UACC812人乳腺导管瘤细胞的应用及培养操作！

                   UACC812人乳腺导管瘤细胞的应用及培养操作！

一、背景

UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）是一种人乳腺导管瘤细胞系，通常用于生物医学研究，特别是乳腺癌的发病机制、药物筛选和治疗方法研究等领域。这种细胞系来源于一位乳腺癌患者的肿瘤样本，并在实验室中经过连续传代培养得到。

UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）具有贴壁生长的特性，形态上通常呈现为上皮样细胞。在细胞培养中，需要使用含有适当比例的胎牛血清（FBS）和抗生素的培养基来维持其生长。细胞传代时，通常使用胰蛋白酶或胰酶-EDTA溶液进行消化，并按照适当的比例进行传代。

除了常规的细胞培养实验外，UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）还可以用于基因表达分析、信号通路研究、药物敏感性测试等。这些研究有助于科学家们更深入地了解乳腺癌的发病机制，发现新的治疗靶点，以及评估不同治疗策略对乳腺癌细胞的疗效。

需要注意的是，UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）是一种肿瘤细胞系，因此在实验过程中需要遵守相关的生物安全规定和操作规程。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑。

二、UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）培养操作

1)复苏UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）可以用于MGBA表位长肽负载DC诱导特异性CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用：

研究预测与合成MGBA的表位长肽,体外验证其免疫活性,为肽疫苗的研究提供新的思路。

研究方法：利用在线数据库预测MGBA的HLA-A2表位,根据集中的表位设计MGBA来源的表位长肽,采用标准Fmoc固相合成法合成肽段。抽取HLA-A2+健康志愿者的外周血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合刺激外周血单个核细胞,诱导产生DC。使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)来促进DC成熟。使用合成的表位长肽致敏DC(实验组,未致敏肽的DC作为对照组),诱导产生特异性的CTL。

使用流式细胞术分析DC表面的分子标志物(CD83、CD80、CD86、HLA-DR),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IL-10、IL-12、IFN-γ的分泌水平,同时,应用流式细胞术分析DC-CTL、MGBA长肽DC-CTL分别对UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）与MCF-7的杀伤效果。结果:通过生物信息学预测选取的MGBA表位长肽为P69-92,长肽负载组与对照组均诱导出形态典型、功能成熟的DC,与对照组相比,实验组DC分泌的IL-10和IL-12的水平分别为(161.90±17.90 vs 196.15±17.18;259.48±22.45vs 212.08±21.50),差异明显(P<0.05),在UACC-812乳腺癌细胞的刺激下,肽段致敏组CTL分泌的IFN-γ为(636.64±61.09),明显高于其他组(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测发现MGBA P69-92 DC-CTL对UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）(HLA-A2+,MGBA+)杀伤的最佳效靶比为20:1,与DC-CTL相比,MGBA P69-92DC-CTL对UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）有明显的杀伤活性(P<0.05),而DC-CTL与MGBA P69-92DC-CTL对MCF-7(HLA-A2+,MGBA-)细胞没有显著的杀伤性,两组差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：MGBA表位长肽P69-92致敏DC后可被其有效摄取及提呈,且诱导产生的表位特异性CTL对HLA-A2及MGBA双阳性的UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）有特异性的杀伤作用,分泌高水平的IFN-γ;对MGBA阴性的UACC-812(人乳腺导管瘤细胞）没有杀伤作用。在此研究的基础上,可以进一步通过小鼠体内实验验证其免疫活性,这一研究结果为免疫疫苗的设计奠定了基础。

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