科学把握生物战争内涵与本质特征！中国微生物菌种查询网：重视和维护生物安全，必须防范和打赢未来可能发生的生物战争。关于生物战争，目前学术界还没有较统一的看法。但生物战争与生物战有着密切的关联。有学者认为，生物战，是指应用生物武器完成军事目的的行动。在作战中，通过各种方式施放生物战剂，造成对方军队和后方地区传染病流行，农作物大面积坏死，从而达到削弱对方战斗力，破坏其战争潜力的目的。2011年版《中国人民解放军军语》对生物战的释义是：使用生物武器伤害人畜、毁坏植物等的作战。关于生物战争，许多军事书籍都没有给出明确的定义。但是对于生物战争，我们也必须有比较明确和科学的认识。　　笔者认为，生物战争是指在生物技术高度发展以及信息时代核威慑条件下，交战双方以生物战部队为主要作战力量，以生物战作战思想为指导、以生物战作战方式为主要手段、在“生物微边疆”（生物疆域）展开的以夺取制生权为核心、以破坏和维护国家生物安全为主要目的军民结合的“总体战争”。是一种充分利用生物资源并依赖于生物战剂的未来可能产生、成熟的新战争形态。　　以生物战部队为主要作战力量　　任何不同的战争形态下，主体作战力量一定是与主要战争形态对应的。譬如机械化战争的主体作战力量一定是机械化军队，信息化战争的主体一定是信息化军队。生物战争的作战力量主体，也一定是生物战部队。因为其他作战部队没有也不可能大量装备生物战装备，不具备生物战进攻和防御能力。　　如果在未来生物战争成为一种新的战争形态，军队形态和构成，不再是现在的陆军、海军、空军等主力军种，生物战部队应该是主力军种了。但这种可能性目前来看不太可能实现。除了生物技术不可能成为军事领域中的主导性技术外，人类一定会深入思考生物战争的巨大危害，制定相关的限制法律和措施，不让生物战争成为未来的主导战争形态。就像核战争没有成为主导战争形态一样，生物战争也不可能成为主导战争形态。　　任何战争形态，都有对应的作战指导思想和相对应的独特作战方式。机械化战争时代，各种机械化战争理论层出不穷，坦克战、飞机轰炸，都是特有的作战手段；信息化战争时代，也有许多信息化战争作战理论，如网络中心战等。生物战争要成为一种战争形态，要有生物战争的作战思想、作战样式。目前，学术界已经提出了一些生物战作战指导思想，譬如说微观攻击思想、有度征服思想、技术压制思想。现在的生物战手段也多种多样了，如实施生物恐怖袭击、利用基因武器攻击、制造突发疫情、进行疫苗攻击等。这些作战思想和作战方式警示我们，生物战是有可能发展为生物战争的。　　战争在“生物微边疆”领域展开　　任何战争都有展开的疆域，或者叫战争空间、战场空间。古代冷兵器战争是在陆地和海洋上进行的，是平面的二维空间；机械化战争是在陆、海、空三维立体空间中进行的；信息化战争是在陆、海、空、天、电、网络空间展开的，甚至还包括了认知域，也就是思维空间。以往的战争空间，可以概括为“高、远、深”的宏观疆域，是地缘边疆的不断拓展。而纳米技术的突破，使我们可以在分子、原子甚至更小的粒子级别来操作和改造物质，生产出以前没有的材料，制造超级小的各种纳米武器，所以未来战争将会在微观空间中展开；现代生物技术发展、生物武器的诞生，又让战争空间拓展到了“生物微边疆”，这个生物空间成为了国家安全新的疆域。　　未来战争，既可能在宏观疆域中展开，同时也可能在微观的生物边疆中进行。我们今后不但要注意宏观疆域中的国防、战争和国家安全问题，更要重视微观领域、生物空间中的国防、国家安全和生物战争问题。　　以维护国家生物安全　　为目的夺取制生权　　从古到今，维护国家安全主要包括政治安全、军事安全、经济安全等安全领域，但很少涉及生物安全领域。现在和未来战争，则必须维护生物领域的安全。尤其是生物战争的目的，就是为了维护或破坏国家的生物安全。任何战争要获得胜利，夺取战争主动权是关键。从冷兵器战争—热兵器战争—机械化战争—信息化战争的演变过程中，战争制权从以制交通权—制海权—制空权—制电子权—制网权—制信息权—制天权等为核心，一步步发生了巨大的变化。信息化战争是以制天权、制空权、制网权等为基础的制信息权的争夺为核心的。未来生物战争的制权，则是以制生权为核心的争夺。拥有制生权，才能打赢生物战争。制生权有双重内涵，一是指对生物域的控制权，二是指在生物域军事对抗中的主动权。　　生物战争还必定是军民结合的“总体战争”，因为生物战争时代也会有信息化、智能化战争，既有政治、外交、经济、科技斗争，也有民心士气的斗争。总之，生物战争必定是宏观疆域和微观疆域相结合的斗争和战争，是各种战争方式相结合的混合战争或叫混搭战争。一定是要靠国家全民动员打人民战争才能赢得的战争。　　依赖于生物资源生物战剂的　　新战争形态　　可以用于生物战争的武器有两类，一是自然界的生物资源，譬如蜜蜂，没有它许多植物不能授粉。杀虫剂可以大量杀死蜜蜂，蜜蜂群体大量灭绝进而就会引发粮食危机；比如一些自然界的细菌、病毒，恐怖分子可以用它来搞生物恐怖袭击、制造瘟疫事件。二是生物武器，就是人造病毒、基因武器等。所以，未来的生物战争，一定是充分利用生物资源和生物战剂的战争。　　为什么说生物战争是未来可能产生的新战争形态呢？一是自然界的生物资源和运用现代生物技术制造的生物武器，已经为未来生物战发展成为生物战争这种新的战争形态提供了前提。二是重大疫情会让世界各国生灵涂炭，经济损失巨大，再加上人造的生物武器更是灭绝人性的世界末日武器，因此必须加以限制，不能任由信息化战争发展为生物战争。所以，当我们越来越认识到生物战争的危害后，一定要联合起来限制生物战争的发展。三是即使生物战没有发展为生物战争，但是在未来的信息化战争或智能化战争中，一些国家或恐怖组织也可能会搞生物战。马克思主义认为，批判的武器不能代替武器的批判。我们要遏制和打赢敌对国家针对我们的生物战甚至是生物战争，就必须有这方面的领先技术和生物战武器，有这方面的战略能力和准备。不要打生物战争，但必须有打赢生物战争的准备和能力，这是战争的辩证法。所以，我们要有生物战争可能成为新战争形态的观念、理论和赢得战争的手段。　　信息化战争在相当长时期内仍是主导战争形态。尽管人工智能技术在军事领域中应用越来越广泛，将来的信息化战争会越来越智能化，但是智能化战争只是高度发展的信息化战争，而不是一种全新的战争形态。当前，一些国家会针对敌对国家搞生物战，但在相当长时期内，生物战也只是一种作战样式、作战手段而已，就像网络战、导弹战、计算机病毒战等，只是作战手段和作战样式而已，生物战还不能上升为一种战争形态。另外，无论是生物战也好，还是未来的生物战争也好，都离不开生物技术高度发达这个前提。因为任何战争形态的出现，都是有主导技术群体的。机械化战争时代的主导技术是飞机、坦克等机械制造技术，信息化战争时代的主导技术是信息技术。将来生物战争若要成为主导战争形态，生物技术必须是军事领域中的主导技术才行。但笔者认为，生物技术是不可能成为未来军事领域中的主导技术的。

               牛肝菌的分类与生长条件及注意事项！牛肝菌是牛肝菌科和松塔牛肝菌科等真菌的统称，是野生而可以食用的菇菌类，其中除少数品种有毒或味苦而不能食用外，大部分品种均可食用。主要有白、黄、黑牛肝菌。其中白牛肝菌味道鲜美，营养丰富。该菌菌体较大，肉肥厚，柄粗壮，食味香甜可口，营养丰富，是一种世界性著名食用菌。西欧各国也有广泛食用白牛肝菌的习惯，除新鲜的作菜外，大部分切片干燥，加工成各种小包装，用来配制汤料或做成酱油浸膏，也有制成盐腌品食用。 一、菌种形态特征菌盖扁半球形，光滑、不粘、淡裸色，菌肉白色，有酱香味，可入药。大腿蘑营养丰富，味道香美，是极富美味的野生食用菌之一，可出口欧美、日本等国，深受外商欢迎。该菌菌体较大，肉肥厚，柄粗壮，食味香甜可口，营养丰富，是一种世界性著名食用菌。 二、菌种分类1、白牛肝菌白牛肝菌，学名美味牛肝菌（Boletus edulis）。主要别名有大脚菇、白牛头、黄乔巴、炒菌，也称大腿蘑、网纹牛肝菌，白木碗或者麻栎香，属于真菌类。生长期为每年五月底至+月中，雨后天晴时生长较多，易于采收。白牛肝菌的子实体为肉质，伞盖褐色，直径最大可达25厘米，1千克重，菌盖厚，下面有许多小孔，类似牛肝，可生食，也可制成干制品。 2、黄牛肝菌黄牛肝菌，该菌菇体肥大，在牛肝菌中子实体最为壮硕，口味香甜，具有清热解烦、养血和中、追风散寒、舒筋和血、补虚提神等功效，是中药制剂“舒筋丸”的原料之一；又是妇科良药，还可用以治妇女容易得的某些妇科疾病。 3、黑牛肝菌黑牛肝菌是一种可食用的蘑菇。在欧洲，黑牛肝菌经常被拿来食用。外边和菌肉都是黑色的。味道鲜美，是最香的牛肝菌之一。夏季生马尾松，油茶林中地上，多长在夏季的阔叶林地中。我国特有品种。其中的维生素A、B可治疗风湿，预防视力减退。主治养血，具有清热解烦，养血等功效。该菌营养丰富，口感香脆，味道鲜美，不但味道好还有营养价值。 4、红牛肝菌红牛肝菌，又名见手青（用手摸菌皱后会变青），在中国有极高声誉，被称为山珍宝美句，肉肥厚，营养丰富，食味很好，是群众较为喜食的著名食用菌，据分析，100克鲜菇中含蛋白质21.6克、碳水化合物57.8克、磷398毫克、铁39.8毫克，同时具有抗癌活性，对小白鼠肉癌S-180的抑制率为80%，对艾氏癌的抑制率为90%。 三、菌种生长环境白牛肝生长于云南松、高山松、麻栎（所以又叫麻栎香）、金皮栎、青风栎等针叶林和混交林地带，单生或群生。常与栎和松树的根形成菌根。产于6～10月，温暖地区稍出得早些，温凉、高寒地区出得晚一些。喀什地区也有部分分布。 牛肝菌在云南各地均有分布，产期为每年的6～10月。四、菌种主要成分多糖：组成牛肝菌多糖的单糖有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖和岩藻糖。 生物碱：从牛肝菌中分离出的生物碱主要有胆碱、腐胺、腺嘌呤等。甾醇类化合物：主要是一些麦角甾醇及其衍生物。酸类化合物分离出的较多，如亚油酸、肉桂酸和尼克酸。此外还发现了可以作为色素类物质的酸类化合物，如牛肝菌素A和B，降褐绒菌素A。幻觉诱发物：主要是迷幻剂，能引起“小人国幻视症”。 五、菌种生长条件1、温度温度是影响美味牛肝菌发生的重要指标，反过来温度是一个由多种因素（坡度、坡向、海拔）决定的结果。温度又会影响湿度，而湿度对美味牛肝菌的发生也有影响。美味牛肝菌菌丝体在18℃~30℃下生长，但最适温度为24℃~28℃；其子实体可在5℃~28℃范围内生长发育，子实体形成的适宜温度为16℃~24℃，低于12℃就不易形成子实体。 2、水分和湿度美味牛肝菌多集中在海拔高度300m~600 m之间，在海拔200 m或700 m也有生长，但数量很少。由于海拔高度是山区气候的一个标志因子，即随海拔高度不同，温度、湿度、空气、光照强度、土壤和植被等都随之而改变。土壤是美味牛肝菌及其寄主植物生活的基质，土壤的结构、透气性、酸碱度等都与美味牛肝菌的生长有密切的关系。调查发现，美味牛肝菌产区附近的土壤一般为山地黄土、黄壤、灰沙土、山地黄棕壤、暗棕壤、紫色土及黄沙土，尤其在枯枝落叶层较厚、松软和肥沃的土层中，美味牛肝菌的长势较好。时雨时晴，或白天晴、夜间有雨最有利于子实体形成，少雨低湿环境不利于子实体的形成。菌丝体生长阶段土壤含水量以60%左右为宜，而子实体生长阶段相对湿度以80%~90%为好。 3、酸碱度营养基质p H5.0~6.0较适合美味牛肝菌菌丝体生长和子实体发育。 4、光照美味牛肝菌的菌丝体生长不需要光照，而子实体的形成需要一定散射光的刺激。美味牛肝菌多发生于七阴三阳或半阴半阳有散射光的林地。植被茂密、荫蔽度大、深沟边、杂草丛生地很少发生；日照长、植被少，子实体也很少发生。森林内郁闭度不同，其子实体的发生有明显区别。郁闭度在0.6~0.9之间均有美味牛肝菌的生长，郁闭度低于0.5或大于0.9时，几乎没有生长或发生量很少。在0.7~0.9郁闭度的林下，美味牛肝菌的发生量最大。不同郁闭度下的光照、湿度有明显差异，而美味牛肝菌的发生需要一定的散射光，所以在郁闭度较大的密林中发生量相对减少。六、注意事项牛肝菌，营养丰富，清热解毒，所以食无所忌。但食用野生菌一定要炒熟煮透，若发现因食用野生菌而出现恶心、呕吐、腹痛、头晕、站立不稳、幻觉等症状，要立即到附近的医院洗胃，进行救治，同时不要乱服药物，以免延误病情；要立即停止食用可疑食品，并予以保存，以备检验；如果离医院较远，应及时大量饮用温开水或淡盐水，然后用手指、鸡毛等刺激喉咙反复催吐、洗胃，再及时送到有条件的医院进行救治。 

                        实验室生物安全管理要点！百欧博伟生物：实验室的生物安全管理涉及多个方面，包括建立质量与生物安全管理体系、人员管理、菌（毒）种和阳性样本的管理、环境与设备管理、废弃物安全、个人防护和应急预案等，本文详细您阐述了每个板块的具体内容。 一、质量与生物安全管理体系的建立 实验室质量管理体系的建立是要有明确的目的及规范的管理，有效的制约和高效的机制，能自我发展和完善的有机整体。 在病原微生物实验室进行的检测工作的质量管理作为单位质量管理体系的有机组成部分有关生物安全方面的特殊要求包括：实验室准入，操作规范，个人防护、健康监护、消毒效果评估，菌毒种保管，废弃物处理和意外处置、实验室生物风险评估等各项生物安全规章制度应编入单位实验室质量体系文件；质量与生物安全管理体系必须确定总负责人，明确管理部门，检测部门、保障部门、部门职责、相互关系以及各部门负责人的责任、权利和义务;生物安全管理委员会，要建立生物安全监督员和内审员队伍，定期进行生物安全督促检查;要求各部门执行本单位编制的实验室质量与生物安全管理体系文件，并按文件规定的程序开展各项管理活动，维持体系的运行和改进。二、人员管理实验室生物安全工作的关键是人，实验室人员缺乏实验室生物安全意识，将在各个环节产生暴露的风险。因此必须大力抓好实验室生物安全人才队伍建设。 人员准入病原微生物实验室要严把准入关，用制度保证所有实验人员尤其是客座人员和新工作人员必须接受生物安全防护知识及实验室制度、安全操作规程以及实验潜在的危险等相关内容培训并考核合格，持证上岗；在操作前签署生物安全《知情同意书》 ，并经实验室负责人批准后方能进入。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，身体受到开放性损伤、患发热性疾病以及患有免疫缺陷或免疫抑制的人等。 人员培训所有实验人员还必须每年更新知识，接受一次附加培训。培训方式可分为全员培训和专项培训，专项培训又有管理和操作两类。重点在防止气溶胶产生的操作， 锐器操作、生物安全柜的使用、防护用品穿戴、样本运输、意外事故处理、逃生演练等，以达到增强生物安全防范意识的目的。健康监护实验室人员的健康监测也是病原微生物实验室实验室的一个重要工作，实验室应充分了解每个病原的生物危害性， 制定健康监护计划， 储备预防性药物。针对致病力、 传播力采取服药、 打免疫针的手段， 进行防范;对患病的实验人员要及时甄别， 只要其临床体征和所从事的病原相关就要进行干预和医疗管理， 提高预警能力。三、菌(毒)种和阳性样本的管理 菌(毒)种和阳性样本在流转过程中既要保持生物的原始特性，还要考虑也是传染源，既要避免意外暴露还要防止恶意利用或生物恐怖袭击。 菌(毒)种和阳性样本的保存要按照国家相关规定，一类或国家规定需上交国家菌(毒)种保藏单位的菌(毒)种应及时交送。对二、 三、 四类菌(毒)种和阳性样本要建立专门的、规范的保管室，实行双人双锁管理制度。注意保存场所和设施应具备一定的防盗能力，人员进出能得到控制，备有消毒、急救和防护用品，建立检查、销毁和领用制度，疑似样本和菌毒种的管理应参照执行。 菌(毒)种和阳性样本的运输运送人员应熟悉相关的生物安全知识并采取相应安全防护措施。跨省运输可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)或样本时，还必须将申请材料报省人民政府卫生主管部门审核同意后，递交上级相关机构，颁发准运证书后，方可运送。四、环境与设备管理按国家标准《实验室生物安全通用要求》(GB19489－2008)对实验室生物安全实行分级管理。 实验室环境与设施设备要求生物安全二级(BSL- II)实验室是使用最多、涉及最广的生物安全实验室，除满足生物安全一级(BSL-I)实验室设施和设备要求外，还应在实验室内配备生物安全柜，高压蒸汽灭菌器、洗眼设施，防止节肢、啮齿动物进入的设计，有可自动关闭门及可视窗，防虫纱窗等。 确保实验室设备的正常使用实验室设备和消耗材料应确保质量，制定操作规程，合理使用，规范操作。高浓度的感染材料必须在生物安全柜操作，高压灭菌器要考虑放置地点，锐器的使用和存放也应合乎要求，消防器具不但在品种上要满足实验室的特殊要求，而且要在保质期内使用。五、废弃物安全管理废弃物安全管理是防止生物安全事件的重要一环。病原微生物实验室的培养物、储存物、垃圾以及其他废弃物的处理和处置必须以安全为目的，首先应就地消毒灭菌，进行无害化处理，利器还必须置于坚固、防漏、有盖的容器，密闭后运出实验室销毁。实验室不但要制定消毒制度，储备消毒剂，而且要确保消毒剂的有效性并对消毒效果进行判定。六、个人防护和应急预案不同的防护等级要求不同的防护用品及管理要求。在生物安全二级(BSL-Ⅱ)实验室至少应有一套防护用品，包括头部、面部、身体、手部、足部防护等。实验室常用的防护手套，防护服应制定一定的保有量和保质期检查制度，避免到用时才发现没有防护用品或使用过期防护用品的情况。当发生实验室意外时，应执行应急预案，服从现场指挥官的调度。在物资储备上做好准备，主要是应急照明、报警、维护、急救和消毒几个方面，不仅要备好照明灯、报警电话号码、工具箱、急救箱、洗眼器、紧急喷淋器、消毒器械和消毒剂等物品，并且在程序上还要对火警、盗抢、水险、设备故障、样本泄露和人员暴露或感染等各种情况的处理方法进行规定。 病原微生物实验室的安全性取决于实验人员的安全意识，实验室设施的建设，防护设备的配置和管理体系的完善。领导重视，建立管理队伍，明确职能分工和部门职责，加强培训和交流，才能提高管理水平。

