MTEC1小鼠胸腺上皮细胞的处理方法与培养步骤！ 一、知识简介小鼠胸腺上皮细胞分离自胸腺组织采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。胸腺是机体重要的淋巴器官，其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，还可以分泌胸腺激素及激素类物质，具有内分泌技能的器官。 二、产品信息平台编号：Bio-133518 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：MTEC1 细胞名称：MTEC1小鼠胸腺上皮细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、主要用途小鼠胸腺上皮细胞可用于17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖影响的转录组学与蛋白组学分析研究。 四、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 五、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  用于石油发酵生产反丁烯二酸的：皱褶假丝酵母 皱褶假丝酵母(C. rugosa)，原名柱状假丝酵母(C. cylindracea)，是一种半子囊不产孢子的假丝状单细胞非致病酵母真菌。该酵母通常被认为是对人类和其它生命形式都是安全的。其所产的脂肪酶（C. rugosa lipase , CRL）广泛应用于传统与现代工业，如脂肪酸的生产、各种酯类的合成等，是当前世界上应用最广泛的商品化脂肪酶之一。 一、菌种简介平台编号：Bio-51952 规格：冻干物拉丁属名：Candida Rugosa (Anderson) Diddens Et Lodder 菌株名称：皱褶假丝酵母其他编号：AS2.511培养基编号：13培养温度：25-28℃培养时间：48h用途：石油发酵生产反丁烯二酸注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*麦芽汁琼脂培养基*YM 培养基（酵母粉 3.0 g ；麦芽提取物 3.0 g ；葡萄糖 10.0 g ；蛋白胨 5.0 g；琼脂 20.0 g；蒸馏水 1000 ml ；pH 6.2 +/- 0.2 ） 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况，请在收到菌种后2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。3、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。4、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 栖植物潘隆尼亚碱湖杆菌的性质与用途及生产工艺！ 栖植物潘隆尼亚碱湖杆菌是Pannonibacter属的微生物，原产地为匈牙利。模式菌株；革兰氏阴性，在2216E平板上呈乳油色，不湿润，直径1mm.。主要用途为分类；研究；教学，具体用途为模式菌株，用于分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-02832 提供形式：冻干物拉丁属名：Pannonibacter Phragmitetus 中文译名：栖植物潘隆尼亚碱湖杆菌拉丁学名：Pannonibacter phragmitetus原始编号：H5菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：周宇光直接来源国家：中国保藏时间：8/1/2006生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：水处理培养温度：30℃培养基：0002    分离源：水处理菌剂用途：水处理注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种特性细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性,不产细胞色素。 三、功效作用产酸，菌群，维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用，可竞争性地抑制病原微生物，产生有益的代谢产物，激活酸性蛋白酶的活性，参与机体的，防止有害物质产生。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 Cattlechondrocytes牛软骨细胞的实验操作规程！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133541 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：Cattlechondrocytes 细胞名称：牛软骨细胞产品类别：其它动物细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、基本特性（1）组织来源于正常人肺组织。（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。（3）原代细胞培养末期液氮冻存。（4）每冻存管细胞数：500000cells/1ml。（5）肌动蛋白, alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。（6）不含有 HIV-1 、HBV 、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。 三、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 四、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 五、实验操作1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶,置于超静台吹干或45℃烘箱烘干(切记保持无菌),4℃冰箱放置,备用。2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥,75%酒精浸泡,无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS (pH 7.4 )中反复洗涤,去除外部的血渍,洗涤液澄清,用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。4、除去内皮细胞：将纵向剪开, 内膜面向上,无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍,去掉内皮细胞,用1 × PBS (pH 7.4 )洗涤3次。5、分离中膜：将去掉内膜的,继续刮动分离中膜,去掉外膜,用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块,加入1 × PBS (pH 7.4 ),转移到15ml 离心管中,PBS洗涤3次,离心收集沉淀物。6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液,将离心管放入37℃水浴消化15min。7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中,按1:1加入消化终止液,中止酶反应;余下的组织继续加入消化液,消化15min ,重复消化3次。8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中,1000 rpm,离心10 min,弃去上清,加入培养液重悬,染色计数细胞。9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。10、培养：放置于37℃,5% CO2培养箱中。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 微生物实验室及检定菌和培养基的管理制度！ 一、微生物实验室管理制度  1、室内应备有专用的接种棒、酒精灯、试剂架、搪瓷盘及盛有5%石碳酸水溶液的消毒水、吸管筒、酒精和碘酒棉球等物。  2、无菌操作衣、帽和口罩应每次使用后必须进行清洗和高压灭菌。  3、检验前应做好微生物实验室及工作台的清洁，并用规定方法进行灭菌消毒。  4、微生物检验人员必须具备无菌概念，入室前应严格洗手消毒。穿戴无菌工作衣、帽、口罩及拖鞋、不能化妆、佩带饰物，不能裸手直接接触食品添加剂。出室时应脱去无菌工作衣、帽、口罩及拖鞋，并挂放在指定的地点。严禁穿戴无菌工作衣、帽走出无菌室，进入非洁净区域。  5、患有传染病、皮肤病、皮肤有伤口者不能进入无菌室进行微生物操作。  6、在进行检定菌和食品添加剂检验操作时，不得用手直接接触或玷污他物，防止污染。  7、接种环在使用前或使用后必须经过火焰炽灼灭菌，冷却后方可使用或收还。  8、检验过程中用完的器具应定位放置。染菌器皿或剩余菌种、菌液或其他带菌培养物的器皿应在沸水中煮沸约30分钟或进行高压灭菌后，方可弃去。操作时若将菌液碰到手或桌面，应及时用消毒液处理，不得污染环境。  9、检验完毕应及时用消毒液清理操作用具，清洁工作台及地面，并用紫外线灯消毒，关闭电源。室内应绝对保持整洁，定期消毒处理，保持无菌环境。非微生物检验人员不得进入无菌室，并谢绝参观。检定菌（法定标准规定用作生物检定的一切菌种）有专人保管。原始菌种须在低温保存，并作好检定菌的传代工作。无菌检查后的菌液，必须经高温灭菌后弃去。凡作暴露菌试验后的双碟培养基应经加热约30分钟后弃去。  10、洁净室洁净度的监测工作应定期测定，并记录存档。每次进入无菌室操作时，必须同时进行环境暴露试验检测。  11、洁净区域与非洁净区域的压差应大于10，洁净区域各室之间的压差应大于5，并按规定随时检查，应符合规定。  12、操作使用后的无菌衣，帽，口罩每次必须进行清洁和消毒。未经消毒的无菌衣不得带入无菌室，更不得使用。  13、微生物检测必须严格按操作规程进行。 二、检定菌、培养基管理制度 1、检定菌：凡法定标准规定用作生物检定的一切菌种。  2、检定菌种的来源为江苏药检所提供（购买）以接种好的菌种斜面。  3、检定菌须有专人管理。  4、将购来的各种试管斜面菌种放入3~8°C的冰箱中冷藏保存。  5、使用时必须按规定的方法启用，并做好使用记录。  6、严格按标准操作程序的规定进行菌种的传代接种。  7、将传代并经培养后的菌种放入3~8°C的冰箱中冷藏保存。  8、每支菌种需标明菌名、接种日期和规定的使用有效期。  9、严格按操作规程进行无菌检定工作。 10、菌种处理：凡以使用后的菌种斜面、过期的菌种斜面染菌或活性降低的斜面管必须在沸水中煮沸60分钟以上，或放入蒸汽消毒锅在121°C消毒1小时，方可弃去，未经消毒的菌种斜面一律不得随意的弃去，以防环境污染或交叉污染。  11、培养基需按标准操作程序进行制备和消毒，置规定温度的生化培养箱内培养规定时间后，应检查无菌生长方可使用或可用直接使用从江苏省疾控中心购买的培养基。  12、凡做暴露菌落试验后的双碟培养基必须经加热煮沸10〜15分钟后弃去。  