中国生物多样性保护成效显著 促进人与自然和谐共生！我国生物多样性保护取得积极进展共建万物和谐的美丽家园(共建地球生命共同体)百欧博伟生物：近日，19头长江江豚在天鹅洲科研基地、何王庙故道、老湾故道等7个迁入点安家，这是我国迄今最大规模的江豚迁地保护行动。为保护长江江豚这一珍稀濒危物种，各地不断强化就地保护，保护和修复重要栖息生境，并建立了多个迁地保护地，迁地群体总量已超过150头。习近平总书记强调，生物多样性是人类赖以生存和发展的重要基础。生态兴则文明兴。要站在对人类文明负责的高度，尊重自然、顺应自然、保护自然，探索人与自然和谐共生之路，促进经济发展与生态保护协调统一，共建繁荣、清洁、美丽的世界。作为首先批准《生物多样性公约》国家之一，我国高度重视生物多样性保护。近年来，各地各部门认真贯彻习近平生态文明思想，推行一系列行之有效的措施，生物多样性保护取得显著成效，促进了人与自然和谐共生。完善保护制度，建立以国家公园为主体的自然保护地体系金绿色的头，暗铜绿色的前足、鞘翅——一群名为阳彩臂金龟的甲壳虫，引得生态环境部南京环境科学研究所科研团队队员一阵欢呼。这个团队在浙江丽水多地发现阳彩臂金龟的野生个体，更在自然生境中发现了野生种群。阳彩臂金龟是我国大陆特有物种。这个一度濒临灭绝的物种，近年来在浙江、四川、福建、安徽、江西等地多次被报告发现。生态专家认为，这从一个侧面反映了我国生态环境持续向好，生物多样性保护成效逐步显现。生物多样性保护成效显著，得益于我国生态保护体系逐步完备。——政策法规制度日趋完善。我国出台野生动物保护法、自然保护区条例等多部专门法律法规，对生物物种资源加以保护。环评法、森林法、草原法等与生态环境相关的法律法规，也对生物多样性保护做出了明确规定。仅2020年，我国就新颁布了《生物安全法》，修订动物防疫法、野生动物保护法、渔业法等法律法规，全国人大常委会作出《关于全面禁止非法野生动物交易、革除滥食野生动物陋习、切实保障人民群众生命健康安全的决定》。生物多样性法律法规体系越来越完善。——生态保护力度持续加大。一条条生态红线，护卫着绿色空间。我国划定并严守生态保护红线，据初步测算，生态保护红线涵盖了约占国土面积18%的各类自然保护地，90%的陆生生态系统类型和85%的重点野生动物种群得到有效保护。我国实施《建立国家公园体制总体方案》，有力推动以国家公园为主体的自然保护地体系的建立。目前，12个省份已开展了国家公园试点，总面积超过22万平方公里，覆盖陆域国土面积的2.3%。——自然保护地监管力度增强。近年来，生态环境部联合有关部门和单位，开展“绿盾”自然保护地强化监督工作。生态环境部自然生态保护司司长崔书红介绍，“绿盾2020”行动对196个自然保护地4398个“绿盾”台账问题整改进展情况紧盯不放。实施重大工程，为生物多样性保护奠定坚实基础开展生物多样性观测，既是保护的基础，也是履行《生物多样性公约》的重要行动。2016年，在原环境保护部组织下，18个省(区、市)建立了74个红外相机观测样区，布设红外相机4400余台。以此为基础，我国初步形成了生物多样性观测网络。在全国建立749个以鸟类、两栖动物、哺乳动物和蝴蝶为主要观测对象的观测样区，布设样线和样点11887条(个)，每年获得70余万条观测数据，掌握了典型区域物种多样性变化第一手数据。《生物多样性保护重大工程实施方案(2015—2020年)》，由国务院有关部门和地方政府共同实施。其中，生态环境部负责组织实施生物多样性调查与评估、观测网络建设两项任务，累计投入中央财政资金近4亿元，共267家科研院所的2000余名科研人员参加。“通过实施重大工程，基本摸清了我国生物多样性状况。”崔书红说，全国划定32个陆地、3个海域生物多样性保护优先区域，约占我国陆地国土面积的29%，维管植物数占全国总种数的87%，野生脊椎动物占全国总种数的85%。同时，还发现新种和新记录种70余个，丰富了中国生物多样性“家谱”。生物多样性保护重大工程的作用逐步显现，构建了监管数据库，提升了科研能力和水平，支撑了相关政策法规制定。“随着国家在科学研究领域投入增加，我国科学家在生物多样性的起源、演化与维持机制等保护生物学领域，取得了重要进展。”中科院院士、中科院动物研究所研究员魏辅文表示，这为生物多样性及濒危物种保护相关决策，提供了强有力的科技支撑。公众积极参与，生物多样性保护渐成共识并化为自觉行动“有一个叫灵武的保护地上新了，赶紧兑换，你的封面也会有小动物。”天津市民杨一乐提醒儿子在手机里用积攒的绿色能量兑换“福利”。“那是为了保护生物多样性，不是为了封面有小动物。”儿子说。杨一乐笑了，没想到13岁的儿子也知道生物多样性这个词了。如今，翻开报纸，打开收音机、电视，时常能看到或听到生物多样性相关新闻。《地球：神奇的一天》《微观世界》《美丽中国》等纪录片收获了很高的人气和良好的口碑。“保护生物多样性就是保护我们人类自身。”“一个物种可以左右一个地区的经济命脉，一个优良生态群落的建立可以改善一个地区的环境。”……生物多样性保护渐成社会共识，并转化为人们的自觉行动。如今，由社区或公益组织发起的保护行动明显增多：观鸟爱好者积极参与湿地鸟类的监测工作；“蔚蓝地图”等手机应用程序上线“生物多样性随手拍”等活动，吸引公众了解身边的物种……去年5月22日国际生物多样性日前夕，中华环境保护基金会等机构发出“人人一平米共同守护生物多样性”的呼吁。其后短短几天，社会公众为三江源“嘉塘公益保护地”申领保护面积4000多万平方米。人们从生物多样性保护和利用中受益，激发和增加了生态保护积极性。沙丘连绵，湖水湛蓝，沙柳、胡杨刚吐新绿，初夏的库布其国家沙漠公园七星湖景区风景怡人。经过30多年生态治理，曾经的不毛之地披上了绿装，绝迹多年的狼、狐狸、山鸡、野兔、苍鹰等野生动物，重回这里安家，生物种类增长了10倍。生态旅游有效促进当地百姓增收。“我们从生态保护中得到实惠，大伙儿植绿护绿的积极性更高了。”内蒙古鄂尔多斯市杭锦旗居民额日敦说。积极参与植树造林，不滥食野生动物，自觉践行绿色生活方式……广大群众正以多种方式投身生物多样性保护之中，为共建万物和谐的美丽家园付出努力。

                    弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的应用！一、背景弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞是来源于弥漫大B细胞淋巴瘤患者血液、淋巴组织的贴壁细胞系，主要用于体外弥漫性大B细胞淋巴瘤的研究。弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是成人淋巴瘤中最常见的一种类型，在临床表现和预后等方面具高度异质性。弥漫性大B细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的一种，也是成人最常见的淋巴系统肿瘤，主要指的是细胞核大于2个正常淋巴细胞的大B细胞构成的，伴有弥漫生长的肿瘤。常见的临床症状，就是无痛性、进行性淋巴结肿大和结外肿块，这是典型的弥漫大B的临床表现。常常伴有发热、乏力和盗汗。另外，40%的肿瘤原发于结外，最常见累及的部位是胃肠道，其他部位也常常发生。但是，原发于骨髓或者直接累及血液的比较少。肿块生长比较迅速，肿块可以在相应部位引起压迫症状，随着病情的发展，常发生扩散。二、弥漫大B细胞淋巴瘤细胞传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（每次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。三、应用用于长链非编码RNA HULC在眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤中的作用及机制研究：1、检测HULC和miR-29c-5p在眼眶DLBCL组织中的表达情况。2、研究HULC敲除和HULC-miR-29c-5p axis对DLBCL细胞增殖、侵袭、凋亡以及MAPK/ERK信号通路的影响。3、进一步研究HULC敲除对DLBCL移植瘤生长以及移植瘤中miR-29c-5p表达、细胞增殖、MAPK/ERK信号通路的影响。方法：1、HE染色观察眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤的病理组织形态特征。2、利用qRT-PCR检测HULC和miR-29c-5p在眼眶DLBCL组织中的表达情况。结果：1、HE染色发现眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中肿瘤细胞弥散分布,体积大,呈圆形,核大,嗜碱性染色,核分裂像多见。2、与癌旁正常组织与反应性淋巴增生组织相比,在眼眶DLBCL组织中HULC表达明显上调,miR-29c-5p表达明显下调。HULC对DLBCL细胞生物学功能的影响及分子机制方法：1、构建pLenti-sh-HULC、pLenti-HULC以及pLenti-miR-29c-5p慢病毒载体。将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和滴定,之后进行病毒感染Pfeiffer细胞,经筛选得到稳定转染细胞系。2、CCK-8、Transwell、流式细胞术实验检测Pfeiffer细胞增殖、侵袭以及凋亡情况。3、利用Western blot检测Pfeiffer细胞中MAPK/ERK信号通路相关蛋白p-MEK1/2、p-ERK的表达情况。4、利用qRT-PCR检测HULC和miR-29c-5p在外周血单个核细胞（PBMC细胞）和Pfeiffer细胞中的表达情况。5、生物信息学预测能与HULC结合的miRNA。双荧光素酶报告基因实验验证HULC与miR-29c-5p的关系。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              微生物分离和纯化的基本原理与操作步骤！一、基本原理　　在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。　　为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。　　土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。二、器材　　高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。三、操作步骤　　1、稀释涂布平板法　　（1）倒平板 将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至55—60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液，使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板，如图Ⅶ-1所示。最好是将平板放室温2—3天，或 37℃培养24小时，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。　　（2）制备 土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。　　（3）涂布 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀释度，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管土壤稀释液中各吸取0．2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，如图Ⅶ-2所示。　　（4）培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃温室中培养3—5日，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2—3日。　　　（5）挑菌 将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置28℃和37℃温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。整个分离过程见图Ⅶ-3。　　2、稀释混合平板法　　此法与稀释涂布平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先分别吸取0．5ml10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液对号放入平皿，然后再倒入溶化后冷却到45℃左右的培养基，边倒入边摇匀，使样品中的微生物与培养基混合均匀，待冷凝成平板后，分别倒置于28℃和37℃温室中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。　　3、平板划线分离法　　（1）按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称。　　（2）划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述10-1的土壤悬液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：　　（a）用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。　　（b）将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温室培养。　　（3）挑菌 同稀释涂布平板法，一直到菌分纯为止。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              人真皮成纤维细胞的使用方法与注意事项！一、细胞简介规格：1*10 6拉丁属名：人真皮成纤维细胞（永生化）细胞名称：人真皮成纤维细胞细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞详述皮肤指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。三、细胞特性1）细胞来源于手术切除的正常包皮组织。2）细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。2）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。四、产品的使用1) 本产品仅能用于科研2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3) 本产品未通过用于活体诊断的审核五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。  六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                腐败希瓦氏菌的优势与培养操作步骤！腐败希瓦氏菌是新疆农业科学院微生物应用研究所收藏的一种非模式菌株。菌体短杆状，弯曲，革兰氏阴性；菌落酪黄色，较小，光滑，边缘规整，略凸起。主要用途是研究；生产。具体用途是污水处理。一、菌种简介规格：冻干物拉丁属名：Shewanella putrefaciens中文名：腐败希瓦氏菌 属名：Shewanella 收藏单位：新疆农业科学院微生物应用研究所 模式菌株：非模式菌株其它编号：ATCCBAA-1097培养基编号：33培养温度：30培养时间：18-24 小时用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）*LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可）三、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。5、产品性价比适中，从销售到售后，给您完善的服务。四、操作步骤1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 支斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

