇淋放入灭菌容器内，待其溶化立即检验。2、检验方法菌落总数测定：按GB/T 4789.2执行大肠菌群测定：按GB/T 4789.3执行沙门氏菌检验：按GB/T 4789.4执行志贺氏菌检验：按GB/T 4789.5执行金黄色葡萄球菌检验：按GB/T 4789.10执行霉菌和酵母计数：按GB/T 4789.15执行乳酸菌检验：按GB/T 16347执行二、根据GB 2759—2015冷冻饮品和制作料的致病菌限量应符合GB 29921 中冷冻饮品的规定，其他微生物限量还应符合下表的规定。三、根据GB/T 31114-2014和GB/T 31119-2014对于冰淇淋和雪糕的出厂检验判定和复验：出厂检验项目有1项（卫生指标中规定的菌落总数和大肠菌群除外）不符合标准规定，可以加倍抽样复验，复验后仍不符合本标准规定，判该批产品为不合格品。微生物指标中规定的菌落总数和大肠菌群中若有1项不符合标准规定，判该批产品为不合格品，不应复验。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  强化生物安全风险防控基础性工作！中国微生物菌种查询网：建设以生态系统良性循环和环境风险有效防控为重点的生态安全体系是构建生态文明体系的重要内容。生态环境安全体系是由生物安全、环境安全、系统安全三方面组成的动态安全体系，是国家安全的重要组成部分，是经济社会持续健康发展的重要保障。为避免和有效应对生物安全风险，“十四五”时期应强化生物安全风险防控基础性工作。　　强化生物安全领域立法完善生物安全领域相关法律法规建设，建立行之有效的生物安全管理体制和机制。维护自然生态系统的完整性、稳定性和功能性，维持足够的生态空间，确保生态系统的良性循环，科学处理涉及生态环境的重大风险问题。　　以生态性预防维持生态平衡传染病的生态性预防是用生态学方法控制特定病毒传播，建立人与自然和谐相处的关系，保持自然界生态平衡，杜绝或减少因生态环境破坏而导致的动物病原体向人类转移。开展生态型预防，一是通过封禁保护、自然修复的办法，提升生态系统质量和稳定性，维护生态系统健康和生物多样性，保护其他物种的生存空间；二是实施重要生态系统保护和修复重大工程，构建复合生态系统，优化生态安全屏障体系，建设生态廊道和生物多样性保护网络，恢复生态平衡，遏制病原体媒介和宿主的生存条件，进而防止传染病发生流行；三是做好野生动物保护工作，加大野生动物保护的执法力度，实行野生动物分区划片保护，禁止滥捕、贩运野生动物，zuida限度避免病原体由野生动物向人类传播。　　做好环境污染治理治理环境污染可以有效阻断病原体繁殖和迁移的载体和条件，特别是在发生重大传染病时期，为阻断传播途径，应强化医疗废物处置、医疗污水治理、空气杀菌消毒等工作。在医疗固体废弃物处置环节，须防止出现二次传染或环境污染。对此，应建立科学的疫情医疗废物处置机制，实行分类分流焚化处置。在医疗污水处置环节，须加强疫情地区污水水体监管，尤其要对农贸市场、集贸市场、超市、车站、机场、码头等场所的污水加强监测，确保出水指标达到城镇污水处理厂污染物排放标准要求，防止各类地表水和地下水受医疗污水、生活污水和医疗废物污染。在阻断空气疫源环节，要加强对医院、隔离场所等病原体密集区空气的致病微生物检测，并对空气中的微生物、细菌进行消毒处理，防止气溶胶传播。　　注重科技创新，推动成果转化应用开展生态环境与传染病发生机理的专项攻关研究。如宿主动物传染人的机理研究、生态环境变化对病原体变异影响的研究、环境中病原微生物的快速监测研究、环境污染对病原体传播能力的影响研究、生态环境因素与病原体传播的关系研究、自然灾害带来的健康损失和应急系统建设研究、传染病国际间传播机制与防控研究等。研究建设传染病防控生态环境监测体系，开展对传染病流行生态环境的动态跟踪监测，重点建立动物传染病监测系统。做好生态防控传染病科研成果的转化应用工作。打通科研部门与防控实施部门之间的壁垒，让科研成果转化为具体的防控方案与举措，提高传染病防控水平。实施项目生态流行病学评估。在制定大规模开发规划和实施重大项目时，前置实施生态流行病学评估，论证项目对生态环境的改变、对人类健康造成的影响，尽量避免对野生动物栖息地和致病古老病原体生存环境的破坏，降低资源开发利用和环境破坏引发重大传染性疾病的风险。

                免疫荧光组织（细胞）化学染色方法！一、免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法（一）基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 （二）试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制 搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml） 有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫） 荧光显微镜 玻片架 滤纸H 37℃温箱等。 （三）实验步骤 1、滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。 2、滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。 3、取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。 4、取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。 5、立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示： （-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。 （四）注意事项 1、对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。 2、染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。染色温度多采用室温（25℃左右），高于37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原（如流行性乙型脑炎病毒）可采用0-2℃的低温，延长染色时间。低温染色过夜较37℃30 min效果好的多。 3、为了保证荧光染色的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。 ⑴标本自发荧光对照：标本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。 ⑵特异性对照（抑制试验）：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。 ⑶阳性对照：已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。 如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光，阳性对照和待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。 4、一般标本在高压汞灯下照射超过3min，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本zuihao在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。  二、免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：间接法（一）原理与意义 免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——间接法，是一种荧光抗体染色法。该方法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原，敏感性较高，操作方法较易掌握，而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体（如麻疹）等的研究和检查，所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。 （二）操作流程 1、双层法（Double Layer Method） ⑴切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/L pH7.2 PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。 ⑵再滴加间接荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。 ⑶对照染色 ①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清，再用上法进行染色，结果应为阴性。 ②抗原对照：即类属抗原染色，亦应为阴性。 ③阳性对照。 2、夹心法：未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在，方法步骤如下： ⑴切片或涂片固定后，置于染色湿盒内。 ⑵滴加未标记的特异性抗原作用切片于37℃，30min。 ⑶缓冲盐水洗2次，每次5min，吹干。 ⑷滴加特异性荧光抗体再用切片于37℃，30min。 ⑸如③水洗。 ⑹缓冲甘油封固，镜检并拍照。三、免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：补体法（一）原理与意义 免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——补体法，是一种荧光抗体染色法。本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制，因而一种荧光抗体可作更广泛的应用，敏感性亦较间接法高，效价低的免疫血清亦可应用，节省免疫血清，尤其是对检查形态小的如立克氏体、病毒颗粒等或浓度较低的抗原物质时甚为理想。 （二）操作指南 1、材料 ⑴免疫血清60℃灭活20min，用Kolmers盐水作2倍稀释成1：2，1：4，1：8……。补体用1：10稀释的新鲜豚鼠血清，抗补体荧光抗体等，按下述的补体法染色。免疫血清补体结合的效价，如为1：32则免疫血清应作1：8稀释。 ⑵补体用新鲜豚鼠血清一般作1：10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果，按2单位的比例，用Kolmers盐水稀释备用。Kolmers盐水配法：即在pH7.4、0.1mol/L的磷酸缓冲盐水中，溶解MgSO4的含量为0.01%浓度。 ⑶抗补体荧光抗体：在免疫血清效价为1：4，补体为2单位的条件下，用补体染色法测定免疫豚鼠球蛋白荧光抗体的染色效价，然后按染色效价1：4的浓度用Kolmers盐水稀释备用。 2、操作步骤 ⑴涂片或切片固定。 ⑵吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定湿度的染色盒内。 ⑶用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。 ⑷滴加经过适当稀释之抗补体荧光抗体30min，37℃，水洗同（3）。 ⑸蒸馏水洗1min，缓冲甘油封固。 3、对照染色 ⑴抗原对照。 ⑵抗血清对照：用正常兔血清代替免疫血清。 ⑶灭活补体对照：将补体经56℃ 30min处理后，按补体同样比例稀释，与免疫血清等量混合后，进行补体法染色。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物肥料的分类及应用效果！  微生物肥料是指一类含有活的微生物并在使用中能获得特定肥料效应能增加植物产量或提高品质的生物制剂。长期以来，社会上对微生物肥料的看法存在一些误解和偏见：一种看法认为它肥效很高，把它当成wanneng肥料，甚至扬言可以完全取代化肥；另一种看法则认为它根本不是肥料。其实这两种都是偏见。世界多年试验证明，用根瘤菌接种大豆、花生等豆科作物可提高共生固氮效能，确实有增产效果，合理应用其它菌肥拌种或施用微生物肥料，对非豆科农作物也有增产效果，而且有化肥达不到的效果。所以今天小编就为大家详细讲解一下微生物肥料的相关知识。一、微生物肥料的历史国外：1885 年，Berthelot等人的盆钵试验表明微生物可以通过固氮作用，将空气中的氮转化为可被植物吸收利用的土壤氮元素。1895 年由德国科学家Noble研发出世界上最早的微生物肥料“Nitragin”根瘤菌接种剂专利产品，从此微生物肥料逐渐进入人们的视线。目前，西方发达国家微生物肥料的使用率已占到其国家肥料使用量的20% 以上。国内：20 世纪30 年代我国对微生物肥料研究刚刚起步，张宪武率先对大豆根瘤菌接种技术进行研究，他从我国东北各地土壤样本中分离到130 个固氮菌菌株并推广150万公顷，使当时大豆平均增产10% 以上。70~80 年daikai始了对丛枝菌根的部分真菌与植物根形成的共生体系的研究。90 年代，刘荣昌等研发出以“环状芽孢杆菌”为有效菌的“生物钾肥”，许景钢研发出“土壤磷素活化剂”。这一时期出现的微生物肥料的特点是成分为单一的营养菌，主要通过利用微生物特性来提高土壤中主要营养元素的含量和有效性。二、微生物肥料的分类我国微生物肥料种类繁多，截至目前还没有一套完整统一的分类系统，根据分类的标准不同，有如下几种分类方法：（一）按作用机理分类1、狭义的微生物肥料：指通过微生物的生命活动增加植物营养元素的活性和供应量，进而增加产量，即含有肥料特性的微生物制剂，这类产品虽不具有养分，但却有肥料的功能。2、广义的微生物肥料：该种微生物肥料略有或没有养分供应功能，但却有其他功效，如刺激植物生长或拮抗某些病原微生物的致病作用，降解有害污染物等，这类微生物肥料更应该称为“微生物制剂”而不是肥料，但现都统称为微生物肥料，在农业部统一登记备案。（二）按微生物种类划分细菌肥料：如固氮细菌肥料、溶磷细菌肥料、解钾细菌肥料。真菌肥料：该类肥料包括外生菌根菌剂和内生菌根菌剂两种类型，如丛枝菌根、菌根菌剂、兰科菌根菌剂。放线菌肥料：如抗生素菌肥；藻类肥料：如固氮蓝藻等。（三）按功能不同分类根据功能不同又可分为：溶磷微生物肥料、解钾微生物肥料、有机质分解微生物肥料等，如豆科植物接种剂和土壤磷素活化剂等。同一类功能的微生物肥料也可以是不同微生物种类的肥料，如溶磷菌肥，既可以是细菌肥料也可以是真菌肥料，因为同一微生物具有不同功能、或不同微生物具有相同功能的现象在微生物肥料界非常普遍。（四）按含有微生物种类的多少划分分为单一微生物或复合微生物肥料等。单一微生物肥料：只含有一种微生物作用的肥料。复合微生物肥料：即多种微生物通过一定比例混合在一起所形成的微生物制剂。微生物+有机肥=生物有机肥微生物+化肥=生物复混肥微生物+有机肥+化肥=生物有机无机复合（复混）肥（五）农业部登记的微生物肥料种类目前农业部登记的微生物肥料产品共有：9个菌剂类品种：根瘤菌剂、固氮菌剂、溶磷菌剂、硅酸盐菌剂、菌根菌剂、光合菌剂、有机物料腐熟剂、复合菌剂和土壤修复菌剂。2个菌肥类品种：复合生物肥料和生物有机肥料。在剂型上分为液体和固体，固体又分为粉末和颗粒等。三、微生物肥料应用效果1、增加作物产量王素英等人在2003年的统计结果表明各类微生物肥料的增产幅度在10% 左右，其中以复合微生物肥料增产效果最明显，达到20% 以上。吕彦彬等人在2009年的研究结果表明：单独施用微生物肥料没有配施有机肥或化肥对马铃薯的增产效果明显，同时说明微生物肥料在作物增产中只起到辅助作用，不能代替有机肥和化肥而单独使用。2、改善作物品质微生物肥料能改善作物品质已是不争的事实。某些微生物肥料即使没有明显的增产作用，但仍然能改善作物品质。施用微生物肥料能够在明显提高蔬菜含糖量和维生素C含量的同时降低蔬菜的硝酸盐含量。微生物肥料对水果品质的影响也比较明显。刘利军等人在2007年的研究中表明：在使用微生物肥料后，砀山酥梨叶片氮含量显著降低，微量元素含量、糖酸比、含糖量和Vc 含量等明显增加，并证明了果实的品质、耐贮性和梨果的等级均显著提高。3、减轻病虫药害张伟卫等人在2013年的试验结果表明微生物肥料对大田棉花枯萎病和茄子黄萎病均具有稳定的控制作用，病情指数分别降至38.2 和23.5。烟草专用微生物肥料能减轻烟草病毒病害、促进烟草的生长，降低杂气和刺激性。荆瑞勇等在2009年的研究结果表明微生物肥料能有效减轻土壤中残留除草剂对作物的药害。4、改善土壤结构长期施用微生物肥料，能够恢复土壤团粒结构的形成，起到疏松土壤、消除土壤板结、改善土壤结构的作用。据报道，在北方寒地黑土上连续3 年施用土壤磷素活化剂，土壤容重下降0.1~0.3，疏松土壤效果非常显著。也有研究表明施入微生物菌肥后，由于微生物大量繁殖，促进了土壤中有机质的释放，改善了土壤的理化性质，增加了土壤团粒，改善了土壤结构。四、微生物肥料存在的问题1、配套体系不够完善目前，我国还没有形成有利于微生物肥料应用的农业施肥、推广和监管体系。在发达国家大豆接种根瘤菌已成为常规耕作措施，而我国东北大豆根瘤菌的接种率却不到10%。