               粘质沙雷氏菌的使用说明与培养方法！粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens ) 又称灵杆菌，一种产生鲜红色素的细菌，存在于空气和水中，可生长在动、植物性食品中。为细菌中最小者，约0.5×(0.5～1.0)微米。近球形短杆菌，但形态多样。 粘质沙雷氏菌广泛分布于自然界，是水和土壤中的常居菌群，亦是临床上常见的条件致病菌，在机体免疫功能降低时可引起肺部和尿道感染以及败血症。一、形态特征菌株的菌落基本上是凸起，中心不透明，边缘不规则，大小为1~2.5 mm，均产生红色色素(图版Ⅰ-3)。.在营养琼脂平板上可产生树枝状向左旋的特别菌落(图版Ⅰ-1)；在特殊条件下培养时可出现由小逐渐变大、连续有序排列的双列菌落(图版Ⅰ-2)。菌体为革兰氏阴性短杆菌，大小为(1~1.3)μm×(0.7~1.0)μm，周生鞭毛，有动力，无荚膜，无芽孢。二、生理生化特征28℃下培养产生红色色素，37℃下培养不产红色色素而恢复在28℃下培养又产生红色色素；革兰氏阴性，周生鞭毛；从耐紫外线照射试验中发现菌株中具有抗紫外线的物质存在；左旋状菌落和双列菌落如何形成尚未清楚。三、防治对象黄胫小车蝗四、生防特点以黄胫小车蝗成虫为供试虫对HBZBS-1菌株进行了室内毒力测定。结果表明,该菌株对黄胫小车蝗有很高的杀虫毒力。HBZBS-1菌株培养原液对黄胫小车蝗成虫有很好的杀虫效果,感染4d后的死亡率达87%。室内重复试验结果表明,该菌株对黄胫小车蝗成虫的杀虫效果稳定。将培养液稀释10倍后,对黄胫小车蝗的杀虫效果已明显降低,这说明初始感染量是影响其杀虫效果的重要因子。含少量活菌体的上清液的杀虫效果明显高于不含活菌体的上清液的杀虫效果;纯活菌体菌液对黄胫小车蝗成虫的防治效果为83%,与培养母液的杀虫效果基本相当,明显高于其他处理液的防治效果。由此可见，对黄胫小车蝗起主要杀虫作用的是活菌体,纯菌体代谢产物也表现出一定的杀虫毒力,但杀虫活性较低。经100℃水浴处理的含少量菌体的上清液对黄胫小车蝗成虫无杀虫活性,但经紫外线处理的含少量菌体的上清液仍具有一定的杀虫活性。说明HBZBS-1菌株及具有杀虫活性的代谢产物经一定强度的紫外线照射而不至丧失活性,但耐热性较差。五、代谢产物灵菌红素（Prodigiosin，正式名称为2-methyl-3-pentyl-6-methoxyprodiginine）是Prodiginin（中文名不详）的一种。它具有Prodiginin的基本结构，也就是三吡咯环，其中的一个吡咯环C2上带有一个甲基，C3上则有一个戊基。灵菌红素是一种红色物质，可由粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）等细菌合成的次级代谢产物。虽然其对于生产者的作用和意义还不是彻底明了，但它已被发现具有多种生物活性作用，能抗癌，抗微生物，抗疟疾，抗霉，免疫抑制的作用。其中抗癌方面，因为其具有癌组织的高针对性和对正常细胞则表现的低毒害作用，而成为一种非常有潜力的抗癌物质六、粘质沙雷氏菌的培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

            新技术促进了非细菌性植物微生物组的研究！百欧博伟生物：与人类一样，植物也有微生物组。随着植物的生长，它们会从周围的土壤中吸收有益的微生物，使其在根部繁殖。大多数植物微生物组研究都集中在细菌和真菌上，尽管还有许多其他微生物可以影响植物健康，如线虫、螨虫、原生动物和真菌。人们对这些其他微生物的影响知之甚少，很大程度上是由于技术上的限制。其中一个限制是，来自植物根部或组织的样本中充满了植物DNA，它覆盖了科学家用来检测特定微生物的DNA信号。为了更准确地对线虫、螨虫、原生动物和真菌的DNA进行测序和鉴定，来自康涅狄格农业实验站和康涅狄格大学的科学家们改造了一种被称为 "肽核酸（PNA）夹 "的技术，以阻断植物DNA。他们在《Phytobiomes Journal》上发表了他们的研究成果。"这些夹子使我们能够以最小的污染从植物本身检查整个非细菌微生物组，"第一作者Stephen Taerum解释说。"通过添加夹子，我们能够从每个植物样本中获得三倍的序列信息，并检测到来自罕见微生物的数千个序列。"他们设计的夹子阻断了玉米、小麦、高粱和大麦的DNA。只要稍加改变，这种方法就可以用来开发阻断其他植物物种DNA的夹子。"这是一种技术，只在许多研究人员已经使用的方法类型上增加了微小的变化，并揭示了许多新的和不同的生物体的存在，希望更多的人们去尝试使用它。"项目负责人Lindsay Triplett补充道。Triplett、Taerum和同事们现在将研究重点放在原生动物在根系微生物组中的作用上。论文标题为《Validation of a PNA Clamping Method for Reducing Host DNA Amplification and Increasing Eukaryotic Diversity in Rhizosphere Microbiome Studies》。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   肠道微生物与人体健康研究进展！百欧博伟生物：人类肠道中定居着许多对宿主有益的微生物，包括细菌、病毒、真核生物等，它们在肠道内能与其他微生物及免疫系统相互作用，对人体健康具有重要影响，被称为“被遗忘的器官”，它们的基因组也被誉为人类的“第二基因组”，与人体的能量代谢及物质代谢有关。本文总结了人体肠道中病毒、真核生物、细菌和宿主免疫系统的相互作用，微生物群的失衡可能导致的疾病如肥胖和克罗恩病等，以及微生物环境在人体内的成熟过程，期望有助于诊断和治疗与肠道微生物失衡相关的疾病。一、人体肠道微生物人体的微生物主要分布在体表、肠道和口腔，微生物的种类及数量构成是不同的。其中，肠道中的微生物数量约为机体自身细胞（1013）的10倍，在自然界中，结肠中分离出的微生物密度最高，人体粪便干重的 60%为细菌。已有文献表明，婴儿肠道菌群的结构差异较大，而随着年龄的增长，正常成年人的肠道菌群结构趋于近似，拟杆菌属占肠道菌群的30%，而肠杆菌属和肠球菌属的含量少于1%。肠道中的专性厌氧菌本身对于维持肠道菌群结构的平衡起着至关重要的作用，专性厌氧菌在肠道中形成菌膜屏障，主要通过2条途径阻止肠道潜在致病菌（通常为兼性厌氧或需氧菌）及毒素对肠上皮细胞的黏附及侵袭：其一，通过与肠上皮细胞紧密结合，占据空间；其二，通过竞争营养物质，产生酸性代谢产物，降低肠道中的pH值。为进一步了解人体生理状况与自身微生物之间的相互作用和关系，2007年12月19日，美国国立卫生研究院（NIH）人类路线图计划（road map plan）正式启动一项新的基因工程——人体微生物群系项目（Human Microbiome Project，HMP），旨在确定不同个体间是否存在共同的核心微生物群系，研究人体微生物群系变化与人体健康状况之间的关系，开发新的技术和生物信息学工具，关注HMP项目相关的伦理、法律和社会问题等。目前研究人员已经开展了500多个细菌基因组的测序工作，这些参考细菌基因组主要来源于人体胃肠道（29%），其次为口腔（26%）和皮肤（21%），最终这个数据库将包含900多种人体内细菌、真菌和病毒的基因组。分析结果显示，人体内的微生物具有惊人的多样性，即使是孪生姐妹，其微生物群中细菌的相似程度也低于50%，而病毒的相似度更低。同时还发现了一些新的基因和蛋白质，其中有些对人类健康发挥重要作用，有些与疾病密切相关。通过这些研究，人们正逐渐了解究竟是什么因素决定了人体的微生物群，其中宿主的遗传基因对微生物群的形成起到了重要的作用。研究证明，特定的基因位点对细菌群落的构成有影响，而对病毒的影响有待考证。2010年，欧盟资助的“人类肠道宏基因组计划”开始进行迄今最大的肠道细菌基因研究，旨在探索人类肠道中的所有微生物群落，进而了解肠道细菌的物种分布，为后续研究肠道微生物与人的肝硬化、肥胖、肠炎、糖尿病等疾病的关系提供重要的理论依据。以前的研究通常着眼于真核生物、病毒与人类疾病的关系，其实，健康人体也含有大量的病毒和真核生物。人们低估了健康人体中病毒的丰富度，近期从人体提取出的大量全新的病毒片段证明了人体病毒构成方式与细菌一样，也很多样化。因此，人们亟须将视野从个体研究转移到群体研究上去。通过微生物预测个体未来的健康情况,人们首先需要测定人体微生物环境随时间产生的变化。结果显示，健康人体的细菌、真核生物含量及组成相对而言更加平稳，一些外界变量，包括饮食习惯改变、疾病和环境等则可能导致人体微生物内环境的变化。其中，饮食习惯改变对人体微生物环境有巨大影响。在一年内，健康的成人体内 95%以上的病毒序列只有极小的变化，这意味着病毒环境基本不变。Minot 等的实验则证明，节食可以使不同的成年人的病毒环境趋于一致。另外，在小鼠实验中研究人员发现，将高糖、高脂的饮食习惯改变为低糖、低脂的饮食习惯，可以在一天内改变小鼠的微生物环境。节食也会影响到真核生物的生长分布，以动物脂肪为主要能量来源的人，其微生物内环境含较多的拟杆菌属，而以碳水化合物为主食的个体则含有较多的普氏菌。人体的微生物环境是在出生时决定的，婴儿的出生方式对其未来的人体微生物环境建立有着巨大的影响。母体的羊水中有少量的微生物，其种类、数量都很少，这是人体接触的第一类微生物。通过检测胎便中的 DNA 片段，可以证明羊水中有少量细菌。接下来，婴儿的微生物环境会受到其出生后遇到的第一个外环境影响，如果是正常顺产，其体内微生物群来自母体的阴道；如果是剖宫产，其体内微生物群来自母体的皮肤环境。事实证明，顺产婴儿的体内微生物环境与母体的阴道微生物种类相似。相对的，剖宫产的婴儿微生物群与体表分布相似，多含有金黄葡萄球菌和丙酸杆菌等。另外，剖宫产的婴儿排泄物中细菌种类少，且体内含有更多的免疫细胞。婴儿体内的细菌和病毒丰富度会随着时间而增加，其种类也会有所变化。最初的人体微生物多为好氧微生物，因为肠道内最初有氧，随后逐渐被成人体内常见的厌氧微生物取代。婴儿的肠道微生物环境构成变化很快，大部分第一周检测出的微生物在第二周之后就消失了，在前三个月内，婴儿的肠道微生物一直以这样的速率变化着。这与成年人一年内95%微生物种类不变的现象不同。母乳、配方奶粉中并未检测到病毒片段，这说明在喂养婴儿之前，婴儿就已经通过环境、母体获得了大量的微生物。对单独的婴儿个体的跟踪研究证实，婴儿出生后其体内的微生物种类随时间增加，而其微生物环境在使用抗生素、食用固体食物等几个时间点会产生巨大的变化。宏基因组学方法揭示了婴幼儿的微生物环境是如何变得越来越复杂多样。最初，婴儿的食物是母乳及奶粉，这使得其微生物环境变得适宜消化、利用乳酸。在进食固体食物前，婴儿已具有消化植物性多糖的能力，这说明在更改食谱前，婴儿已做好了从母乳转向固体食物的准备，而并非由外界环境的变化所引起。第一年内，婴儿的微生物环境开始向成年人的方向靠拢，在2.5年时，几乎与成年人并无不同。一旦微生物环境成熟，就会长期保持稳定，直到老年。研究人员发现，老年人体内的微生物环境与年轻人不同，尤其是杆菌属和梭状芽孢杆菌2类。另外，老年人的微生物环境构成种类远比年轻人要多，这可能是由于老年人多患有各种疾病，药物的使用会对微生物构成造成影响。抗生素对人体微生物环境的平衡有着巨大的影响，使用抗生素后，平衡的人体微生物环境被打破，所有微生物类群都会受到不同程度的影响，有的类群在治疗后数月都不能恢复。这种失衡导致外界的微生物入侵人体，取代了原本平衡健康的微生物环境，导致疾病。另外，长期、重复使用抗生素会增加整个微生物环境对抗生素的抗性。二、免疫系统与微生物免疫系统与微生物之间有着复杂的关系。首先，免疫系统的成熟完善过程离不开微生物。利用无菌小鼠动物模型研究发现，无菌小鼠肠道中IgA的分泌量减少，肠道淋巴组织减少，Peyer 斑和肠系膜淋巴结变小。这说明由于肠道内有共生菌，肠黏膜表面分泌 IgA，而一旦肠道内菌量减少，IgA 的分泌量也会减少。因此，肠道菌群促进了淋巴组织成熟并分泌IgA的过程。在先天免疫系统中，免疫细胞通过微生物群相关分子模式（microbe associated molecular pattern，MAMP），如细菌的细胞壁内容物（脂多糖、肽聚糖）、鞭毛等，识别不同的微生物。Toll 样受体（Toll-like receptors，TLR）是一类用于识别相关微生物抗原的宿主蛋白。如果人体内没有TLR，肠道、肠系膜免疫系统无法正常运作。共生菌通过 TLR 可以增强抗炎症作用，提高免疫系统的耐受力。Nod样受体（Nod-like receptors，NLR）是另一类典型的微生物组织结构识别蛋白，可以形成炎性体，应答外界损伤类型的免疫。例如，NLRP6的缺失会导致 IL-18 量减少，从而影响一些肠道微生物的增生。后天免疫系统也会受共生菌群的影响。微生物会影响 T 细胞的分化过程，这说明 T 细胞的成熟不仅取决于细胞个体差异，也取决于外界的微生物环境。同时，共生菌反过来也会影响机体的周围环境，例如，多形拟杆菌会减少其他肠道细菌在生理过程中产生的多肽。另外，一些细菌能够通过减少自身组成蛋白质的免疫系统相关受体，减少IgA 的量，从而在人体肠道内更好地生存。因此，可以推测，如果没有微生物菌群对人体的影响，人体或许会更容易罹患自身免疫性疾病。三、肠道微生物与疾病人体肠道微生物菌群失调可以导致自身免疫性疾病、过敏反应、肥胖、炎症性肠疾病（inflammatory bowel disease，IBD）、糖尿病等。肥胖与微生物环境的关系非常密切，硬壁菌门（Bacteroidetes）、拟杆菌门（Firmicutes）细菌的含量是衡量肥胖的一个重要微生物指标。在节食的个体中可以观测到硬壁菌门的微生物量减少、拟杆菌门的微生物量增加。另外，通过对孪生姐妹的观察发现，硬壁菌门微生物的减少对应着放线菌的增加。通过对人体菌类数量的调整，个体可以更好地吸收食物中的能量，减少炎症反应。使用动物模型模拟宿主基因改变、环境因素改变导致肥胖的过程，发现通过改变微生物环境，将肥胖个体的微生物转接入健康、苗条的个体体内，能够改变能量利用的表现型，使之呈现出肥胖个体的表现型。肥胖会导致一种与普通炎症完全不同的低量炎症反应，诱导产生温和的细胞因子，如TNF-α、IL-1b、CCL2等，诱导产生肥大细胞、T细胞、巨噬细胞等。双歧杆菌的增加会导致胰高血糖素肽2增加，减少大肠的通透性，从而使病原菌的脂多糖难以异位。再如TLR5可以识别细菌鞭毛，是先天免疫系统的主要受体之一。TLR5 缺陷型小鼠的肠道微生物环境发生了巨大的变化，表现出代谢综合征。仅仅通过将肥胖小鼠的微生物环境转移至正常野生型小鼠体内，也能够导致这种代谢综合征引起的肥胖。克罗恩病（Crohn's disease）主要表现为胃肠道功能紊乱、胃黏膜炎症反应，其病因尚不明确。目前了解到，基因组、病毒组、微生物环境等因素相互作用，共同导致克罗恩病。研究人员以 Atg16L1基因缺陷型小鼠为对象，研究环境因素与个体基因与克罗恩病的关系。使用鼠诺沃克病毒感染Atg16L1缺陷型小鼠及野生型小鼠，缺陷型小鼠的潘氏细胞不正常生长，而野生型小鼠的潘氏细胞不变，这说明病毒和致病基因共同导致潘氏细胞异常。自身免疫性疾病也与微生物环境有关。Ⅰ型糖尿病小鼠模型中，微生物环境对先天免疫系统作用，导致糖尿病。与没有自身免疫的个体相比，高风险患糖尿病的儿童基因中有着独特的微生物环境构成，其微生物种类随时间减少，而卵形拟杆菌、硬壁菌含量则相对较高。肠道微生物对多发性肝硬化和类风湿关节炎也有影响，而无菌小鼠中不会产生这些疾病。在多发性肝硬化小鼠模型中，将某些微生物引入无菌小鼠会使之变成疾病型，这是一个肠道微生物作用于后天免疫系统从而引起自身免疫疾病的典型例子。因此，利用共生菌的鞭毛多糖，可以防止自身免疫疾病。此外，还有一类由多种微生物共同作用导致的疾病，其机理较为复杂，由于不是由单独的微生物导致，研究其微生物菌群的组成及相互关系就非常重要。例如，潜伏的疱疹病毒可以保护小鼠，使宿主不被单核细胞李斯特菌和鼠疫耶尔森菌侵染，这是因为疱疹病毒诱发生成了 IFN-γ和细胞坏死因子。由此可以猜测，通过互益共生，疱疹病毒增强了宿主的健康，其终生潜伏也有益于这类病毒的生存。幽门螺杆菌会导致胃癌和胃溃疡，但大部分人群都是该菌的携带者而并无病理反应。通常，幽门螺杆菌的感染都伴随着呼吸道疾病，比如慢性阻塞性肺病和肺结核。有研究表明，感染幽门螺杆菌导致这类呼吸道疾病的患病几率增大，而近期也有研究得到了相反的结论，认为感染幽门螺杆菌会减少胃溃疡患病率，携带有幽门螺杆菌的实验猴体内含有更高的结核抗原诱导的 IFN-γ水平，从而增强了Th1反应，降低了幽门螺杆菌携带者的胃溃疡患病率。早期的细菌感染会导致分化的T细胞减少，而增强Th1反应，其机理尚不清楚。幽门螺杆菌环境通常在人出生的前10年开始成熟，并在不使用抗生素的情况下保持稳定状态。发展中国家几乎所有成年个体体内都携带幽门螺杆菌，而由于滥用抗生素等原因，发达国家的成年个体携带幽门螺杆菌的比例小很多,这将导致在该人群中居高不下的各种过敏性紊乱疾病。所以，使儿童适当暴露在较为复杂的环境中、减少抗生素的使用等，可以有效预防过敏症。随着生活水平的提高，现代生活中人们的微生物菌群已与过去不同，由于缺少了部分必需的微生物菌群信号，人体的免疫系统常常不能正常运作，自身免疫性疾病中以过敏为主的患病率大大增长，过敏原的种类也增加了许多。“卫生假说”认为，幼年接触的致病源稀少，免疫系统无法正常成熟，从而引发哮喘。在发展中国家，过敏人群远小于发达国家，这很可能是由于其庞大的家庭结构，使得每一个家庭成员有更多接触致病菌的机会，而糟糕的卫生环境、少使用抗生素等因素也增加了个体接触微生物的机会。“卫生假说”的一种可能的机理是与IL-10的反调节作用有关。IL-10 是一种抗炎症反应的细胞因子，在先天免疫和后天免疫过程中都发挥着重要作用。当微生物入侵人体后，会导致IL-10分泌量增加，减缓炎症反应，同时使人体暴露在过敏原中。另外，基因与环境共同作用，会影响人体过敏反应。例如，血清 IgE水平与CD14启动子区的单核苷酸SNP位点有关。拥有该基因的儿童，若与宠物狗接触更多，则有较高的IgE水平。寄生虫也会导致人体分泌IgE，有人认为，由于西方国家人们接触寄生虫较少，导致西方国家人群易产生过敏症状。四、结语为了更好地理解疾病与人体微生物间的关系，亟须设定一种通用评判标准，用以衡量人体微生物环境的构成和丰富度，并依此判断人体的健康程度。另外，如何完整地衡量微生物、人体、外界环境之间的关系，从而对可能产生的疾病进行预判，也是一个未来研究的方向。总之，虽然已进行了许多相关研究，但缺少一个统一的评判标准，这是该领域研究所面临的最大问题。另外，在一些案例中，从一个健康的个体环境引入新的微生物可以治疗一些疾病，使患病个体环境恢复稳态，如将肥胖个体的微生物群转移至健康野生型个体中，会将野生型个体转变为肥胖个体。那么，我们为什么不能通过这种转移微生物菌群的方式治疗相关疾病呢？这是因为，首先，人们尚未寻找到一个合适的体外转移条件；其次，不同的研究人员对“健康个体”并没有一个相同的衡量标准；第三，人们尚不清楚不同的患病个体需要对应怎样的健康个体。因此可以看出，在微生物治疗上，我们仍有很长的路要走。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     9号培养基的应用与检测方法！一、背景9号培养基用于多粘菌素B等抗生素效价测定的底层培养基，成分(g/L)：胰酶消化酪蛋白胨17.0；大豆粉木瓜酶消化物3.0；氯化钠5.0；磷酸氢二钾2.5；葡萄糖2.5；Agar/琼脂20.0；pH值7.2±0.1 25℃。用法：称取本品50.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。硫酸多粘菌素B(多粘菌素B)多粘菌素系由多粘芽胞杆菌（bacilluspolymyxa）产生的一组多肽类抗生素。多粘菌素b和e供药用。常用其硫酸盐，为白色结晶性粉末，易溶于水，有引湿性。在酸性溶液中稳定，其中性溶液在室温放置一周不影响效价，碱性溶液不稳定。多粘菌素B抗菌谱及临床应用与多粘菌素E相似，对革兰阴性杆菌，如大肠杆菌、绿脓杆菌、副大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、嗜酸杆菌、百日咳杆菌及痢疾杆菌等有抑制或杀菌作用。临床上主要用于敏感菌引起的感染及绿脓杆菌引起的泌尿系统感染、以及眼、气管、脑膜炎、败血症、烧伤感染以及皮肤粘膜感染等。多粘菌素B对绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌，以及嗜血杆菌、肠杆菌属、沙门菌、志贺菌、百日咳杆菌、巴斯德菌和弧菌等革兰阴性菌有抗菌作用。变形杆菌、奈瑟菌、沙雷菌、普鲁威登菌、革兰阳性菌和专性厌氧菌均对本类药物不敏感。细菌对本品与多粘菌素E之间有交叉耐药性，但对本类药物与他类抗菌药物间则没有交叉耐药性发现。二、应用用于多重耐药鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药机制研究：测临床分离鲍曼不动杆菌中携带的β-内酰胺酶基因及外排泵基因,体外诱导鲍曼不动杆菌对多粘菌素B产生耐药,以探讨其对多粘菌素B的耐药机制。三、方法1、连续收集临床分离的63株非重复多重耐药鲍曼不动杆菌,采用微量肉汤稀释法测定亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、多粘菌素B及头孢哌酮舒巴坦的最低抑菌浓度（MICs）。2、采用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应（ERIC-PCR）获得63株鲍曼不动杆菌的指纹图谱并进行同源性分析。3、采用聚合酶链反应（PCR）检测β-内酰胺酶基因TEM、AmpC、OXA-23、KPC、IMP、VIM,外排泵基因adeB、adeG、adeJ、adeR、adeS,两组份调节系统基因pmrA、pmr B。4、采用体外实验对收集的菌株进行诱导耐药,以获得多粘菌素B耐药的鲍曼不动杆菌。5、采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测诱导耐药菌株及原始敏感菌株的外排泵基因adeB、adeJ、adeG及两组份调节系统基因pmrA、pmr B的m RNA表达情况,分析其表达差异。6、对负责脂质A生物合成的基因lpxA/lpxC/lpxD及两组份调节系统基因pmr A、pmrB进行PCR扩增并将扩增产物测序,探讨耐药菌株是否发生特异性突变。7、采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对诱导耐药的菌株及原始敏感菌株进行检测,分析其蛋白质差异。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              幽门螺杆菌改良无血培养基的研制方法！百欧博伟生物：在无血脑心浸液卵黄琼脂培养基(BHI-EA)的基础上进行改良，建立一新型快速、简便的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)无血脑心浸液卵黄琼脂培养基(BHI-EA)。应用此改良培养基和含血脑心浸液培养基(BHIA)分别对82例胃粘膜标本进行分离培养，对两者在Hp阳性培养率、分离时间及Hp纯培养速度方面进行比较。改良培养基分离Hp阳性率为70%(57/82)，脑心浸液血培养基阳性率为63%(52/82)。采用改良培养基分离Hp时间缩短近24 h，纯培养时间缩短近12 h，且细菌各项检测指标典型。因此，改良培养基更适用于Hp的分离培养。An improved medium without blood for Helicobacter pyloriWANG Yichao,GUO Gang,XIE Qinghua,ZOU Quanming(Department of Clinical Microbiology,Third Military Medical University,Chongqing 400038)Abstract Establish a rapid and easy medium without blood for Helicobacter pylori.Improve the components to the brain heart infussion-egg yolk agar medium without blood(BHI-EA).Through isolation and cultivation of the Helicobacter pylori from 82 stomach mucosas with the improved medium and brain heart infusion agar containing blood(BHIA)to compared the difference between this improved medium and BHIA on the positive rate of the stomach mucosas,isolation time and grow speed of pure cultivation.The rate of Helicobacter pylori positive with the improved mediums was 70%(57/82),but with the BHIA was 63%(52/82).The time for pure cultivation could shorten 12 h,isolation shorten 24 h.All the test indexes were typically.The improved medium is easier to isolate and culture Helicobacter pylori.   Helicobacter pylori(幽门螺杆菌,Hp)是一种与人类消化道疾病密切相关的病原菌。其体外培养的方法较多，国内多采用含血脑心浸液培养基。由于其操作的繁琐及易污染性，近年来陆续有人采用无血培养基即卵黄培养基，但该培养基仍存在培养时间较长的缺点。针对此情况，我们在卵黄培养基的基础上进行改良，使培养时间缩短，且细菌的各种生物学性状均较典型。    一、材料及方法    1、培养基的制备   （1）含血脑心浸液培养基(BHIA) 取脑心浸液(BHI)45 ml加入蛋白胨1 g、NaCl 0.5 g、Na2HPO4 1.5 g、蒸馏水 55 ml，调节pH值至7.6～7.8，加琼脂粉1.5 g后高压，再加入已灭菌绵羊血5 ml，10 g/dl葡萄糖5 ml和万古霉素、磺胺增效剂(TMP)以及多粘菌素B，使其最终浓度分别达到10 mg/L、5 mg/L、0.38 mg/L，倒平板备用。    （2）卵黄脑心浸液培养基(BHI-EA) 取新鲜鸡蛋于75%酒精内消毒10分钟，以无菌手续将卵黄取出放入有玻璃珠的无菌生理盐水中，使最终体积比为1∶1，摇匀备用。向45 ml牛脑心浸液中加入胰蛋白胨1 g，1 g/dl可溶性淀粉，NaCl 0.5 g、Na2HPO4 1.5 g、蒸馏水55 ml，调节pH值为7.6，加琼脂粉1.5 g高压，待温度降至60°C时加入上述卵黄水30 ml，再加入20 g/dl无菌葡萄糖溶液3 ml及抗生素混悬液，使最终浓度分别为，万古霉素10 mg/L，TMP 5 mg/L，多粘菌素B 0.38 mg/L，倒平板待用。    2、Hp分离培养 取82例我校附属医院消化科胃镜室就诊病人胃粘膜标本，分别置玻璃匀浆器内研磨后，取等量悬液均匀涂布于上述二种培养基上。将各接种平板置于密闭玻璃干燥器内，用抽气泵抽至负压73 kPa后，灌入气体使终浓度分别达到(5% O2、85% N2、10% CO2)，罐内放一盛水小瓶，使湿度＞95%，37°C孵箱内孵育1～4天，观察Hp生长情况以及检测生物学性状。    3、Hp纯培养 取等量已分离纯化的Hp菌液转种到上述两种培养基上，L型玻璃棒均匀涂布后培养，培养条件同上，观察长出肉眼可见菌落所需时间。    4、Hp鉴定 生长出的菌株用革兰染色镜检，PCR鉴定，另作脲酶、氧化酶、触酶及动力实验对其生物学性状进行检测，步骤按常规法进行。    二、结果    1、两种培养基上胃标本中Hp分离培养速度的比较标本接种后，每24小时观察一次，如出现可疑Hp菌落，则取菌涂片行革兰染色镜检，并作脲酶、氧化酶、触酶和PCR鉴定。如果形态染色典型，脲酶、氧化酶、触酶及PCR阳性则确认为标本Hp分离阳性。用BHI-EA培养基培养24小时后阳性例数在总阳性例数中的比率为21%(12/57)，高于BHIA上24 h的阳性比率2%(1/52)，两者相差显著(P＜0.01)。培养48 h后BHI-EA上的阳性比率为88%(50/57)，也显著高于BHIA上的阳性比率60%(31/52)，证明BHI-EA培养基能显著缩短胃标本中Hp的检出时间。   2、两种培养基上胃标本Hp分离阳性率比较分别对82例不同胃病患者(胃癌9例，胃炎16例，胃溃疡23例，十二脂肠溃疡24例，其它胃疾病10例)胃粘膜标本进行分离培养。结果在BHIA上阳性分离率为63%(52/82)，而在BHI-EA上阳性率为70%(57/82)。培养结果表明，BHIA与BHI-EA对不同消化道疾病患者胃粘膜的Hp分离阳性率基本一致，BHI-EA稍高于BHIA，无统计学差异(P＞0.05)。    3、两种培养基上Hp纯培养生长速度的比较所有Hp分离株在此两种培养基上均能顺利生长，但生长速度明显不同，分别取前述57例阳性标本的分离菌株进行纯培养。在BHI-EA上12 h即有4株菌长出肉眼可见菌落，24 h内阳性结果为41例，阳性率为72%(41/57)。而BHIA上12 h内无明显菌落出现，直到24 h才有8株菌株出现，阳性率仅为14%(8/57)，显著低于BHI-EA组(P＜0.01)。    三、讨论    最近几年报道的针对Hp培养的无血培养基基本解决了应用含血培养基易污染的问题。但其培养速度仍较慢，我们采用的改良无血培养基充分解决了这一问题，在此培养基中，我们加入了相当于常规卵黄培养基中两倍的卵黄量，同时加入适量的胰蛋白胨成份，充分满足Hp生长营养需求，有效地刺激其生长，此外加入可溶性淀粉可吸附标本中有毒物质及Hp生长的代谢产物，保证Hp处于有利的生长环境。由实验结果可以得出，改良卵黄培养基能大大提高Hp的生长速度从而较大程度的节省培养时间，而且各项生物学性状均很典型，完全能满足临床诊断及Hp的研究所需，是一种实用的Hp培养方法。    幽门螺杆菌作为人胃内定居菌，对营养成分、气体条件等均有较严格的要求，使其在体外培养中受到很多因素的影响，因此培养基在制备过程中应严格控制pH值和各种成份的含量，特别是抗生素浓度及葡萄糖的含量。此外，由于Hp生长需要一定湿度条件，故在培养基倾倒平板后，应密封放4°C冰箱待用，放置时间不宜超过两周，保证Hp在新鲜培养基中有一最佳生长环境。另外，由于此培养基能有效的促进Hp生长，故在培养过程中应掌握好时间以防生长过度导致细菌球性变。