13、培养基处理：使用过的培养基，若为无菌则置沸水中煮沸60分钟以上，再弃去；若为有菌，则必须经高温消毒后方可弃去。未经消毒的培养基一律不得随意的弃去，以防环境污染或交叉污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   蜡样芽胞杆菌的应用领域与使用方法及注意事项！ 蜡状芽胞杆菌，菌落乳白色，圆形扁平，表面稍干燥，边缘不规则。菌体长杆状，1.8×4.0μm，孢囊微膨大，芽孢中生。具有处理养殖废水潜力。 菌种简介平台编号：Bio-085918 规格：10?Cfu/颗 10支/盒 拉丁属名：Bacillus Cereus 菌株名称：蜡样芽胞杆菌用途：4代定量工作菌株。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 菌珠产品使用说明书 使用前请仔细阅读说明书并确认产品标示的含量范围 商品名称：菌珠含量范围：0.5~2.0×10e3 cfu/颗 贮存条件：-20℃或-20℃以下有 效 期：12 个月菌株来源：本产品由中国医学细菌保藏管理中心（National Center For Medical Culture Collections, CMCC）提供的 0 代菌种生产。 传代次数：第 4 代  使用方法① 平衡至室温：使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。② 溶解：将适量的无菌生理盐水或无菌水加入菌珠西林瓶中，盖上瓶盖，静置约 5~10s， 涡旋震荡 5~10s，或使用其它方法使其完全溶解。 ③ 按照相应标准或试验要求，吸取适量菌液进行相应接种培养即可。  使用示例1、若接种方法为平板涂布法： ① 使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。 ② 将 1.1mL 无菌生理盐水或无菌水加入西林瓶中，盖上瓶盖，静置约 5~10s，涡旋震 荡 5~10s，或使用其它方法使其完全溶解。 ③ 吸取 100?L 菌液（含量约为 50~200cfu），加至已凝固的无菌培养基平板中，再用无 菌 L 型涂布棒将菌液沿同一方向在平板上涂抹均匀，待菌液渗透入培养基内，将平板 倒置，置于所需温度培养即可。 2、若接种方法为液体接种或倾注平皿法： ① 使用前将未开启的西林瓶平衡至室温。 ② 将 1.1mL 无菌生理盐水或无菌水加入西林瓶中，盖上瓶盖，静置约 5~10s，涡旋震 荡 5~10s，或使用其它方法使其完全溶解。 ③ 吸取 1mL 已溶解完全的菌液，加入 9mL 无菌生理盐水中，混匀，进行 10 倍稀释（总 含量约为 500~2000cfu）。 ④ 吸取步骤③中 1mL 菌液（含量约为 50~200cfu），加至相应液体培养物中，置于所需 温度培养即可。或是加至无菌平皿中，注入 15~20mL 温度不超过 45℃已融化的培养基， 混匀，凝固，倒置培养。  应用领域1、适用于药检中的灵敏度试验、促生长试验、无菌检查、适用性检查、控制菌检查等。2、适用于食品检验的定量、定性对照。3、适用于化妆品微生物检验质量控制。  注意事项1、本产品内含两个小球，白色为菌珠球，蓝色为保护球。使用过程中，蓝色保护球不必取 出，不影响使用。若保护球由蓝色变为红色，本产品不可使用。 2、本产品为一次性产品，菌珠溶解后，请于 8h 之内使用完毕。3、如果暂时不使用，请严格按照贮存条件存放，请勿放置于温度波动较大的普通冰箱中。4、避免反复冻融本产品。 5、按照适当的生物危害处理方式处理废弃的菌悬液。 6、产品若出现受潮、密封不严等情况，请勿使用。 7、仅供实验室使用。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     用于分类与教学及研究的：茎瘤固氮根瘤菌 茎瘤固氮根瘤菌属于杆菌。细胞直径大于2.0μm，长短不一。呈类球状或卵圆状。细胞单个、成对或不规则堆团状，罕见4个以上的链状。以周生鞭毛运动。碳源广泛，包括葡萄糖、果糖、蔗糖、乙酸、延胡索酸、葡糖酸和乙醇等。不分解蛋白质。能以硝酸盐、氨和氨基酸作氮源。过氧化氢酶阳性。广泛分布于土壤中。 一、菌种简介平台编号：Bio-103020 规格：冻干物 拉丁属名：Azorhizobium Canlinodans 菌株名称：茎瘤固氮根瘤菌收藏时间：1993/12/20原始编号：ORS-571-R3资源归类编码：15131118104模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：非模式菌株。 是一种茎瘤固氮根瘤菌，与植物共生，在植物的固氮过程中起主要作用，生长过程中不需要氧气。属于化能异养型。具体用途：研究生物危害程度：四类致病对象：无培养基编号：637培养温度：25-30℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人肺微血管内皮细胞的培养步骤及收货注意事项！  细胞简介平台编号：Bio-73461 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：人肺微血管内皮细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                      细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：准备DMEM高糖，10% 优质胎牛血清。1）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。2）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 微生物菌种查询网提供的人肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的人肺微血管内皮细胞完全培养基(CM-H001)能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。同时，还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 购买细胞注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。3、用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议直接购买提供的完全培养基。5、建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和中国微生物菌种查询网技术部沟通交流。6、该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      微生物和生物医学实验室的设计准则与要求！ 1、范围 本标准规定了微生物和生物医学实验室生物安全防护的基本原则、实验室的分级、各级实验室的基本要求。本标准为最低要求。 本标准适用于疾病预防控制机构、医疗保健、科学研究机构。 2、规范性引用档 下列档中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用档，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些档的最新版本。凡是不注日期的引用档，其最新版本适用于本标准。 GB 14925—2001 实验动物 环境及设施 GB/T 16803—1997 暖气、通风、空调、净化设备 GB 50073—2001 洁净厂房设计规范 JGJ 71—1990 洁净室施工及验收规范 3、定义 本标准采用下列定义 3.1 实验室生物安全防护 biosafety protection for laboratories 实验室工作人员所处理的实验物件含有致病的微生物及其病毒时，通过在实验室设计建造、使用人员防护设置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面採取综合措施，确保实验室工作人员不受实验物件侵染，确保周围环境有受其污染。 3.2 微生物危害评估 hazard assessment for microbes 对实验微生物和病毒可能给人或环境带来的危害所进行的评估。 3.3 气胶 aerosol 悬浮于气体介质中粒径一般為0.001μm~1000μm的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态分散体系。 3.4 生物安全柜 biosafety cabinet 处理危险性微生物时所用的箱形空气净化安全装置。 3.5 CLASS I级生物安全柜 class Ⅰbiosafety cabinet 至少装置一个高效率滤网HEPA对排气进行净化，工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作视窗，外部空气由操作视窗吸进，而不可能由操作视窗逸出。工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验物件不受污染。 3.6 CLASS II级生物安全柜CLASS Ⅱ biosafety cabinet 至少装置一个高效率滤网HEPA对排气进行净化，工作空间为经高效率滤网净化的无涡流的单向流空气。工作时正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部操作视窗。外部空气由操作视窗吸进，而不可能由操作视窗逸出。工作状态下遵守操作流程时既保证工作人员不受侵害，也保证实验物件不受污染。 3.7 CLASS III级生物安全柜 CLASS III biosafety cabinet 至少装置一个高效率滤网HEPA对排气进行净化，工作空间为经高效率滤网净化的无涡流的单向流空气，正面上部为观察窗，下部为手套箱式操作口。箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝。 3.8 物理抑制设备 physical containment device 用物理或机械方法防止病原微生物逸出的设备。 3.9 高效率滤网HEPA (high efficiency particulate air) filter 在额定风量下，对粒径大于等于0.3μm的粒子捕集效率在99.97%以上及气流阻力在245Pa以下的空气过滤。 3.10 相对压力 relative pressure 绝对压力减去大气压力之值。 4、实验室生物安全防护的基本原则 4.1 总则 4.1.1 实验室生物安全防护的内容包括安全设备、人员防护装置和措施，实验室的特殊设计和建设要求，严格的管理制度和标准化的操作程序及规程。 4.1.2 应将每一特定实验室从立项、建设到使用维护的全过程中有关生物安全防护综合措施的内容编入实验室的生物安全手册中。必须设有专职的生物安全负责人。 4.1.3 生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别。 4.2 安全设备和人员防护 安全设备和人员防护是确保实验室工作人员与病原微生物及其病毒直接接触的一级屏障。 4.2.1 生物安全柜是最重要的安全设备，形成最主要的防护屏障。实验室应按要求分别配备CLASSⅠ、CLASS Ⅱ、CLASS Ⅲ级生物安全柜。所有可能使病原微生物及其病毒溅出或产生气胶的操作，除实际上不可实施外，都必须在生物安全柜内进行。