玉米、水稻等大田作物化肥施用量过度，微生物肥料、有机肥料施用很少，短期行为普遍，推广力度和政策支持明显不足。同时微生物肥料市场鱼目混杂，国家在该类肥料的质量监管上还没有形成完善的规章制度和产品标准。2、菌种纯度不高、针对性不强微生物肥料具有生态适应性，施用时应依据当地生态状况、作物品种、土壤类型和耕作方式等确定具体施用方式和施用量，有针对性地筛选出高适应的功能菌种，以达到较佳的作用效果。但是绝大多数微生物肥料企业还在使用分离筛选及传统育种等相对滞后的菌种选育技术，造成微生物肥料地域针对性不强，适应性较差，个别企业甚至提纯复壮做的都很不到位，导致菌种纯度下降、活性衰减、田间效果不稳定或迅速下降。3、作用效果不稳定微生物肥料的应用效果受很多因素影响，除肥料本身的活性菌种类、含量、纯度等内在因素外，环境条件也是影响肥料效果的重要因素，如底物浓度、温度、湿度、土壤pH 值等，导致很多微生物肥料的使用效果与预期相差很多，并且地块间，年度间的差别很大。zuihou小编总结一下：目前的科学研究通过大量的实验证明了微生物肥料在农业作物种植与生产是有很明显的效果的，但是由于目前相关机关单位的监管并不完善，以及该类肥料本身是一种菌剂或菌剂产物，在生产、运输和贮藏等环节容易失效，所以这多方面的原因导致目前市场上的微生物肥料品种繁杂，质量参差不齐。所以广大的农友应该多多了解微生物肥料的相关基本知识，慎重的选择肥料的施用。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

           微生物的分离纯化与稀释平板菌落计数实验方法！一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。二、实验材料1、活材料：苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。2、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；高氏一号琼脂培养基；加有氯霉素（或庆大霉素）和孟加拉红的马丁氏琼脂培养基:在1000mL培养基中加入注射用氯霉素2mL，孟加拉红33.4mg，均于灭菌前加入。3、材料：肥沃茶园土。4、实验用品：内装15～20个玻璃珠的90mL无菌水、9mL无菌水、直径9cm的无菌平皿、1mL无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲、经2mm土壤筛过筛的菜园、天平、试管架、无菌称量纸、酒精灯、火柴、接种环、无菌水。三、实验方法（一）稀释平板测数法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品10g，放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20～30s，即成10－1稀释液；再用1mL无菌吸管，吸取10－1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10－2稀释液；再换一支无菌吸管，吸取10－2稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，也吹吸3次，即成10－3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10－4、10－5、10－6、10－7、10－8、10－9等一系列稀释菌液。用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10－7、10－8、10－9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10－4、10－5、10－6稀释度，测定放线菌数量时，采用10－3、10－4、10－5稀释度，测定真菌数量时，采用10－2、10－3、10－4稀释度。2、平板接种培养平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。⑴混合平板培养法将无菌平板编上10－7、10－8、10－9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取1×10－9稀释液各1mL放入编号10－9的3个平板中，同法吸取10－8稀释液各1mL放入编号1×10－8的3个平板中，再吸取1×10－7稀释液各1mL放入编号1×10－7的3个平板中，由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换。然后在9个平板中分别倒入已熔化并冷却至45～50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，在30℃下培养。至菌落长出后即可计数。⑵涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1mL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上，每个编号设三个重复。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20～30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至菌落长出后即可计数。（二）土壤中好气性细菌的分离与计数1、土壤稀释液的制备按“稀释平板测数法”的相同步骤进行，按无菌操作法将土壤稀释至10－6即可。2、分离方法可以用三种方法进行分离。⑴混菌法：按“稀释平板测数法”中的“混合平板培养法”进行，使用的稀释度为10－4、10－4、10－6三个，各做3个重复。⑵涂抹法：按“稀释平板测数法”中的“涂抹平板测数法”进行，使用的稀释度为10－3、10－4、10－5三个，各做3个重复。以上两法又统称为稀释平板分离法，可同时用于所分离菌的计数。⑶划线法：用灭菌接种环沾取10-1稀释液1环于已凝固的平板上进行划线（图示）。划线可按以下两种方式进行，一种为交叉划线法，是在平板的一边做第一次“Z”字形划线。转动培养皿70°角，将接种环在火上烧过并冷却后，通过第一次划线部分，做第二次“Z”字形划线。同法进行第三次、第四次划线。另一种为边疆划线法，是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪式划线，直至平板中央。转动培养皿180°，再从平板另一边（不烧接种环）同样划线至平板中央。划线法实质上属于一种“由点到线”的稀释法，较适用于含菌比较单一的材料的纯化，对于土壤这类微生物高度混杂的样品则较少使用。以上各种分离法，都应按无菌操作进行。所用的培养基若在倒平板前，按50μg/m L 的量加入用乙醇溶解的制霉菌素或放线菌酮（起抑制霉菌的作用），效果会更好。3、培养将上述接种过土壤悬液的平板倒置，于28～30℃培养，至长出菌落为止（24～36h）。4、挑菌纯化在平板上选择分离较好的有代表性的单菌落接种斜面，同时作涂片检查，若发现不纯，应挑取此菌落做进一步划线分离，或制成菌悬液再做稀释分离，直至获得纯培养体。5、计数选取混菌法和涂抹法中每皿菌落数30～300的平板，分别按“稀释平板测数法”中的“混合平板测数法”和“涂抹平板测数法”中的公式计数。这样求得的是每克原始土样中的活菌数，若要折算为每克干土的含菌数，还应将此数值除以干土在土样中所占的质量分数(烘干土的质量/原土样的质量)。注：土壤含水量的测定是将一定质量的土壤在105～110℃下烘干至恒重，再称干重。（三）土壤中放线菌的分离与计数1、土壤稀释液的制备按实验“稀释平板计数法”中的方法进行，将菜园土稀释至10－5。在稀释时，可在盛无菌水的三角瓶中加10滴100g/L的石炭酸溶液和50μg/m L 的制霉菌素以抑制细菌和霉菌的生长。2、分离方法采用稀释平板分离法，又可分为两种方法。⑴混菌法：按“稀释平板计数法”中的“混合平板培养法”进行，所不同者是稀释度，应采用10－3、10－4、10－5三个稀释度，各做3个重复。⑵涂抹法：按“稀释平板计数法”中的“涂抹平板计数法”进行，应采用10－2、10－3、10－4三个稀释度，各做3个重复。3、培养将上述接种过土壤悬液的平板倒置于28～30℃培养4～5d。4、挑菌纯化从平板中选择分离较好的放线菌菌落（应与细菌菌落区别开）较接斜面，并制片作纯度检查，若不纯，应进一步将该菌作稀释平板分离或划线分离，直至获得纯培养。（四）土壤中真菌的分离纯化与计数1、土壤稀释液的制备按实验“稀释平板计数法”中的方法进行，将土样稀释至10－4。