                     微生物引起食品腐败变质的条件！一、食品本身的组成分和理化状态  一般来说食品总是含有丰富的营养成分，各种蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和无机盐等都有存在 只是比例上的不同而已。如有一定的水分和温度，就十分适宜微生物的生长繁殖。  但有些食品以某些成分为主的，如油脂则以脂肪为主，蛋品类则以蛋白质为主。微生物分解各种营养物质的能力也不同。因此只有当微生物所具有的酶所需的底物与食品营养成分相一致时，微生物才可以引起食品的迅速腐败变质。当然，微生物在食品上的生长繁殖还受其他因素的影响。 食品本身所具有的 pH 值影响微生物在其上面的生长和繁殖。一般食品的 pH 值都在 7.0 以下，有的甚至仅为 2~3 。pH 值在 4.5 以上者为非酸性食品，主要包括肉类、乳类和蔬菜等。 pH 值在 4.5 以下者称为酸性食品，主要包括水果和乳酸发酵制品等。因此，根据微生物生长对 pH 值的要求来看，非酸性食品较适宜于细菌生长，而酸性食品则较适宜于真菌的生长。但是食品被微生物分解会引起食品 pH 值的改变，如食品中以糖类等为主，细菌分解后往往由于产生有机酸而使 pH 值下降。如以蛋白质为主，则可能产氨而使 pH 值升高。在混合型食品中，由于微生物利用基质成分的顺序性差异，而 pH 值会出现先降后升或先升后降的波动情况。  食品本身所具的水分含量影响微生物的生长繁殖。食品总含有一定的水分。这种水分包括结合态水和游离态水两种。决定微生物是否能在食品上生长繁殖的水分因素是食品中所含的游离态水，也即所含水的活性或称水的活度。由于食品中所含物质的不同，即使含有同样的水分，但水的活度可能不一样。因此各种食品防止微生物生长的含水量标准就很不相同。  食品的渗透压同样是影响微生物生长繁殖的一个重要因素。各种微生物对于渗透压的适应性很不相同。大多数微生物都只能在低渗环境中生活。也有少数微生物嗜好在高渗环境生长繁殖，这些微生物主要包括霉菌、酵母菌和少数种类的细菌。根据它们对高渗透压的适应性不同，可以分为以下几类：① 高度嗜盐细菌，最适宜于含 20%~30% 食盐的食品中生长，菌落产生色素，如盐杆菌（ Halobacterium ）。② 中等嗜盐细菌，适宜于含 5%~10% 食盐的食品中生长，如腌肉弧菌（ Vibrio costicolus ）。③ 低等嗜盐细菌，最适宜于含 2%~5% 食盐的食品中生长。如假单胞菌属（ Pseudomonas ）、弧菌属（ Vibrio ）中的一些菌种。④ 耐糖细菌，能在高糖食品中生长，如肠膜状明串珠菌（ Leuctonostoc mesenteroides ） 。还有能在高渗食品上生长的酵母菌，如蜂蜜酵母，异常汉逊氏酵母。霉菌有曲霉、青霉、卵孢霉（ Oospora ）、串孢霉（ Catenularia ）等。  二、食品环境  食品所处的环境如温度、气体、湿度等与食品上微生物的生长繁殖关系极为密切，因此这些环境因素也直接地影响食品腐败变质的速度和程度。 1、食品所处环境的温度当环境为低温时，会明显抑制微生物的生长和代谢速率，因而会减缓由微生物引起的腐败变质。人们利用冰箱低温保藏食品即是利用这一原理。但低温下微生物一般并不死亡，只是代谢活性较低而已，因此食品在低温下长期保存，仍有缓慢腐败变质的可能。食品处于高温环境时，如果温度超出微生物可忍耐的高限，则微生物很快死亡。如果温度在适宜生长温度以下时，则微生物的生长会随着温度的提高而加快，食品的腐败变质随之会加快。如果温度超出适宜范围但未超过其忍耐限度时，微生物生长速率反而会减慢，食品的腐败变质速率也会减慢。但如有嗜热细菌污染食品，则引起食品腐败的速度要比中温性细菌快 7~14 倍。  2、食品环境中的气体食品环境中如有充足的氧时，有利于好氧性微生物的生长，而厌氧性微生物只能生长在食品内部缺氧之处。由于好氧性微生物的生长速率较厌氧性微生物快得多，因此引起的食品腐败变质也较厌氧性微生物快得多。如在环境中含有较高浓度（如 10% ）的 CO 2 ，则可明显抑制好氧性细菌和霉菌的生长，从而防止食品尤其是水果和蔬菜的腐败变。 O 3 ， N 2 等都有相类似的作用而可延长食品的保存期。  3、食品所处的湿度高湿度，一方面可增加食品的含水量，提高水的活度，有利于微生物的生长与繁殖；另一方面有利于微生物的生命活动，不会因湿度太小而使细胞体失水干缩。因此减小食品所处环境和食品本身的湿度是防止食品腐败、尤其是霉变的一个重要措施。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