                  链霉菌属的特征和培养及主要作用！链霉菌属（streptomyces)，是最高等的放线菌。有发育良好的分枝菌丝，菌丝无横隔，分化为营养菌丝、气生菌丝、65孢子丝。营养菌丝又名基内菌丝，色浅，较细，具有吸收营养和排泄代谢废物的功能；气生菌丝是颜色较深，直径较粗的分枝菌丝；气生菌丝成熟分化成孢子丝，孢子丝再形成分生孢子。孢子丝和孢子的形态、颜色因种而异，是分种的主要识别性状之一。已报道的有千余种，主要分布于土壤中。已知放线菌所产抗生素的90%由本属产生。一、链霉菌属的分类中科院微生物研究所根据气生菌丝（孢子堆）的颜色、基内菌丝的颜色、可溶性色素、孢子丝的形状、孢子的形状和表面结构等特征，将本属分为14个种组，每个种组又包括许多不同的种，以此做为链霉菌属各种的鉴定和寻找新的抗生素产生菌的依据。主要代表如产生链霉素的灰色链霉菌。二、链霉菌属的特征和培养放线菌目中的一个大属。菌丝纤细、无隔、多核、分枝，革兰氏阳性，菌丝体发达，分化成基内菌丝和气生菌丝，后者成熟后发育成孢子丝，其形态多样(直、波曲、螺旋、轮生)，可裂生大量分生孢子进行散播、繁殖。菌落小而致密、干而不透明，幼时表面光滑、边缘整齐、颜色单调、不易挑起，继而发展成绒毛状、表面起粉、色泽丰富，正反面颜色往往不同。各个种都能利用葡萄糖。有较强的淀粉和蛋白质水解能力(尤其是角蛋白)。三、链霉菌属的分布链霉菌主要分布于含水量较低、有机质含量丰富的中性或微碱性土壤中，多数为腐生+好气性异养菌。由于能产生大量的孢子，故有较强的抗干燥能力。链霉菌孢子对热的抵抗力比细菌芽胞弱，但强于营养体细胞。对链霉菌的保藏一般利用沙土法，在4℃的冰箱中可存活1~3年。 四、链霉菌属的作用链霉菌的次级代谢产物种类丰富，最重要的就是产生抗生素。现发现由链霉菌产生的抗生素有1000多种，已经应用于临床的近百种，如链霉素(streptomycin)、卡那霉素(kanamycin)、丝裂霉素(mitomycin)，土霉素(oxytetmcycline)等。有的链霉菌能产生多种抗生素，还有一些种类能产生维生素、酶及酶抑制剂等。 五、链霉菌属的致病性大部分(超过500种)链霉菌是非致病的污染菌或定植菌。但索马里链霉菌例外，该菌可引起足菌肿病，偶尔引起侵袭性感染。其他菌种很少引起疾病。灰色链霉菌(也称圆环链霉菌)是从人体标本中最常分离的菌种，但认为其是偶尔引起感染的病原菌;更为人熟知的，它是链霉素的原始来源。分离菌株通常只鉴定到属水平(如果要鉴定到种，需要借助分子生物学检测方法);欲提高鉴定率还需要更多的研究。 六、链霉菌属的生长速度快速或中等速度，4~10 天内成熟，最适生长温度通常为25~30℃。七、链霉菌属的镜下形态菌丝细长(直径≤1 μm),且有大量分枝，细长菌丝可表现为直形、,波浪形或螺旋形。菌丝的不同位点会产生小的椭圆形的分生孢子(也称为孢子)，通常呈链状排列:最好在玻片上培养来观察。分生孢子抗酸染色时，可呈部分抗酸性;某些菌种不易形成分生孢子。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     HSF人皮肤成纤维细胞的应用！一、背景HSF人皮肤成纤维细胞来源于人皮肤组织的贴壁细胞，贴壁生长形态为长梭形或多角形，支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。培养条件需添加含胎牛的血清。成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。电镜下，其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞，胞体变小，呈长梭形，粗面内质网和高尔基复合体均不发达。它具有较强的分裂增殖能力，适应性强，是最容易培养的动物细胞类型之一。贴壁细胞传代方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。3、轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的培养瓶中或含有14ml培养基的培养瓶中培养。二、应用用于绞股蓝总皂苷对人皮肤成纤维细胞光老化模型凋亡信号通路的影响研究：通过采用长波紫外线（UVA）辐射人体皮肤成纤维细胞（HSF），诱导细胞发生光老化现象后，采用不同浓度绞股蓝总皂苷（Gyp）含药血清进行干预，观察各组皮肤细胞在增殖活性、ROS含量、细胞凋亡数量以及凋亡相关调控因子Bcl-2，Bax，Caspase-3mRNA和蛋白表达变化，探究Gyp干预光老化细胞凋亡作用相关分子机制，探索Gyp对HSF细胞光老化损伤有明确防治作用新靶点，为绞股蓝作为靶点药物用于防治人体皮肤光老化及相关疾病提供理论基础及实验数据。实验材料：健康SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠20只，体重200～250g。皮肤成纤维细胞株（HSF）；绞股蓝总皂苷（MUST-11031401）；DMEM高糖培养液；胎牛血清（FBS）；胰蛋白酶；PBS缓冲液；二甲基亚砜（DMSO）；UVA光源（20W），紫外光光度计；MTT；细胞凋亡原位检测试剂盒；水合氯醛；青/链霉素；无水乙醇；75%乙醇；兔抗人Bax、Bcl-2及内参β-actin抗体；HRP标记的羊抗兔二抗；ECL发光试剂盒；Trizol；Bax、Bcl-2及内参引物；PCR仪、电泳仪，凝胶成像分析系统；细胞蛋白提取试剂；BCA法蛋白定量试剂盒；ECL发光液；电热恒温振荡器；酶标仪；凝胶成像分析系统；水平摇床；垂直板电泳装置；电泳仪；转印电泳槽等。Gyp对光老化皮肤成纤维细胞增殖的影响：1、绞股蓝总皂苷（Gyp）含药血清制备将20只SD大鼠按随机数字法分为空白血清对照组和Gyp含药血清组。含药血清组给予Gyp粉末生理盐水溶液（生药质量浓度为80mg Kg-1d-1）灌胃，空白血清对照组给予等体积的生理盐水，连续灌胃7d。然后于腹主动脉采血，血液经离心后分离出血清，冻存备用。2、人皮肤成纤维细胞（HSF）培养及光老化模型复制将HSF细胞株消化传代。待倒置显微镜下观察到细胞长满瓶底时，放入冰箱中保存。造模时，取出冻存的HSF细胞，解冻后将细胞悬液移入培养瓶，加入新鲜培养液培养。微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  肉制品中的微生物及其检验方法！肉制品的种类很多，一般包括腌腊制品(如腌肉、火腿、腊肉、熏肉、香肠、香肚等)和熟制品(如烧烤、酱卤的熟制品及肉松、肉干等脱水制品)。腌腊制品：以鲜肉为原料，利用食盐腌渍或再加入适当的作料，经风晒做形加工而成。熟制品：指经过选料，初加工、切配以及蒸煮、酱卤、烧烤等加工处理，食用时不必再经加热烹调的食品。肉类制品由于加工原料、制作工艺、贮存方法各有差异，因此各种肉制品中的微生物来源与种类也有较大区别。 一、肉制品中的微生物来源1、熟肉制品中的微生物来源（1）加热不完全  肉块过大或未完全烧煮透时，一些耐热细菌或芽胞会存活下来，如嗜热脂肪芽杆菌、微球菌属、链球菌属、小杆菌属、乳杆菌属、芽孢杆菌及梭菌属的某些种；还有某些霉菌等。（2）通过操作人员的手、衣物、呼吸道和不洁贮藏用具等造成污染。（3）通过空气尘埃、鼠类及蝇虫等为媒介而污染。（4）由于肉类导热性较差，污染于表层的微生物极易生长繁殖，并不断向深层扩散。熟肉制品受到金黄色葡萄球菌或鼠伤寒沙门氏菌或变形杆菌等严重污染后，在室温下存放10～24h，食前未经充分加热，就可引起食物中毒。2、灌肠制品中的微生物来源灌肠制品种类很多，如香肠、肉肠、粉肠、红肠、雪肠、火腿肠及香肚等。此类肉制品原料较多，由于各种原料的产地、贮藏条件及产品质量不同，以及加工工艺的差别，对成品中微生物的污染都会产生一定的影响。绞肉的加工设备、操作工艺，原料肉的新鲜度以及绞肉的贮存条件和时间等，都对灌肠制品产主重要影响。3、腌腊肉制品中微生物的来源    常见的腌腊肉制品有咸肉、火褪，腊肉、板鸭、风鸡等。（1）原料肉的污染（2）与盐水或盐卤中的微生物数量有关    具有较强的耐盐或嗜盐性的微生物，如假单胞菌属、不动杆菌属，盐杆菌属、嗜盐球菌属，黄杆菌属、无色杆菌属、叠球菌属及微球菌属某些细菌，及某些真菌。弧菌和脱盐微球菌是最典型的。许多人类致病菌，如金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌和肉毒梭菌可通过盐渍食品引起食物中毒。腌腊制品的生产工艺、环境卫生状况及工作人员的素质．对这类肉制品的污染都具有重要意义。 二、肉制品中的微生物类群不同的肉类制品，其微生物类群也有差异。1、熟肉制品常见的细菌如葡萄菌，微球菌，革兰氏阴性无芽孢杆菌中的大肠杆菌、变形杆菌，还可见需氧芽胞杆菌如枯草杆菌、蜡样芽胞杆菌等；常见的真菌有酵母菌属、毛霉菌属、根霉属及青霉菌属等。2、灌肠类制品耐热性链球菌、革兰氏阴性杆菌及需氧芽孢杆菌属、梭菌属的某些菌类；某些酵母菌及霉菌。这些菌类可引起灌肠制品变色、发酶或腐败变质；如大多数异型乳酸发酵菌和明串珠菌能使香肠变绿。3、腌腊制品多以耐盐或嗜盐的菌类为主，弧菌是极常见的细菌，也可见到微球菌，异型发酵乳杆菌、明串珠茵等。一些腌腊制品中可见到沙门氏菌、致病性大肠杆菌、副溶血性弧菌等致病性细菌。一些酵母菌和霉菌也是引起腌腊制品发生腐败、霉变的常见菌类。 三、肉制品的微生物检验1、样品的采集与处理（1）样品的采集   烧烤制品及酱卤制品，可分别采用如下方法采集；①烧烤肉块制品:用无菌棉拭子进行6面50cm2取样，即正(表)面擦拭20cm2，周围四边(面)各5cm2，背面(里面)拭10cm2。②烧烤禽类制品用无菌棉拭子作5点50cm2取样，即在胸腹部各拭10cm2，背部拭20 cm2，头颈及肛门各cm2。③其它肉类制品包括熟肉制品(酱卤肉、肴肉)、灌肠类、腌腊制品、肉松等，都采集200g。有时可按随机抽样法进行一定数量的样品采集。（2）样品的处理  ①用棉拭采的样品，可先用无菌盐水少许充分洗涤棉拭子，制成原液，再按要求进行10倍系 列稀释。②其它按重量法采集的样品均同鲜肉的处理方法，进行稀释液制备。2、微生物检验（1）菌相   根据不同肉制品中常见的不同类群微生物。参照本教材有关内容检验。（2）肉制品中的细菌总数、大肠菌群MPN及致病菌的检验。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 白色葡萄球菌微生物菌种的培养方法！菌株简介资源名称：白色葡萄球菌种属 ：Staphylococcus albus Rosenbach白色葡萄球菌培养基：营养肉汁琼脂：蛋白胨 5g， 牛肉膏30g ，NaCl 5g， 琼脂15g ，蒸馏水1L，pH 7.0-7.2 。生长条件：37℃，好氧白色葡萄球菌基本概念1、菌群：由多种细菌混合组成的相对稳定的细菌群体，具有某些共同性状。如大肠菌群包括大肠杆菌、产气肠细菌及他们之间的过渡类型。2、菌属：菌种的上一级分类，通常性状相近、亲缘关系密切的若干菌种组成一个菌属，如芽孢杆菌属、葡萄球菌属、乳杆菌属等。3、是细菌最基本的分类单位，通常指表型特征相似、亲缘关系接近的一类细菌群体，与同属内其他种有着明显差异；当涉及到细菌保存时，菌种是指细菌的种子（用来长期保存）资源。4、菌型：同一菌种的不同细菌，在某些方面存在较小差异的为同一菌型，通常一个菌种内的细菌可以分为多种不同的菌型。5、菌株：由一个独立分离的单细胞系培养而成的纯遗传型群体及其一切后代，一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。白色葡萄球菌菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。白色葡萄球菌微生物菌种的培养1、孢子制备（1）放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于放线菌孢子的形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。（2）霉菌孢子的制备　霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。2、种子制备（1）摇瓶种子制备　摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