不得用超净工作台代替生物安全柜。 4.2.2 必要时实验室应配备其他安全设备，如设置配有排风净化装置的排气罩等，或采用其他不使病原微生物逸出确保安全的设备。 4.2.3 实验室所配备的离心机应在生物安全柜或本标准4.2.2中所指的其他安全设备中使用，否则必须使用安全密封的专用离心杯。 4.2.4 必须给实验室工作人员配备必要的人员防护用品。 4.3 实验室设计与建造的特殊要求 包括：实验室的选址、平面布置、实验室结构、通风空调、安全装置及特殊设备等设计与建造的特殊要求。 4.4 安全操作流程 4.4.1 本标准针对不同等级的生物安全防护实验室所规定的安全操作流程，包括标準的安全操作流程和特殊的安全操作流程，必须在实验室的生物安全手册中明列并加以执行。 4.4.2 针对不同的微生物及其病毒应补充规定相应的特殊安全操作流程，也应在各实验室的生物安全手册中明列并加以执行。 4.5 病原微生物及其病毒在实验室之间的传递 病原微生物及其病毒在实验室之间的传递必须严格按照国家现行有关管理办法执行。 4.6 管理制度 4.6.1 实验室基本管理 4.6.1.1 实验室内的佈置和准入 a）在主实验室应合理设置清洁区、半污染区和污染区； b）非实验有关人员和物品不得进入实验室； c）在实验室内不得进食和饮水，或者进行其他与实验无关的活动； d）实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准。 4.6.1.2 实验室工作人员的资格和培训 a）实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立进行工作前还需在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标準，方可开始工作； b）实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工作； c）实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作流程。 d）三级和四级生物安全防护实验室的工作人员在开始工作前必须留本底血清进行有关检测，以后定期复检。如有疫苗必须进行免疫注射。 4.6.2 实验室特殊管理 为避免和处理源于不安全操作引起的意外事故，必须严格执行以下原则： 4.6.2.1 针对可能的的危险因素，设计保证安全的工作程式。 4.6.2.2 事前进行有效的培训和摸拟训练。 4.6.2.3 对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性保健治疗的措施，足以应付紧急情况。 4.6.2.4 实验室事故处理：工作人员在操作过程中发生意外，如针刺和切伤、皮肤污染、感染性标本溅及体表和口鼻眼内、衣物污染、污染试验檯面等均视為安全事故。应视事故类型等不同情况，立即进行紧急处理。具体措施必须形成书面档并严格遵守执行。在紧急处理的同时必须向有关专家和领导汇报，并详细记录事故经过和损伤的具体部位和程度等，由专家评估是否需要进行预防性治疗。 4.6.2.5 应填写正式的事故登记表，并按规定报告给国家相应级别的卫生主管部门。 4.7 微生物危害评估 当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须进行微生物危害评估。应依据传染性微生物致病能力的程度、传播途径、稳定性、感染剂量、操作时的浓度和规模、实验物件的来源、是否有动物实验资料、是否有有效的预防和治疗方法等诸因素进行微生物危害评估。 4.7.1 通过微生物危害评估确定物件微生物应在哪一级的生物安全防护实验室中进行操作。 4.7.2 根据危害评估结果，制定相应的操作流程、实验室管理制度和紧急事故处理办法，必须形成书面档并严格遵守执行。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     细菌对消毒剂产生耐受性的方式有哪些？ 百欧博伟生物：当细菌细胞被作用于消毒剂中时，细菌中的多种结构就会受到不可逆转的损伤或损害作用。如细菌细胞的增殖能力的丧失通常就被称为是微生物死亡。但是在消毒过程中，一些细菌细胞往往能够耐受消毒剂的作用，尽管它们的增殖能力会暂时丧失，但是过一段时间之后，它们的增殖能力又会恢复，从而使消毒过程无效。这就是细菌对消毒剂的耐受性，产生这种耐受性与多种因素有关。通常细菌产生耐受性的几种方式是：  （一）具耐受性的细菌和不能完全致死的消毒剂剂量    在某一特定的群体中，细菌对于某一特定的消毒剂剂量敏感范围很宽。在正常的接触条件下，消毒剂能够杀灭99.999%的细菌。从本质上讲，清洁前含1000000CFU/cm2, 的表面有望在消毒后仅含10个细菌。在这个假想的条件下，细菌数量减至了安全水平，达到了消毒过程目的。问题在于10个耐受住了消毒程序的残存菌，会成为再次污染的潜在因素。对表面进行充分地润洗，那么这10个残存菌会耐受住第二个消毒过程而残存下来，其他种类的细菌也会发生这个过程。过了一段时间并经历了几次消毒和清洁过程之后，具有了耐受力的残存者们有能力进行增殖。当这个过程发生以后，工厂就得重新寻找办法处理那些对这种杀菌剂已经不再有反应的细菌。 （二）分泌多聚糖样物质黏附细菌，共同形成生物膜     生物膜的形成是细菌耐受消毒剂的另一种机制。某些细菌能分泌一种多聚糖样的物质，这种多聚糖组成了一层薄膜，这些分泌物有着很强的黏性，能把细菌本身牢固地黏附在金属上面，这样就形成了一层含有细菌的膜，也就是我们所指的生物膜。形成生物膜的细菌本身也许是无害的或者不是病原菌，然而，由它们的分泌物形成的凝胶矩阵却能够把它们自己黏附牢并且能够把病原菌包埋其中，如李斯特菌。尽管这些病原菌对于生物膜的形成没有任何作用，然而它们却能污染和该表面接触的产品。     凝胶矩阵对于化学去除剂有非常好的耐受性，因此生物膜一旦形成就难于去除，通常需要高于正常浓度的碱试剂或是具有强氧化性的消毒剂才能奏效，而完全去除生物膜通常需要几种方法并用。  （三）清洁剂之间的交互作用钝化消毒剂效力    大部分清洁剂既含有非离子型的表面活性剂（乳化剂和清洁剂），也含有阴离子型的表面活性剂或者是两者组合成的混合物。在溶液中，非离子型的表面活性剂电性为中，但是阴离子型的表面活性剂却带有负电荷。当该清洁剂被直接用于含有土壤的表面上时，大部分效力在1520min之内耗尽。然而，极少量消毒剂，也就是那些在水溶液中呈现阴离子状态并最先作用于表面的消毒剂成分却留在了表面上。在施用季铵盐类消毒剂之前，假如该表面没有被充分润洗，那么带正电荷的季铵基团就会与带负电荷的残留消毒剂发生中和反应，这些消毒剂就会被完全钝化，形成了阴离子一季铵基团复合物或无杀菌作用的膜，消毒剂完全丧失了效力，更有甚者，在形成的季铵盐复合膜中也会含有一些利于细菌生长的营养物质。假如没有仔细检查，这样的复合物实际上就能支持细菌的裂殖。   北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  小鼠纤维肉瘤细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞是一种弱免疫原性的细胞系，由纤维肉瘤在C57BL/6小鼠中诱导产生。这种细胞系已被广泛用于诱导肿瘤反应性T淋巴细胞的过继免疫疗法研究中。同时，MCA-205细胞也被用作刺激剂，以研究细胞因子的表达。此外，该细胞系还是研究肿瘤细胞免疫反应和支持靶向癌症免疫疗法开发的绝佳模型。 二、MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞培养操作 1)复苏MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞可以用于KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究： Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用研究为明确Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用,我们首先检测了其在小鼠纤维肉瘤细胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞系中的表达情况,发现Kif20a高表达。通过转染成功构建出Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系,并以此为研究对象,检测其细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的变化,并用Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系构建荷瘤鼠,观察其肿瘤大小及肿瘤转移情况,结果显示,Kif20a下调后,小鼠纤维肉瘤细胞的活力降低,细胞周期阻滞在G2/M期,克隆形成能力明显降低,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,肿瘤减小,肿瘤组织Ki67的表达降低,提示在小鼠纤维肉瘤中,Kif20a下调仍能抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。 综上所述,本研究显示KIF20A是软组织肉瘤生物调控网络的核心基因,KIF20A在软组织肉瘤中高表达与软组织肉瘤的预后密切相关。在纤维肉瘤细胞系中,转录组测序发现下调KIF20A,多种与生物学进程及信号通路相关的基因发生变化。进一步研究发现,下调KIF20A后,PI3K-AKT活性受到抑制,其下游NF-κB、细胞周期、凋亡等信号通路也发生改变,从而抑制了肿瘤的增殖、迁移、侵袭及转移,促进了肿瘤的凋亡。本研究明确了KIF20A在小鼠纤维肉瘤细胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞系中的表达情况,探讨了其在纤维肉瘤中的作用及相关机制,提示KIF20A是治疗纤维肉瘤潜在的分子标志物和治疗靶点,为纤维肉瘤的治疗提供新的思路。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     沙眼衣原体的生物学特性与微生物学诊断及检测！ 一、知识简介 沙眼衣原体 《伯氏系统手册》(1984)的记载，将沙眼衣原体Chlamydia trachomatis 分为3个生物型，即小鼠生物型(biovar mouse)、沙眼生物型(biovar trachoma)和性病淋巴肉芽肿生物型(biovar lymphogranulomavenereum,LGV)。后二者与人类疾病有关。用间接微量免疫荧光试验，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14个血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34个血清型。 二、生物学特性 (一)形态与染色 将鸡胚卵黄囊或细胞培养的沙眼衣原体高度提纯，于电镜下检查，可见原体呈球形或类球形，胞浆膜外有刚性细胞壁，壁外有平滑表层。始体的体积较大，形状不甚规则，其包膜富有韧性，无刚性的细胞壁，原体和始体内皆含有DNA与RNA。 沙眼衣原体具有特殊的染色性状，不同的发育阶段其染色有所不同。成熟的原体以Giemsa 染色为紫色，与监色的宿主细胞浆呈鲜明无比。始体以 Giemsa 染色呈蓝色。