 食用菌菌种的分类中国栽培食用菌历史悠久 。1949年以前，主要是传统段木栽培方法栽培香菇和黑木耳二种。建国以后，双孢蘑菇栽培量逐年增加。二十世纪70年代主要栽培种类增加到10个（平菇、草菇、滑菇、金针菇、银耳、毛木耳、猴头），80年代又增加到14个（增加了灰树花、金耳、茯苓、天麻蜜环菌），90年代增加到44个，规模栽培的食用菌有双孢蘑菇、巴西蘑菇、大肥菇、美味蘑菇、香菇、糙皮侧耳、佛州侧耳、肺形侧耳、白黄侧耳、榆黄蘑、鲍鱼菇、盖囊菇、杏鲍菇、白阿魏菇、红平菇、元蘑、黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、黄伞、草菇、猴头、柱状田头菇、鸡腿菇、灰树花、长根菇、大球盖菇、银耳、金耳、蛹虫草、灵芝、中华灵芝、薄盖灵芝、松杉灵芝、茯苓、猪苓、蜜环菌(伴生天麻)、斑玉蕈、长裙竹荪、短裙竹荪、洛巴口蘑、牛舌菌、褐灰口蘑，其中大规模商业栽培的有31种。　　从商业规模栽培的种类及其品种看，近年商业规模栽培的种类有双孢蘑菇、巴西蘑菇、大肥菇、美味蘑菇、香菇、糙皮侧耳、佛州侧耳、肺形侧耳、白黄侧耳、榆黄蘑、杏鲍菇、白阿魏菇、黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、草菇、猴头、茶树菇、鸡腿菇、灰树花、银耳、灵芝、中华灵芝、薄盖灵芝、松杉灵芝、茯苓、天麻蜜环菌、斑玉蕈、长裙竹荪、短裙竹荪等。这些栽培种内都有丰富的品种多样性，供栽培者根据市场需要选择使用。这些多样化的栽培种和品种保证了中国在农业生产方式下食用菌的周年栽培和持续发展。　　双孢蘑菇有鲜销品种和罐藏品种两大类。 香菇可以按照适宜的基质有段木品种和代料品种；按照出菇的迟早有早生品种和迟生品种；按照产品适宜的商品型式有鲜销品种和干制品种；按照出菇温度有低温(5～15℃)品种、中温品种(10～15℃)、高温(15～25℃)品种和广温(10～28℃)品种；按照子实体大小有大叶品种、中叶品种和小叶品种。　　平菇按照出菇温度有高温品种、中温品种和低温品种；按照子实体色泽有灰色品种和白色品种；按照孢子释放情况有少孢品种、孢子晚释品种、无孢品种。　　黑木耳按照子实体着生方式的不同有单片品种和菊花品种；按照色泽有黑色品种和褐色品种。　　毛木耳按照子实体色泽的不同有黄背木耳、白背木耳和紫木耳三大类品种。　　金针菇按照子实体色泽有黄色品种、淡色品种和白色品种三大类。　　滑菇按照子实体发生迟早有极早生品种、早生品种、中生品种和晚生品种。　　草菇按照子实体大小有大粒、中粒和小粒三类品种。　　杏鲍菇和白阿魏菇按照出菇温度有高温品种和低温品种；　　杏鲍菇按照子实体形态有柱状品种和保龄球状品种；　　白阿魏菇按照子实体形态有掌状品种和马蹄状品种。

淡紫拟青霉（（Paecilomyces lilacinus（Thorn.）Samson）属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，也能侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。基本信息该属主要特征是分生孢子梗呈瓶状或近球形(瓶梗),在菌丝端或短枝上轮生,分生孢子单孢链状,至今该属报道有近50个种,皆为昆虫病原菌和线虫病原菌。 [1]  此菌广泛分布于世界各地，具有功效高、寄主广、易培养等优点，特别在控制植物病原线虫方面功效卓著。半个多世纪以来，国内外许多专家学者对此菌进行了广泛而深入的研究，在生物学、生态学、大量培养、控害效能与田间应用等方面取得了一系列研究成果。形态特征编辑 淡紫拟青霉在 28℃、黑 暗条件 下 ，PDA平板培养3d后长出白色菌落 ，产孢后逐渐变成浅粉红色 ，培养 7d后 ，菌落呈紫红色 、圆形 、隆起 、粉状 ，表面没有分泌物，产孢量越多，菌落颜色越深。淡紫拟青霉的分生孢子梗末端膨大。分生孢子为单细胞 ，椭圆形至纺锤形 ，呈链状 、平滑 、无 色至黄色 ，2 μm～4μm 宽 ，孢梗上具有瓶颈状不规则的分枝或轮生分枝 ，瓶梗基部较宽 。轮生分枝由圆柱形的部分组成 ，有 时分枝向远离主轴 方向弯曲 。培养特性 培养条件温度 、光照是影响其生长的最主要因素。Cab．anillasE、王 明祖、刘 杏忠 、李 芳 研究 了淡紫拟青霉的生长和产孢条件 ，结果表明：生长温度范围可 以从 8℃～38℃，生长和产孢的最适温度范围是25℃-30℃，10℃和 40℃时停止生长，35℃时停止产孢 。全黑暗条件有利生长和产孢 ，半光照次之 ，全光照最差 。周 靖研究结果表 明 ：以蔗糖为碳源 (60g/L)，硝酸铵为氮源(1.5g/L)。pH5～pH6，培养温度为 30℃时最适合该菌的生长。 营养条件淡紫拟青霉对营养条件要求不高，不仅能在多种常规培养基上生长，而且能在多种自然基质，如农副产品废料、废渣与植物叶片或植物浸提液中生长。王明祖等研究表明认为马铃薯、蛋白胨、蔗糖、硝酸钙、磷酸氢二钠组成的培养基和猪粪浸出液琼脂培养基有利于该菌的营养生长。潘沧桑、邓国平等利用糖厂、啤酒厂、木薯加工废液进行淡紫拟青霉菌剂的生产研究，既可使废料资源化，又可减少环境污染。尽管淡紫拟青霉能在多种培养基质上和多种生态条件下生长，但不同成份的培养基、培养条件，其产菌率与代谢物也有所不同。李芳研究了不同通气量、不同培养基、不同基质浓度对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株生长的影响，结果表明，碳氮源浓度为0.045g/ml，每瓶(250ml)装液量为50ml时最适合淡紫拟青霉NH-PL-03菌株菌丝和孢子生长，而对线虫的毒力的最佳装液量为100ml；在孟加拉红、PDA和察氏培养基上，菌丝量增长最为显著，在察氏和燕麦培养基上产孢量最大，培养液滤液的毒力随培养时间延长而升高，在察氏培养基培养毒力较高。梁照文研究了不同液体培养基对淡紫拟青霉繁殖和毒力的影响，筛选了一种高产孢量的培养基，主要成分为200g/L马铃薯、1%鸡蛋黄、20g/L蔗糖。CayrolJC研究表明：利用麦芽培养基在静止、透气状态下生产的菌液，杀线虫活性最强，光照对菌液的毒性没有影响。 [2] 控害效能对植物病原线虫淡紫拟青霉是南方根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌，对南方根结线虫的卵寄生率高达60%~70%。对多种线虫都有防治效能，其寄主有根结线虫、胞囊线虫、金色线虫、异皮线虫、甚至人畜肠道蛔虫，是防治根结线虫最有前途的生防制剂。淡紫拟青霉菌对根结线虫的抑制机理是淡紫拟青霉与线虫卵囊接触后，在粘性基质中，生防菌菌丝包围整个卵，菌丝末端变粗，由于外源性代谢物和真菌几丁质酶的活动使卵壳表层破裂，随后真菌侵入并取而代之。也能分泌毒素对线虫起毒杀作用。对昆虫据文献资料，淡紫拟青霉可寄生半翅目的荔枝蝽蟓、稻黑蝽；同翅目的叶蝉、褐飞虱；等翅目的白蚁；鞘翅目的甘薯象鼻虫以及鳞翅目的茶蚕、灯蛾等。对植物病原菌淡紫拟青霉36-1菌株对植物病原菌具有拮抗效能。在玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶苗病上试验，淡紫拟青霉菌株活菌体液对其菌丝生长抑制率分别为80.22%、80.50%、77.71%、75.30%和61.36%；处理柑桔果面，青、绿霉扩展抑制率为65.97%。批量处理柑桔，好果率为78.44%，比对照高54.44%。生理功效促进植物生长在拟青霉的培养过程中，特别是在特殊培养基与深层发酵培养过程中，该菌能产生丰富的衍生物，其一是类似吲哚乙酸产物，它最显著的生理功效是低浓度时促进植物根系与植株的生长，因此在植物根系施菌不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植株营养器官的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用。产生多种功能酶此菌能产生丰富的几丁质酶，几丁质酶对几丁质有降解作用，它能促进线虫卵的孵化，提高拟青霉菌对线虫的寄生率，此外还能产生细胞裂解酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶，Galvez-Mariscal研究表明：在高效菌株中蛋白酶和葡聚糖酶、淀粉酶活性高出1.2~4.2倍和20~120倍，这些酶促进细胞分裂。降解效应Somaseknar研究发现，淡紫拟青霉能促进难溶磷酸盐的溶解，实验室研究证实：拟青霉菌的增溶效果达到30%，其它线虫拮抗菌达到20%~40%。同类研究还表明，拟青霉还能促进许多化学聚合物（如农药，制革废水等）的分解，这证明淡紫拟青霉具有一定的环保效应。淡紫拟青霉菌淡紫拟青霉菌剂是纯微生物活孢子制剂，具有高效、光谱、长效、安全、无污染、无残留等特点，可明显刺激作物生长。试验证明，在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植物根系及植株营养器官的生长，如播前拌种，定植时穴施，对种子的萌发与幼苗生长具有促进作用，可实现苗全、苗绿、苗壮，一般可使作物增产15%以上。生物防治防治根结线虫有机蔬菜生产中生物防治植物线虫病的主要生物类型，淡紫拟青霉并提出了提高生物防治效果的途径。植物线虫病在我国局部发生、危害严重，几乎每种作物上都有1~2种线虫病，有的发生面积不断扩大，危害越来越重，已成为农业生产上亟待解决的问题之一。淡紫拟青霉在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植物根系及植株营养器官的生长，常规的化学防治的农药的毒性较大，危害绿色食品的生产，所以应寻找新的技术。淡紫拟青霉生物农药生物防治植物病原线虫是研究的热点，已发现可以防治线虫病的生物有捕食线虫的真菌、线虫、涡虫、线蚓、昆虫、螨类等；寄生线虫的病毒、原生动物、细菌等;还可用植物的提取液，其防治效果也较好。生物防治是病害防治中最具有应用前景的防治方法，符合环保和健康理念。但国内用于防治根结线虫病的生防产品非常少，大多数对根结线虫有作用的生防制剂都还处于研发阶段。在登记的生防产品仅有“线虫必克”和阿维菌素以及最近登记的淡紫拟青霉。在蔬菜根结线虫防治上用的较多的有阿维菌素。可用0.5%阿维菌素颗粒剂15-17.5g/亩进行沟施或穴施。但作为生物农药阿维菌素存在几乎所有生物农药不可避免的弱点，即田间使用效果不太稳定。根结线虫病主要为害蔬菜根部，侧根和须根最易受害。受害根部产生大小不等的瘤状物或根结，根结初为白色，柔软，后变为浅黄褐色或深褐色，表面粗糙，有时裂开。剖开根结，可看到白色珍珠状小颗粒，是根结线虫的雌成虫。蔬菜受根结线虫侵染后生长发育缓慢，叶片小而黄。发病重时，植株矮小，不结实或结实不良，遇高温干旱天气时，植株易萎蔫甚至枯死。寄生作用淡紫拟青霉可以寄生多种植物线虫，包括根结线虫、孢囊线虫等重要经济线虫的卵和幼虫，在其代谢过程中，可以产生具有杀线虫活性的物质，抑制线虫的孵化或直接使卵失去活性。弄清楚淡紫拟青霉如何寄生线虫，对于正确使用该生防菌，提高防效有很大帮助。多年来，国内外学者做了大量研究。高学彪和汪军分别采用双温测定法，室内测定淡紫拟青霉对南方根结线虫和香蕉根结线虫卵的相对寄生率为92.6%和94.3%。汪来发研究了来自不同地域的淡紫拟青霉的13个菌株，分别用其孢子液处理南方根结线虫卵囊、孢子液处理分散卵粒、菌丝处理分散卵粒，结果表明了不同菌株对南方根结线虫的寄生能力有很大差异，且用孢子液处理卵囊的寄生率显著高于其他两种处理，寄生能力最强的菌株其寄生率可达74.62%。张雯等研究了淡紫拟青霉对根结线虫的侵染作用，结果发现，菌丝侵入线虫卵消化了卵内容物而卵壳完整，推测几丁质酶在侵染卵过程中起穿透卵壳几丁质层的作用，而不以几丁质为营养。刘国坤对淡紫拟青霉FZ-0289菌株体外寄生南方根结线虫卵进行了研究，结果表明接种7d后，对胚胎发育期卵的寄生率为98.2%，对含卵的寄生率为88.6%，卵囊接种14d后，卵囊内卵寄生率为94.5%。淡紫拟青霉PL050705菌株离体寄生柑橘半穿刺线虫，对胚胎期卵的寄生率为83.33%，对卵内有幼虫卵的寄生率为43.75%。HollandRJ等研究了淡紫拟青霉体外寄生爪哇根结线虫卵、3龄、4龄幼虫和雌虫成虫，结果表明：淡紫拟青霉侵染卵过程中，菌丝首先在卵表面膨大然后形成侵染钉，然后侵入卵，最后菌丝从卵里面继续生长出来或形成孢子，淡紫拟青霉也容易侵染3龄、4龄幼虫和雌虫成虫。KhanA研究了淡紫拟青霉侵染爪哇根结线虫、禾谷孢囊线虫、香蕉穿孔线虫这三种植物线虫，淡紫拟青霉通过菌丝直接穿透爪哇根结线虫体壁，从而侵染卵、幼虫和成虫；胚胎时期卵与含有幼虫的卵相比，较易侵染。淡紫拟青霉也可以侵染体内含有卵的早熟孢囊和香蕉穿孔线虫，但无法侵染成熟的褐色孢囊。

                 脑心浸出液琼脂的检验原理与应用！一、背景脑心浸出液琼脂用于链球菌和肠球菌及其它对营养苛求菌的培养，成分：脑心浸出粉8.0g，动物组织胃酶消化物5.0g，胰酪蛋白胨16.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钠2.5g，葡萄糖2.0g，琼脂13.5g，pH7.4±0.2(25℃)。二、检验原理胰蛋白质胨和牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。用法：称取本品50.1g加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，大多数不致病。医学上重要的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌等。引起人类的疾病主要有：化脓性炎症、毒素性疾病和超敏反应性疾病等。肠球菌（Enterococcus）属肠球菌属，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。三、应用用于医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究研究：应用多重PCR方法对医院内感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA,Methicillin-resistant Staphylococcus aureus）进行葡萄球菌染色体mec元件（SCCmec）分型,以发现MRSA院内感染的流行病学分布特征,为分析MRSA造成医院内感染的传播途径、发生机理及降低MRSA院内感染的发生率奠定基础。方法:收集临床分离的96株金黄色葡萄球菌,其中痰标本74株;血液标本3株;腹腔引流物1株;伤口分泌物15株;尿液1株;胸腔引流物1株;足部脓肿标本1株。应用Vitek全自动生化分析仪鉴定金黄色葡萄球菌,按NCCLS2002年第十二版操作指南,应用K-B法进行抗生素敏感试验;应用琼脂稀释法测定每株菌对苯唑青霉素的最低抑菌浓度（MIC）值;鉴定后的菌株置于含脑心浸出液的培养管中培养进行增菌培养;常规方法提取MRSA细菌DNA后,应用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型,并结合临床资料分析。结果:药敏实验结果显示96株MRSA对青霉素及环丙沙星均耐药,苯唑青霉素的MIC为64—1024mg/L,对红霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、克林霉素的耐药率分别为98.9%、98.9%、94.7%及100%,对万古霉素全部敏感。SCCmec分型结果显示96株MRSA中有91株属于SCCmec-Ⅲ型;1株属于SCCmec-ⅢA亚型;2株属于SCCmec-Ⅳ型;1株属于SCCmec-Ⅰ型;1株属于未定型株（NT SCCmec型）。菌株科室分布情况为神经科25株;呼吸科15株;老年病科12株;神经外科10株;内分泌科6株;矫形科4株;心内科4株;肝胆外科3株;创伤外科3株;风湿科2株;胸外科2株;普外科2株;泌尿科2株;烧伤科1株;ICU1株;急诊室1株;耳鼻喉科1株;皮肤科1株;消化科1株。其中SCCmec-ⅢA亚型来源于神经外科;SCCmec-Ⅳ型来源于呼吸科和矫形科;SCCmec-Ⅰ型来源于内分泌科。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物实验操作中常见的注意事项！一、无菌操作要求 1、接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。      2、进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间， 工作前经紫外线消毒后使用。   3、接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。      4、进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。        5、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。       6、接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取 出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。       7、接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆 的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。8、吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。   二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌 间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。       3、无菌间使用前后应将门关紧， 打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。       4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。       5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1、灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如 用金属筒应将上面通气孔打开。（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包 好。2、装放（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。（2）大型高压蒸气锅：：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能 过挤。3、设备检查（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水 量补足，水变混浊需更换）.②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至 60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。    （3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。 ②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定。④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。⑤使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按 动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。4、灭菌温度与时间（1）干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5-2h。（2）压力蒸气灭菌 锅灭菌温度与时间。（二）间歇灭菌方法1、灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。（1）将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。（2）关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒10～20min。     （3）灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。2、血清凝固器使用方法，培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营 养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到灭菌目的。（1）在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用。（2）将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃1h灭菌，放37℃温箱过夜，再如此灭菌三次。3、煮沸消毒：可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5 min，加入0.02%甲醛，80℃煮60 min均可达到灭菌目的， 但选用 煮沸消毒的增消剂时， 应注意对物品的腐蚀性。4、灭菌处理：灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染。     （1）物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用。    （2）取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用。（3）培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。（4）启闭式容器，在取出时应将筛孔关闭。（5）取出的物品掉落在地或误放不洁这处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无 菌物品使用。（6）取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。（7）凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。（8）每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。四、有毒有菌污物处理要求微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。1、经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。2、经微生物污染的培养物，必须经121℃30min高压灭菌。3、染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液体不得低于浸泡的高度）再经121℃30 min高压灭菌。4、涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯 中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，必须高压灭菌后洗涤。5、打碎的培养物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭干净。污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。    五、培养基制备要求培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：1、根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药 品应进行质量检验。2、PH 测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基 PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可 影响一些培养基的 PH 降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基 的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。3、培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉 花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。4、盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。5、培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。6、每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养 基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。7、目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。8、每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。六、样品采集及处理要求1、所采集的检验样品一定要具有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在。2、根据食品的种类及数量，采样数量及方法应按标准检验方法的要求进行。3、采样应注意无菌操作，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤 酚皂溶液，用新洁尔灭、酒精等消毒药物灭菌，更不能含有此类消毒药物或抗生素类药物，以避免杀死样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可应用。4、样品采集后应立即送往检验室进行检验，送检过程中一般不超过3h，如路程较远，可保存在1～5℃环境中，如需冷冻者，则在冻存状态下送检。5、检验室收到样品后，进行登记（样品名称、送检单位、数量、日期、编号等），观察样品的外观，如果发现有下列情况之一者，可拒绝检验。（1）样品经过特殊高压、煮沸或其他方法杀菌者，失去代表原食品检验意义者。（2）瓶、袋装食品已启开者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者，即失去原食品形状者（食物中毒样品除外）。（3）按规定采样数量不足者。对送检符合要求的样品， 检验室收到后，应立即进行检验，如果条件不具备，应置4℃冰箱存放，及时准备创造条件，然后进行检验。6、样品检验时，根据其不同性状，进行适当处理。（1）液体样品接种时，应充分混合均匀，按量吸取进行接种。（2）固体样品，用灭菌刀、剪取其不同部位共25g，置于225ml 灭菌生理盐水或其他溶液中，用均质器搅碎混匀后，按量吸取接种。（3）瓶、袋装食品应用灭菌操作启开，根据性状选择上述方法处理后接种。七、记录和报告的要求1、检验室收到样品后，首先进行外观检验，及时按照国家标准检验方法进行检验， 检验过程中要认真、负责、严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。2、样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验纪录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性细菌。1949年美国的植物病理学家Burkholder首次发现它可以引起洋葱茎腐烂，称为洋葱假单胞菌，1992年Yabuuchi等正式将该菌及其它6个属于rRNA群的假单胞菌归为一个新属，即伯克霍尔德菌属。该属已确认的有25个种，除洋葱伯克霍尔德菌外，其他菌在临床标本中并不常见。简介伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia）的一些细菌具有生物防治、促进植物生长和生物修复等功能。 伯克霍尔德菌能产生多种具有抗菌活性的代谢产物如铁载体（Pyochenlin，Pyoverdine）、吩嗪、硝吡咯菌素、苯基吡咯、单萜生物碱、Cepaciamide A、CepacidineA、Cepacin A 等。现已应用于生物防治，分解有毒物质等领域。惠特莫尔氏病源自一种叫做伯克霍尔德菌的细菌，电子显微图中就是伯克霍尔德菌。分类和命名伯克霍尔德菌属隶属假单胞菌科，临床常见的有洋葱伯克霍尔德菌、类（假）鼻疽伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌、泰国伯克霍尔德菌和唐菖蒲伯克霍尔德菌等伯克霍尔德菌属DNA G+C含量为59~69.5mol%，代表菌种为洋葱伯克霍尔德菌，原归类假单胞菌属，首次自洋葱根部分离，可引起洋葱茎腐烂而得名 [1]  。形态与染色革兰阴性，直或微弯曲杆菌，单个或成对排列；有一根或数根端鞭毛，有动力，无芽胞。鼻疽伯克霍尔德菌无鞭毛，无动力 培养特性营养要求不高，在麦康凯琼脂平板上即可生长，在血琼脂平板上35℃培养18~24h，形成中等大小菌落，不透明、湿润、凸起。某些菌株可产生黄色、棕色、红色或紫色色素。某些菌种有特殊的皱褶或黏液样菌落形态、特别的色素、特异的气味及B一溶血。伯克霍尔德菌专性需氧，大部分菌种的最适生长温度为30~37℃，少数菌种能在42℃生长 生化特性伯克霍尔德菌属氧化酶试验阳性或阴性，触酶试验阳性，大部分菌种氧化葡萄糖，还原硝酸盐为亚硝酸盐，或产生氮气 临床意义伯克霍尔德菌属内大部分菌种分离自土壤、水和动植物中，只有少数几个种与人类感染相关，其中临床最多见伯克霍尔德菌通常指由7个基因型组成的洋葱伯克霍尔德菌复合群，属内还有假鼻疽伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌等。鼻疽伯克霍尔德菌是鼻疽病的病原菌，假鼻疽伯克霍尔德菌是假鼻疽病的病原菌，均主要引起牲畜疾患，主要流行于热带和亚热带地区。假鼻疽伯克霍尔德菌和鼻疽伯克霍尔德菌为潜在的生物恐怖细菌，易感染猫、狗和马等动物，人类可通过伤口、黏膜、呼吸道途径而获得感染。急性患者可有高热、衰竭等全身症状，病菌进入血流，可形成菌血症及内脏脓肿，最后常因脓毒血症死亡。洋葱伯克霍尔德菌存在于土壤及水中，在医院环境中常污染自来水、体温表、喷雾器、导尿管等，引起多种医院感染，包括败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、脓肿等；洋葱伯克霍尔德菌也是引起囊性纤维化及慢性肉芽肿患者感染的最重要条件致病菌