2、分离方法采用稀释平板分离法。又可分为两种方法。⑴混菌法：按“稀释平板计数法”中的“混合平板培养法”进行，所不同的是稀释度，应选10-2、10－3、10－4三个稀释度进行接种。⑵涂抹法：按“稀释平板计数法”中的“涂抹平板计数法”进行，所不同的是稀释度，应选10-1、10－2、10－3三个稀释度进行接种。3、培养将上述接种土壤悬液的平板倒置于28℃培养3～5d。4、挑菌纯化从长有单菌落的平板中选取典型的真菌菌落（包括酵母菌菌落）转接斜面，并同时制片作纯度检查。若不纯，应进一步挑取该菌落采用划线分离，或制成菌悬液进一步作稀释分离，直至获得纯培养体为止。5、计数选取每皿菌落数在10～100之间的平板用于计数。不应遗漏酵母菌的菌落，必要时可制片检查，以免误为细菌菌落，具体方法见土壤中好气性细菌的分离与计数。6、菌种保存将分离到的真菌转接到PDA斜面上培养，待长好后，置于冰籍中保存，必要时进行深入研究。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                微生物检验必知培养基制备技术汇总！一、玻璃器皿的清洗 在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１-２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。2、用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。二、培养基的类型 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。⑴天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。这种培养基的稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。⑵合成培养基合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。⑶半合成培养基在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。这种培养基在生产实践和实验室中使用最多。2、根据培养基的物理状态来区分，可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。⑴液体培养基所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。⑵固体培养基在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用。固体培养基在实际中用得十分广泛。在实验室中，它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。⑶半固体培养基如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。3、根据培养基的用途来区分，可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。⑴选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。⑵增殖培养基在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基，这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。⑶鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。另外，根据培养基的营养成分是否“完全”，可以分为基本培养基、完全培养基和补充培养基，这类术语主要是用在微生物遗传学中。根据培养基用于生产的目的来区分，可以分为种子培养基和发酵培养基。还有专门用于培养病毒等寄生微生物的活组织培养基，如鸡胚等；专门用于培养自养微生物的无机盐培养基等。三、培养基制备的基本方法和注意事项 1、培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。2、培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。3、培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于一侧，每称完一种成分即在配方旁边做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。4、培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。5、培养基pH的初步调正因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH，保证培养基的质量。pH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。6、培养基的过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60℃的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000mL培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。7、培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20mL培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。8、培养基的灭菌一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成适当斜面，待其自然凝固。9、培养基的质量测试每批培养基制备好以后，应仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。将全部培养基放入36±1℃恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。10、培养基的保存培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      无菌实验室操作规范及要求！洁净室我们曾经为大家介绍过，今天就来说说与其相类似的无菌室，无菌室实验操作过程中要注意什么？有哪些必须遵守的条件？一、无菌室的级别根据空气洁净度的不同，无菌室可分为哪几个级别一般情况下，无菌室的等级有百级，千级，万级，十万级，百万级等等。净化等级一般分为100级、1000级、10000级、100000级，现在2010年版的GMP 净化车间已经不用这个叫法了，分为ABCD级别，分别相对应于98版的几个级别，通过检测区域内的尘埃粒子数、浮游菌数、沉降均数评价净化级别，各个级别 有不同的要求，净化等级分静态、动态两种。二、无菌室设计建设要点无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。三、无菌室操作规范1、无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。2、严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。3、无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。4、无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。5、需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6、无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。7、无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3-5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                生殖道和微生物组成的相互作用！生殖道微生物菌群在体内可与其他身体部位相互作用，包括近端（如泌尿道）和远端（如肠道或口腔）。许多研究也显示，伴侣通过性行为共享和/或交换生殖道的微生物菌群。因此，多个部位可以作为生殖道微生物的潜在宿主。