沙眼衣原体对革兰氏染色虽然一般反应为阴性，但变化不恒定。沙眼包涵体在上皮细胞浆内，很致密，如以Giemsa染色，则呈深紫色，由密集的颗粒组成。其基质内含有糖原，以Lugol液染色呈棕褐色斑块。 (二)培养 人类是沙眼衣原体的自然宿主。它主要寄生于机体粘膜上皮细胞。猴和猩猩的眼及泌尿系可实验感染各型沙眼衣原体(包括LGV在内)。灵长类外的动物，对LGV之外的其他沙眼衣原体均无致病性。鸡胚只对大多数沙眼衣原体敏感，但禽类则对各型沙眼衣原均不敏感。小白鼠对LGV衣原体是敏感的，尤其是脑内感染，病死率可达30%。此外，大白鼠、豚鼠和家兔对LGV衣原体的敏感性幼龄高于成年。所有沙眼衣原体都能在鸡胚卵黄囊内生长繁殖，并致死鸡胚。将沙眼衣原体悬液接种6～8天胚龄卵黄囊内，置35℃温箱，一般于6～8天后死亡。剖检时胚体及卵黄囊膜充血。卵黄囊膜涂片可散在衣原体，病理切片则可见卵黄囊膜细胞内包涵体。 所有沙眼衣原体均可在细胞培养中生长，现多采用McCoy或HeLa229细胞株，在接种衣原体前，以X线照射细胞，或于细胞培养中加入代谢抑制如细胞松弛素B、DEAE葡聚糖呈放线菌酮，其目的在于细胞生长代谢缓慢，以利于衣原体的寄生性生长。 三、所致疾病 (一)沙眼：由衣原体沙眼生物变种A、B、Ba、C血清型引起。主要经直接或间接接触传播，即眼～眼或眼～手～眼的途经传播。当沙眼衣原体感染眼结膜上皮细胞后，在其中增殖并在胞浆内形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵体。该病发病缓慢，早期出现眼睑结膜急性或亚急性炎症，表现流泪、有粘液脓性分泌物、结膜充血等症状与体征。后期移行为慢性，出现结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫、角膜血管翳引起的角膜损害，以致影响视力，最后导致失明。据统计沙眼居致盲病因的首位。1956年我国学者汤飞凡等人用鸡胚卵黄囊接种法，在世界上首次成功地分离出沙眼衣原体，从而促进了有关原体的研究。 (二)包涵体包膜炎：由沙眼生物变种D～K血清型引起。包括婴儿及成人两种。前者系婴儿经产道感染，引起急性化脓性结膜炎(包涵体脓漏眼)，不侵犯角膜，能自愈。成人感染可因两性接触，经手至眼的的途径或者来自污染的游泳池水，引起滤泡性结膜炎又称游泳池结膜炎。病变类似沙眼，但不出现角膜血管翳，亦无结膜瘢痕形成，一般经数周或数月痊愈，无后遗症。 (三)泌尿生殖道感染：经性接触传播，由沙眼生物变种D～K血清型引起。男性多表现为尿道炎，不经治疗可缓解，但多数转变成慢性，周期性加重，并可合并副睾炎、直肠炎等。女性能引起尿道炎、宫颈炎等，输卵管炎是较严重并发症。该血清型有时也能引起沙眼衣原体性肺炎。 (四)性病淋巴肉芽肿：由沙眼衣原体LGV生物变种引起。LGV要通过两性接触传播，是一种性病。男性侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。女性可侵犯会阴、肛门、直肠，出现会阴～肛门～直肠组织狭窄。 四、免疫性 机体感染衣原体后，能诱导产生型特异性细胞免疫和体液免疫。但通常免疫力不强，且为时短暂，因而常造成持续性感染、隐性感染和反复感染。此外，也可能出现免疫病理损伤，由迟发型超敏反应引起，如性病淋巴肉芽肿等。 五、微生物学诊断 多数衣原体引起的疾病可根据临床症状和体征确诊。但对早期或经症患者，须行实验室检查来帮助诊断。 (一)直接涂片镜检 沙眼急性期患者取结膜刮片，Giemsa或碘液及荧光抗体染色镜检，查上皮细胞浆内有无包涵体。包涵体结膜炎及性病淋巴肉芽肿，也可从病损局部取材涂片，染色镜检，观察有无衣原体或包涵体。 (二)分离培养 用感染组织的渗出液或刮取物，接种鸡胚卵黄囊或传代细胞，分离衣原体，再用免疫学方法鉴定。 (三)血清学试验 主要用于性病淋巴肉芽肿的辅助诊断。常用补体结合试验，若双份血清抗体效价升高4倍或以上者，有辅助诊断价值。也可用ELISA、凝集试验。 (四)PCR试验 设计不同的特异性引物，应用多聚酶链式反应可特异性诊断沙眼衣原体，具有敏感性高，特异性强的特点，现被广泛应用。 六、防治原则 沙眼无特异的预防方法，疫苗在试用，效果不肯定。注意个人卫生，不使用公共毛巾和脸盆，避免直接或间接接触传染，是预防沙眼的重要措施。生殖道衣原体感染的预防同其他性病一样。 治疗一般用利福平、四环素、氯霉素、强力霉素及磺胺等药物。 七、快速检测 衣原体按其特性分为三类：沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittas)和肺炎衣原体(Chlamydia Pneumoniae)。沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；另外3个则与性病性淋巴肉芽肿(Lymphor Ganuloma Venereun, LGV)的发生有关。 沙眼衣原体快速检测目前分定性和定量快速检测。目前流行常用的为金标定性快速检测。其检测原理为：用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中衣原体的检测。从而达到检测女性宫颈和男性尿道中衣原体的存在，临床辅助诊断衣原体感染，试验结果还需要临床医生结合患者症状、体征及其它检查结果进一步确定的目的。 金标法定性沙眼衣原体快速检测有着快速、方便、准确性高的优点。为临床医生的辅助诊断等节省了很多时间。为目前市面上沙眼衣原体快速检测的主流。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    细胞冻存与复苏的实验原理与步骤及注意事项！ 一、知识简介 细胞冻存与复苏是一种用于长期储存细胞的技术。在这个过程中，细胞被置于低温环境中，减缓其代谢活动。通过将细胞冷冻保存在液氮中（通常为-196℃），细胞暂时脱离生长状态，但其细胞特性得以保存。当需要时，可以通过复苏将这些冻存的细胞重新激活，以供实验使用。这种方法能够适度地保存一定数量的细胞，防止细胞受到污染或其他意外事件的影响，从而发挥了细胞保种的作用。 二、实验原理 （一）细胞冻存原理： 细胞冻存的原理在于降低细胞温度至零度以下时，会引起以下变化：细胞器会脱水，细胞内可溶性物质浓度增加，并形成冰晶。 缓慢冷冻的过程可以逐渐使细胞脱水，以防止细胞内形成大冰晶。因为大冰晶可能导致细胞膜和细胞器的损伤和破裂。而快速复苏的目的是防止小冰晶再次结合成大冰晶，即防止冰晶的再结晶过程。 （二）低温保护剂的应用原理： 1、增加渗透压稳定性：在细胞冻存过程中，加入低温保护剂可以增加细胞的渗透压稳定性，从而减缓细胞在慢速降温过程中的脱水和皱缩现象，显著提高了冻存效率。 2、DMSO的作用：常用的低温保护剂是DMSO（二甲基亚砜），它是一种渗透性保护剂。DMSO能够迅速透入细胞，并提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓了冻结过程。这样一来，细胞在冻结前会透出水分到细胞外部，在细胞外形成冰晶，从而减少了细胞内部的冰晶形成，有效减少了冰晶对细胞的损伤。 三、实验步骤 （一）材料准备 1、仪器：净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。 2、玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、培养瓶、玻璃瓶（250 ml、100 ml）、废液缸。 3、塑料器皿：吸头、枪头、胶塞、移液管（10 ml）、15 ml 离心管、冻存管（1～2 ml）。 4、其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。 5、试剂：D-Hanks 液、小牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl、7.4% NaHCO3、DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油。 （二）细胞冻存 1、配制冻存培养液：配制含10% DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。 2、处理细胞：取对数生长期的细胞，使用胰蛋白酶将单层生长的细胞消化下来，对于悬浮生长的细胞，直接将细胞移至15ml离心管中。 3、离心：进行1,000 rpm，5分钟的离心。 4、调整细胞密度：去除胰蛋白酶和旧的培养液，加入适量的配制好的冻存培养液。用吸管轻轻吹打使细胞均匀，然后计数并调节冻存液中细胞的最终密度为5×10^6/ml～1×10^7/ml。 5、分装细胞：将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml。 6、标记冻存管：在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作者。 7、冻存过程：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；直到-100℃时，可迅速浸入液氮中。另一种方法是将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2小时，然后放入-70℃冰箱中过夜，最后将冻存管移入液氮容器中。 （三）细胞复苏 细胞复苏的步骤如下： 1、取出冻存管：从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动，促使其尽快融化。 2、处理细胞悬液：从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，将其加入离心管中，并滴加10倍以上的培养液，然后混匀。 3、离心：进行1,000 rpm，5分钟的离心。 4、调整细胞密度：弃去上清液，加入含10%小牛血清的培养液以重悬细胞。进行计数，调整细胞密度后，将其接种到培养瓶中，并置于37℃培养箱中，静置培养。 5、继续培养：次日更换一次培养液，继续进行培养。 四、细胞冻存、复苏注意事项 1、确保细胞状态良好：在冻存之前，确保细胞具有良好的形态，并且没有污染。 2、选择适合的冻存液：根据细胞类型选择合适的冻存液，并按照相应的操作规程进行细胞的冻存。 3、控制细胞密度：要控制好细胞的密度，避免过低或过高影响冻存效果。不同的冻存液针对不同细胞有适当的冻存密度范围，以确保细胞在冷冻和复苏过程中的存活率。 4、尽快冷冻：细胞悬液加入冻存液后尽量短时间在常温放置，因为常温下DMSO对细胞会造成损伤。建议尽快通过程序降温或一步法等方式进行细胞的冷冻保存。 5、合理存放：细胞长期存放在-80℃冰箱时，建议靠冰箱内侧放置样本，避免开关冰箱导致温度不稳定影响细胞保存效果。 6、检测存活率：细胞冻存后应取出一管进行复苏，并检测细胞的存活率。为稳妥起见，可在细胞冻存半年后进行复苏培养，并观察细胞生长情况后继续冻存。 7、温和解冻：使用适当的方法解冻细胞，如将冻存管放入37°C的水浴中直至完全解冻。避免使用高温或暴露时间过长的方法，以减少DMSO对细胞的毒性作用。 8、匀速摇晃：细胞融解过程应匀速、均一地摇晃以加速融解，同时避免流体剪切力对细胞的损伤。 9、尽快去除DMSO：已融解的冻存细胞应尽快在常温下存放，并尽快离心去除DMSO。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物实验仪器霉菌培养箱的操作步骤有哪些？ 