               无菌冷灌装技术的清洁消毒与卫生控制！百欧博伟生物：从有饮料生产的历史以来，行业中已经开发了一系列的加工和灌装技术，并还在迅速发展，以确保产品的质量。这些加工灌装技术有严格卫生条件下的冷处理和灌装、冷处理和巴氏消毒后的充填灌装、结合热灌装过程的巴氏消毒、增加防腐剂和巴氏消毒的冷灌装与冷“超净线”灌装结合的巴氏消毒等。　　伴随着市场和卫生监管部门对食品饮料产业卫生水平要求的提高，以及消费者口味的转变，饮料市场逐渐从不敏感产品例如碳酸饮料，向敏感型产品例如含乳饮料转型，从而带来了整个饮料生产工艺的改变。这个变化过程中的驱动力包括:开发新的微生物敏感的饮料需求、含有天然原料饮料的消费需求、不含防腐剂饮料的消费需求、口感外观更好的消费需求、需要长保质期储存环境条件的分布经济学、密集的市场营销驱动扩大范围的方案以及迎合大容量PET瓶的趋势等等。　　在这样的条件下，市场上迎来了新的饮料生产技术——无菌冷灌装(Cold Aseptic Filling)。对比之前的饮料生产技术，无菌冷灌装采用了先进的清洗消毒工艺，生产流程的控制更为严格，能够最大程度地降低微生物的风险，保障原料和成品的食品安全。　　一、无菌冷灌装线技术　　1、无菌冷灌装工艺无菌冷灌装的工艺流程大致如下：饮料原材料成批投入调配罐并混匀、糖浆内加水并调至最终浓度、产品经过超高温瞬时灭菌后冷却保持无菌。全封闭的无菌灌装一体机在一个干净的正压房中进行，与包装大厅分开。PET瓶使用无菌空气输送风轨输入无菌区域，经过严格控制的清洗消毒之后，在无菌环境下将无菌的产品灌入容器内。同时，PET瓶盖也经过清洗消毒程序，将灌装好产品的瓶子封盖，并进入喷码、装箱区域。　　2、无菌冷灌装线设备构造一般来说，无菌冷灌装线通常由以下5部分组成：瓶杀菌机、洗瓶机、填充机、盖杀菌机以及旋盖机。①瓶杀菌机：PET瓶经输送风轨由转接星轮进入到瓶杀菌机区域，在杀菌区域使用消毒液过氧乙酸或配合以润湿剂以喷淋或灌注方式对瓶子内外部进行彻底消毒杀菌。②洗瓶机：消毒过的PET瓶在洗瓶机内部，使用无菌水对整个瓶子进行彻底的冲洗，保证消毒液的残留符合设备供应商和食品工厂的规定，确保生产饮料的品质安全。③填充机：UHT超高温瞬时灭菌处理的无菌料液在此区域，通过无菌灌装阀进行精确定量灌装，同时要确保灌装区空气质量能达到百级空间的要求。　④盖杀菌机：瓶盖在盖杀菌机经过消毒液过氧乙酸喷淋或浸泡处理后，使用无菌水彻底冲洗干净，保证消毒液的残留符合设备供应商和食品工厂的规定，确保生产饮料的品质安全。⑤旋盖机：杀菌后的瓶盖通过旋盖头密封于灌装完成的PET瓶上，保证密封完整，无渗漏无高盖歪盖现象。　　3、无菌冷灌装线清洁消毒技术　　（1）敏感饮料由于食品饮料的生产制造过程会在设备中产生如糖、蛋白质、淀粉、脂肪、油脂和油等有机污垢，如矿物盐、水硬度、植物矿物沉积、啤酒石、饮料石等无机污垢，以及如醋酸杆菌、脂环酸芽孢杆菌等微生物污垢，所以食品饮料行业的加工处理设备需要从生产加工设备表面去除附着着的污垢、从加工设备比如管道系统中去除矿物质沉积，同时还要防止表面的微生物污染破坏产品质量。　　根据以下各种因素，可以界定饮料对微生物的敏感性程度，从而判断此种产品能否安全地在不同的饮料生产线上生产：pH、CO2含量、糖含量(Brix)、磷酸和氮营养物含量、柠檬油精含量、抗坏血酸含量、防腐剂含量、果汁含量、水果材料供给、糖加工过程、灭菌过程、工厂卫生水平。随着危险性的增加，饮料生产线的清洗消毒频率和微生物控制风险等级也必须增加。　　一些饮料生产商依据饮料的敏感性把产品分为以下4组：组1：高碳酸化，高酸软饮料，例如可口可乐、雪碧;组2：同类型1，但具有刺激性，例如根汁汽水;组3：敏感的碳酸软饮料，例如充二氧化碳的果汁;组4：矿泉水，功能饮料，牛奶，含乳饮料，茶，咖啡饮料，果汁，例如奶茶、绿茶;组4(敏感饮料)指的是一类与“简易不敏感”饮料相比，对微生物和味道污染呈现更高敏感型的产品。由于它们呈现以下特性使得它们具有高度微生物变质的危险性：①较高pH范围;②含有低或不含二氧化碳，提供好氧和厌氧微生物的生长条件;③可使用的营养物非常广泛;④固有的微生物含量和具备天然原材料的敏感性;⑤倾向于不加防腐剂;⑥对清洁敏感;⑦产生复杂的基于牛奶、果汁、咖啡和茶的污垢;⑧处理常常要求热处理，因而必须去除高温热变性的残留物;⑨可能含有固体物质如果肉、谷粒，这些物质会沉积在管道表面。　　（2）无菌冷灌装线的清洗消毒无菌冷灌装线设计工艺的出发点就是生产更多类型的敏感饮料以迎合市场需求并确保微生物安全，因为敏感饮料的特性和灭菌的需要使无菌冷灌装设备的污垢更难以去除，消毒要求更高，所以无菌冷灌装线的卫生设计和清洗消毒工艺就更为关键，只有经过设备供应商的测试并验证通过的清洁消毒剂才能够应用在无菌冷灌装线的生产中。　　无菌冷灌装线的清洗消毒主要集中在两个部分：包装材料的清洗消毒和管道内部的清洗消毒。　　①包装材料的清洗消毒对象是直接跟灌装物料接触的PET瓶和起着密封作用的瓶盖，希悦尔使用拥有专利技术的特殊消毒剂——泰华施牌过氧乙酸对包装材料进行消毒杀菌。过氧乙酸简称PAA，分子式为CH3COOOH，因为有羟基基团的存在，会让微生物结构中的蛋白质、酶和功能基团(-SH，-NH2)氧化，同时高反应活性的羟基基团能够攻击膜脂、DNA和其它必需的细胞组分，从而导致微生物细胞死亡，起到消毒杀菌的作用。②管道内部的清洗消毒又称为CIP，指生产工厂在不拆除或改变系统操作装置状态的清洗方式。在管道内部的清洗消毒中，清洗溶液通过喷洗在罐体的表面和在管道内部由泵作循环来接触清洗表面，并去除污垢、杀灭微生物细胞以达到清洗消毒的目的。无菌冷灌线中希悦尔采用设备供应商许可的复合酸碱来进行CIP，有别于普通工业酸碱的是，复合酸碱除了固有的氢氧化钠、氢氧化钾和硝酸、磷酸成分外，还会添加适当比例的鳌合剂或润湿剂，能够帮助酸碱更好地渗透进入污垢内部和微生物细胞内，大大增强清洗消毒效果，保证无菌体系的完整运行。　　二、无菌冷灌装线的卫生控制　　1、饮料微生物污染路径　　饮料微生物污染路径分为两种类型：直接传播和间接传播。直接传播包括：食品原物料和配料(包括生产用水)携带的微生物，生产设备、使用工器具、包装材料食品接触面等与食品的接触传播，动物(虫害)接触食品传播，工厂操作员工身体、手部或其他不洁部位与食品的接触传播，空间环境中微生物沉积在食品上或直接与食品接触传播。间接传播包括：员工手部接触非食品接触面后再碰触食品传播，机器运行产生的灰尘和水雾，环境微生物由于不当操作扩散到空气中，人员活动向空间扩散的微生物，人流、物流将加工环境外的微生物传播到加工环境中。　　2、无菌冷灌装线的风险因子　　无菌冷灌装生产的风险因子包括以下几个方面：原物料的风险因子，包装材料的风险因子，介质(空气、水)的风险因子，人员/员工的风险因子，设备的风险因子，空间环境的风险因子。　　3、无菌冷灌装线的卫生控制　　一般来说，原物料初始带菌量大约是1000CFU/mL，并不是处于一个无菌的状态，所以在无菌冷灌装之前对产品进行热处理杀菌很有必要。如果在日常质量监测工作中发现原物料初始带菌量超过了超高温灭菌设备或巴氏杀菌设备的设定标准值，则需要检查原物料供应商的品质，确保热处理之后的产品能够保证无菌品质。　　无菌冷灌装工艺中，包装材料都是在清洁消毒之后进行灌装和封瓶，所以任何二次操作都会导致一定程度的污染。在整个卫生控制中，包装材料要管控初始带菌量，为了达到OEM的要求(100000瓶灌装产品中只有1CFU污染)，瓶子的初始带菌量不能超过40个微生物。同时，灌装之前，包装材料必须灭菌，使用过氧乙酸消毒液灭菌能够达到OEM对细菌孢子的杀灭率5～7log(99.999%～99.99999%)的要求。　　无菌冷灌装的灌装和封盖过程中，饮料必须防止受到空气传播的污染。对于设备的空间环境，可以采取基本的卫生措施来保证微生物数量最低，如安装正压房和封闭的门窗等，对于设备表面应采用持续性的清洗消毒，抑制微生物的增生。对于灌装区域，则要严格控制尘埃粒子、沉降菌及浮游菌的数量，确保灌装区域达到百级空间。安装的高效过滤器要定期检漏、按时保养维护。　　员工的卫生控制要建立良好的清洁消毒意识，进出工厂、车间，要遵循品质控制部门的要求，搞好个人卫生，避免对产品的二次污染。　　无菌冷灌装车间的设备必须按照卫生级别的标准设计，要求无角落和空洞，有斜面的平坦地面，不锈钢表面无划痕、无焊点，能够方便的进行设备维修、检查，方便排水，设备材料与灌装产品和清洁消毒产品兼容。　　糟糕的空间卫生环境会导致微生物的滋长，微生物也会通过员工或者操作水流喷溅的方式进入灌装区域。只有采取良好的卫生操作才能够保证空间环境中的微生物保持在极低的水平，前提是天花板、地板、墙壁、照明设施、下水道等必须按照能够方便清洁并且不会支持微生物生长的原则来设计。　　总体而言，无菌冷灌装线是目前世界范围内最为先进的饮料生产技术，要想做到生产的顺利运行和品质的有力保障，除了企业领导层的积极态度，认识到卫生控制的重要性以外，还要建立合适的监察体系进行监督，调动所有员工的卫生意识，建立有效的清洗杀菌工艺，才能安全且高效地为消费者提供合格的产品。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                实验培养基的应用！百欧博伟生物一、背景实验培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。                             培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，最好现配现用。天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。常用的天然有机营养物质包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培养基成本较低，除在实验室经常使用外，也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计而配制的培养基。例如。高氏1号培养基和查氏培养基等。合成培养基有一定的配方，配制合成培养基时重复性强，但与天然培养基相比其成本较高，微生物在其中生长速度较慢，一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。半组合培养基指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如，马铃薯蔗糖培养基。二、应用用于实验室微生物相关实验研究：按照用途可以将实验培养基分为以下几种：1、营养培养基(加富培养基)在基础培养基中加入某些特殊营养物质，如血液、血清、酵母浸膏或生长因子等。用以培养对营养要求高的微生物，如培养百日咳杆菌需要含有血液的培养基。2、基础培养基含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础培养基是上面提及的天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基。这种培养基可作为一些特殊培养基的基础成分。3、鉴别培养基是一类含有某种特定化合物或试剂的培养基。某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生的某种代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将某种微生物与其他中微生物区别开来。主要用于不同类型微生物的快速鉴定，如用来检查细菌能否产生硫化氢的醋酸铅培养基。4、选择培养基利用微生物对某种或某些化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而利用所需分离的微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的，如分离真菌的马丁氏培养基。既有选择作用又有鉴别作用的培养基，如鉴别肠道杆菌的远藤氏培养基。微生物的生长繁殖除需要一定的营养物质以外，还要求适当的PH范围。不同微生物对PH的要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的PH是偏酸性的，而细菌或放线菌的培养基的PH为中性或微碱性的。所以配制培养基时，都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的PH调到合适的范围。但配制PH低的琼脂培养基时，如预先调好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固，因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性PH条件下灭菌后，再调整PH。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 血浆游离DNA提取试剂盒的应用！一、背景血浆游离DNA提取试剂盒适合于从血浆、血清等无细胞组织液中提取游离DNA（Circulating free DNA,cfDNA）片段,纯化的cfDNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于各种下游操作，包括基因测序（例如无创产前基因检测、肿瘤检测）、文库构建等。血浆游离DNA提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从血清，血浆等样本中分离纯化高质量游离DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的游离DNA得率高，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。血中cfDNA简称循环核酸（circulating free DNA），是指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。在这里，循环核酸不可顾名思义为循环血中的核酸类物质，所有细胞内的核酸，血中游离的内源性脱氧核糖核酸和外源性DNA与RNA，如真菌血症、细菌血症和病毒血症等病理情形下的血中外源核酸，虽然其在临床医学中具有重要意义但均不属于严格意义的血中cfDNA范畴。血中cfDNA在疾病的早期诊断、预后、监测等方面具有重要潜在价值。其具体医学应用大致包括以下方面：1、用于产前诊断；2、用于免疫性疾病等非肿瘤类疾病的病情分析与疗效观察；3、用于肿瘤相关分析。在上述三类应用中，其在肿瘤分析中的价值尤为重要，虽然目前血中cfDNA分析尚未列为临床必需的检测指标，但数以千计的研究论文和大量一期和二期临床试验的数据，有力支持这一新技术在肿瘤防治中的巨大应用价值。二、应用用于血浆游离DNA定量检测及COL14A1基因异常甲基化分析在食管鳞癌诊断中的意义研究：与肝癌、肠癌、卵巢癌等常见肿瘤相比,食管癌的诊断和监测尚缺乏相对有效的肿瘤标志物。循环游离)NA(circulating cell-free DNA,cfDNA),是指血清或血浆中游离于细胞外的DNA片段。已有研究显示,对循环游离DNA进行定量检测有潜在的肿瘤标志物作用。但这些研究研究数据相差较大,对食管鳞癌的研究也并不多见。本研究的目的是对血浆游离DNA定量检测在鉴别食管鳞癌与健康人的能力进行研究,探讨血浆游离DNA定量检测在食管鳞癌诊断中的潜在临床应用价值。方法：对60例健康人、49例食管鳞癌患者的血浆标本提取并纯化血浆游离DNA,应用实时荧光定量PCR(SYBR GreenⅠ)方法进行定量检测,分析健康人与食管鳞癌患者之间、不同临床病理特征食管鳞癌患者之间血浆游离DNA水平的差异,并通过ROC曲线对血浆游离DNA水平诊断食管鳞癌的能力进行评价。结果：1、60例健康人血浆游离DNA含量中位数为17.91ng/m1,四分位区间：12.99～29.90ng/ml。其中男性组血浆游离循环DNA水平中位数(19.10ng/m1)与女性组(17.17ng/m1)无显著差异(P=0.382)；≤60岁组(18.17ng/m1)与>60组(15.46ng/m1)亦无显著差异(P=0.374)。2、49例食管鳞癌患者血浆游离DNA含量中位数为49.72ng/m1,四分位区间：28.17-68.42ng/m1。其中男性组血浆游离循环DNA中位数(51.14ng/m1)与女性组(38.26ng/m1)差异无统计学意义(P=0.382),≤60岁组(45.81ng/m1)与>60组(51.14ng/m1)差异亦无统计学意义(P=0.374)。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   微生物培养基优化方法的研究进展！中国微生物菌种查询网：微生物初级代谢产物和次级代谢产物的生物合成与培养基组成和培养条件密切相关，而在一个高度非线性、非结构化的复杂系统中要获得最佳工艺，试验优化技术具有很重要的作用。本文综述了单因子试验、正交试验、均匀设计、响应面设计、遗传算法和神经网络等优化技术并进行了展望。微生物发酵是指微生物利用一些原料养分在合适的发酵条件下经特定的代谢途径转变成所需产物的一类复杂的生物过程，涉及到许多相互影响的因素，产物生物合成水平除受微生物内部代谢机理、调控机制等影响外，还有外界环境(培养基组成与配比、发酵温度 、发酵pH、溶氧等)的影响 。因此，最大限度地合成目的产物并非易事，并且对于一个高度非线性、非结构化的复杂发酵系统而言，要建立一个准确、满意的合成模型则更为困难，而试验优化技术的应用，特别是多元方程拟合技术(响应技术)的应用可以很好地解决该问题。传统的优化技术(如单因素法)虽然方法简单、易行，结果较直观，但在考察多个因素时会浪费大量时间，且有可能导致不可靠的甚至错误的结论，因此，常常仅作为过程优化的初步试验。在考察多个因素时，为了减少试验次数，节省时间，通常采用统计优化技术，这是因为统计优化技术无论从试验设计到数据分析以及模型的建立与统计学密切相关，它能够以较少的试验次数获得极为丰富的统计信息。因此，被广泛地应用于微生物发酵培养基配方的优化中，以确定最佳发酵工艺参数，从而实现高产、优质、低消耗等经济目标，本文对常用的优化试验方法进行了综述。一、单因素试验法单因素试验是在假设因素间不存在交互作用的前提下，通过一次只改变一个因素且保证其他因素维持在恒定水平的条件下，研究不同试验水平对结果的影响，然后逐个因素进行考察的优化方法，是试验研究中最常用的优化策略之一。王晓辉等人利用单因素试验对BS070623蛋白酶高产突变株进行了发酵培养基优化试验，取得了良好效果。然而，对于大多数培养基而言，其组分相当复杂，仅通过单因素试验往往无法达到预期的效果，特别是在试验因素很多的情况下 ，需要进行较多的试验次数和试验周期才能完成各因素的逐个优化筛选，因此，单因素试验经常被用在正交试验之前或与均匀设计、响应面分析等结合使用。利用单因子试验和正交试验相结合的方法，可用较少的试验找出各因素之间的相互关系，从而较快地确定出培养基的最佳组合。较常见的是先通过单因素试验确定最佳碳、氮源，再进行正交试验，或者通过单因素试验直接确定最佳碳氮比，再进行正交试验。二、正交设计试验法正交设计试验法是利用一套表格，设计多因素、多指标、多因素间存在交互作用而具有随机误差的试验，并利用普通的统计分析方法来分析试验结果。正交设计试验法对因素的个数没有严格的限制，而且无论因素之间有无交互作用，均可使用。利用正交表可于多种水平组合中，挑出具有代表性的试验点进行试验，它不仅能以全面试验大大减少试验次数，而且能通过试验分析把好的试验点(即使不包含在正交表中的)找出来。利用正交设计试验得 出的结果可能与传统的单因素试验法的结果一致，但正交试验设计考察因素及水平合理、分布均匀，不需进行重复试验，误差便可估计出来，因而计算精度较高，特别是在试验因素越多 、水平越多、因素之间交互作用越多时，优势表现越明显，此时，使用单因素试验法几乎不可能实现。孟和毕力格等人利用正交试验对传统乳制品中产γ-GABA乳酸菌培养基进行了优化，获得了满意结果，采用优化后的培养基于32℃发酵培养 96 h，产物含量高达10.78 g／L。钟为章等人采用L16正交表对红螺菌科光合细菌液体培养基组成进行了优化，利用优化培养基在光照3000 lx、(32±2)℃条件下培养3d，细菌总数由1.63×109cfu／mL增殖至3.68x10 cfu／mL。蔡成岗等人以角蛋白酶为考察指标，采用正交试验对枯草芽孢杆菌菌株KD—N2生产角蛋白酶培养基进行了优化研究，产物酶活力可达到(66.5±2.04)U／mL。在正交试验中，如果所考察的指标涉及到模糊 因子时，不能直接使用正交设计试验法，可以把正交试验结果模糊化，然后用模糊数学的理论和方法处理试验数据。陈敏等人利用模糊正交法，把试验结果模糊化，以模糊综合评价值为目标函数优化了锌酵母发酵培养基组成。模糊正交法通过把正交试验结果模糊化，然后用模糊数学的理论和方法处理试验数据，不仅能估计因素的主效应，还可以估计因素的最佳搭配，能在同样试验工作量情况下获得更多的信息。三、均匀设计法均匀设计法(Uniform Design)是一种考虑试验点在试验范围内充分均匀散布的试验设计方法，其基本思路是尽量使试验点充分均匀分散，使每个试验点具有更好的代表性，但同时舍弃整齐可比的要求，以减少试验次数，然后通过多元统计方法来弥补这一缺陷，使试验结论同样可靠，均匀设计一般采用二次型回归模型：由于每个因素每一水平只作一次试验，因此，当试验条件不易控制时，不宜使用均匀设计法。对波动相对较大的微生物培养试验 ，每一试验组最好重复 2～3次以确定试验条件是否易于控制，此外，适当地增加试验次数可提高回归方程的显著性。均匀设计法与正交设计试验法相比，试验次数大为减少，因素、水平容量较大，利于扩大考察范围，如当因素数为5，各因素水平为3l的试验中，如果采取正交设计来安排试验，则至少要做312=961次试验 ，而用均匀设计只需要做31次试验。在试验数相同的条件下，均匀设计法的偏差比正交设计试验法小。在使用均匀设计法进行条件优化时，应注意几个问题：①正确使用均匀设计表，可参考方开泰制定的常用均匀设计表，每个均匀设计表都应有一个试验安排使用表，要注意变量、范围和水平数的合理选择。②不要片面追求过少的试验次数，试验次数最好是因素的3倍。③要重视回归分析，为了避免回归时片面追求回归模型的项数、片面追求大的R2值和误差自由度过小等问题，可通过选择n稍大的均匀设计表，误差自由度≥5，回归模型最好不大于l0，在已知实际背景时少用多项式，在采用多项式回归时尽量考虑二次的。④善于利用统计图表，在均匀设计中，各种统计点图，如残差图、等高线图、正态点图、偏回归图等，对数据特性判定和建模满意度的判断非常有用。⑤均匀设计包的使用，如 DPS、SPSS、Sigmaplot、SAS等。王剑锋等人利用均匀设计、二次多项式逐步回归分析对烟管菌 Bjerkandera adusta WZFF．W—Y11产漆酶液态发酵培养基进行优化，在优化条件下进行液态培养可稳定获得 9672U／L的漆酶活力。四、响应面优化设计法响应面优化设计法是一种寻找多因素系统中最佳条件的数学统计方法，是数学方法和统计方法结合的产物，它可以用来对人们受多个变量影响的响应问题进行数学建模与统计分析 ，并可以将该响应进行优化。它能拟合因素与响应间的全局函数关系，有助于快速建模，缩短优化时间和提高应用可信度。一般可以通过 Plackett—Burman (PB)设计法或 Central composite design (CCD)等从众多因素中精确估计有主效应的因素，节省实验工作量。响应面分析法以回归法作为函数估算的工具，将多因子试验中因子与试验结果的相互关系，用多项式近似，把因子与试验结果(响应值)的关系函数化，依此可对函数的面进行分析，研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系，并进行优化。周海鸥等人应用 PB设计法对影响桑黄发酵的培养基组成进行筛选，再采用 CCD设计结合响应面对影响菌丝得率的关键因素最佳水平进行了深人研究，并通过二次方程回归求解得到最优化条件，此模型与预测值极为接近，吻合性较好。姜丽艳等人应用PB设计法对影响乳链菌肽液体发酵培养基组分进行了筛选，然后采用最陡爬坡实验逼近 3个关键因素的最大响应区域 ，找到了最优化的水平，在此培养条件下进行发酵培养，发酵液中乳链菌肽效价为 6033 U／mL，是优化前的4．48倍。钟国华¨蜘等人采用中心组分旋转设计技术，根据菌丝干重和高效氯氰菊酯降解率，按照统计学要求检测模型显著性，分析了配方组合对降解菌生长量、高效氯氰菊酯降解率的影响和效应，采用二次多项式逐步回归分析模型，根据响应面模型和预测回规模型方差分析对模型进行评价，以确定最佳培养基配方。利用优化培养基进行培养，菌体干重为 450.30 mg／50 mL培养菌液，处理24 h对50 mg/L 高效氯氰菊酯降解率高达93.78％。王普等人用部分因子试验筛选了影响 Candida tropicaJis 104产高选择性羰基还原酶的因素，继而采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域并结合CCD和RSM对3个显著性因素进行分析，得到了优化的培养基组成，采用该优化培养基进行发酵培养，供试菌株羰基还原酶活力达到 851.13 U／L，较优化前提高了65.2％。五、二次正交旋转组合法前面介绍的几种方法具有试验设计和结果分析简单、实际应用效果好的优点，在微生物培养基优化中得到了广泛的应用，但它们不能对各组分进行定量分析，不能对产量进行预测。所以，在正交设计试验法的基础上，加入组合设计和旋转设计的思想，并与回归分析方法有机结合，建立了二次回归正交旋转组合设计法(rotation regression orthogonal combination)，它是旋转设计的一种，不仅基本保留了回归正交设计的优点，还能根据测量值直接寻求最优区域，适用于分析参试因子的交互作用。它既能分析各因子的影响，又能建立定量的数学模型，属更高层次的试验设计技术。基本思路是利用回归设计安排试验，对试验结果用方程拟合，得到数学模型，利用计算机对模型进行图形模拟或数学模拟，求得模型的最优解和相应的培养基配方，并在一定范 围内预估出在最佳方案时的产量，与响应面法有相似之处。张钟元等人为了提高 Proteus mirabilis产 L-肉碱脱水酶的活力，通过单因素试验研究了碳源、氮源及诱导物等对酶生物合成的影响的基础上，采用二次正交旋转组合设计优化了培养基组分配比，使L-肉碱脱水酶活力由最初的1.90 U／mL提高到了5.32 U／mL，与模型预测值较为接近，取得了预期效果。刘晓永等人为提高酵母菌中β- 葡聚糖的含量，在单因素试验基础上，应用二次正交旋转组合法设计培养基成分，获得了优化后的培养基配方，培养基经优化后，酵母菌中B一葡聚糖产量由原来的65.80 mg／100 mL提高至108.18mg／100 mL，获得了满意的结果。六、遗传算法与神经网络遗传算法(genetic algorithms，GA)是一新型智能优化算法，由美国的Holland提出，是进化算法(evolutionary algorithms，EA)中的一种，是基于达尔文的进化论和孟德尔的遗传学说，仿效生物的进化与遗传，根据“生存竞争” 和“优胜劣汰”的原则，借助复制、交换、突变等操作，使所要解决的问题从初始解一步步逼近最优解，遗传算法模拟生物遗传和进化原理，在反复迭代的过程中，将适应度高的个体更多的遗传到下一代，为确保在整个n维空间搜索最优解，群体由一定数量的个体组成，在遗传的同时，个体在一定的概率下发生交叉互换，并在一定的概率下发生变异，所以，将在最终的群体中得到一个或若干个优良的个体，其对应的表现型即为达到或接近问题的最优解，培养基配方优化的遗传算法基本过程见图 l，遗传算法在整个可行域内进行随机寻优，并对搜索空间的多个解进行评估，能有效防止搜索过程限于局部最优解，最终达到或逼近全局最优解。最早报道 GA应用于培养基优化的是 Freyer等，其后 Zuzek等也进行了尝试，由于它在培养基优化方面不需要建立数学模型确定各因素之间的相互影响，有目标函数值即可的优越性而受青睐。与其他传统搜索方法相比，GA在搜索过程中不易陷入局部最优，即使所定义的目标函数非连续、不规则或伴有噪声，它也能以很大的概率找到全局最优解，同时，由于GA 固有的并行性，使得它适合于大规模的并行分布处理，而且GA容易介入到已有的模型中并且具有可扩展性，易于和其他技术如神经网络、模糊推理、混沌行为和人工生命等相结合，形成性能更优的问题求解方法∞。运用配方优化的遗传算法所搜索出的决策因素最优区间，可以免馈到进一步的配方试验中，有效地缩短确定优化配方的时间与减少试验次数。神经网络是一种“黑箱”模型，具有很强的非线性映射能力，可用于反 映非线性条件下，难以用常规的数学模型描述的问题。遗传算法以自然选择和遗传理论为基础，将生物进化过程 中适者生存规则与群体内部染色体的随机信息交换机制相结合的高效全局寻优搜索算法。神经网络和遗传算法的结合可 以通过引入非线性的模型来描述各因素问复杂的关系，并在遗传算法的基础上，通过全局寻优找出最佳值。罗剑飞等人利用神经网络(ANN)和遗传算法(GA)结合的优化方法优化了培养其组成，并获得了最高“性价比”的培养基，通过发酵经济学的初步统计发现，优化后的培养基比初始培养基，其“性价比”提高了27.36％。试验表明，通过优化可以大大减少生产中的成本消耗。宋文军等应用GA优化了L—Ile发酵培养基组成，并运用ANN技术对发酵过程进行建模并预测 ，取得了良好效果，实验发现，在L—Ile 发酵的模拟和预测是一种快速方法。七、模式识别模式识别方法是从空间区域划分和属性类别判断角度出发，处理多元数据的一种非函数方法。该方法用一组表示被研究对象特征的变量构成模式空间，按 “物以类聚”的观点分析数据结构，划分出具有特定属性模式类别的空间聚集区域 ，并辨认每一个模式的类别。由计算机按模式识别原理处理数据信息，做出最优决策。熊明勇等人应用模式识别，以培养基组成构筑模式空间，以黄色短杆菌 TV10为出发菌株，通过主成分分析(PCA)揭示模式空间的可视化区域，选择优化点并逆推回到高维空间得到最优化培养基组成，结果表明，该菌株可积累一缬氨酸26.38 g／L，比初始值提高7.8％。八、展望微生物初级代谢产物和次级代谢的生物合成其发酵机理十分复杂，受很多因素的影响，如培养基组成、培养温度、pH、发酵时间、菌种理化特性及发酵工艺等。适宜的培养基配方和合适的发酵条件成为产物生成量高低和原料利用率高低的决定因素。一般情况下，培养基组分繁多且各成分间还可能存在错综复杂的交互作用。因此，微生物培养基的组成优化就显得十分重要和必要。培养基优化常规方法有单因素试验法、正交设计试验法及响应面分析法，还有一些实践应用相对较少的，如均匀设计法、二次回归旋转组合法、遗传算法等。培养基优化方法的选择，可以采取单一方法 ，也可以用几种方法的组合，要根据实际情况合理选择。培养基优化方法除本文中提到的常用培养基优化方法外，还有研究者不断开拓新方法或采用不同方法交叉对培养基进行优化，如聚类分析方法等。笔者相信，随着数理统计方法和优化技术的发展和应用，将来一定还会出现更适用、更方便、可行性更好的微生物培养基优化方法。