               人小肠粘膜上皮细胞完全培养基的应用！一、背景人小肠粘膜上皮细胞完全培养基作为体外培养人小肠黏膜上皮细胞的培养基包含人小肠粘膜上皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人小肠粘膜上皮细胞的体外培养。基础培养基添加血清、抗生素等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。基础培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需添加天然培养基，常用的是牛血清，因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。小肠粘膜又分为粘膜上皮、固有膜和粘膜肌层3层组成，小肠粘膜系小肠壁的最内层结构。二、应用用于肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究：人类中性氨基酸载体B0AT1的真核表达重组质粒构建及稳定转染Hela细胞系的建立目的构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株。方法：提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRI和XbaI双酶切后将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coli DH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达,氨基酸摄取实验证实转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性。结果：从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因,酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系。结论：重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达,为进一步研究B0AT1的功能及其调控干预打下了良好的基础第二部分Na+依赖性谷氨酰胺载体ASCT2的生物学功能及表皮生长因子的调控作用目的肠上皮细胞氨基酸载体对于机体营养物质吸收至关重要。Na+依赖性中性氨基酸载体ASCT2是一种广谱的氨基酸载体,它的生理功能主要是转运肠腔内谷氨酰胺,丙氨酸,丝氨酸,半胱氨酸等中性氨基酸。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

             微生物检测无菌室消毒灭菌操作要领与方法！一、目的建立无菌室清洁消毒标准操作规程，为质检中心的无菌室清洁消毒操作提供标准，防止污染，保证药品质量控制及检验的准确性和真实性。二、范围适用于实验室的无菌室的清洁消毒工作。质检中心无菌室的工作人员对本规程实施负责，质保部负责监督。三、消毒灭菌操作要领1、先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟。2、检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。3、操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。4、进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。四、操作过程注意事项1、动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。2、操作应在近火焰区进行。3、接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。4、使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。5、观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝。6、进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。7、工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。五、消毒灭菌方法无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：1、用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。2、0.1％升水消毒：用0.1％升水浸过的纱布或海绵进行指擦，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升水，手也可用升水消毒，并把袖子卷起来。喷雾后 20～30分钟，箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死，内部的空气就变得很清洁。3、紫外线照射灭菌：在无菌箱中装一支200伏、3O瓦的紫外线灯管；每次开20～30分钟，就能达到空间杀菌的 目的。照射结束后，罩黑布半小时，以增强杀菌效果。4、石炭酸喷雾：在每次接种之前，用5％石炭酸溶液喷雾，可促使空气中的微粒和杂菌沉降，防止桌面微尘飞扬，并有杀菌作用。5、石灰揩擦：经常用药物熏蒸，易造成酸性环境，特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久，污染往往越来越严重，预防办法可把各种药品交替使用，过一段时间（约五周）用石灰擦洗一遍。实践证明，这样做效果很好。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                人前列腺癌细胞的处理方法与培养步骤！一、细胞简介规格： 1*10 6拉丁属名：DU145（人前列腺癌细胞）细胞名称：人前列腺癌细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：前列腺2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。          四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                 气味沙雷氏菌单层冻干管打管说明书！一、菌种简介规格：冻干物拉丁属名：Serratia odorifera菌株名称：气味沙雷氏菌其它编号：NBRC 102598=ATCC 33077=JCM 1243=NCTC 11214=BCRC 12223=CCM 3388=CCUG 14508=DSM 4582 培养基编号：104培养温度：37℃培养时间：18-24h分离源：唾液培养基信息培养基编号：104名称：NBRC #802可用于培养菌种： 备注：多聚蛋白栋 10.0g酵母粉 2.0gMgSO4·7H2O 1.0g 蒸馏水 1L琼脂 15.0g用途：标准菌种、标准菌株、质控菌种、质控菌株，用于实验室质控、检测。贮藏条件：-20℃避光储存，使用后放入冰箱内。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）*LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可）三、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。六、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