下一代测序研究还表明，常见的阴道细菌（如乳杆菌、纤毛菌、普雷沃菌、加德纳菌、阿托波菌和孪生菌）是男性和女性尿道菌群的组成部分，这表明微生物菌群在泌尿生殖道内的相互连接（膀胱-阴道轴）。此外，主要的阴道乳酸杆菌和其他常见的阴道细菌，如阴道加德纳菌，通常在导尿管的尿液样本中发现，并可以使用扩展定量尿液培养（EQUC）方案进行培养。在一项使用EQUC和全基因组测序技术的研究中，发现同一个体的膀胱和阴道中存在与卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、大肠杆菌和咽峡炎链球菌在系统遗传学上类似的菌株。此外，该研究还表明，阴道和膀胱的微生物菌群表现出相似的功能能力，这与肠道菌群不同。这些发现强烈表明，微生物在泌尿生殖道内的易位不仅限于泌尿致病菌，还包括与健康相关的细菌。乳杆菌属。在膀胱和阴道中发现的乳酸菌被认为可以保护尿路免受尿路致病菌的侵袭。然而，有关尿路微生物菌群的保护作用机制还有待进一步研究。多项研究表明，阴道微生物组成（包括乳杆菌和BV-相关细菌）可以在男性阴茎皮肤、尿道、尿液和精液样本中检测到，这表明性伴共享和交换寄居在泌尿生殖道的微生物。此外，一项研究对有或没有BV的一夫一妻制异性恋夫妇的阴道、阴茎和男性尿道菌群进行了研究，结果显示，男性伴侣的阴茎皮肤和尿道菌群与有BV的女性伴侣的阴道菌群之间具有高度相似性，这支持了BV的性传播理论。此外，既往的培养研究表明，BV相关的阴道加德纳可以从男性尿道或阴茎皮肤中培养出来。相反，BV阴性夫妇的尿道和阴茎皮肤微生物菌群与阴道微生物菌群是不同的，这表明阴茎上皮微环境可能有利于BV相关细菌的定殖。此外，有关与女性发生性行为的女性的多项研究支持BV相关微生物的性传播。总体而言，这表明性伴侣之间可以共享一些阴道细菌，并影响彼此泌尿生殖道微生物菌群的种类组成。此外，其他性活动，如口交和肛交，也会影响微生物在远端粘膜部位（如肠道和口腔）的连续分布。但是，还需要进行更多的研究，尤其是使用微生物培养和宏基因组学方法，来评估泌尿生殖系统和性伴侣的其他阴道粘膜部位的微生物菌群之间的关系和动态变化。此外，最常见的阴道乳杆菌种（卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、詹氏乳杆菌和加氏乳杆菌）也被证明可以在直肠中定植；阴道和直肠的共定殖与BV的zuidi患病率有关。这些研究支持以下观点：直肠是阴道乳酸菌的主要宿主，直肠中这些微生物的定殖有助于维持与健康相关的阴道微生物菌群。zuihou，起源于远端粘膜部位（如肠道或口腔）的血源性传播细菌被认为是与生殖道微生物菌群（尤其是上生殖道与远端粘膜部位）之间相互作用的潜在途径。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

            人骨髓间充质干细胞无血清培养基的应用！一、背景人骨髓间充质干细胞无血清培养基适用于人骨髓间充质干细胞各个时期的培养，培养基不含血清可以减少血清对细胞培养发育的干扰。无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的基本配方：基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是存在于骨髓、脂肪、胎盘、结缔组织和器官间质内的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的成体干细胞，可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝实质细胞、肌细胞以及神经元细胞等，已成为基础医学、临床医学、再生医学、组织工程等研究领域的重要种子细胞之一，具有十分诱人的应用前景。无血清培养基的优点：1、可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。2、避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。3、避免血清组分对实验研究的影响。4、有利于体外培养细胞的分化。5、可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。缺点：1、细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。2、成本较高。3、针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。二、应用用于人骨髓间充质干细胞对间质性肺纤维化的抗损伤治疗机制及黄酮化合物的协同效应研究：通过体外诱导的NKT细胞,模拟间质性肺纤维化炎症损伤特点,探讨了骨髓间充质干细胞的免疫调节抗炎及其保护肺上皮细胞的抗损伤机制,调查了骨髓间充质干细胞对NSIP患者异常的肺成纤维细胞的影响,同时探索了中药经验方中总黄酮提取物可能的协同效应,为临床间质肺纤维化的治疗开拓新的思路和途径。三、研究方法人骨髓间充质干细胞的培养鉴定与在小鼠肺内的定殖全骨髓培养法分离人2～3月龄流产胎儿骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells BMMSCs),并进行细胞表型鉴定。调整合适的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养密度,转染(green fluorescent protein,GFP)绿色荧光蛋白真核表达质粒-PEGFPn2。取转染GFP质粒表达绿色荧光蛋白的间充质干细胞(1×106/只)经尾静脉注入SCID小鼠体内,MSCs注入小鼠体内24小时内处死小鼠,冰冻切片,共聚焦激光显微镜下观察。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物肥料的种类和使用方法！一、根瘤菌肥料根瘤菌肥料是指用于豆科作物接种，使豆科作物结瘤。固氮的接种剂。当豆科植物种子萌发时，根系分泌的一些物质对根瘤菌有强烈的刺激作用。根瘤菌大量繁殖，聚集在根的周围，形成根瘤。根瘤菌的寄主则不停地把根瘤固定的氮素转化，运输供自身利用。1、使用方法：根瘤菌肥多用于拌种，即在豆科作物种植之前将根瘤菌肥料拌在种子上经促进共生固氮，达到增产的目的。根瘤菌与钼肥结合使用效果更好，微信搜索菜农圈关注。使用时，每667m2用5?10g钼酸铝直接拌种或与根瘤菌有肥合用。2、注意事项：（1）根瘤菌是喜温好气型的微生物，适宜于中性至微碱性的土壤条件，应用于酸性土壤时，要加石灰调节土壤酸度。（2）避免与速效氮肥和杀菌剂同时使用，如种子消毒，应在拌种前2?3周拌药，使菌与药有较长时间的间隔，以免影响根瘤活性。二、固氮菌肥料固氮菌肥料是以能够自由生活的固氮的微生物肥料为菌种生产出来的固氮菌肥料。1、使用方法：固氮菌适用于各种作物，特别是禾本科作物和蔬菜中的叶菜类作物，可作基肥，追肥和种肥。与有机肥，磷肥、钾肥及微量元素，肥料配合施用，对固氮菌的活性有促进作用。（1）基施：与有机肥配合沟施或穴施，施后立即覆土。（2）追施：把菌肥用水调式糊状，施于作物根部，施后覆土。（3）拌种：在菌肥中加适量的水混匀，倒入种子混拌，捞出阴干即可播种。2、注意事项：（1）多适用于禾本科作物及蔬菜中叶菜类作物。（2）避免与速效氮联合应用。（3）对土壤酸性反应很敏感，适宜的PH值为7.4?7.6。（4）当土壤湿度为田间zuida持水量的25%?40%时，固氮菌开始生育，至60%时生育最旺盛。（5）固氮菌属于中温性细菌，一般在25?30℃的条件下生长zuihao。　　三、磷细菌肥料磷细菌肥料是能把土壤中难溶性的磷转化为作物能利用的有效磷素营养，又能分泌激素刺激作物生长的活体微生物制品。1、使用方法：磷细菌肥料可以作基肥，追肥和种肥，具体施用量以产品说明为准。（1）基肥：可与农家肥料混合均匀后沟施或穴施，施后立即覆土。（2）追肥：将肥液于作物开花前期追施于作物根部。（3）拌种：在磷细菌肥料内加入适量清水调成糊状，加入种子混拌后，将种子捞出待其阴干即可播种。2、注意事项：（1）磷细菌肥料应用于缺磷但有机质丰富的土壤效果较佳。（2）不同类型的解磷菌种互不拮抗，可复合使用。（3）磷细菌肥料不能和农药及生理酸性肥料同时施用。（4）磷细菌的适宜温度为30?37℃，适宜的PH值为7.0?7.5。　　四、硅酸盐细菌肥料硅酸盐细菌肥料是指在土壤中通过硅酸盐细菌的生命活动，增加植物营养元素的供应量，刺激作物生长，抑制有害微生物活动，对作物有一定增产效果的微生物制品。1、使用方法：硅酸盐细菌肥料可以作基肥，追肥和拌种或蘸根用。（1）基肥：每667m2沟施或条施3?4kg，硅酸盐细菌肥料，施后覆土。若与农家肥混合施用效果更好。（2）拌种：在硅酸盐细菌肥料内加入适量的清水制成悬浊液，喷在种子上拌匀，稍干后立即播种。（3）蘸根：将硅酸盐细菌肥料与清水按1：5的比例混匀，待溶液澄清后，将水稻、蔬菜等作物的根部蘸取清液，随蘸随用，避免阳光直射。2、注意事项：（1）不能与过酸、过碱的肥料混合施用。以免发生抑制作用。（2）当土壤中速效钾含量在26mg/kg以下时，不利于耐酸盐细菌的生长与解钾功能的发挥。（3）当PH值小于6时，硅酸盐细菌的活性会受到抑制。因此，在施用前施用生石灰调节土壤酸度。 中国微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！