微生物定义英文名称：marine microorganism定义1：分布在海洋中的个体微小、形态结构简单的单细胞或多细胞生物。所属学科：水产学（一级学科）；水产基础科学（二级学科）定义2：海洋中个体微小，构造简单的低等生物的总称。包括细菌、放线菌、霉菌、酵母、病毒、衣原体、支原体、噬菌体和微型藻及微型原生动物等。所属学科：资源科技（一级学科）；海洋资源学（二级学科）以海洋水体为正常栖居环境的一切微生物。但由于学科传统及研究方法的不同,本文不介绍单细胞藻类,而只讨论细菌、真菌及噬菌体等狭义微生物学的对象。海洋细菌是海洋生态系统中的重要环节。  特性嗜盐性海洋微生物最普遍的特点。真正的海洋微生物的生长必需海水。海水中富含各种无机盐类和微量元素。钠为海洋微生物生长与代谢所必需此外,钾、镁、钙、磷、硫或其他微量元素也是某些海洋微生物生长所必需的。  嗜冷性大约90%海洋环境的温度都在5℃以下,绝大多数海洋微生物的生长要求较低的温度，一般温度超过37℃就停止生长或死亡。那些能在 0℃生长或其最适生长温度低于20℃的微生物称为嗜冷微生物。嗜冷菌主要分布于极地、深海或高纬度的海域中。其细胞膜构造具有适应低温的特点。那种严格依赖低温才能生存的嗜冷菌对热反应极为敏感，即使中温就足以阻碍其生长与代谢。   嗜压性海洋中静水压力因水深而异，水深每增加10米,静水压力递增1个标准大气压。海洋最深处的静水压力可超过1000大气压。深海水域是一个广阔的生态系统,约56%以上的海洋环境处在100～1100大气压的压力之中，嗜压性是深海微生物独有的特性。来源于浅海的微生物一般只能忍耐较低的压力，而深海的嗜压细菌则具有在高压环境下生长的能力，能在高压环境中保持其酶系统的稳定性。研究嗜压微生物的生理特性必需借助高压培养器来维持特定的压力。那种严格依赖高压而存活的深海嗜压细菌，由于研究手段的限制迄今尚难于获得纯培养菌株。根据自动接种培养装置在深海实地实验获得的微生物生理活动资料判断，在深海底部微生物分解各种有机物质的过程是相当缓慢的。  低营养性海水中营养物质比较稀薄，部分海洋细菌要求在营养贫乏的培养基上生长。在一般营养较丰富的培养基上，有的细菌于第一次形成菌落后即迅速死亡，有的则根本不能形成菌落。这类海洋细菌在形成菌落过程中因其自身代谢产物积聚过甚而中毒致死。这种现象说明常规的平板法并不是一种最理想的分离海洋微生物方法。   多形性在显微镜下观察细菌形态时，有时在同一株细菌纯培养中可以同时观察到多种形态,如球形椭圆形、大小长短不一的杆状或各种不规则形态的细胞。这种多形现象在海洋革兰氏阴性杆菌中表现尤为普遍。这种特性看来是微生物长期适应复杂海洋环境的产物。发光性在海洋细菌中只有少数几个属表现发光特性。发光细菌通常可从海水或鱼产品上分离到。细菌发光现象对理化因子反应敏感，因此有人试图利用发光细菌为检验水域污染状况的指示菌。                                    