                 生命体内全新生物分子糖RNA首现！百欧博伟生物：科技日报据美国斯坦福大学官网17日消息，该校研究人员发现一种新型生物分子——糖RNA（glycoRNA），这种分子可能在大多数类型的生命体中都很常见，并可能在人类自身免疫性疾病中发挥作用。相关研究发表在17日的《细胞》杂志上。糖RNA是糖基化RNA分子，以一小段RNA（核糖核酸）为支架，上面连着聚糖。人们之前认为这种糖基化修饰过程只发生在蛋白质或脂肪（脂质）上。由此产生的糖脂和糖蛋白于动物、植物和微生物细胞中无处不在，在生命过程中发挥重要作用。此次研究表明，新的糖RNA分子也可发挥同样重要的作用。“这是一种关于全新生物分子的惊人发现。”该研究的资深作者卡罗琳·贝尔托齐说，“这真是一颗重磅炸弹，因为这项发现表明，细胞中存在着我们完全不知道的生物分子途径。”研究人员表示，糖RNA此前一直没有被发现，因为聚糖和RNA这两种成分在细胞的不同部位工作。大多数类型的RNA都存在于细胞核和细胞质中，在细胞质中分别保留着基因组和蛋白质合成。相反，聚糖起源于被膜结合的亚细胞结构，因此与RNA所处不同空间，所以生物学家曾认为它们之间没有接触。在这项新的研究中，研究小组发现了两者存在重叠的可能性。研究人员瑞安·弗林注意到，一种能糖化某些蛋白质的酶也与RNA结合。通过给不同的聚糖贴上荧光标签，她发现，这种酶也可以与RNA结合。在证明了人类细胞中存在明显的新的糖RNA后，研究小组进一步发现，这种生物分子也存在于老鼠、仓鼠和斑马鱼的细胞中。研究人员表示，不同生物体中存在糖RNA表明，这种生物分子在生命中发挥着重要作用，而且它可能起源于古代，并在地球生命的出现中发挥了一定作用。弗林表示，糖RNA在体内的确切功能尚不清楚，但他们计划进一步研究，因为它们可能与自身免疫性疾病有关。例如，一些糖化的RNA是狼疮患者免疫系统的靶标，进一步的研究或会发现新的潜在治疗机会。一种可能存在于所有生命形式中、还可能发挥着重要作用的生物分子，竟然时至今日才出现在人们视野里？有趣的是，glycoRNA真就没有藏首藏尾，它没被发现，只是由于人们没想到要去找它——这种生物分子的存在，公然违背了成熟的细胞生物学。教科书告诉我们，RNA和聚糖生活在两个不同的世界，但这次科学家发现了它们的重叠，下一步，很可能就会揭示出它们与细胞、与人体自身免疫之间的隐秘关系。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人肺癌细胞的培养步骤与注意事项！一、细胞简介规格：1ml/T25拉丁属名：NCI-H3255（人肺癌细胞）种属：人源细胞系/肺、气管、支气管到货周期：10-15个工作日细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：肺癌2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x10e6 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                  四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                   微生物实验室培养箱的功能与区别！微生物菌种查询网：培养箱是一种非常常见的实验室仪器，但是我们经常遇到各种培养箱，比如：恒温培养箱，恒温恒湿培养箱，二氧化碳培养箱，厌氧培养箱，霉菌培养箱，光照培养箱等等。这么多种类，到底怎么区别呢？培养箱，通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织/微生物在生物体内或某一特定情况的生长环境，如一定的温度、一定的湿度、一定的光照或一定的CO2水平、一定的酸碱度等，来对细胞/组织/生物体进行体外培养的一种装置，是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等领域广泛使用的设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。培养箱主要有如下种类：一、恒温培养箱恒温培养箱适合于普通的细菌培养和封闭式细胞培养，并常用于有关细胞培养的器材和试剂的预温。特点：加热控制，不带制冷。恒温培养箱分为：隔水式恒温培养箱和电热恒温培养箱。1、隔水式电热恒温培养箱：加热管通过对夹层内的水进行加热，利用水的对流形成四面加热，有效的保证加热均匀性。水套遇断电时仍能较好地恒温，采用微电脑智能控温仪和双金属片调节器两种控温方式。温控范围：室温+5℃-60℃，只能把温度稳定在室温以上，不带制冷。2、电热恒温培养箱：采用电加热的方式，外壳采用冷扎板静电喷塑，内胆采用不锈钢制作，保温层采用石棉作为保温材料，在底部设有加热管，通过加热管对箱体内进行加热，它的缺点就是温度均匀性相对较差，温冲比较高。主要由箱体、加热器、鼓风机和温控仪等几部分组成。二、恒温恒湿箱恒温恒湿培养箱可以准确地模拟恒温、恒湿等复杂的自然状环境的，有着精确的温度和湿度控制系统的一种箱体。 特点：温度控制，湿度控制，一般不带观察窗一般用于植物培养、育种试验；微生物培养、发酵等各种恒温试验、环境试验、物质变性试验和培养基、血清、药物等物品的储存等。广泛应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域。 三、生化培养箱这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。因此可适应范围很大，一年四季均可保持在恒定温度，因而逐渐普及。该培养箱使用与维修保养类似电热式培养箱. 由于安装有压缩机， 因此也要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定，不要过度倾斜，及时清扫散热器上的灰尘等。 特点：生化培养箱一般不带控湿和不带杀毒功能。具有双制式冷热控温。一般带玻璃观察窗。生化培养箱是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研，教育部门不可缺少的实验室设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等。四、霉菌培养箱霉菌培养箱是适合培养霉菌等真核微生物的试验设备，因为大部分霉菌适合在室温（25摄氏度）下生长，且在固体基质上培养时需要保持一定的湿度，所以一般的霉菌培养箱由制冷系统，制热系统，空气加湿器和培养室，控制电路和操作面板等部分组成，并使用温度传感器和湿度传感器来维持培养室内的温度和湿度的稳定。有些特殊的霉菌培养箱还可以设定温度湿度随培养时间变化。特点：双制式冷热控制，可加热，可制冷，湿度控制本产品适用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验和生产部门。是水体分析；BOD 测定细菌、霉菌；微生物的培养、保存；植物栽培、育种实验的专用恒温，恒温振荡设备。 五、二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，培养箱要求稳定的温度（37℃）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。特点：温度控制，一般只带加热，可高温灭菌，个别有制冷，CO2水平控制，酸碱度控制，湿度控制二氧化碳培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养，常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精（IVF）、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。由于增加了二氧化碳浓度控制，并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制，使生物细胞，组织等的培养成功率、效率都得到改善。总之，二氧化碳培养箱是普通电热恒温培养箱不可替代的新型培养箱。六、厌氧培养箱厌氧培养箱亦称厌氧工作站或厌氧手套箱。厌氧培养箱是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的专用装置。它能提供严格的厌氧状态恒定的温度培养条件和具有一个系统化、科学化的工作区域。特点：无氧控制，温度控制该产品是一种可在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置，可培养最难生长的厌氧生物，又能避免往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。因此本装置是厌氧生物检测科研的理想工具。七、人工气候培养箱可人工控制光照、温度、湿度、气压和气体成分等因素的密闭隔离设备小型的称“人工气候箱”。特点：光照控制，湿度控制，冷热控制，气压控制，气体成分控制人工气候箱是具有光照、加湿功能的高精度冷热恒温设备，为用户提供一个理想的人工气候实验环境。它可用作植物的发芽、育苗、组织、微生物的培养；昆虫及小动物的饲养；水体分析的BOD的测定以及其它用途的人工气候试验。是生物遗传工程、医学、农业、林业、环境科学、畜牧、水产等生产和科研部门理想的试验设备。 八、光照培养箱光照培养箱是具有光照功能的高精度恒温设备，是细菌、霉菌、微生物的培养及育种试验的专用恒温培养装置，特别适用于生物工程、医学研究、农林科学、水产、畜牧等领域从事科研和生产使用。特点：光照控制，恒温控制（制冷和制热）光照培养箱外壳一般是冷轧钢板、表面采用静电喷涂工艺、内胆为工程塑料或不锈钢、保温层由聚脂发泡形成，透光窗采用双层中空玻璃以确保箱内的保温性能，箱体内部有冷、热气风道箱内气体循环流畅、温度更加均匀。光照培养箱主要是用来做植物的培养，微生物培养箱根据所培养的微生物种类的不一样又有不同种类。 九、植物培养箱植物培养箱实际就是一个有光照的带湿度恒温培养箱，其中的光照、温度、湿度等条件能够满足植物的生长需求。植物培养箱原理是几组灯管和一套控温装置(通常5-50度)。如果高级点的还有光照设置比如几点开灯几点关灯，什么时候光照强一些等。特点：光照控制，湿度控制，恒温控制，专门用于植物培养 十、低温培养箱低温培养箱广泛应用于储藏培养基、血清、药品以及微生物培养、环境试验等。 特点：温度可以更低，可到零下150°