百欧博伟生物：霉菌培养箱是培养箱的一种，主要是培养生物与植物，在密闭的空间内设置相应的温度、湿度，使霉菌在4-6小时左右长出来，作为人工加快繁殖霉菌之用。霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域，是水体分析、BOD测定，细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。 霉菌培养箱操作规程： 1、通电：将本机电源插头插入电源座中，按面板上电源开关，开关指示灯亮，表示电源已接通。 2、按动面板上照明开关，开关指示灯亮，同时箱内照明灯点亮。再按一下灯熄灭。 3、控温仪菜单操作： 4、在仪表运行状态，上主屏显示测量值，下副屏显示设定值。 5、若要改变设定值、按一下SET键，此时副屏门锁，这时可按△、△、△键设置项内所需的控温值。设置完毕后，再按SET键，此时仪表进入新设置的控制程序运行。 6、上限报警设定：按住SET键数秒钟，待主屏显示RL1，副屏闪烁时，可按△、△、△键设置所需的上限报警值，在按SET键，设置完毕。 7、下限报警设定：按住SET键数秒钟后，待主屏显示RL1，再按SET键主屏显示RL2，副屏闪烁，可按键设置下限报警值，再按SET键，设置完毕。 8、上、下限报警设定完毕后，按住SET数秒钟，待主屏显示测量值，副屏显示设定值后，仪表操作完毕。机器即进入正常运行。 9、在使用过程中，遇到突然停电时，应及时将电源插头拔下，至少待5分钟后方可重新通电启用。 10、每月对培养箱内部进行清洁，用消毒液进行擦拭消毒，用干净的微湿的抹布将外表面擦拭干净。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  阿氏芽孢杆菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 阿氏芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为抗逆机制分析和功能基因的鉴定。 一、菌种简介平台编号：Bio-107248 规格：冻干粉 拉丁属名：Priestia Aryabhattai 中文名称：阿氏芽孢杆菌拉丁名称：Priestia aryabhattai主要用途：研究曾用名：Bacillus subtilis培养基编号：2原始编号：20180316JD01培养温度(℃)：30℃其他保藏中心编号：培养时间(天)：1-2天需氧类型：好氧生物安全级别：一级收藏时间：2018-07-13模式菌株：否用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落为圆形，微黄色，表面平坦湿润，菌落内部呈黏液状，直径大约2.0 ~ 5.0 mm。革兰氏反应阳性，能运动，可以产生内生孢子。在扫描电子显微镜下，T61菌株的细胞形态为杆状，长度约为2 μm，直径约为1.0 μm。生理生化实验显示，T61与阿氏芽胞杆菌模式株DSM21047 一致，氧化酶、磷酸酶、酯酶、半乳糖苷酶等阳性，胰蛋白酶、芳胺酶等阴性；可以利用甘油、L-阿拉伯糖、核糖、D-木糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、海藻糖等产酸；可以利用丙酮酸、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、蜜二糖等碳源，但不能利用山梨醇、鼠李糖等。菌株对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、红霉素、壮观霉素、利福平敏感，不具抗性。含有C14:0 iso、C14:0、C15:0 iso、C15:0 anteiso、C16:0 iso、C16:1 w11c、C16:0和C17:0-anteiso 等脂肪酸。(G+C)mol% 含量为38.02 %。16S rDNA 序列号 KC662327。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  大鼠肺微血管内皮细胞的知识与应用及培养操作！ 一、背景 PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）是一种用于科研实验的细胞类型，具有贴壁生长的特性，形态为内皮细胞样，短梭形。这种细胞来源于大鼠的肺微血管，通常用于研究肺部的生理和病理过程，如血管通透性、炎症反应、气体交换等。 在实验室中，PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）可以通过细胞培养的方法进行扩增和传代。细胞培养需要特定的培养基和条件，以保证细胞的正常生长和繁殖。复苏细胞时，通常将冻存的细胞在37℃水浴中迅速解冻，并与培养基混合均匀，然后进行离心、洗涤和重新悬浮，最后加入培养瓶中培养。 PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）的规格通常以细胞数量来表示，如每瓶或每管包含多少细胞。价格则因品牌、质量和数量等因素而异。在购买PMVEC时，需要注意选择正规渠道和有质量保证的产品，以确保实验结果的准确性和可靠性。 二、PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）培养操作 1)复苏PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）可以用于肝细胞来源的miR-194激活PMVEC促进血管生成在肝肺综合征中的作用及机制： 选择果蝇卵室发育过程中发生群体细胞迁移的边界细胞团作为研究对象,开展相关研究,以期发现其中的一些共性,更好的阐明肝肺综合征血管新生过程的具体机制。 研究方法： 1、构建HPS大鼠模型,提取并鉴定血清外泌体,观察PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）对其的吸收情况构建运用胆总管结扎术(CBDL)诱导的HPS大鼠模型,5周后进行血气、肝功、血流动力学测定以及肝肺组织病理切片分析,取假手术组和HPS组大鼠外周动脉血血清运用差速离心法提取外泌体,运用Western blot、TEM和NTA法鉴定外泌体,再用BCA测定外泌体浓度变化。最后,运用PKH67标记外泌体,与PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）共培养,观察对外泌体的吸收情况。 2、观察血清外泌体对PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）增殖、迁移及成管的影响将血清外泌体与PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）共培养,通过流式细胞术分析细胞周期及增殖情况;运用Transwell小室实验和划痕试验观察PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）的迁移情况;采用Matrial胶体外管腔形成法观察成管能力的变化。 3、利用miRNA生物芯片筛查外泌体miRNA差异表达谱,并进行qRT-PCR验证对大鼠外周血血清外泌体进行miRNA生物芯片筛查,得到差异表达的miRNA,运用qRT-PCR进行验证。 4、观察miR-194对PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）增殖、迁移及成管的影响将miR-194激动剂和抑制剂转染PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）,通过流式细胞术分析细胞周期及增殖情况;运用Transwell小室实验和划痕试验观察PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）的迁移情况;采用Matrial胶体外管腔形成法观察成管能力的变化。 5、生物信息学分析并验证潜在的miR-194靶基因运用Targetscan数据库预测miR-194的靶基因,运用Amigo数据库搜集负调控血管生成的基因,取两组数据的交集,得到miR-194潜在的调控血管生成的靶基因,运用双荧光素酶检测系统进行验证。 6、分析HPS时血清中增加的外泌体的分泌细胞对可能导致血清外泌体和外泌体内miR-194增加的细胞进行筛查,并模拟体内条件运用胆汁酸刺激筛查出的细胞,观察其分泌外泌体和miR-194的变化. 7、在体和离体水平验证肝细胞内P53通路介导的外泌体分泌在HPS血管生成中作用运用P53抑制剂pifithrin-μ、P53 RNAi探讨P53对胆汁酸处理后肝细胞中TASP6表达、培养基里外泌体浓度以及外泌体miR-194含量的影响。CBDL模型大鼠静脉注射pifithrin-μ、GW4869或anta-miR-194,观察其对肺血管生成及存活率的影响。进一步分析了HPS患者和大鼠血清胞外泌体miR-194水平和P(A-a)O2的相关性。 8、在果蝇卵室内利用活体成像和光遗传学技术,观察Myo-II流动在群体细胞迁移中的具体作用结果。 研究结果： 1、成功构建运用胆总管结扎术(CBDL)诱导的HPS大鼠模型,并从外周血清中提取出外泌体,发现肝肺综合征大鼠血清外泌体浓度存在显著改变,PKH-67标记的血清外泌体可以被PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）吸收。 2、来源于肝肺综合征大鼠血清的外泌体可以显著促进PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）的增殖、迁移及成管效应。 3、miRNA生物芯片及qRT-PCR验证结果提示miR-194在肝肺综合征大鼠血清的外泌体内表达显著升高。 4、miR-194可以显著促进PMVEC（大鼠肺微血管内皮细胞）的增殖、迁移及成管效应。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     烬灰土类芽孢杆菌的性质与用途及生产工艺！ 烬灰土类芽孢杆菌是Paenibacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-097589 规格：冻干物 拉丁属名：Paenibacillus Cineris 菌株名称：烬灰土类芽孢杆菌收藏时间：2013/6/26原始编号：6.26原产国：中国资源归类编码：15131313101模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：菌株为呈杆状，有芽孢生成，革兰氏染色为阴性，繁殖方式为裂殖。菌落为圆形，凸起，表面湿润光滑，边缘整齐。营养类型为异养，好氧，不需光照。培养基编号：33培养温度：28℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌株为呈杆状，有芽孢生成，革兰氏染色为阴性，繁殖方式为裂殖。菌落为圆形，凸起，表面湿润光滑，边缘整齐。营养类型为异养，好氧，不需光照。 三、保藏条件培养物和安瓿冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     食用菌美味牛肝菌的储存与培养及注意事项！ 美味牛肝菌不仅味道鲜美、营养丰富，而且具有重要的保健功效，但其对人类的贡献不只是作为食品和药品，它也具有重要的生态效应，在促进林木生长、改善环境质量和维护生态平衡中都起着重要作用。  