贝莱斯芽孢杆菌 形态特征 菌落乳白色、圆形,表面光滑、稍凸，1.0-1.5mm，质地粘稠。细胞杆状、大卵圆形, 常成对；G-，不形成内生芽胞但形成孢囊和荚膜黏液，以周生鞭毛运动，好氧，PH7.0-7.5，能利用大气中的氮气，固氮需钼；能利用淀粉、甘露醇，但不利用鼠李糖。 主要价值主要用途为研究；生产，具体用途为生产固氮菌肥。 生理特性可在15-45℃，pH 5.0-10.0的范围内生长，生长迅速，易分离培养。能分泌产生多种生物活性物质。包括酶、抗菌蛋白、脂肽类抗生素、聚酮类抗生素、植物激素等。分布范围 可从海洋和河流沉积物、土壤、植株根际、植物组织中分离得到。应用近年来，关于贝莱斯芽孢杆菌的研究主要集中在饲料、医药、纺织、水产、污水处理、植物保护等领域。作为一种新型生防微生物因子，贝莱斯芽孢杆菌在植物病害防控、促进植物生长等方面备受关注防治植物病害贝莱斯芽孢杆菌能有效抑制多种植物病原菌，如辣椒疫霉、腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌。以及叶类蔬菜上几种病原真菌包括褐斑病菌、茎点霉、灰葡萄孢石竹变种和油菜菌核病菌，有效防控多种植物病害。贝莱斯芽孢杆菌对病原微生物的拮抗作用主要通过其分泌的抑菌活性代谢物来起作用。该菌可以分泌产生多种生物活性物质，包括细胞壁降解酶类（葡聚糖酶和蛋白酶）、脂肽类抗生素（表面活性素、伊枯草菌素和芬荠素）以及聚酮类抗生素作用机制：水解病源真菌细胞壁；抑制病原真菌分生孢子萌发、芽管生长和附着胞的形成；改变细胞质膜的结构和渗透性，引起胞内物质外泄，导致细胞死亡 促进作物生长贝莱斯芽孢杆菌能分泌多种植物激素和挥发性化合物，如IAA、NH、和ACC脱氨酶，促进甜菜、胡萝卜、黄瓜、胡椒、土豆、小萝卜、南瓜、番茄和芜菁多种种作物的生长

                      小鼠骨骼肌细胞提取物的应用！一、背景小鼠骨骼肌细胞提取物是从小鼠骨骼肌细胞提取的，小鼠骨骼肌细胞从正常小鼠骨骼肌组织制备，可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。骨骼肌（skeletal muscle）又称横纹肌，附着在骨骼上的肌肉，肌肉中的一种。肌细胞的结构特点是细胞内含有大量的肌丝，具有收缩运动的特性，是躯体和四肢运动和体内消化、呼吸、循环、排泄等生理活动的动力来源。肌细胞内的基质称“肌浆”，肌细胞的内质网称肌浆网，肌细胞的细胞膜称“肌膜”。肌纤维之间有少量结缔组织、血管、淋巴管及神经在构成肌肉组织时，各肌肉细胞一般外形为纺锤状乃至纤维状，特称为肌（肉）纤维。海绵动物虽然缺乏肌肉组织，但硅角海绵类除体表的扁平上皮细胞多少有点收缩性外，在体表流出孔的周围，存在着称为肌细胞（myocyte）的长纺锤形的收缩性细胞。此外，钙质海绵类的小孔细胞也有收缩性。这些和某种原生动物细胞的整体都能收缩共同构成了肌细胞的萌芽形态。发展到腔肠动物，水螅型的外胚叶细胞层中具有上皮肌细胞，可认为是真肌原纤维。这里最普通的圆柱形上皮细胞，即支柱细胞，基底部延长而成纺锤形，只有这部分存在肌原纤维，它是由体表的上皮细胞向肌细胞分化过程中的形态。至于水母型则已完全成为纺锤形的肌细胞。扁形动物以上的动物已明显分化为皮肌层、器官肌等等。二、应用小鼠骨骼肌细胞提取物可用于Sestrin2/AMPK信号介导骨骼肌细胞自噬在有氧运动改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗过程中的作用研究：哺乳类和大多脊椎类动物的基因组主要表达3种Sesns亚型,无脊椎动物机体仅表达1种。尤其重要的是,Sesns参与细胞自噬激活,与AMPK/m TORC1信号通路关联密切。自噬作为普遍存在的分解代谢调节机制,通过清除胞内损伤或衰老的细胞器、过量ROS及能量代谢产物,不仅参与维持正常状态下细胞的代谢平衡,也在代谢性疾病发生过程中起着重要作用。AMPK/m TOR信号通路通过感受细胞内营养与能量水平变化,在调控机体能量代谢与稳态维持过程中至关重要。而且细胞可通过AMPK/m TOR信号通路对一些来源于生长因子、激素水平、营养状态、细胞外环境压力以及细胞内能量应激等一些分子信号的变化进行整合从而实现对细胞自噬水平的调节。作为能量代谢调节的关键介质,AMPK活化通过增强骨骼肌细胞葡萄糖摄取和氧化、增加脂肪酸的氧化率,同时抑制肌糖原合成和促进糖原的分解、抑制骨骼肌蛋白合成等途径,在运动过程中骨骼肌能量代谢的供应与机体内稳态维持调节中发挥着至关重要的作用,且与IR相关代谢性疾病的预防和治疗关系密切。有氧运动作为细胞自噬的天然“激动剂”,通过自噬激活在维持能量代谢和防治肥胖、T2DM等疾病方面有着独特的优势。尽管目前运动与Sesns表达调控之间的关系并不明确,但Sesns涉及P53,AMPK,m TOR及过氧化物酶信号转导调节的重要过程,提示Sesns参与自噬激活和AMPK促进细胞能量代谢之间的潜在联系。并且,Sesns基因缺失引起的代谢表型改变与长期运动缺乏所致的代谢机能障碍极为相似。而且,单次抗阻运动及中、高强度的运动可激活细胞AMPK、增加Sesns上游效应蛋白P53的蛋白表达及磷酸化活性,改善增龄性心肌和骨骼肌功能退变而延缓衰老,表明Sesns可能参与运动促进健康的调节过程。此外,单次运动增加骨骼肌细胞Sesn2/3蛋白表达、抑制m TOR/S6K1通路活性,改善细胞胰岛素信号转导。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

             微生物检验样品采集的操作过程及注意事项！百欧博伟生物：样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标志、样品的运输、接收、保存几个环节。一、取样取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。首先在取样之前应确认货、证是否相符。其次取样工具要达到无菌的要求，对取样 具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等T作。另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。1、包装食品 对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性；在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。2、生产过程中的取样 划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性；如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需要冷却的粉状或同定食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。3、液体产品 通常情况下，液态产品较容易获得代表性样品。液态产品一般盛放在大罐中，取样时，可连续或间歇搅拌，对于较小的容器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完全混匀。较大的样品(100～500m1)要放在已灭菌的容器中送往实验室，实验室在取样检测之前应将液体再彻底混匀一次。4、固体样品 固态样品常用的取样工具有灭菌的解剖刀、勺子、软木钻、锯子和钳子等。面粉或奶粉等易于混匀的食品，其成品质量均匀、稳定，可以抽取小样品检测(如100 g)。但散装样品就必须从多个点取样，且每个样品都要单独处理，在检测前彻底混匀，并从中取一份样品进行检测。肉类、鱼类的食品既要在表皮取样叉要在深层取样。深层取样时要小心不要被表面污染。有些食品，如鲜肉或熟肉可用灭菌的解剖刀或钳子取样；冷冻食品可在未解冻的状态下可用锯子、木钻或电钻(一般斜角钻人)等获取深层取样样品；全蛋粉等粉末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱底，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌小勺从上、中、下部位取样。5、表面取样 通过惰性载体可以将表面样品上的微生物转移到合适的培养基中进行微生物检验，这种惰性载体既不能引起微生物死亡，也不应使其增殖。这样的载体包括清水、拭子、胶带等。取样后，要使微生物长期保存在载体上，既不死亡又不增殖十分困难，所以应尽早地将微生物转接到适当的培养基中。转移前耽误的时间越长，品质评价的可靠性就越差。表面取样技术只能直接转移菌体，不能做系列稀释，只有在菌体数量较多时才适用。其最大优点是检测时不破坏样品。6、空气样品的采取 空气的取样方法有直接沉降法和过滤法。在检验空气中细菌含量的各种沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前为止，这种方法在判断空气中浮游微生物分次自沉现象方面仍具有一定的意义。过滤法是使定量的空气通过吸收剂，然后将吸收剂培养，计算出菌落数。二、包装密封为保证样品的完整性，装有样品的包装物应进行封口，以证实其可靠性，即从取样地点至实验室这段时间不发生任何变化。可采用自粘胶、特制的纸黏着剂或者石蜡等封口，封口处应留m填写日期、检验人员和货主签字的地方，然后盖上专用的印章。三、样品的标志取样过程中应对所取样品进行及时、准确的标记。取样结束后，应由取样人写出完整的取样报告。样品应尽可能在原有状态下迅速运送或发送到实验室。保存的样品应进行必要的清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称，地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。所有盛样容器必须有和样品一致的标记。在标记上应记明产品标志与号码和样品顺序号以及其他需要说明的情况。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。当样品需要托运或由非专职取样人员运送时，必须封死样品容器。四、样品的运输取样结束后应尽快将样品送往实验室检验。如不能及时运送，冷冻样品应存放在-15℃以下的冰箱或冷库内；冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏库内；其他食品可放在常温暗处。微生物检验样品应在取样后6 h以内送达实验室进行检验。样品的运输过程必须有适当的保护措施(如密封、冷藏等)，以保证样品的微生物指标不发生变化。运送冷冻和易腐样品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂，但样品不可与冷却剂或冷冻剂直接接触，保证途中样品不升温或不融化，必要时可于途中补加冷却剂或冷冻剂。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又回流瓶内，从而增加污染。如不能由专人携带送样时，也可托运。托运前必须将样品包装好，应能防破损，防冻结或防易腐和冷冻样品升温或融化。在包装上应注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字样。同时做好样品运送记录，写明运送条件、日期、到达地点及其他需要说明的情况，并由运送人签字。五、样品的接收在接收样品时，实验室应与送样人共同相互确认样品与委托单上的内容是否一致。确认内容一般包括：品名；检验目的；检验项目；形状和包装状况(同体、粉状、冷冻、冷藏、零售、批发、无菌包装等都不同)；抽样数量(个数和质量)；抽样日期及送达日期；抽样地点；随货样附带的许可申请单编号；生产国或者生产厂家名称(进口商品)；抽样者的单位、姓名及有无封印；其他搬运、储存、检验时的注意事项。六、样品的保存实验室接到样品后应在36 h内进行检测(贝类样品通常要在6 h内检测)，对不能立即进行检测的样品，要采取适当的方式保存，使样品在检测之前维持取样时的状态，即样品的检测结果能够代表整个产品。实验室应有足够和适当的样品保存设施(如冰箱或冰柜等)。保存的样品应进行必要和清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称、地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等；样品在保存过程中应保持密封性，防止引起样品pH值的变化。不同类型的样品，保存方法不同：1、易腐样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于低温状态(0～4℃)，应在取样后尽快送至实验室，并保证样品送至实验室时不变质。易腐的非冷冻食品检测前不应冷冻保存(除非不能及时检测)。如需要短时间保存，应在0～～4℃ 冷藏保存，但应尽快检验(一般不应超过36h)，因为保存时间过长会造成样品中嗜冷细菌的生长和嗜中温细菌的死亡。2、冷冻样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于冷冻状态，送至实验室前样品不能融解、变质。冰冻样品要密闭后置于冷冻冰箱(通常为-l8℃)，检测前要始终保持冷冻状态，防止样品暴露在二氧化碳气体中。3、其他样品：应用塑料袋或类似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，并要保证从取样到实验室进行检验的过程中其品质不变。必要时可使用冷藏设备。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

一、细胞简介细胞名称：非洲绿猴肾细胞拉丁属名：Vero 规格：1*10e6细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞特性1）来源：非洲绿猴正常肾2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。                  五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、如需要查询或者采购其他产品，请直接联系电话：18701098095或者QQ：2852776741，感谢支持！

             微生物检测中消毒和灭菌的区别以及方法！消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法，而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。一、物理方法1、温度利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。（1）干热灭菌法：a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。（2）湿热灭菌法：在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。a.巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。b.煮沸消毒法：直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。c.间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。具体做法是：将待灭菌的物品加热至100℃，15~30分钟，杀死其中的营养体。然后冷却，放入37℃恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。第2天再重复上述步骤，三次左右，就可达到灭菌的目的。此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所需时间长。d. 加压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121℃。在这种情况下，微生物（包括芽孢）在15~20分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。（3）影响灭菌的因素：a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同。多数微生物的营养体和病毒在50~65℃，10分钟就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121℃，12分钟才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。b.微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，pH在7附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。（4）灭菌对培养基成分的影响：a.pH值普遍下降。b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。c.不少培养基颜色加深。d.体积和浓度有所变化。e.营养成分有时受到破坏。2、辐射利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目前主要应用在以下几个方面：（1）接种室、手术室、食品、药物包装室常应用紫外线杀菌。（2）应用β射线作食品表面杀菌，γ射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。3、过滤采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器。通过过滤，只让液体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体留在筛子上面，从而达到除菌的目的。这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌。它的zuida优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内，有时会给实验带来一定的麻烦。二、化学方法一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是起消毒剂的作用，而不是灭菌剂。能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒剂。能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称为防腐剂。但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，常不易严格区分。消毒剂在低浓度时也能杀菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐剂没有选择性，因此对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用于体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。常用的化学消毒剂有：石碳酸、来苏水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    血凝试验与血凝抑制试验方法！一、适用范围本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 二、血凝试验1、材料与试剂（1）器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、注射器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。（2）pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方法参见附录A。（3）1%鸡红细胞悬液，配制方法参见附录B。（4）阿氏液，配制方法参见附录C。（5）标准禽流感病毒抗原，购入的标准禽流感病毒应检测其血凝效价并进行无菌检验，以检查与所标HA效价是否相符。若不符，应重复检测并到相关实验室验证。 2、操作程序（1）取96孔V形微量反应板，用微量移液器在1~12孔每孔加25 μL PBS，共滴8排，后四排的第1列孔再补加25 μL PBS。（2）吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第1列孔中，吹打3~5次充分混匀。（3）从第1列孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2列孔中，混匀后吸取25μL加入到第3列孔中，依次进行系列倍比稀释至第11列孔，最后从第11列孔各吸取25 μL弃之，设第12列孔为红细胞对照。（4）自右向左依次向各孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。（5）将反应板置于微量振荡器上振荡1 min，室温（20-25℃）静置45 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃静置60 min，红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果。 3、结果判定（1）在红细胞对照孔出现正确结果的情况下，将反应板作45°倾斜，观察红细胞是否完全凝集。以完全凝集的病毒最大稀释度为该抗原的血凝滴度。完全凝集的病毒的最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）。（2）最终结果取2倍、3倍倍比稀释抗原的血凝滴度的几何平均值。 三、血凝抑制试验1、材料与试剂（1）器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、煮沸消毒器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。（2）pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法参见附录A。（3）1%鸡红细胞悬液配制方法参见附录B。（4）阿氏液，配制方法参见附录C。（5）4单位抗原，制备方法参见附录D。（6）HA效价高于10log2时可继续增加稀释的孔数。 2、操作程序（1）根据血凝试验结果配制4单位抗原。以能引起100%血凝的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位，4单位抗原的的配制方法如下：假设抗原的血凝滴度为1:256（28），则4单位抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4），稀释时，将1 mL抗原加入到63 mL PBS中即为4单位抗原。但是该4单位抗原必须经过验证（如附录D  4单位抗原的标定）后才可确定其稀释倍数，用于血凝抑制效价的测定。（2）取96孔V形微量反应板，用移液器在第1~11孔各加入25 μL PBS，第12孔加入50 μL PBS。（3）在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第10孔，第10孔弃去25 μL，设第11孔为病毒对照，第12孔为红细胞对照。（4）在第1~11孔各加入25 μL 4单位抗原，轻叩反应板，使反应物混合均匀，室温20-25℃下静置30 min。（5）自右向左依次向各孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。（6）将反应板置于微量振荡器上振荡1 min，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃静置60 min，红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果。 3、结果判定（1）在红细胞对照出现完全沉淀、病毒对照出现完全凝集的情况下，将反应板作45°倾斜，从反应板背侧观察。以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。（2）当被检血清对其HI效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。 附录ApH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制氯化钠（NaCl）氯化钾（KCl）磷酸氢二钠（Na2HPO4）磷酸二氢钾（KH2PO4）加蒸馏水至将上述成分依次溶解，用盐酸（HCl）调pH至7.2，分装，121℃、15 min高压灭菌，一经使用，于4℃保存不超过3周。 附录B1%鸡红细胞悬液配制采集至少3只2~6月龄SPF公鸡或无禽流感和禽流感抗体的非免疫鸡的抗凝血液与等量柠檬酸钠溶液混合，放入离心管中，加入3~4倍体积的PBS混匀，以1500 r/min离心5~10 min，去掉血浆和白细胞层，反复洗涤三次，最后吸取压积红细胞用PBS配制成体积分数为1%的悬液，于4℃保存备用。 附录C阿氏液的配制葡萄糖（C6H12O6．H2O)柠檬酸三钠（Na3C6H5O7.2H2O)柠檬酸（C6H8O7.H2O）氯化钠（NaCl)加蒸馏水至100 ml，溶解，过滤，分装，121℃、30 min高压灭菌，4℃保存备用。 附录D4单位抗原的制备根据血凝试验测定的血凝效价，判定4个血凝单位的稀释倍数，并作复归试验。例如：病毒2倍倍比稀释时的HA效价为9log2，3倍时的HA效价为8log2，其4个血凝单位为6log2~7log2，则将病毒在96~128倍稀释。则可以假定90×，100×，110×，120×，130×为4HAU，分别再作2×、3×、4×、5×、6×稀释，每个4个孔，并作红细胞和病毒对照，依此做一次血凝实验，从而确定4单位抗原。判定时4×的半数100%凝集则为4单位抗原，1个100%凝集说明稀释倍数偏大，3个100%凝集稀释倍数偏小。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