                金耳的形态特征与主要价值及栽培技术！金耳(Tremella aurantialba Bandoni et Zang)，为真菌植物门真菌，又称黄木耳、茂若色尔布（藏语）、金黄银耳、黄耳、脑耳。金耳的滋补营养价值优于银耳、黑木耳等胶质菌类，是一种理想的高级筳宴佳肴和保健佳品。 一、形态特征子实体散生或聚生，表面较平滑；渐渐长大至成熟初期，耳基部楔形，上部凹凸不平、扭曲、肥厚，形如脑状或不规则的裂瓣状、内部组织充实。成熟中期后期，裂瓣有深有浅。中期，部分裂瓣充实，部分组织松软；后期，组织呈纤维状，甚至变成空壳。子实体的颜色成鲜艳的橙色、金黄色、甚至橘红色；药用和美容的产品呈近白色。 二、主要价值食用金耳，因其颜色金黄，又称黄木耳，因其形似人脑，又称脑耳。金耳含有丰富脂肪，蛋白质和磷、硫、锰、铁、镁、钙、钾等微量元素，是一种营养滋补品，并可作为药用。三、栽培技术1、环境条件（1）生物因子　　 金耳的自然生长和发生，都离不开其耳友菌粗毛硬革菌，这种菌不但一直伴随着金耳菌丝的生长，而且还与金耳的菌丝共同组织化发育为金耳子实体。没有粗毛硬菌，金耳就不能正常生长和发育。因此，通过子实体组织分离得到的菌种也不是金耳一种菌丝，而是金耳和粗毛硬革菌两种菌体的混合体。（2）营养金耳分解木质纤维素类的能力极弱，只能利用单糖或较简单糖类碳源，而对木质纤维素的利用则依靠粗毛硬革菌菌丝的分解。壳斗科的树种、桐、楮、栲都是金耳栽培的很好树种，代料栽培中阔叶木屑中加入一定量的麦麸、米糠、玉米粉和石膏等，可获较高的产量。（3）温度菌丝体生长适温23～25℃，子实体为15～20℃。湿度　　 段木栽培的适宜含水量50%左右为宜，代料栽培的基质含水量以55%～65%为宜。子实体生长发育以大气相对湿度85%～95%最适。子实体的抗旱能力较强，给予干干湿湿的湿差，可使子实体生长健壮，出干率高。（4）光照和通风菌丝生长不需要光，子实体形成必须有光诱导。子实体发育需要足够的通风，通风不良子实体色泽暗淡，适当的通风，充足的氧气才能使金耳形成自然的橙黄和橙红色素。（5）酸碱度（pH值）　以pH值5.8～6.2生长最好。2、栽培方式金耳有段木栽培和代料栽培两大生产方式。（1）段木栽培需注意的有：①段木含水量要求高于香菇和黑木耳，因此砍伐后要注意切勿干燥过度，有的树种含水量较低，砍伐剃枝后可立即接种。②接种期以自然温度15～20℃最适，接种期较黑木耳要晚些。③采收后干制以自然晾干为好，切忌碳火烘熏。（2）代料栽培中需特别处理：①必须选择有子实体的母种或原种，每袋的接种物必须带有一定大小的子实体块。②培养菌丝阶段要采用控温控湿措施，调节金耳和粗毛硬革菌之间的关系，以使金耳菌丝旺盛生长，积累足够的养分，以利出耳。具体温湿度的调控为：接种后置于20～23℃下培养至菌丝长至料深3/4，然后降温至15～20℃，抑制粗毛硬革菌的生长，刺激金耳子实体原基形成。③原基形成后，要干干湿湿管理，光照充足，以利子实体健壮、色泽鲜艳，成为优质产品。 3、栽培季节金耳现有多采用熟料袋栽和塑料营养罐栽培，在室内多层架床培育，具体如下。（1）菇房条件金耳与其他菌类不同，子实体必须是金黄色，白色的不成金耳，也就没有商品价值。所以，长耳房要有充足的光线，方便人为调控适合子实体生长的温度、湿度、空气等条件。栽培房内设置5-6层培养架，房间四周要有通风孔和窗户，以利于吸收新鲜空气，排出废气。门窗要用细孔纱窗封闭。窗户宜多，以便引进更多的光线，有利于子实体色素的形成。（2）栽培季节栽培季节为春、秋两季，通常从10月开始至翌年4月份止，每年安排2-3个生产周期，每个生产周期50-70天。海拔500米以上的地区，第一季安排在9月中旬至12月中旬，第二季安排12月下旬至翌年3月中旬。海拔500米以下地区，第一季在安排10月上旬至翌年1月中旬，第二季安排在1月下旬至3月下旬。（3）装袋灭菌栽培袋分为短袋和长袋两种规格：短袋14厘米*28厘米或15厘米* 30厘米的低压聚乙烯塑料袋，每袋装干料量250-300克；长袋12厘米* 55厘米。罐栽的采用塑料营养罐，高18厘米，直径8.5厘米，罐中间螺纹旋合；下半部装料160克，上半部高9厘米，罐顶中心设通气口，高1厘米，口径3.5厘米，配有海绵过滤，装料后罐口加盖。4、管理措施金耳菌丝满袋后表面开始形成白色菌丝扭结状，子实体原基出现时，就可进人长菇管理，具体分为不同的三个阶段进行。（1）原基形成期 接种后24-26天进人子实体形成和分化期，对氧气的需求急剧增加。长袋的应及时撕开穴口胶布，并在菌袋上面铺盖整张纸，喷水纸上保湿并遮光；短袋的解开袋口，让新鲜空气充分进人。塑料罐的揭开罐盖，换上罩罐，并旋紧螺纹。长耳阶段菌袋的排放方式：长袋卧式横摆于培养架上，短袋和罐栽的采取立放。无论直立或卧放，袋间距2-3厘米。摆好后均须在表面覆盖一层纸，并喷水至湿。这阶段白天温度控制在20℃～22℃，要有一定的温差刺激，昼夜温差应大于10℃。空气相对湿度85%以上，要经常往墙壁和地上喷雾状水。菌袋内出现积水，及时排除，以免引起感染而损害子实体原基。每次喷水时，要打开门窗，让水的压力推动室内空气对流，使室内空气新鲜。每次往纸上喷水时，要掀动几下纸，让空气进入袋内，此工序选择早、晚进行，中午风大不宜通气。（2）幼耳生长期 接种后27-28天,一般幼耳长2厘米左右时，长袋的可用消毒过的刀片，在长耳穴周围环割去1厘米的袋膜，使穴口直径扩大4厘米，让空气透进穴口。短袋的把袋口薄膜拉直，增加袋内空间，加速菌丝新陈代谢，促进幼耳加快长大。一般在22℃-23℃适温和空气相对湿度85%-90%的条件下，子实体迅速长至直径6厘米，正常呈自色或浅黄色。（3）子实体转色期 金耳只有是金黄色或橙黄色，商品价值才高，颜色转变与光照有很大关系，一般接种后50天左石耳瓣伸展，每天上午喷水时，可将覆盖袋面和袋口的纸揭2-3小时，让菌袋接受一定的光照。散射光线越强越好，但不得让阳光直接照射。耳片大量伸展时，室温22℃-24℃为宜，每天喷雾2-3次，忌喷大水，空气相对湿度90%-95%。经过增光、加氧、增湿管理后,3-5天子实体即转为鲜艳的橙黄色。营养罐栽培的靠罐内空间自然生长，中间不喷水，不打药，属于绿色、有机栽培，管理上只要控制好室内温度和光照即可。（4）出耳程控 为便于菇农对照，特将金耳子实体生长与特色管理列于表21-2。（5）子实体成熟期 金耳从接种至采收一般53-60天。当耳瓣充分展开，形似脑状，颜色呈金黄，具有弹性，表面开始产生霜状担孢子。此时就要采收，若逾期采收耳瓣将变薄，失去弹性，晒干后无光泽，影响品质。适时采收的鲜耳，每6千克左右可晒成1千克干耳，过熟的金耳需要10千克鲜耳，才可晒成1千克干耳。采后留耳基，再盖纸，停止喷水2-3天，耳基伤口愈合恢复生长后，再行喷水管理，一般15天左右可再收一茬金耳。（6）要求勤观察、勤记录，有问题早处理，对污染袋要选择荫凉干燥、避光、通风、清洁处隔离培养。对栽培袋一般15天左右倒垛一次，要求上下、内外、前后大交换，不能倒垛过勤。整个养菌过程要求避光、通风，湿度60－65%左右。 5、菌种制作金耳菌种是由金耳菌丝和毛韧革菌丝两种组合构成，它与银耳菌种相似都是二型菌丝结合体，因此金耳菌种制作技术要求有其特殊操作技术。（1）母种分离金耳作为母种分离的种耳，以幼耳子实体为佳，其组织充实，生活力强。金耳子实体的外表层黄色部分为金耳菌丝，内层浅黄白色部分为毛韧革菌丝，其交接处为两种菌丝穿插共生部位。分离时将种耳清洗、晾干后，撕开或切开，在子实体内外层交接处，钩取黄豆粒大小的组织块，接人斜面培养基的中央，置于180℃-25℃下，培养10天后菌丝长满试管斜面即为母种。（2）原种制作金耳原种培养基配方为：杂木屑78%、麦麸20%、石膏粉1%、蔗糖1%、含水量60%,PH6。装瓶、灭菌、冷却按常规。原种接种时，其母种最好选择含有已形成胶质化的金耳原基，在无菌操作条件下，接种在原种培养基上；然后置于200℃ -250℃下培养，20天后长满菌丝。当培养基表面出现白色颗粒菌丝团，分化胶质物时，应将培养温度降至20℃-15℃，经35-45天培养，胶质颗粒增大，形成脑状胶质子实体时，即为原种。（3）栽培种制作栽培种培养基与原种同。接种时将原种培养基长出的幼耳子实体，切成1-1.5厘米的组织块，接种在瓶装的栽培种培养基上，置于15℃～20℃下培养，当长成幼耳时，即可用于栽培生产金耳。 6、保存菌种菌种是重要的食用菌生产资料。必须很好保藏。做到不死亡，不衰退，不被杂菌污染，保存菌种的基本原理是使菌丝的生理代谢活动尽量降低。通常采用的手段是：低温、干燥和减少氧气供应。（1）母种的低温保存：这是一种常用的而且是最简单的保存方法。首先是将要保存的菌种移接到适宜的斜面培养基上。为减少培养基水分蒸发，延长保存时间．可将琼脂用量加到2．5%，再加入0.2%磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸钙等缓冲剂。将要保存的菌种放人4℃的冰箱内保存，每隔3～4个月转管一次。（2）原种和栽培种的短期保存：原种和栽培种一般应按计划生产，长好后及时使用，不宜长期保存，只能作短期保存。栽培种体积大。数量多不可能在冰箱内大量保存。要保存的原种必须菌丝粗壮，活力强，封口严密．无杂菌感染，要保存的栽培种必须菌丝粗壮，没有污染或出黄水现象。把挑出的符合保存标准的原种和栽培种，放人保存室内，保存室应该干净、凉爽、干燥、黑暗，以降低其生命活动，减少变异退化，温度以5～10℃为宜，不要超过15℃，这样的条件下栽培种可保存l～2个月。

              人胰腺星状细胞的实验方法与注意事项！一、产品信息产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶英文名称：Rat Pituitary Cells细胞名称：人胰腺星状细胞组织来源：胰腺组织培养条件：原代细胞取组织现分细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、细胞简介人胰腺星状细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）。PSC具有静息态与激活态两种，并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的维生素A脂滴可以被油红O染成红色，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现，原代分离的细胞培养6d，胞浆中仍可见明显的脂滴，传代后，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。免疫细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程，至培养第6d大多数细胞激活，传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化，导致细胞形态、功能发生变化，促使基质增生、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。本公司生产的胰腺星状细胞采用胶原酶制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Desmin、alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。三、培养基信息DMEM-F12、FBS、Penicillin、Streptomycin等我们推荐使用Procell人胰腺星状细胞专用完全培养基作为体外培养人胰腺星状细胞的培养基。四、人胰腺星状细胞实验方法1、将肺组织至于无菌的培养皿中用含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗若干次至无明显血细胞；2、剪取肺组织边缘微血管丰富的组织，用含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗两次；3、将剪取的肺边缘组织剪成2-3mm3 大小，加入含双抗的1×PBS（pH=7.4）清洗；4、用进行过灭菌处理的玻璃滴管将剪碎的组织块和清洗用的1×PBS（pH=7.4）一起转入15ml离心管中；5、250rpm/min离心2 min，小心倾去液体，再加入适量的含双抗的1×PBS（pH=7.4），用玻璃滴管吹吸液体以清洗组织块；6、继续250rpm/min离心2 min，小心倾去液体，重复上述步骤若干次，直至离心后的液体中观察不到明显的红色；7、将清洗好的组织块重新转至无菌的培养皿中，用无菌的200 ml的吸头将组织块贴于25cm2 培养瓶中；8、加入2ml培养基，将培养瓶倒置放于37℃、5%CO2 的培养箱中2-3h之后正置培养瓶继续培养；9、培养若干天后，可观察到组织块周围陆续有细胞爬出，继续培养几天，直至组织块周围的细胞达到较高密度（培养其间两天换液一次，换液操作时动作一定要轻柔，以防组织块被摇下）；10、当组织块附近的细胞生长到较高密度后，将贴壁的组织块吹下，换新的培养基继续培养24；11、24h后，用0.25%的Trypsin-EDTA消化细胞，FBS中止消化，将消化后的细胞悬液转入15ml离心管，1000rpm/min离心5min，之后倾去废液，用培养基重悬细胞，转入原来的培养瓶中，继续在37℃、5%CO2 的培养箱中培养。五、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。3、用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。5、建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和百欧博伟生物技术部沟通交流。6、该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