一、菌种简介平台编号：Bio-57627 提供形式：斜面培养物拉丁属名：Boletus Edulis 中文名称：美味牛肝菌属名：Boletus种名加词：edulis其它中心编号：=ACCC 50559来源历史：←食用菌中心←中国农科院农业资源与农业区划研究所←吉林省农业科学长白山资源所收藏时间：2006.10.10资源归类编码：15152115104模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：食用。特征特性：8天长满斜面，菌丝洁白、浓密、整齐。生物危害程度：四类致病对象：无培养基：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1 微量，琼脂 15.0g，pH6.0。[注] 马铃薯提取液制备见CM0014培养基。培养温度：25℃资源保藏类型：培养物保存方法：液氮超低温冻结法；定期移植法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；食用。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM00172、培养基成分：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素 B1 微量，琼脂 15.0g，pH6.0。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯 200g，切成小块，加水 1.0L 煮沸 30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至 1.0L。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    食品微生物热处理和杀菌基本理论知识汇总！ 1、食品热处理 是食品加工与保藏中用于改善食品品质、延长食品贮藏期的最重要的处理方法之一。主要作用是杀灭致病菌和其它有害的微生物，钝化酶类，破坏食品中不需要或有害的成分或因子，改善食品的品质与特性，以及提高食品中营养成分的可利用率、可消化性等。当然，热处理也存在一定的负面影响，如对热敏性成分影响较大，也会使食品的品质和特性产生不良的变化，加工过程消耗的能量较大。 2、工业烹饪 一般作为食品加工的一种前处理过程，通常是为了提高食品的感官质量而采取的一种处理手段。烹饪通常有煮、焖（炖）、烘（焙）、炸（煎）、烤等几种形式。 3、焙烤 焙（Baking）和烤（Roasting）基本上是相同的单元操作，它们都是以高温热来改变食品的食用特性。两者的区别在于烘焙主要用于面制品和水果，而烧烤主要针对肉类、坚果和蔬菜。焙烤也可达到一定的杀菌和降低食品表面水分活性的作用，使制品有一定的保藏性，但焙烤食品的贮藏期一般较短，结合冷藏和包装可适当地延长贮藏期。 4、油炸 主要是为了提高食品的食用品质而采用的一种热处理手段。通过油炸可以产生油炸食品特有的色香味和质感。油炸处理也有一定的杀菌、灭酶和降低食品水分活性的作用。油炸食品的的贮藏性主要由油炸后食品的水分活性所决定。 5、热烫 又称烫漂、杀青、预煮。主要应用于蔬菜和某些水果，通常是蔬菜和水果冷冻、干燥或罐藏前的一种前处理工序。 6、热挤压 挤压是将食品物料放入挤压机中，物料在螺杆的挤压下被压缩并形成熔融状态，然后在卸料端通过模具出口被挤出的过程，热挤压则是指食品物料在挤压的过程中还被加热。 7、热杀菌 是以杀灭微生物为主要目的的热处理形式。根据要杀灭微生物的种类的不同可分为巴氏杀菌（Pasteurisation）和商业杀菌（Sterilization）。杀菌的方法通常以压力、温度、时间、加热介质和设备、以及杀菌和装罐密封的关系等来划分，以压力划分可分为常压杀菌和加压杀菌；杀菌的加热介质可以是热水、水蒸气、水蒸气和空气的混合物以及火焰等。 8、湿热杀菌 以蒸气、热水为热介质，或直接用蒸汽喷射式加热的杀菌法。利用热能转换器（如锅炉）将燃烧的热能转变为热水或蒸汽作为加热介质，再以换热器将热水或蒸汽的热能传给食品，或将蒸汽直接喷入待加热的食品。 9、常压杀菌 主要以水（也有用水蒸汽）为加热介质，杀菌温度在100℃或100℃以下，用于酸性食品或杀菌程度要求不高的低酸性食品的杀菌。杀菌时罐头处于常压下，适合于金属罐、玻璃瓶和软性包装材料为容器的罐头。杀菌设备有间歇式和连续式的。 10、高压蒸汽杀菌 利用饱和水蒸汽作为加热介质，杀菌时罐头处于饱和蒸汽中，杀菌温度高于100℃，用于低酸性食品的杀菌。由于杀菌时杀菌设备中的空气被排尽，有利于温度保持一致。在较高杀菌温度（罐直径102mm以上，或罐直径102mm以下温度高于121.1℃）时，冷却时一般采用空气反压冷却。杀菌设备有间歇式和连续式的，罐头在杀菌设备中有静止的也有回转的。回转式杀菌设备可以缩短杀菌时间。 11、高压水煮杀菌 利用空气加压下的水作为加热介质，杀菌温度高于100℃，主要用于玻璃瓶和软性材料为容器的低酸性罐头的杀菌。杀菌（包括冷却）时罐头浸没于水中以使传热均匀，并防止由于罐内外压差太大或温度变化过剧而造成的容器破损。杀菌时需保持空气和水的良好循环以使温度均匀。杀菌设备主要是间歇式的，但罐头在杀菌时可保持回转。软罐头杀菌时则需要特殊的托盘（架）放置软罐头以利于加热介质的循环。 12、空气加压蒸汽杀菌 是利用蒸汽为加热介质，同时在杀菌设备内加入压缩空气以增加罐外压力、减小罐内外压差。主要用于玻璃瓶和软罐头的高温杀菌。杀菌温度在100℃以上，杀菌设备为间歇式。其控制要求严格，否则易造成杀菌时杀菌设备内温度分配不均。 13、火焰杀菌 是利用火焰直接加热罐头，是一种常压下的高温短时杀菌。杀菌时罐头经预热后在高温火焰（温度达1300℃以上）上滚过，短时间内达到高温，维持一段较短时间后，经水喷淋冷却。罐内食品可不需要汤汁作为对流传热的介质，内容物中固形物含量高。但由于灭菌时罐内压较高，一般只用于小型金属罐。此法的杀菌温度较难控制（一般以加入后测定罐头辐射出的热量确定）。 14、热装罐密封杀菌 是对装罐前的食品进行热处理，然后趁热立即将食品装罐密封，利用食品的余热完成对密封后罐头的杀菌或进行二次杀菌，达到杀菌要求后再将罐头冷却。主要用于汁酱类酸性食品的杀菌。杀菌设备多用管式或片式，对装罐容器的清洁无菌程度要求较高，密封后多将罐头倒置，以保证对罐盖的杀菌。 15、预杀菌无菌装罐 是使食品在预杀菌过程中达到杀菌要求，然后冷却至常温，在无菌的状态下装入经灭菌处理的无菌容器中并进行密封（封罐）。多用于液态和半液态食品的杀菌。预杀菌在热交换器中完成，时间短。无菌装罐可在无菌包装设备或系统中完成，是一种连续的高温短时或超高温瞬时杀菌方法。适用于软性包装材料和金属、塑料容器。 16、DT值（指数递减时间） 是热力致死速率曲线斜率的负倒数，可以认为是在某一温度下，每减少90％活菌（或芽孢）所需的时间，通常以分钟为单位。 由于热力致死速率曲线是在一定的热处理（致死）温度下得出的，为了区分不同温度下微生物的D值，一般热处理的温度T作为下标，标注在D值上，即为DT。 17、TDT值（热力致死时间） 在某一恒定温度（热力致死温度）条件下，将食品中的一定浓度的某种微生物活菌（细菌和芽孢）全部杀死所需要的时间（min），一般用TDT值表示，同样在右下角标上杀菌温度。 18、F值（杀菌值） 是指在一定的致死温度下将一定数量的某种微生物全部杀死所需的时间（min）。 19、Z值 当热力致死时间减少1/10或增加10倍时所需提高或降低的温度值，一般用Z值表示。Z值是衡量温度变化时微生物死灭速率变化的一个尺度。 20、TRT值（热力指数递减时间） 在某特定的热死温度下，将细菌或芽孢数减少到10-n时所需的热处理时间。它是指在一定的致死温度下将微生物的活菌数减少到某一程度如10-n或1/10n（即原来活菌数的1/10n）所需的时间（min），记为TRTn，单位为分钟，n就是递减指数。 21、酸性食品 指天然pH≤4.6的食品。对番茄、梨、菠萝及其汁类，pH＜4.7，对无花果，pH≤4.9，也称为酸性食品。 22、低酸性食品 指最终平衡pH＞4.6，aw＞0.85的任何食品，包括酸化而降低pH的低酸性水果、蔬菜制品，它不包括pH＜4.7的番茄、梨、菠萝及其汁类和pH≤4.9的无花果。 23、酸化食品 是指加入酸或酸性食品使产品最后平衡pH≤4.6和aw＞0.85的食品。它们也被称为酸渍食品。在加工食品时，可以通过适当的加酸提高食品的酸度，以抑制微生物（通常以肉毒杆菌芽孢为主）的生长，降低或缩短杀菌的温度或时间，此即为酸化食品。 24、罐头冷点 罐头加热时，该点温度变化最慢，常作为代表罐头容器内食品温度变化的温度点。加热时该点的温度最低（此时又称最低加热温度点），冷却时该点的温度最高。热处理时，若处于冷点的食品达到热处理的要求，则罐内其它各处的食品也肯定达到或超过要求的热处理程度。 25、热力致死时间 热力致死时间曲线是采用类似热力致死速率曲线的方法而制得的，它将TDT值与对应的温度T在半对数坐标中作图，则可以得到类似于致死速率曲线的热力致死时间曲线。 26、阿累尼乌斯方程 反映热破坏反应和温度关系，即反应动力学理论。 27、温度系数Q值 描述温度对反应体系的影响。Q值表示反应在温度T2下进行的速率比在较低温度T1下快多少，若Q值表示温度增加10℃时反应速率的增加情况，则一般称之为Q10。 28、非热杀菌 杀菌过程中食品温度并不升高或升高很低，既有利于保持食品中功能成分的生理活性，又有利于保持色、香、味及营养成分。非热杀菌技术主要包括物理杀菌和化学杀菌。非热物理杀菌是采用物理手段（如电磁波、压力、光照等）进行杀菌，化学杀菌则是通过化学试剂来达到杀菌的作用。 29、超高压（UHP）杀菌技术 是指将密封于弹性容器内的食品置于水或其它液体作为传压介质的压力系统中，经100MPa以上的压力处理，以达到杀菌，灭酶和改善食品的功能特性等作用。 30、高压脉冲电场（PEF）杀菌 是利用强电场脉冲的介电阻断原理对食品微生物产生抑制作用，具有处理时间短、能耗低、传递快速、均匀等优点，因而有望广泛地用于食品杀菌。 31、脉冲强光杀菌 是用连续的宽带光谱短而强的脉冲，抑制食品和包装材料表面、透明饮料、固体表面和气体中的微生物。 32、磁力杀菌 是处于实验开发阶段的非热杀菌技术。研究表明，采用6000的磁力强度，将食品放在N极与S极之间，经过连续摆动，不需加热，即可达到100%的杀菌效果，对食品的成分和风味无任何影响。可运用于饮料、调味品及各种包装的固体食品。 33、感应电子杀菌 是以电为能源的线性感应电子加速器所产生的电离辐射导致微生物的DNA和细胞发生变化，进而钝化和杀死有害微生物。 34、半导体光催化杀菌 半导体光催化技术应用到了杀菌领域，尤其是水的深度处理方面，开辟了杀菌领域新天地。这种杀菌是通过生物生命活动过程中电子的得失而导致的结果。因而控制合适的光催化条件，就能达到良好的杀菌效果。 35、超声波灭菌 超声波对传声媒质的相互作用，蕴藏着巨大的能量，这种能量能在极短的时间内足以起到杀灭和破坏微生物的作用，而且能够对食品产生诸如均质、催陈、裂解大分子物质等多种作用，具有其它物理灭菌方法难以取得的最佳效果，从而提高品质，保持功能成分不受破坏。 36、紫外线杀菌 是用紫外线照射物质，使物体表面的微生物细胞内核蛋白分子构造发生变化而引起死亡。 