黄蓝状菌 形态特征编 菌丝较粗而长，菌落较大，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1-8厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取。 黄色蓝状菌，菌落在CA上25℃培养12天，直径3245mm，中心有突起或元，平坦或有少量放射状皱纹：质地絮状兼绒状：分生孢子结构通常稀少；边缘的菌丝体白色至被黄色或鲜黄色，近于淡柠檬黄色（palelemon yellow, R. PL IV），中部者呈现楠红色、粉红色或淡紫红色，近于贝壳粉红色至葡萄酒粉红色（shell pink, pale vinaceous-pink, R. Pl. XXVIII）、 浅杏黄色（a picot buff, R. Pl. XIV) ；裸囊壳少或较多；渗出液淡黄色、 微红色，偶有缺乏者；反面呈现不同程度的黄色、 楠黄色，在中部往往是红褐色； 可溶性色素缺乏。中文学名黄色蓝状菌界真菌界分布区域广布种，较容易分离到。基    物土壤、 霉萝扣籽、 霉烟叶菌落在CA上25℃培养12天，直径3245mm，中心有突起或元，平坦或有少量放射状皱纹：质地絮状兼绒状：分生孢子结构通常稀少；边缘的菌丝体白色至被黄色或鲜黄色，近于淡柠檬黄色（palelemon yellow, R. PL IV），中部者呈现楠红色、粉红色或淡紫红色，近于贝壳粉红色至葡萄酒粉红色（shell pink, pale vinaceous-pink, R. Pl. XXVIII）、 浅杏黄色（a picot buff, R. Pl. XIV) ；裸囊壳少或较多；渗出液淡黄色、 微红色，偶有缺乏者；反面呈现不同程度的黄色、 楠黄色，在中部往往是红褐色； 可溶性色素缺乏。菌落在CYA 上 25℃培养7天，直径32-40mm， 平坦或有放射状皱纹，中心有突起或无；质地絮状兼绒状或絮状；分生抱子结构稀少或很少；菌丝体，边缘者淡黄色，中部者黄色或微红黄色，近于玉米黄色（ maize yellow, R. Pl. IV）、 淡粉红肉桂色(light pinkish cinnamon, R. Pl. XXIX） 或肌肤粉红色（fleesh蝙pink, R. Pl. XIII）；裸囊 壳较多 F 渗出液偶尔存在，少量，淡黄色;反面黄色、 楠黄色或红褐色；可搭性色素缺乏。菌落在WA上25℃培养7天，直径（35一） 40-60mm，通常较厚，平坦或有少量放射状皱纹，或1-2道环纹；质地絮状兼绒状或絮状；分生孢子结构通常很少， 偶有分离物较多， 分生孢子面绿色，近于草绿色（grass green, R. Pl. VI）；菌丝体换绿黄色、 绿黄色或柠檬黄色；裸囊壳较多或大量产生；渗出液缺乏；反面黄色、 黄褐色、 紫红色或红褐色；可溶性色素缺乏 。菌落在G25N 上 25℃培养7天， 直径2-8mm， 通常平坦；质地絮状兼绒状；分生孢子结构尚未形成。 也有分离物不生长。在CYA上5℃培养7天不生长。在CYA上37℃培养7天：直径16-38mm，较薄，平坦或近于平坦， 中心有脐状突起或无；质地絮状兼绒状或絮状；分生孢子结构尚未形成或很少；菌丝体呈现不同程度的黄色、 黄红色， 近于天皇橙色（Mikado orange, R. Pl. IV）、 帝国黄色(Empire yellow, buff-yellow, R. Pl. IV）至淡黄色；裸囊壳较多或大量产生 ；渗出液缺乏，反面橙红色、 橙黄色或红褐色；可溶性色素通常缺乏， 偶有产生者。裸囊壳呈现球形、 近球形或近球形至椭圆形， 直径或长轴（16←） 25←500 （一侧） ρ，黄色、 情黄色或情红色，约2周成熟；原基大，近圆柱状，常弯曲，可达35。一400µm （产囊体） 长，由一细丝（雄器）所围绕；子囊链生，球形或近球形，8.←12 (-15）μm；子囊孢子呈现椭圆形，3. 2→6.0×2. ← 3. 8闷，黄色或带红黄色，显著刺状粗糙。分生孢子梗发生于气生菌丝，孢梗茎15-80 (-240）×2. ←－3. Oµm，壁平滑；帚状枝双轮生 单轮生，偶有不规则或副校存在；梗基每轮2←3 (-5）个，较紧贴，、8.0-12 （一16）×2. 0-一3. Oµm；瓶梗每轮3-6个，9.0-11 (-13） ×2. 0-2. Sµm, 披针形，梗颈细而明显；分生孢子呈现不同程度的椭圆形 或近纺锤形，2.8-3.8×2.0-2. Sµm，壁平滑或近于平滑；分生抱子链疏松而不规则。新模式： CBS 310. 38 (Stolk &. Samson, 1972, Pittt &. Samson, 1993）。本种的产囊体近圆柱状， 大：子囊孢子也较大，椭圆形，其壁显著刺状租糙等特征突出。分布：广布种，较容易分离到。 我国有吉林长春市（C13191）；黑龙江齐齐哈尔市 （C13077）；浙江杭州 市（C12708, C12710）、 舟山市（C12735）；福建武夷山 (C12780) ；河南郑州市（C13230）；湖北神农架（7488, 7765, 7831, 9112, 9213, 9696, 9726, 9730, 9745, 9861）；湖南张家界市（C12868）；广东广州市（C12793, C12796, C12818）、 韶关市（C12831）；广西桂林市（C10586）、 凭祥市（C11121,C11409）、 南宁市（C11470, C11600, C11950, C11999）；青海西宁市（C12200）。基物： 土壤、 霉萝扣籽、 霉烟叶、 腐木屑和菜籽。

                    高压蒸汽灭菌器灭菌效果的验证！ 高压蒸气灭菌器使物品灭菌后达到无菌要求，这是微生物实验的基本保证。高压灭菌器灭菌效果是否合格是实验成败的最基础最关键的首要步骤。除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到对样品的无菌试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。为此我们提供了进行灭菌效果验证的一个简易可行的方法。一、试验材料1、嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（也可用成套测试管）。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)。ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-105 CFU/片。2、121℃压力蒸气灭菌化学指示卡（常见的灭菌指示带也可）。3、溴甲酚紫胨水培养基115℃高压灭菌20分钟后备用4、0-150℃留点温度计（须计量局校准）。二、方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应在1℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。附：灭菌时的注意事项（一些进口的全自动灭菌锅可不用考虑排气）使用高压蒸气灭菌器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除灭菌器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。假如灭菌器内仍存留有部分空气时，则压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多，则二者相差也越大，器内温度不足，灭菌则不彻底。（很多人在做发酵法培养基灭菌时会出现小导管中有气泡，不妨也可以尝试多排出灭菌器内的冷空气，有奇效哦）。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zuiyou质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 我国科学家揭示合成生物的建构原理！百欧博伟生物：中科院深圳先进院、深圳合成生物学创新研究院刘陈立研究团队以大肠杆菌为模式生物，揭秘了细菌大小的决定因素，相关成果发表于《自然—微生物学》。该研究推导出了全新的“个体生长分裂方程”，修正了该领域原有的两大生长法则，并对合成生物学领域生命体理性设计提供了相关建构基础原理。每种细菌都有各式各样的可遗传继承的大小，这些微小细胞的体积有时可以相差106-108倍，当然，较大的细菌是极少数的，大多数已知细菌的直径在0.4至2微米之间，长度在0.5至5微米之间。细菌的大小不仅呈现多样化，而且很稳定。即使在温度高达100度以上的热液口、盐浓度高达5摩尔的盐湖、离子放射性强度超过人类致死剂量1000倍等条件下，这些环境中的细菌细胞仍然保持特定大小。长久以来，细菌的大小一直是细菌分类学中一个不可缺少的性状，同时特定的大小使得细菌能更适应其生存环境。那么细菌的大小究竟是怎么决定的？一测到底 展开三年漫长研究早在上世纪50年代，美国科学家Schaechter等发现细菌细胞长得越快，细胞就越大。更为重要的是，该研究突破性地用一个数学公式描述了细菌细胞生长速度和细胞大小之间的定量关系，即是说只要知道细胞生长快慢，就可以准确推断出细胞大小，反之亦然。这一公式后被称为"SMK生长法则"。那么，细胞大小和生长速度为什么存在这样的关系呢？1968年，Donachie在《自然》杂志上发表了他的观点。他认为，细胞大小决定了细胞内DNA何时开始新一轮复制。当细胞进入复制阶段时，细胞大小和复制起点数的比值是恒定不变的。这一比值被称为“起始质量”，且“起始质量”与生长速率无关。开始新一轮DNA复制后，经过恒定的时间周期，细胞分裂。由于细胞是指数生长，起始质量及时间周期恒定，因此分裂时细胞的大小与生长速率的指数次方成正比。这一观点很好的契合了SMK生长法则，回答了“细菌大小是怎么决定的”这一基础科学问题，被称为“恒定起始质量假说”。这两个统治了学术界半个世纪的生长法则环环相扣，就像科研道路上的“指路牌”，在该领域树立权威六十年，多年来许许多多的研究在两大法则的指引下开展；也有一些研究团队对这两个法则的准确性提出过质疑，但由于缺乏系统全面的实验数据，相关结论并未引起领域内大部分研究人员的重视。要想修正主流细胞生长法则，必须要确保实验数据完整的覆盖度以及高度的可重复性，刘陈立团队潜心研究3年多，对两大法则进行了系统性重复实验。“通常该类研究会选取1种或少数几种培养基，而我们选择了超过30种培养基开展实验，我们采用早晚轮班制，对细胞的生长状态进行实时监控，以确保每次取样都是在细胞稳定状态下进行的，”该文章的diyi作者郑海博士介绍说，“在低生长速率条件下，完成一次实验所需时间长达一周，而为确保数据可靠，实验还需要重复，重复次数多的超过9次以上。”这是迄今为止有报道的类似研究工作中选用培养基种类最多、覆盖生长速率范围最广的一次。带着极大的耐心和严谨的态度，团队最终发现，原有的两大法则并不准确，被奉为经典的“指路牌”可能将大家的研究引向了偏离的方向。“虽然生长速度越快，细胞越大，但二者之间的关系并不符合SMK生长法则的预期”，该文章通讯作者刘陈立研究员说，“按照法则描述，无论细胞生长快慢，一旦达到‘起始质量’，就应该开始新一轮的DNA复制，然而，我们却在实验中观察到，细菌细胞没有遵循假说，不同培养条件下，‘起始质量’有高有低。”如果两大法则并不准确，那么细菌大小是怎么决定的呢？我们能否修正“指路牌”呢？玩转数据 推导全新定量关系为了回答“细菌大小是怎么决定的”这一科学问题。刘陈立这样描述实验数据分析的过程：“要和数据呆在一起，揣摩它。”研究团队通过寻找大量科研实验数据背后的量化关系，最终推演出一个全新且适用于不同生长速率条件的“个体生长分裂方程”。个体生长分裂方程新的方程统一了不同生长速率条件下的细菌细胞周期调控机制，这一定量公式的提出也使得细菌个体大小、生长速率等自然现象具有了一定的可预测性，例如：当得知细菌生长速率和DNA复制周期，便可准确预测出细菌的大小。该分裂方程为研究人员提供了新的研究范式和思维方法，解答了细菌细胞大小和DNA复制周期以及生长速度之间的关系，具有广泛应用价值。“个体生长方程”对理解细菌细胞周期的控制机制有什么意义呢？在“个体生长方程”的约束下，研究团队对细菌细胞分裂的控制机制进行了探讨。并以此为基础提出了一个全新的分子机制假说，认为存在一种“分裂许可物”，它与“细胞生长”和“染色体复制分离”相关。当它积累达到一定阈值时，细胞就会分裂。研究团队在此基础上建立了相应的数学模型，进一步的实验验证了理论预测。从数学公式到建构生命体理性设计基础在物理世界，“伯努利方程”指导了飞机的设计，“阿基米德浮力定律”推动了潜艇的面世，“牛顿第二定律”是人类得以翱翔太空的理论基石，合成生物学的zongji目标就是生物世界实现理性设计、改造现有生命形式或者创造全新的生命形式以满足人类不同的需求。以“合成生物学”为研究导向，刘陈立团队继去年揭示细菌群体迁徙公式后，在定量生物学领域再度实现突破，“研究再次证实了定量的思维方法在生命科学研究中的重要性，我们找到的每一个运行规律，都是试图找到可用于指导设计、改造、重建生命形式的‘图纸’。”刘陈立表示。此次对细菌个体细胞相关定量规律和法则的基础科学问题研究，对人类揭示并理解生命体内在原理提供了重要的参考依据，此研究也有助于未来合成生物学领域的理性设计和建构，以满足细菌治疗疾病、抗生素替代、绿色生物制造等多个应用层面的需要。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  食品生产企业防止污染的措施制度！中国微生物菌种查询网：食品安全是一个重大的公共安全卫生问题，直接关系人们的身体健康，为保护顾客的身体健康，有效控制食品污染，防止食品安全事故的发生，按照食品生产加工通用卫生规范的要求，本公司在原料采购、加工过程中采取必要的控制食品污染的条件和措施。 一、加强食品从业人员的食品安全意识，通过培训，提高食品从业人员控制食品污染的技能。 二、建立食品原材料隔离制度，防止交叉污染。 三、保持食品从业人员的个人卫生，防止人为污染现象的发生。 四、建立食品加工设备和器具的定期清洗消毒制度，防止食品的二次污染。 五、每年对从业人员进行健康检查，保证从业人员的健康状况良好，符合食品从业人员的健康要求。 六、生产加工人员卫生要求及防污染控制措施，进入食品生产场所前应整理个人卫生，防止污染食品。应建立并执行食品加工人员健康管理制度。1、食品加工人员每年应进行健康检查，取得健康证明；上岗前应接受卫生培训。2、食品加工人员如患有痢疾、伤寒、甲型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎等消化道传染病，以及患有活动性肺结核、化脓性或者渗出性皮肤病等有碍食品安全的疾病，或有明显皮肤损伤未愈合的，应当整到其他不影响食品安全的工作岗位。3、进入作业区域应规范穿着洁净的工作服，并按要求洗手、消毒；头发应藏于工作帽内或使用发网约束。4、进入作业区域不应配戴饰物、手表，不应化妆、染指甲、喷洒香水；不得携带或存放与食品生产无关的个人用品。5、使用卫生间、接触可能污染食品的物品、或从事与食品生产无关的其他活动后，再次从事接触食品、食品工器具、食品设备等与食品生产相关的活动前应洗手消毒。6、非食品加工人员不得进入食品生产场所，特殊情况下进入时应遵守和食品加工人员同样的卫生要求。 七、食品采购污染控制措施1、本公司实施原材料采购的验收把关质量管理，严格控制原材料质量，不符合要求的原材料不准使用，实行质量否决权。2、本公司使用的原材料，添加剂均要符合国家标准、行业标准、及相关卫生标准和规定。3、采取必要的措施保证食品在运输过程中质量发生劣变。在运输时不得将成品与污染物同车运输。八、食品贮存污染控制措施1、原材料、成品存放离地离墙，分类存放，定期检查，处理变质或超过保质期的食品。2、仓库要保持清洁、无霉斑、蚊虫；仓库应通风良好，禁止存放有毒、有害及个人用品。3、化学物品存放在制定的干燥、通风良好的地方，防止污染食品。4、包装材料在储存过程防止损坏和污染。 九、食品加工过程污染控制措施1、食品生产加工必须具备保证产品质量的生产设备、工艺装备和相关器具，具有保证产品质量相适应的原料处理、加工、贮存等硬件设施。2、食品生产加工工艺流程设置应当科学、合理。生产加工过程应当严格、规范，采取必要的措施防止食品交叉污染。3、食品生产加工周围不得有有害气体、放射性物质和扩散性污染源，不得有蚊虫；设置相应的防鼠、防蚊蝇的有效措施，避免危及食品质量安全。4、食品加工过程的运输要有专门的符合食品要求的工器具，防止运输污染。 十、废弃物防止污染控制措施1、应制定废弃物存放和清除制度，有特殊要求的废弃物其处理方式应符合有关规定。废弃物应定期清除；易腐败的废弃物应尽快清除；必要时应及时清除废弃物。2、车间外废弃物放置场所应与食品加工场所隔离防止污染；应防止不良气味或有害有毒气体溢出；应防止虫害孳生。 十一、清洁和消毒1、应根据原料、产品和工艺的特点，针对生产设备和环境制定有效的清洁消毒制度，降低微生物污染的风险。2、清洁消毒制度应包括以下内容：清洁消毒的区域、设备或器具名称；清洁消毒工作的职责；使用的洗涤、消毒剂；清洁消毒方法和频率；清洁消毒效果的验证及不符合的处理；清洁消毒工作及监控记录。3、应确保实施清洁消毒制度，如实记录；及时验证消毒效果，发现问题及时纠正。 十二、化学污染的控制1、应建立防止化学污染的管理制度，分析可能的污染源和污染途径，制定适当的控制计划和控制程序。2、应当建立食品添加剂和食品工业用加工助剂的使用制度，按照GB 2760的要求使用食品添加剂。3、不得在食品加工中添加食品添加剂以外的非食用化学物质和其他可能危害人体健康的物质。4、生产设备上可能直接或间接接触食品的活动部件若需润滑， 应当使用食用油脂或能保证食品安全要求的其他油脂。5、建立清洁剂、消毒剂等化学品的使用制度。除清洁消毒必需和工艺需要，不应在生产场所使用和存放可能污染食品的化学制剂。6、食品添加剂、清洁剂、消毒剂等均应采用适宜的容器妥善保存，且应明显标示、分类贮存；领用时应准确计量、作好使用记录。7、应当关注食品在加工过程中可能产生有害物质的情况，鼓励采取有效措施减低其风险。 十三、物理污染的控制1、应建立防止异物污染的管理制度，分析可能的污染源和污染途径，并制定相应的控制计划和控制程序。2、应通过采取设备维护、卫生管理、现场管理、外来人员管理及加工过程监督等措施，zuidachengdu地降低食品受到玻璃、金属、塑胶等异物污染的风险。3、应采取设置筛网、捕集器、磁铁、金属检查器等有效措施降低金属或其他异物污染食品的风险。4、当进行现场维修、维护及施工等工作时，应采取适当措施避免异物、异味、碎屑等污染食品。

                  微生物的发酵在我们生活中的应用！百欧博伟生物：虽然微生物会使食物发霉和变质，还可能引发一些疾病，但是你知道吗？微生物在一些领域也发挥着巨大作用。首先我们需要了解一下微生物的发酵。在适宜的条件下，利用微生物将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程就是微生物的发酵。微生物的种类不同，产生代谢产物的能力不同，所以，利用不同的微生物就可以生产出人们所需要的多种产物。如今，微生物发酵技术在食品加工行业发挥着巨大作用。食品在发酵过程中会形成一个微生物循环系统，在微生物的繁殖转化下，食品的结构被改变，进而得到发酵食品。1、茶类食品在茶类食品的发酵过程中，合理运用微生物发酵技术，可以提升茶的品质。以普洱茶为例，普洱茶在发酵过程中酵母菌具有促进作用，可以提高发酵效率与可靠性。在酵母菌发酵过程中会产生很多活性物质，进而对普洱茶的品质产生影响。2、酒类食品在酒类食品的发酵过程中，制曲工艺非常关键，直接影响到酒类产品的发酵质量。制曲过程中的微生物主要有霉曲、细菌、酵母菌等，各种微生物的繁殖、代谢会影响酒类食品的加工风味和营养结构。3、醋类食品醋类食品发酵过程中，酵母菌会在微生物作用下自然降解，为其他微生物的繁殖提供营养物质，提升食醋的口感和品质。4、豆类食品豆类食品微生物发酵过程中，微生物可对豆类的纤维物质进行转化，使其成为可溶解性物质，有效发挥微生物的发酵功能。微生物发酵技术可以改善一些植物或者动物食品的特殊味道。例如乳酸菌、酵母菌在第二次发酵后可以去除甘草的腥味，使甘草提取液口感酸爽，具有酒香。除此之外，微生物的发酵还能不同程度地影响食品中多糖、蛋白质、脂肪等营养成分的含量、组成以及存在形式，同时，对于氨基酸、总黄酮、脂类等，一定的生物转化可以提高其营养价值，使其化学组成更均衡。随着消费者对食品功能需求不断地提高，微生物发酵技术也在不断地发展。有针对性的管控食品品质，也将持续作为微生物发酵的研究方向。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！