                 微生物，下一次农业革命的突破口？百欧博伟生物：作物、畜禽、水产、农业微生物等农业种质资源是新品种选育的基础，是遗传信息由上一代传给下一代的载体，是人类生存不可或缺的重要资源之一。我国农业历史悠久，种质资源极为丰富，这些资源是我国乃至世界最为重要的农业遗产。这其中，有些地方品种的濒危、珍稀程度不亚于大熊猫。2020年，《国务院办公厅关于加强农业种质资源保护与利用的意见》（以下简称《意见》）正式印发。《意见》提出，力争到2035年，建成系统完整、科学高效的农业种质资源保护与利用体系，资源保存总量位居世界前列，珍稀、濒危、特有资源得到有效收集和保护，资源深度鉴定评价和综合开发利用水平显著提升，资源创新利用达到国际先进水平。近日，农民日报·中国农网记者就农业微生物种质资源保护与利用专访了中国农业科学院农业微生物资源团队首席科学家魏海雷研究员。记者：粮安天下，种铸基石。种子是农业的“芯片”，是确保国家粮食安全和农业农村高质量发展的源头。《国务院办公厅关于加强农业种质资源保护与利用的意见》第一次将农业微生物种质资源提升为国家战略，有什么样的意义？答：如果说作物和畜禽是关系到当前饭碗的问题，那么微生物将是决定未来50年甚至100年农业科技的变革力量。农业微生物种质资源首次以国办文件的形式刊发，凸显了我国在新形势下对战略资源和农业科技原始创新的高瞻远瞩。《意见》明确定义了农业微生物种质资源保护工作的基础性、长期性、公益性，对农业微生物种质资源作出了肯定性支持，从政策上强化了农业微生物种质资源的战略核心地位。另外，《意见》对资源保护工作进行了顶层设计和系统部署，要求尽快摸清资源家底、明确资源保护单位的主体责任，坚持政府主导、多元参与、高效利用的原则，建立国家统筹、分级负责、有机衔接的保护机制，为农业微生物种质资源保护与利用体系建设指明了方向，为农业微生物的创新利用、为建设现代种业强国、实施乡村振兴战略、保障国家粮食安全、促进农业高质量发展奠定了坚实基础，将确保我国在未来国际竞争中占据主导地位。《意见》是新中国成立以来首个专门聚焦农业种质资源保护与利用的重要文件，开启了农业微生物种质资源保护与利用的新篇章，是解决长期以来我国农业微生物种质资源发展落后的重要契机，这是一个既管当前又管长远的历史性、纲领性文件，具有里程碑意义。记者：微生物种质资源非常重要，应用范围广泛，那么在农业领域迫切需要的和最主要的价值体现在什么地方？答：微生物是自然界不可或缺的重要资源，是生物多样性的重要组成部分。如果说植物是“生产者”，动物是“消费者”，那么微生物则是“分解者”和物质转化的“驱动者”，在维系物质和能量循环、生态平衡方面发挥着不可替代的作用。农业微生物种质资源的种类丰富，涵盖了细菌、真菌、病毒等重要类群，主要应用于肥料、食药用、饲料、植保、农业环境等。微生物种质资源在探索高效、安全、资源节约、环境友好的现代农业发展之路发挥了重要作用。特别是在绿色发展大背景下，农业微生物的应用极为迫切。比如解决“藏粮于地”就需要微生物的参与。我国长期以来高强度的掠夺性种植和化肥农药使用引发的耕地质量下降问题已成为制约中国农业可持续发展的瓶颈。土壤健康了，中国种才能产出安全粮。增加土壤肥力，是微生物肥料的主要功效之一。如固氮微生物，可以增加土壤中的氮素来源；解磷、解钾微生物可以分解土壤中难溶的磷、钾，将其转变为作物能吸收利用的磷、钾化合物。当前，微生物肥料年产量超过3000万吨，年产值400亿元左右，使用面积超过5亿亩。目前，我国农业废弃物年产量40多亿吨，以微生物技术为纽带，通过农业废弃物的肥料化、沼气化、食用菌化和饲料化，把种植业、养殖业和居民生活紧密连接起来，可以减少环境污染、改善农村生态环境、发展农业循环经济，促进农业可持续发展。记者：众所周知，微生物在维持土壤—植物生态系统、保障人类健康发挥了重要作用。随着科学技术的发展，农业微生物的应用及效果越来越受到重视。目前，我国农业微生物种质资源保护与利用现状是怎样的？突出短板是什么？答：我国是微生物资源最丰富的国家之一。1999年，国家启动了微生物资源科技基础性工作任务，将微生物资源的收集、整理、保藏列为国家科技基础性工作专项。单从唯一的国家级农业微生物保藏机构——中国农业微生物菌种保藏管理中心来看，已保藏菌种2.3万株30万份，分属于800多属、3000多种，涵盖了肥料微生物、食用菌、饲料微生物、植保微生物、农业环境微生物等。平均每年为500多家高等院校、科研院所、生物企业提供1500株的菌种服务与技术服务，有力支撑了我国生物产业发展和科技进步。但是我国长期以来缺乏系统的、持续的农业微生物种质资源调查、收集和保护工作，与欧美等发达国家相比，在保藏物种多样性、保藏质量、鉴定评价、智能化管理、高效利用、国际参与度等方面还存在很大差距。总体来说，我国农业微生物种质资源的保护与利用面临严峻挑战。一是保护与利用体系有待完善。在《意见》发布之前，我国农业微生物种质资源工作缺乏总体布局和统一部署，资源调查工作不系统，重复投资、低水平开发现象严重。二是精准鉴定与系统评价有待提升。微生物种类繁多、代谢多样，大量具有科学价值和应用前景的农业微生物种质资源“深藏库中无人识”，限制了将种质资源转化为支撑种业发展、补齐资源保护与利用短板、解决种源“卡脖子”问题的核心竞争力。三是国家农业微生物种质资源库建设有待加强。农业微生物种质资源需要专业的保藏技术、多样的保藏方式和特殊的保藏设施。通过走访调研发现，全国各保藏单位普遍存在经费不足、设备简陋、手段单一、共享不利等现象，资源面临污染、退化、甚至灭失的风险，急需在硬件设施、专业队伍、信息整合等方面加大投入。我国农业微生物种质资源保护与利用工作任重而道远。记者：当前粮食安全和生态环境保护是“十四五”时期发展的重中之重，以现代生物技术为核心的微生物资源研究与利用已经成为全球生物资源竞争的战略重点。未来农业微生物种质资源还需在哪几方面发力助推国家农业高质量发展？答：下一次农业革命，微生物或为突破口。2019年，美国科学院、工程院和医学院联合发布研究报告，把微生物相关研究列为未来30年农业领域亟待突破的五大研究方向之一。预示着农业微生物在未来国计民生中的重要作用。所以，农业微生物种质资源工作应当对标国际战略走势，坚持“四个面向”，从以下几个方面发力助推国家农业高质量发展。一是面向国家重大需求，国家菌种资源库牵头进一步完善农业微生物种质资源保护与利用体系，制定和发布农业微生物种质资源登记细则，规范技术要求，推进资源的收集和统一身份信息登记，构建国家农业微生物种质资源库和大数据平台，为国家战略决策提供支撑；二是面向科技前沿，深耕微生物多样性研究，开发利用微生物组学、培养组学等先进技术，挖掘新资源、新机制、新功能，从个体、群体、互作水平揭示农业微生物机理与规律；三是面向农业主战场，发挥微生物的资源优势，开发新型、高效的微生物功能产品，解决农业生产中的突出问题；四是面向人民健康，健全农业微生物检测和风险评估机制，开发益生和多功能微生物食品和保健品，满足日益增长的健康需求。