37、电阻杀菌技术 是利用电流通过食品时，食品中的极性分子在电极极性的高频变化下，不断地旋转摩擦而产生热量，达到杀死活菌体的作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                人肺支气管鳞状细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133678 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：KNS-62 细胞名称：人肺支气管鳞状细胞生长特性：贴壁生长培养体系：EMEM+20%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮样冻存条件：无血清细胞冻存液用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）　二、细胞描述本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 六、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 七、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   粪肠球菌在微生物中的作用机制与应用领域！ 粪肠球菌菌形为圆或椭圆，可顺链的方向延长，直径0.5-1.0微米，大多数成双或短链状排列，通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。 粪肠球菌普遍存在于自然界，一般栖居在各种温血和冷血动物的腔肠，甚至昆虫体内，也是健康人体的上呼吸道，口腔或肠道的常居菌。在人类粪便中的数量仅次于大肠菌群，每克成人的粪便中约含2×108个。粪肠球菌广泛分布在畜、禽养殖场所和畜、禽产品生产加工的环境中，存在于人和动物上呼吸道、消化道、生殖道内。 1、粪肠球菌的作用机理 粪肠球菌作为乳酸菌的一种，通过自身及其代谢产物调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合的稳定。粪肠球菌必须具备某种特性如安全、黏附、竞争排斥、占位和产生抑制物等，才能在微环境中保持优势。 2、应用的安全性 粪肠球菌可视为生物体的正常的菌群，这些正常菌群直接参与宿主的生理代谢活动，是宿主正常生理活动不可缺少的重要组成部分。内源性肠球菌作为动物体内正常菌群之一主要定植于回肠和盲肠部，有些菌株可直接参与宿主的物质代谢过程。 3、生长代谢快 具有较好的粘附力肠球菌生长代谢快，粪肠球菌在培养短时间即进入了对数增长期，并持续到14h、15h～24h进入稳定期，24h后进入衰亡期。能够在胃肠道上皮细胞上粘附，益生菌能粘附在肠道中生长繁殖是发挥作用的基本条件之一，是保证其有效的竞争排斥病原菌的定植，并充分发挥其生物功能的前提。 4、产生益生物质 粪肠球菌在体内发酵糖类，产生大量L型乳酸和细菌素，使肠道内的pH和氧化还原电位值Eh下降，肠道处于酸性环境，对于病原性细菌有拮抗作用，从而抑制其增殖。细菌素是由某些细菌利用核糖体合成机制产生的一种具有抗菌作用的蛋白质或多肽类物质，影响ATP的合成和某些物质的运输，抑制蛋白质、DNA，RNA 等大分子物质的合成等，最终导致细胞死亡。 5、营养要求低，耐受性好 粪肠球菌营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃～45℃，pH值9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃30分钟。 6、增强机体免疫作用 粪肠球菌可以作为非特异性免疫调节因子，增强肠道非特异性免疫能力，促进巨噬细胞产生TNF-a和IL一6，激活淋巴细胞，增加血液中免疫蛋白的含量，提高机体抵抗病原菌的能力。 7、饲用微生物中的作用 ①粪肠球菌制备成微生物制剂可直接投喂养殖动物，有利于改善肠道内微生态平衡，防治动物肠道菌丛区系紊乱。 ②分解蛋白质为小肽、合成B族维生素等功效。 ③粪肠球菌也能增强巨嗜细胞的活性，促进动物的免疫反应，提高抗体水平。 ④粪肠球菌在动物肠道内可形成生物薄膜附着于动物肠道粘膜上，并且发育、生长和繁殖，可形成乳酸菌屏障，抵御外来病菌病毒及霉菌毒素等的负影响，而芽孢杆菌和酵母菌等都是过路菌，没有这个功能。 ⑤粪肠球菌能把部分蛋白质分解成酰胺和氨基酸，把大部分的碳水化合物的无氮浸出物转化为L型乳酸，可以对钙质合成L-乳酸钙，促进养殖动物对钙质的吸收。 ⑥粪肠球菌还能够将饲料中的纤维变软，提高饲料的转化率。 ⑦粪肠球菌能够产生多种抗菌物质，这些抗菌物质对动物体内常见的致病菌具有良好的抑制作用。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  LUDLU-1（人肺癌鳞癌细胞）的培养操作规程！ 细胞简介平台编号：Bio-132893 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：LUDLU-1 细胞名称：LUDLU-1（人肺癌鳞癌细胞）产品类别：人源细胞系细胞形态：Epithelial冻存条件：90%FBS+10%DMSOSynonyms：LUDLU-1（人肺癌鳞癌细胞）Background：Derived from a lung squamous cell carcinoma of a 72 year old Caucasian male. The B-lymphoblastoid cell line AGLCL (ECACC catalogue no. 89120566) was derived from the same patient. Cells grow as large swollen aggregates, which will detach and eventually grow in suspension. This line is EBV transformed.Species：human (Homo sapiens)Tissue：lungDisease：Human Caucasian lung squamous cell carcinomaGender：72 year old Caucasian maleMorphology：EpithelialGrowth Mode：AdherentDoubling Time：N/ADNA Profile：Amelogenin: XCSF1PO：11用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    ATCC 51375甲醇芽孢杆菌冻干管打管说明书！ 一、菌种简介平台编号：Bio-135299 规格：冻干物拉丁属名：Bacillus Methanolicus 中文名称：甲醇芽孢杆菌分离基物：废水处理系统拉丁名称：Bacillus methanolicus培养基编号：260原始编号：PB1培养温度(℃)：45℃其他保藏中心编号：DSM 16454=NCIMB 13113=ATCC 51375=LMG 24730培养时间(天)：48 小时来源历史/保藏单位：DSM需氧类型：好氧生物安全级别：BSL 1收藏时间：2023-02-17模式菌株：是注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基* 血平板培养基（TSA+5%脱纤维蛋白羊血） 三、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。5、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   微生物培养过程中存在的污染因素及预防方法！ 1、风速与风向  培养箱内的风速和风向对于保持温度的均一性以及避免污染都非常重要。一般来说，适当的风速和风向可以帮助培养箱内的温度保持均一，有利于微生物的正常生长。然而，当风速过大时，可能会导致培养基干裂，从而影响培养结果的准确性。另外，药典要求培养皿倒置培养，这是因为经过多次验证发现，当培养箱运行时的风向与培养皿盖的朝向不一致时，容易引入空气中的灰尘、杂菌等，从而污染培养物。因此，在使用培养箱的过程中，需要注意风速和风向的控制，并尽量与培养皿盖的朝向一致。 2、培养皿的密闭性 培养皿由平底和盖组成，一些微生物实验室常用的培养皿直径为90mm，采用顶盖封装。然而，由于不同厂家制造的培养皿的成型工艺和参数不同，平底和盖之间的间隙也存在差异。这些间隙虽然能够满足需氧型微生物对氧气的需求，但也增加了污染的可能性。经过实验证实，在同样的培养条件下，间隙大的培养皿比间隙小的培养皿更容易受到污染。此外，间隙的大小不同还会导致培养皿内培养基的水分蒸发不一致，从而影响培养结果数据的一致性。因此，在使用培养皿的过程中，需要选择质量可靠的培养皿，并注意平底和盖之间的间隙情况。 3、培养箱内的湿度 微生物生长需要一定的湿度条件。湿度对微生物生长的影响是通过影响微生物细胞内水分活度进而影响其新陈代谢来实现的。不同微生物的生长对湿度有一定的要求，一般来说，细菌最为敏感，酵母和霉菌次之。降低湿度会使微生物的水分活度降低，从而减慢其生长速度。因此，在微生物培养的过程中，需要保持适宜的温度和湿度，以有利于微生物的生长。培养箱内湿度的来源主要有培养基的水分散失、湿度自动调控系统以及培养箱所在的环境。因此，在使用培养箱的过程中，需要控制湿度，保持适宜的生长环境。 4、培养物溢洒 培养物溢洒是指含有生物危险物质的液体或固体物质意外与包装材料分离的过程。一旦发生生物危害物品的溢出，尤其是含有病原微生物的培养物的溢出时，会导致微生物的生长和繁殖，从而引起培养箱的污染。为了预防交叉污染，当发生培养物溢洒时，需要及时清理和消毒培养箱。应该使用有效的消毒剂对培养箱的内壁以及接触溢出物品的材料进行消毒或高压灭菌。此外，如果溢洒物中含有破碎的玻璃等材料，不得直接用手取走或弃置，应该使用硬纸板和镊子等工具处理，并将处理物放置在安全的废弃物容器中。最后，对清洁工具也需要进行消毒处理，以确保卫生安全。 5、自然环境污染 培养箱需要放置在洁净、干燥、通风良好的自然环境中。如果环境中空气洁净度不够高，容易滋生细菌、真菌和病毒等微生物，并通过平底和盖之间的间隙污染培养基，从而影响培养结果数据的准确性。因此，在使用培养箱的过程中，需要注意放置环境的卫生和通风状况，尽量避免自然环境的污染。 综上所述，微生物培养过程中存在着多种污染因素，这些因素可能会对实验结果产生影响或导致实验结果不准确。为了保证实验结果的准确性，需要在使用培养箱进行微生物培养时，注意控制风速和风向、选择合适的培养皿、控制湿度、避免培养物溢洒以及注意自然环境的卫生状况。只有这样，我们才能够获得可靠且准确的微生物培养结果。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  ATCC 19891纯白链霉菌的打管说明及注意事项！ 纯白链霉菌，孢子丝长而直或柔曲。孢子长圆形至柱形，表面光滑。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-01591 提供形式：冻干物拉丁属名：Streptomyces Candidus 中文译名：纯白链霉菌拉丁学名：Streptomyces candidus原始编号：JCM 4629菌株来源：←JCM保藏人：刘志恒直接来源国家：日本保藏时间：3/13/2001其他保藏编号：=ATCC 19891 =BCRC 13760 =CBS 677.68 =DSM 40141 =ISP 5141 =KCTC 9020 =NBRC 12846 =NCIMB 12827 =NRRL生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：28℃培养基：0329    分离源：土壤用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株属性蔗糖硝酸盐琼脂：气丝绒状，白色。