                    支原体污染对细胞有哪些影响？一、支原体简介支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中weiyi可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。支原体是在1898 年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。二、支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。三、支原体污染对细胞的影响1、影响细胞的生长状态及形态支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止；细胞状态变差，生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。2、影响细胞的代谢和功能（1）培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA 的合成障碍；（2）支原体活动使培养基成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢；（3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；（4）支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常。3、其他此外，支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响淋巴细胞分化等。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 酵母细胞质粒提取步骤与破壁方法！酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。一、酵母细胞质粒提取步骤：1、接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸 营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。2、第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下。3、取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml的1倍TE悬浮。4、将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性 比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体。5、取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体。6、然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min。7、将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1), 混匀,12000g,离心10min。8、将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3M KAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入-20℃冰箱中。9、1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离心10min。10、弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的100mg/ml浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可。11、跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了。二、酵母细胞破壁方法：我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用。酵母的细胞壁比较厚,不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。1、酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulTE缓冲液重旋!加入50ul玻璃珠(sigma公司)，加入80-100ul酚氯仿，剧烈振荡5-10分种后，使用氯仿抽取去除酚和蛋白，然后按照其他步骤沉淀就可以得到你的质粒，DNA的提取也可以使用这种方法。2、反复冻融破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，加入200ul缓冲液[2% Triton X-100, 1% SDS, 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA (pH 8.0)]，使用液氮和96-98度沸水反复冻融3-5次，然后使用酚氯仿抽提蛋白！3、下面两个文献对你会有所帮助，请参考，不错的方法！For yeast plasmid extraction we use the following method:Buffer A: 100 mM NaCl 10 mM Tris-HCl (pH 8) 1 mM EDTA 0.1 % SDS1. Culture the plasmid-harboring cells overnight in 1 - 2 ml of medium. Cells with 1 - 4 OD600/ml are needed.2. Pulse 5-10 sec at 15'000 rpm (maximum speed) (in an Eppendorf tube).3. Throw away the supernatant.4. Resuspend in 200 µl of buffer A, keep cells on ice.5. Add glass beads just before the solution surface, mix with a vortex during 1 minute and sonicate.6. Add 200 µl of phenol.7. Vortex another minute.8. Centrifuge at 15'000 rpm for 1 minute.9. Throw away the phenol phase.10. Add 200 µl of phenol and reextract the same way.11. Take the water solution (about 200 µl) which contains the plasmids and treat with Glassmilk: add 600 µl of NaI solution and 5 µl Glassmilk suspension, put the tubes on the wheel for 5 min., then pellet the Glassmilk/DNA complex (pulse 5 sec), remove the supernatant and set aside, then wash the pellet 3 times with 300 µl New Wash, then pulse for 5 sec to remove the New Wash.12. Elute the DNA into water (20 µl) or TE buffer.When not using the GeneClean-kit, another protocol can be applied:Steps 1 to 9 remain the same as above. Then:10. Add 200 ml phenol/chloroform 1:1 and vortex.11. Centrifuge at 15'000 rpm for 1 minute.12. Throw away the phenol phase.13. Add others 200 µl of chloroform and reextract the same way.14. Take the water phase and adjust the volume to 400 ml with water.15. Add 40 ml 3M NaCl.16. Add ca. 1 ml of ethanol 100 %.17. Put the tube at -20 0C for about 10 min..18. Centrifuge at 4 0C for 10 min. at maximum speed.19. Throw away the supernatant.20. Wash the pellet once with ethanol 80 % and once with ethanol 100 %.21. Dry the pellet by putting the tube upside down on a Kleenex.22. Resuspend the pellet in 50 ml TE buffer.酵母质粒提取可以用试剂盒提取，也可以直接用裂壁酶处理后采用碱裂解法提取质粒，缺点就是提取的量很少，还会容易出现假阳性现象，明明有却条带，检测却不正确。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      食品微生物检测方法优劣比较！一、样品前处理相对于传统人工操作模式及重复使用的均质乳钵器和搅拌刀头，目前市场上出现品类丰富的一次性均质袋、与样品隔离的拍打式均质系统及自动化重量梯度稀释仪，不仅实现了样品前处理的自动化、标准化及批量化，而且免除了样品间的交叉污染。二、增菌培养及分离不论传统方法或现代检测技术，受检测灵敏度的限制，食品样本经前处理后多需经过增菌培养、选择性分离后方可用于后续检测分析。传统微生物检测中上述两个步骤耗时长达24－96ｈ，为整个检测流程中的关键限速步骤。因此，建立高效增菌策略以及靶标高度特异性微生物浓缩、分离系统已成为实现微生物快速检测的核心。1、增菌条件优化为了缩短增菌时间、提高检测效率，国内外许多研究者致力于致病菌选择性增菌条件改良。如通过单因素筛选、正交试验设计优化了水产品中副溶血性弧菌的增菌培养基及培养条件，使其在相同培养时间内的菌液浓度达到国标增菌方法的1.8倍；相对于通用的耗时48ｈ李氏增菌肉汤LB１和LB２两步增菌法，美国学者研发了一步法ｏPＳＵ增菌肉汤，适用于巴氏杀菌奶和热狗等即食类食品中单增李斯特菌的快速检测。此外，为了满足当前食品致病菌多重化检测的需求，在同一体系内实现多种目标菌共增菌的富集培养基优化也日益受到关注。如针对沙门氏菌、大肠杆菌O157：Ｈ7及单增李斯特菌的复合培养基SEL，经多重PCR及免疫法验证了其良好的复合增菌效果。国内研究者通过优化也分别获得了可同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌或单增李斯特菌的共增菌培养基，３种致病菌在优化条件下能以相对一致的速度增殖，增菌液可满足下游多重ＰＣＲ检测要求，有效提高了检测效率。2、细菌分离与浓缩近年来，国内外学者开发了多种食源性致病菌的高效分离、浓缩法，基于其原理，主要可分为包括离心、过滤等在内的物理法和赖于免疫反应的吸附法。⑴密度梯度离心法离心可将大体积样本中的细菌经沉淀而浓缩，而后加入梯度密度的缓冲液，经多次的离心、洗涤最终实现细菌与食品基质的分离。尽管离心法在细菌富集中具有一定的优势，但其需经多次离心－洗涤反复循环而实现，耗时且影响浓缩效率；另外，其浓缩对象为所有细菌，缺乏靶标特异性。相对于此，基于抗原－抗体免疫反应的吸附分离法则更显优势。⑵免疫磁分离技术免疫磁分离技术是一种高效、特异性微生物富集技术。其原理在于利用磁性微球表面偶联的抗体特异性地吸附样品稀释液中的靶标菌，而后载有致病微生物的磁性颗粒在外加磁场的作用下，向磁极方向聚集，弃去检样混合液，使致病菌得到分离和富集，从而大大缩短了常规检测所需的冗长的增菌时间，提高检测效率。以其高度的靶标特异性及与下游检测技术的良好兼容性在食品微生物快速检测中得到广泛应用。三、快速检测技术传统微生物检测方法包括形态观察、生化鉴定及血清学分型等冗繁的操作，已不能满足现代食品微生物检测对灵敏度、特异性和时效性的要求。1、分子生物学方法此类方法在基因水平上对靶标微生物进行检测，尤其适用于难培养或抗原结构复杂微生物的鉴定及分型，主要包括PCR、核酸分子杂交及基因芯片等技术。⑴PCR及其衍生技术PCR是一种体外酶促合成特定DNA片段的技术，它通过以变性、退火和延伸３个步骤为一个周期的循环反应实现产物的指数级增长。相对于扩增单一靶基因的常规PCR，多重PCR通过在同一反应体系中加入多对特异性引物来实现在同一反应管中同时扩增多个目标基因，可用于同时检测多种微生物或通过多基因交叉确认来进行特定微生物鉴定或种下分型。实时荧光定量PCR技术是一种通过监测PCR产物荧光信号的实时累积来定性或定量分析起始模板的方法。该法全程封闭式反应且无需PCR后处理，避免了交叉污染及溴化乙锭等有毒物质的使用，具有特异性强、高度自动化等优点。通过选取特异性基因设计引物及探针，ｑＲＴ－PCR法近年来已在多种致病细菌、霉菌、酵母以及乳酸菌等重要食品微生物指标的定性和定量检测中被广泛应用。尽管上述PCR及其衍生技术具有高灵敏度、快速等优点，但方法实施所需的昂贵仪器设备严重限制了其在我国食品检测机构的推广应用。⑵核酸分子杂交技术核酸分子杂交是利用带有标记的特定DNA或RNA探针与已变性的待检核酸样品进行杂交，若样品中存在与探针互补的靶标序列则二者退火形成带标记的双链，通过对标记物信号有无及强度的检测即可实现微生物定性或定量分析。 分子杂交技术应用的关键在于靶标特异性核酸片段选取及相应探针设计及标记。如以葡糖苷酸酶基因设计核酸探针可用于检测食品中的总大肠杆菌，而其不同致病型的区分则需针对特异毒力基因合成适宜的探针。由于放射性标记存在标记元素的半衰期短、对人体及环境不友好以及需要特殊操作设备等缺陷，近年来已逐渐被非放射性DNA探针检测系统所取代，其主要通过酶促反应将特定的底物转变为生色物质或化学发光物质而达到信号放大的目的。⑶基因芯片基因芯片又称DNA微阵列，是一种高通量的核酸分子杂交技术。它通过原位合成或显微打印将一系列探针以预设的次序固定于固相支持介质表面，形成高密度的寡核苷酸阵列，样品经核酸提取、PCR扩增及标记后与芯片上的探针阵列杂交，最后通过荧光扫描或酶学方法检测杂交信号的强度和分布以确定受检样品中特定微生物的存在及丰度。食品中的微生物种群具有种类广、丰度低、随机性强等特点，传统的培养、鉴定方法往往会掩盖一些低丰度或不易培养的微生物，而PCR、免疫杂交等现代技术则多限于检测一种或少数几种靶标微生物或基因，难以全面分析食品受污染状况。而基因芯片具有高通量、并行化及高度自动化等优点，为食品微生物群落结构研究、食源性致病菌多个毒力、药敏基因的同步化、快速检测等提供了一个有力的平台。2、免疫学方法免疫学方法是基于抗原－抗体的特异性结合反应发展而成的蛋白质水平上的系列检测方法，相对于分子生物学手段其更直接地靶向微生物特异性基因的表达产物，在一定意义上更具说服力。⑴酶联免疫吸附测定酶联免疫吸附法是将抗原－抗体免疫反应的特异性与酶的高效催化作用有机地结合起来的一种固相酶免疫分析方法。相对于传统ＥＬＩＳＡ的检测限，通过单克隆抗体双夹心法将海产品中副溶血性弧菌的检测灵敏度提高了1000～10000倍；而以新型碳纳米管作为固相吸附材料在沙门氏菌的ELISA检测中亦取得了类似的效果。此外，许多学者还结合ＰＣＲ技术的倍增放大效果开发PCR－ELISA检测技术，进一步提高检测灵敏度。酶联荧光免疫分析技术则是近年来在ELISA基础上发展而来的新型免疫荧光检测技术。该技术用荧光底物代替生色底物， 提高了分析灵敏度，增宽测量范围，减少试剂的用量。Ｍｉｎｉ－ＶＩＤＡＳ即是法国梅里埃公司根据上述原理开发的一款全自动酶联免疫荧光仪，实现了双抗夹心的ELISA技术的自动化。