               三糖铁琼脂培养基的试验方法与应用！三糖铁（TSI）琼脂培养基中乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，培养基中葡萄糖含量少，乳糖和蔗糖多。由于对糖的利用不同，不同细菌在底层产酸、斜面产酸、产生硫化氢和产气上有不同表现。这三种糖中，由于葡萄糖的阻碍作用，细菌首先利用葡萄糖（如大肠埃希氏菌在含葡萄糖和乳糖时，葡萄糖阻遏大肠埃希氏菌乳糖分解酶系的合成，葡萄糖耗尽后，中间有一个延滞期，再利用乳糖）。底层产酸变成黄色，表明能发酵葡萄糖。斜面产酸表明至少能有氧利用乳糖和蔗糖中的一种。只能利用葡萄糖的细菌，在斜面上进行有氧呼吸，培养基中少量葡萄糖被彻底氧化变成二氧化碳和水，不足以改变指示剂的颜色。或者细菌利用蛋白胨中的氨基酸脱羧作用，产生碱性物质使斜面变碱，红色加深。底部由于是在厌氧状态下，氧化一还原电位适合发酵产酸，酸类不被氧化，即使是发酵少量葡萄糖，也能使指示剂改变颜色。而假单胞菌、产碱菌等专性需氧菌因缺氧在底层不产酸表现为红色。因培养基中可能有微量硝酸盐，有的专性需氧菌进行硝酸盐呼吸，微弱产酸变为橘黄色，但不能根本上改变颜色显黄色。而发酵乳糖或蔗糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基指示剂的颜色改变，呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐（Fe2十）和硫代硫酸盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。不同细菌可发酵不同的糖，如肠杆菌科的志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生HZS，在TSI选择培养基上无黑色沉淀，斜面变红，底部仍保持黄色。而沙门氏菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，产生H,S,所以在TSI选择培养基上有黑色沉淀，斜面变红，底部仍保持黄色。大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖，产酸产气，且不产生H,S，在TSI选择培养基上无黑色沉淀，斜面变黄，底部保持黄色。故可利用此试验鉴别肠杆菌科的这些细菌。培养基：三糖铁琼脂培养基。试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，先穿刺接种到TSI深层，距管底3-5mm为止，再从原路退回，在斜面上自下而上划线，置（36±1)℃培养18一24h，观察结果。结果：产生黑色沉淀即表明产生了HZS；发酵乳糖或蔗糖的细菌使整个培养基呈现黄色；只能利用葡萄糖的细菌则斜面变红，底部仍保持黄色。应用：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用产酸产气和硫化氢（变黑）的产生情况。革兰氏阴性菌在三糖铁上的反应如下：肠道杆菌科和弧菌科底层产酸，变为透明黄色，斜面产酸或产碱。非发酵型革兰氏阴性菌斜面产碱或不变，底层产碱或不变或微产酸变成橘黄色。若单纯检验硫化氢产生情况，用醋酸铅纸条法比三糖铁法更为敏感。有的菌或菌株在三糖铁上硫化氢阴性，但用醋酸铅试纸条时表现为硫化氢阳性，如空肠弯曲菌。三糖铁（TSI）琼脂培养基反应模式是许多杆菌鉴定表的组成部分．也可作为观察其他培养基反应的有价值的质控依据。克氏双糖铁（KIA）培养基中含葡萄糖和乳糖，反应原理和三糖铁（TSI）琼脂培养基相同，在肠杆菌科的细菌鉴定中经常使用。

             HMC（人肾小球系膜细胞）收货处理方法！产品名称：HMC（人肾小球系膜细胞）组织来源：肾组织产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶细胞简介：人肾小球系膜细胞分离自肾小球组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用(hyperfiltration)的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。肾小球系膜是位于肾小球毛细血管袢之间的一种特殊间充质，由系膜细胞和系膜基质组成。肾小球系膜细胞是肾小球内非常活跃的细胞，具有分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和清除大分子物质及类似平滑肌细胞收缩的功能。肾小球系膜细胞增生和基质的过多产生是多种肾小球肾炎的主要病理表现。肾小球系膜细胞的培养是研究系膜扩张、瘢痕形成和肾小球硬化的理想方法。系膜细胞的主要作用可能有：①收缩作用，入球小动脉和出球动脉的收缩作用受系膜细胞的调节，以影响毛细血管袢的内压和滤过率；②支持作用，它填充于毛细血管袢之间，支持毛细血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜内的大分子物质和蛋白质；④分泌肾素，在肾缺血或免疫复合物沉积时，系膜细胞增生且分泌肾素。本公司生产的肾小球系膜细胞采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。培养基信息：DMEM[H]、FBS、Penicillin、Streptomycin等。我们推荐使用肾小球系膜细胞专用完全培养基）作为体外培养人肾小球系膜细胞的培养基。HMC（人肾小球系膜细胞）收货处理方法：贴壁生长的细胞：1、贴壁生长的细胞用T25细胞培养瓶发货，收到细胞后，拆开包装T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒。2、消毒后用显微镜观察细胞状态，并拍下细胞照片。3、将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境。4、平衡后将T25瓶中培养基吸出用离心管装好备用。5、如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。悬浮生长的细胞：1、悬浮细胞发货复苏后用离心管发货，拆开包装离心管的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒。2、然后用显微镜观察细胞状态。3、将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上。4、平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清。5、用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。HMC（人肾小球系膜细胞）在发货前质检：细胞活性检测；真菌、细菌、霉菌检测；支原体、衣原体等检测。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

             微生物检测方法和标准：食品冷杀菌技术！百欧博伟生物：由于考虑到消费安全及消费者心理的需求，现代的食品加工工艺与技术要求最大限度地保留食品的色、香、味及其营养成分。然而，传统的食品热力杀菌方法已经远远不能满足这种要求。近年来国内外研究出一些新型的冷杀菌技术，如超高压杀菌、超高压脉冲电场杀菌、脉冲强光杀菌、放射线杀菌、紫外杀菌等冷杀菌技术引起了食品科学研究工作者的高度关注。　　冷杀菌是指在杀菌过程中食品温度不升高或升高很低的一种安全、高效杀菌方法。冷杀菌不仅有利于保持食品功能成分的生理活性，且还有利于保持色、香、味及营养成分。　　1、超高压杀菌　　超高压杀茵是将食品物料以某种方式包装以后，放入液体介质中，在100～l 000 MPa压力下作用一段时间后，使之达到灭茵要求。其基本原理是压力对微生物的致死作用，主要是通过破坏其细胞壁，使蛋白质凝固，抑制酶的活性和DNA等遗传物质的复制等来实现。一般而言，压力越高杀菌效果越好。但在相同压力下延长受压时间并不一定能提高灭菌效果。在400～600 MPa的压力下，可以杀死细菌、酵母菌、霉菌，避免了一般高温杀菌带来的不良变化，超高压冷杀菌技术的先进性是高压、常温灭菌，采用该项技术对食品进行处理后，不但具备高效杀菌性，而且能完好保留食品中的营养成分，食品口感佳，色泽天然，安全性高，保质期长，这是传统高温热力杀菌方法所不具有的优点。目前，超高压灭菌已在国外果蔬、酸奶、果酱、乳制品、水产品、蛋制品、高粘食品等生产中得到应用。　　2、超高压脉冲电场杀菌　　用高压脉冲产生的脉冲电场进行杀菌。脉冲产生的电场和磁场的交替作用，使细胞膜透性增加，膜强度减弱，最终膜被破裂，膜内物质外流，膜外物质深入，细胞体死亡。电磁场产生电离作用，阻断了细胞膜的正常生物化学反应和新陈代谢，使细菌体内物质发生变化。该技术避免了加热引起的蛋白质变性和维生素被破坏等一系列现。　　3、强磁脉冲杀菌　　该技术采用强脉冲磁场的生物效应进行杀菌，在输液管外面，套装有螺旋兴线圈，磁脉冲发生器在线圈内产生（2～10）T的磁场强度。当液体物料通过该段输液管时，其中的细菌即被杀死。该技术具有以下特点：杀菌时间短且效率高。杀菌效果好且温升小，能做到既能杀菌，又能保持食品原有的风味、滋味、色香、品质和组分（维生素、氨基酸等）不变，不污染产品，无噪音，适用范围广泛。　　4、脉冲强光杀菌　　脉冲强光杀菌是采用脉冲的强烈白光闪照方法进行灭菌。通过惰性气体发出与太阳光谱相反，但强度更强的紫外线至红外线区进行杀菌。使用高强度白光的极短脉冲，杀死食品表面的微生物。该高强度的白光类似阳光，但仅以几分之一秒钟的速度反射出来，比阳光更强能迅速杀死细菌。脉冲强光下使微生物致死作用明显，可进行彻底杀菌。在操作时对不同的食品、不同的菌种，需控制不同的光照强度与时间。可用于延长以透明物料包装的食品的保鲜期。　　5、微波杀菌　　微波是频率从300 MHz～300 GMHz的电磁波。微波与物料直接相互作用，将超高频电磁波转化为热能的过程。微波杀菌是微波热效应和生物效应共同作用的结果。微波对细菌膜断面的电位分布影响细胞周围电子和离子浓度，从而改变细胞膜的通透性能，细菌因此营养不良，不能正常新陈代谢，生长发育受阻碍死亡。从生化角度分析，细菌正常生长和繁殖的核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）是若干氢键紧密连接而成的卷曲大分子，微波导致氢键松弛、断裂和重组，从而诱发遗传基因或染色体畸变，甚至断裂。微波杀菌正是利用电磁场效应和生物效应起到对微生物的杀灭作用。采用微波装置在杀菌温度、杀菌时间、产品品质保持、产品保质期及节能方面都有明显的优势。德国内斯公司研制的微波室系统，加热温度为72～85 ℃，时间为1~8 min、杀菌效果十分理想，特别适用于已包装的面包、果酱、香肠、锅饼、点心以及贮藏中杀灭虫、卵等。微波处理的食品保质期达6个月以上。　　6、放射线杀菌　　放射线同位素放出的射线通常有α、β、γ3种射线，用于食品内部杀菌只有γ射线。γ射线是一种波长极短的电磁波，对物体有较强的穿透力，微生物的细胞质在一定强度γ射线下，没有一种结构不受影响，因而产生变异或死亡。微生物代谢的核酸代谢环节能被射线抑制，蛋白质因照射作用而发生变性，其繁殖机能受到最大损害。射线照射不会引起温度上升。一般抗热力大的细菌，对放射线的抵抗力也较大。　　7、紫外线杀菌　　日光能杀灭细菌，主要是紫外线的作用，杀菌原理是微生物分子受激发后处于不稳定的状态，从而破坏分子间特有的化学键导致细菌死亡。微生物对于不同波长的紫外线的敏感性不同，紫外线对不同微生物照射致死量也不同，革兰氏阴性无芽孢杆菌对紫外线最敏感。杀死革兰氏阳性球菌的紫外线照射量需增大5～10倍。但紫外线穿透力弱，所以比较适用于对空气、水、薄层流体制品及包装容器表面的杀菌。　　8、臭氧杀菌　　臭氧氧化力极强，仅次于氟，能迅速分解有害物质，杀菌能力是氯的600～3 000倍，其分解后迅速的还原成氧气。利用其性能的臭氧技术在欧美、日本等发达国家早就得到广泛应用，是杀菌消毒、污水处理、水质净化、食品贮存、医疗消毒等方面的首选技术。美国华盛顿大学医学研究人员发现，臭氧可以抑制癌细胞的生长；日本石川岛播麻种工业公司证明，臭氧水有望成为最佳的果树杀菌剂，其杀菌效果明显优于次氯酸钠；中国医学科学院研究证明，臭氧可以有效地杀灭淋球菌，并且对水中的重金属有分解作用。　　试验证明臭氧水是一种广谱杀菌剂，它能在极短时间内有效地杀灭大肠杆菌、蜡杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、流脑双球菌等一般病菌以及流感病菌、肝炎病毒等多种微生物。可杀死和氧化鱼、肉、瓜果蔬菜、食品表面能产生异变的各种微生物和果蔬脱离母体后继续进行生命活动的微生物，加速成熟乙烯气体，延长保鲜期。　　冷杀菌技术作为一种新型的杀菌技术，已逐渐在食品工业中得到广泛地运用。它不仅克服了传统热力杀菌的不足之处，还能最大限度地保持食品原有的品质以满足消费者需求，使得冷杀菌技术的应用及研究在该科研领域受到密切关注，在食品加工过程中采用冷杀菌技术成为必然的趋势。