基丝无色。在大部分培养基内无可溶色素。甘油天冬素琼脂(ISP)、无机盐淀粉琼脂(ISP)、酵母精麦芽精琼脂(ISP)、燕麦粉琼脂(ISP)：气丝白色系列，在前两种培养基内生孢子较好。基丝反面无色或很淡的灰黄色。 营养琼脂：气丝微白色。基丝好。 马铃薯块：气丝少。基丝无色。可溶色素无或微褐色。 明胶液化慢。牛奶不凝固，胨化好。淀粉水解快。纤维素上生长好。硝酸盐还原。不产生类黑色素、酪氨酸酶和H2S。 利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、鼠李糖、D-甘露醇；不利用蔗糖、棉子糖、肌醇。 拮抗性弱。 三、培养基酵母粉、淀粉琼脂-1 培养基酵母提取物 2.0 g 可溶性淀粉 10.0 g 琼脂 15.0 g蒸馏水 1.0 L pH7.3 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。5、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   UACC812人乳腺导管瘤细胞的应用及培养操作！ 一、背景 UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）是一种人乳腺导管瘤细胞系，通常用于生物医学研究，特别是乳腺癌的发病机制、药物筛选和治疗方法研究等领域。这种细胞系来源于一位乳腺癌患者的肿瘤样本，并在实验室中经过连续传代培养得到。 UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）具有贴壁生长的特性，形态上通常呈现为上皮样细胞。在细胞培养中，需要使用含有适当比例的胎牛血清（FBS）和抗生素的培养基来维持其生长。细胞传代时，通常使用胰蛋白酶或胰酶-EDTA溶液进行消化，并按照适当的比例进行传代。 除了常规的细胞培养实验外，UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）还可以用于基因表达分析、信号通路研究、药物敏感性测试等。这些研究有助于科学家们更深入地了解乳腺癌的发病机制，发现新的治疗靶点，以及评估不同治疗策略对乳腺癌细胞的疗效。 需要注意的是，UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）是一种肿瘤细胞系，因此在实验过程中需要遵守相关的生物安全规定和操作规程。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑。 二、UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）培养操作 1)复苏UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）可以用于MGBA表位长肽负载DC诱导特异性CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用： 研究预测与合成MGBA的表位长肽,体外验证其免疫活性,为肽疫苗的研究提供新的思路。 研究方法：利用在线数据库预测MGBA的HLA-A2表位,根据集中的表位设计MGBA来源的表位长肽,采用标准Fmoc固相合成法合成肽段。抽取HLA-A2+健康志愿者的外周血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合刺激外周血单个核细胞,诱导产生DC。使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)来促进DC成熟。使用合成的表位长肽致敏DC(实验组,未致敏肽的DC作为对照组),诱导产生特异性的CTL。 使用流式细胞术分析DC表面的分子标志物(CD83、CD80、CD86、HLA-DR),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IL-10、IL-12、IFN-γ的分泌水平,同时,应用流式细胞术分析DC-CTL、MGBA长肽DC-CTL分别对UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）与MCF-7的杀伤效果。结果:通过生物信息学预测选取的MGBA表位长肽为P69-92,长肽负载组与对照组均诱导出形态典型、功能成熟的DC,与对照组相比,实验组DC分泌的IL-10和IL-12的水平分别为(161.90±17.90 vs 196.15±17.18;259.48±22.45vs 212.08±21.50),差异明显(P0.05)。 结论：MGBA表位长肽P69-92致敏DC后可被其有效摄取及提呈,且诱导产生的表位特异性CTL对HLA-A2及MGBA双阳性的UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）有特异性的杀伤作用,分泌高水平的IFN-γ;对MGBA阴性的UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）没有杀伤作用。在此研究的基础上,可以进一步通过小鼠体内实验验证其免疫活性,这一研究结果为免疫疫苗的设计奠定了基础。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    好热黄无氧芽孢杆菌的性质与用途及生产工艺！ 好热黄无氧芽孢杆菌Anoxybacillus属的微生物，原产地为中国。菌落为淡黄色，圆形；中央隆起；边缘整齐。耐高温。主要用途为研究，具体用途为极端微生物/高温菌(70℃)。  一、菌种简介平台编号：Bio-103985 规格：冻干物 拉丁属名：Anoxybacillus Flavithermus 中文译名：好热黄无氧芽孢杆菌拉丁学名：Anoxybacillus flavithermus原始编号：E1菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：蔡曼直接来源国家：中国保藏时间：7/8/2014生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：37℃培养基：0033    提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、保藏条件培养物和安瓿冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 草木犀剑菌的培养方法与注意事项及打管说明！ 草木犀剑菌是Ensifer属的微生物，原产地为中国。α变形菌纲的革兰氏阴性杆菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-02284 规格：冻干粉拉丁属名：Ensifer Meliloti 中文译名：草木犀剑菌拉丁学名：Ensifer meliloti原始编号：CCBAU 71042菌株来源：←中国农业大学保藏人：隋新华直接来源国家：中国保藏时间：4/4/2003生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：28℃培养基：0009    分离源：鸡眼草属根瘤采集地点：陕西采集国家：中国用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  三、培养基根瘤菌培养基酵母提取物 1.0g 甘露醇 10.0g 土壤浸取液 200.0g琼脂 15.0g 蒸馏水 1.0 L PH 7.2 四、注意事项1、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。2、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。3、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。4、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。  五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。3、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。4、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                近海细菌摩氏假单胞菌的形态特征与主要价值及培养！ 摩氏假单胞菌是Pseudomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为近海细菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-137171 规格：冻干粉 拉丁属名：Pseudomonas Mosselii 中文名称：摩氏假单胞菌属名：Pseudomonas 种名或亚种名：mosselii来源历史：西北农林科技大学 何斐收藏时间：2015-04-24 原始编号：HB13原产国：中国 模式菌株：非模式菌株 主要用途：分类；研究；教学 特征特性：专性需氧的革兰氏染色阴性无芽胞、有荚膜杆菌，呈杆状或略弯。菌体大小(0.5～1)×(1.5～4)μm。具端鞭毛，能运动。有些株产生荧光色素或（和） 红、蓝、黄、绿等水溶性色素，不发酵糖类。大多数菌的适温为30℃。 生物安全等级：四类培养基编号：0002 培养温度：30℃  隶属单位名称：武汉大学 资源保藏类型：培养物 保存方法：真空冷冻干燥法 实物状态：有实物 用途：分类；研究；教学 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征与模式菌株Pseudomonas mosselii CIP 105259(T) AF072688的相似性为99.881%（Diff/Total nt1/837）；在2216E培养基上25°C条件下培养7天，菌落呈圆形，浅褐色不透明，表面光滑偏湿润，边缘规则，无晕环，中央微凸，直径1-2mm。 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                大鼠海马小胶质细胞的复苏与传代及冻存实验步骤！ 细胞简介平台编号：Bio-129601 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：RHMC 细胞名称：大鼠海马小胶质细胞RHMC产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研2类培养体系：DMEM高糖培养基（不含丙酮酸钠）+10%胎牛血清（Gibco）+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：大鼠海马小胶质细胞RHMC取自雄性SD大鼠，贴壁培养。注释：倍增时间37h用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！