⑵免疫层析技术免疫层析将免疫反应和层析原理相结合， 借助毛细管作用使样品在条状纤维制成的膜上泳动， 其中的待测物与膜上一定区域的配体发生高特异性、高亲和性的免疫结合， 通过酶促显色反应或直接使用着色标记物， 在短时间（20min内）便可得到直观的结果。随着检测技术的不断发展，免疫层析试纸也不断应用于致病菌定量化检测。此外，在同一免疫层析试纸条上进行多种食品致病菌同步检测的方法也正逐步被开发。通过不同光信号标记。⑶乳胶凝集反应乳胶凝集反应采用人工大分子乳胶颗粒标记抗体， 使之与待测抗原发生肉眼可见的凝集反应，以达到检测目标病原微生物或毒素的目的。基于乳胶凝集检测法的高灵敏度和特异性以及结果直观性、操作简易度等优势，近年来其在食源性致病菌检测中的应用越发广泛。3、代谢学方法代谢学方法是指基于微生物在生理代谢过程中发生的特异性物理、化学变化而设计的一系列检测手段，主要包括电阻抗法、ATP发光法和微量生化法等。⑴阻抗法阻抗法是一种通过检测细菌在生长繁殖时将电惰性生物大分子代谢为带电荷的活性小分子所引起的培养液电阻和电导的变化来定量表征微生物的新型检测方法。该法因具有高敏感性、特异性、反应快速性以及可重复性等优点而在食品微生物快速检测中被广泛应用。⑵ATP生物发光法ATP作为机体的“能量货币”普遍存在于所有活体生物中且含量相对恒定，其随机体死亡亦会被快速分解，因此测定样品中的ATP浓度即可推算出其携带的活菌数。基于此，ATP发光法通过发光光度计检测荧光素酶在ATP的作用下氧化荧光素所产生的荧光强度，并利用其在一定范围内与ATP浓度的线性关系来定量样品中的ATP含量，继而推算系统中代谢活细胞水平。该方法无需对样本中的微生物进行培养，可在数分钟内完成检测，且荧光光度计小巧便携，尤其适用于大批量食品样本细菌污染状况以及食品加工设备清洁度的现场快速检定。如自动ATP生物荧光技术已在欧洲和北美的乳品工业中广泛应用于生乳活菌数检测、UHT乳活菌数检测、设备清洁度的评估及成品架售期的推算等。⑶微量生化法为了满足食品微生物快速化、标准化、批量化检测的需求，目前市场上出现了许多高精密度、高重现性的商品化微量生化鉴定试剂盒，大大提高了检测速率以及结果的重现性。尽管上述试剂盒已大大简化了传统微生物生化鉴定程序，但其不同反应仍需分别加样且结果依赖人工判读。近年来随着检测科学的不断发展，全自动微生物生化鉴定分析系统也应运而生，通过结合现代计算机技术，该系统可在一次加样后自动完成系列生化检测并通过概率最大近似值模型法分析后直接报告鉴定结果。上述自动生化鉴定系统可在４－６ｈ内同时完成数十个样品的分析，可满足批量化鉴定的需求，且与其他检测方法的结果高度吻合。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      微生物肥料与传统肥料的区别！百欧博伟生物：目前我国由于长期大量地使用传统化肥，使的我国土地出现了很多问题。其中一项很重要的问题就是化肥利用率低，其n、p、k的利用率只有35%左右。还有一项，土传病害也严重增多，许多常规的解决办法都不是很理想。然而生物菌肥应随着科技的发展，经济的发展，社会的发展，“绿色、环保”主题在人们的头脑中越来越重要。那生物菌肥到底有什么优势呢？下面小编为大家详细介绍下。国家大力提倡的土地减肥等一系列的政策活动，无非是想提高化肥利用率改善土地环境，菌肥明显优势就是能够提高化肥利用率。化肥利用率急剧下降，这很说明问题，仅靠大量增施化肥来提高作物产量是有限的，更何况还有污染环境等一系列的问题。为此各国科学家一直在努力探索提高化肥利用率达到平衡施肥、合理施肥以克服其弊端的途径。ETS生物科技微生物肥料在解决这方面问题上有独到的作用，所以，采用微生物菌肥与复合微生物菌肥配合施用，既能保证增产，又减少了化肥使用量，降低成本，同时还能改善土壤及作物品质，减少污染。绿色肥料产出绿色蔬菜食品，人民的生活水平在不断提高，人们对生活品质的要求也是提高了不少，国内外都在积极发展绿色农业(生态有机农业)来生产安全、无公害的绿色食品。生产绿色食品过程中要求不用或尽量少用(或限量使用)化学肥料、化学农药和其它化学物质。那么，对肥料的要求也就提高了起来，既要能够保障促进生长，质量也得是上上品，最重要的，也就是人们比较关注的，有害物质一定要尽量在尽量的少。当然，从大方面的考虑的话，对生态环境要无不良影响。微生物菌肥符合以上三原则，不但能缓和或减少农产品污染，而且能够改善农产品的品质。微生物菌肥对土壤的改良也具有很大的作用。微生物菌肥中有益微生物能产生糖类物质，占土壤有机质的0.1，与植物液，矿物胚体和有机胶体结合在一起，可以改善土壤团粒结构，增强土壤的物理性能和减少土壤颗粒的损失，在一定的条件下，还能参与腐殖质形成。所以施用微生物肥料能改善土壤物理性状，活化土壤，解决土壤中营养不平衡问题，有利于提高土壤肥力，让蔬菜瓜果、中药材、玉米、小麦等作物吃饱喝足，盛果期长不早衰。最后两点，是可以以菌杀菌并刺激作物生根。微生物菌群中有40%的好氧微生物和60%的厌氧微生物，能够强力抑制土壤中有害菌活动，是解决蔬菜重茬病害的新方法。还可以强烈刺激作物生根，根系发达，营养吸收好，壮苗抗病力强，病害明显减少。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    单个核细胞的分离纯化原理与方法！外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。　　一、原理　　PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的溶液（分层液）进行密度梯度离心，可使不同类别的血细胞按其相应密度分布，从而被分离。　　二、方法　　1、聚蔗糖-泛影葡胺分层液法 聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-hypaque，F-H）分层液为密度梯度离心法最常用的分离液，其主要成分是聚蔗糖和泛影葡胺。聚蔗糖 （Ficoll） 分子量为40kD，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点；常用的Ficoll溶液浓度为6%，密度为1.020。泛影葡胺 （Hypaque） 用来增加密度，适量加入密度为1.200、浓度为34%的Hypaque于Ficoll溶液中，配成密度为1.077±0.001的分层液，称为淋巴细胞分层液，用于淋巴细胞的分离。　　分离细胞时，将肝素抗凝全血叠加在分层液上，使两者形成一个清晰的界面。水平离心后，形成不同层次的液体和细胞区带，从而分离出PBMC。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇Ficoll而凝集成串钱状，沉积于分层液底部；血小板因密度小而悬浮于血浆中；PBMC的密度稍低于分层液，故位于血浆层和分层液的界面中，呈白膜状。吸出单个核细胞，计数，用台盼蓝染色检查细胞活力。　　本法分离单个核细胞的纯度可达95%，细胞获得率达80%以上，细胞活性达95％以上小鼠淋巴细胞的比重与人淋巴细胞比重不同，若分离小鼠淋巴细胞应选用小鼠淋巴细胞分离液，比重1.092±0.001。　　2、Percoll分层液法　　Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 （polyvinyl pyrolidone, PVP） 处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。　　将1份10XPBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100％Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml。用PBS或细胞培养液稀释100％Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的分离。若分离淋巴细胞应使用1.0777g/ml，配制时用稀释液稀释60％即可。　　取比重1.077的Percoll分离液X ml与离心管中，将等倍稀释的抗凝血1/2 X ml 小心叠加在分离液上，经水平离心（1500rpm）后，便得四个细胞层，从而分离出淋巴细胞。表层为死细胞残片和血小板，底层为粒细胞和红细胞，中间有两层，上层富含单核细胞，下层富含淋巴细胞。　　该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法，淋巴细胞纯度高达98%，单核细胞纯度可达78%。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！