              小鼠肝上皮细胞的培养步骤与处理方法！小鼠肝上皮细胞，1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝脏组织，表达H-2K抗原，鼠痘病毒阴性。一、细胞简介规格：1*10 6拉丁属名：NCTC clone 1469 小鼠肝上皮细胞细胞名称：小鼠肝上皮细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：小鼠的肝组织2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给细胞拍照各2-3张（10×，20×都要拍照），作为售后的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基；马血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

                    用先进科技成果保护生物多样性！百欧博伟生物：5月13日，2021世界青年科学家峰会首场活动——生物多样性保护及生物技术国际高峰论坛在温州泰顺启幕。　　全国各地生物环境等领域的专家学者共聚一堂，海外相关专家同步在线上参与讨论，聚焦生态保护、生物医药、生物安全等主题，展开激烈的学术碰撞，利用先进科技成果实现“保护生物多样性，共建地球生命共同体”的愿景。　　本次论坛格外关注数字化。中国科学院数字地球重点实验室副主任张丽指出，基于遥感大数据的动态监测，构建面向机器深度学习的样本数据库，有利于对区域生物多样性进行精准分析与评估。省特聘专家、省林学会湿地专委会委员田园同样认为，我省加快数字化生态建设势在必行，其对于生态碳汇价值计算、碳中和碳达峰实现路径，起着强大的智力作用。　　生物多样性是人类赖以生存和发展的基础，是地球生命共同体的血脉和根基。汇聚科技人才资源、着眼绿色发展道路、打造面向未来合作，浙江用生态文明理念指导经济发展，构建绿水青山生态保护体系和生态经济体系，初步探索形成一条生态效益、经济效益、社会效益兼顾，人与自然和谐共生的可持续发展道路，交出了一张可圈可点的“绿色答卷”。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              厌氧消化链球菌的保藏条件与注意事项！消化链球菌(Peptostreptococcus)是人体口腔、上呼吸道、肠道和女性生殖道的正常菌群，本属细菌包括：厌氧消化链球菌（P.anaerobius）、大消化链球菌（P.magnus）、微小消化链球菌（P.micros）、不解糖消化链球菌（P.asaccharolyticus）、普氏消化链球菌（P.prevotii）、四链消化链球菌（P.tetradius）及延展消化链球菌（P.productus）。一、菌种简介平台编号：bio-53194规格：冻干物拉丁属名：Peptostreptococcus anaerobius菌株名称：厌氧消化链球菌其它编号：ATCC27337=NCTC11460=DSM2948=BCRC10722=CCUG7835=KCTC5182=LMG15865培养基编号：54、116，厌氧;80% N2-10% CO2-10% H2培养温度：37培养时间：48 小时用途：模式菌株。培养基测试，质量控制。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基TSA+5%脱纤维羊血三、保藏条件斜面和冻干菌种应在 2-8°C 保存。请勿长期置于室温。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

          人膀胱移行细胞癌细胞的特性与培养步骤！人膀胱移行细胞癌细胞源自病人的转移性细胞腺癌，对T24和相关细胞株有细胞毒性，代时为19小时，含ras (H-ras)癌基因。一、细胞简介规格：1ml/T75拉丁属名：T24(人膀胱移行细胞癌细胞)细胞名称：人膀胱移行细胞癌细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：膀胱；移行细胞癌2）形态：上皮细胞样3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T75瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                    四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

              斯氏梭菌的使用范围与保藏方法及操作流程！斯氏梭菌微生物菌种基因资源为传统产业特别是传统农业的改造和转型提供了不可替代的生物种质和基因资源，孕育和促进了我国新的生物技术产业尤其是农业高新技术产业的形成和壮大。一、菌种简介规格：冻干物拉丁属名：Clostridium sticklandii菌株名称：斯氏梭菌其它编号：ATCC49905培养基编号：54,厌氧培养温度：37保存方法：真空冷冻干燥法用途：产氨注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养方法培养基：乳酸菌培养基 Ⅱ：Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8。121℃，15min。三、传代方法 1、冻干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂轮在冻干管壁划两圈，掰断，用200μL无菌水或培养基充分溶解，平板涂布，活化培养。 2、斜面：试管口用75%酒精擦拭后，火焰灼烧，后用无菌接种铲切块，挑取接入平板或斜面，培养。四、使用范围1、合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 2、天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 3、半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、操作流程1、菌株复苏：（按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏） （1）所有菌株，显色培养基分4区，每区一株，标明菌株号、菌种名常用缩写如下： cal：白念珠菌 cgl：光滑念珠菌 cpa：近平滑念珠菌 ctr：热带念珠菌 ckr：克柔念珠菌 cne：新型隐球菌，其他菌种标记全名。 （2）隐球菌除传显色培养基以外，另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h 2、菌种鉴定：（48h后观察结果）。六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

              具核梭杆菌聚核亚种的培养说明与注意事项！一、菌种简介规格：冻干粉拉丁属名：Fusobacterium nucleatum中文名称：具核梭杆菌聚核亚种拉丁名称：Fusobacterium nucleatum来源历史：ATCC原始编号：ATCC 25586模式菌株：否主要用途：AJ133496生物安全级别：GR2培养基编号：35培养温度：37℃培养时间：24-48h需氧类型：严格厌氧分离基物：病变物采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌等。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板）三、具核梭杆菌聚核亚种培养说明培养基名称：营养琼脂（NA）用途：用于一般细菌培养、转种、复壮和增菌等成分(g/L)蛋白胨               10.0牛肉粉                3.0氯化钠                5.0琼脂                 15.0pH值7.3 ± 0.1      25℃用法：称取本品 33.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶 ,121℃高压灭菌 15分钟,备用。四、保藏条件安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存，活化好的菌种要放厌氧环境下保存。请勿长期置于室温。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕尽快置于厌氧环境下恒温培养；若接种液体培养，制作液体培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

                人前列腺癌细胞的培养步骤与注意事项！人前列腺癌细胞LNCAP克隆FGC是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离，该患者经确诊为前列腺癌转移。这株细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。一、细胞简介规格：1*10 6拉丁属名：LNCAP（人前列腺癌细胞）细胞名称：人前列腺癌细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：前列腺；左锁骨淋巴结癌转移灶2）形态：上皮细胞样，轻微贴壁（细胞贴壁能力较弱，需使用特殊培养瓶）3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。           五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1) 准备：1640 培养基 优质胎牛血清10%; Glutamax（invitrogen 35050）1%; Sodium pyruvate（invitrogen 11360070) 1%; p/s 1%2) 培养注意事项：a.需使用Corning的cellbind细胞培养瓶,货号是3289 。b.这株细胞并不形成一致的单层，而是形成集落。传代时如胰酶消化后细胞形成聚团，可以用滴管反复吹吸打碎。c.该细胞仅仅轻轻地吸附在基底上，不形成汇合，很快使培养基变酸。 生长很慢。 传代后48小时内不应扰动。d.细胞封包、寄出时，多数细胞从培养瓶底分离，悬浮在培养基中。 收到后，在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时，以使细胞再贴壁。 此后可以换上新鲜培养液。如果需要，培养瓶内容物可以收集，300g离心15分钟，以适量培养液重悬并培养到一个单独的培养瓶中。3) 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。4) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

               生物防治试验成功 助力未来农业发展！在五陵镇鹏宇家庭农场内，一场别开生面的现场交流会吸引了群众的目光。经过严谨的试验，由河南XX生物科技有限公司研发的新型生物制剂在农业生产上取得了良好的效果。“这次新型生物制剂的试验非常成功。下一步，我们将大范围进行推广，指导生物制剂在农业生产上的广泛应用。”河南XX生物科技有限公司总经理高立新看着长势良好、果实累累的哈密瓜，喜悦之情溢于言表，“运用这种新型生物制剂不仅可以杀灭根结线虫病害，还能改善土壤环境，提高农作物品质，实现农业可持续发展，是保护土壤环境、促进人类健康的一次革命。”据了解，这次试验所使用的生物制剂可以有效防治根结线虫病害，提高肥料利用率，减少其他农药的残留，增强农作物的抗逆性，提高果蔬糖分、维生素、蛋白质等营养成分的合成转化，同时还能减少因化学肥料使用过多而产生的肥害环境污染，在提高产量的同时提高了品质，增加了农产品附加值，对土壤治理、减肥增效、保障粮食安全、发展绿色生态农业有重要意义。“根结线虫病害一直是农业种植中的一个顽疾，很难防治。往年因受病虫害的影响，很多果蔬都会出现植株矮小、果实不发育、叶片枯黄等病症，总体产量会减产30%。今年春季，我种植的80亩西瓜、哈密瓜使用了生物制剂后，不仅没有发生病虫害，而且植株长势良好。我是实实在在体会到了科学种植带来的好处。”鹏宇家庭农场负责人王小鹏高兴地说。高立新表示，农业是国家之本，食品安全又是关系国计民生的大事。新型生物制剂的研发应用不仅可以替代传统高毒农药在防治病害过程中的使用，更重要的是从源头上保证了人们“舌尖上的安全”，具有突破性意义。下一步，河南XX生物科技有限公司将秉承绿色发展理念，在进一步的推广中改变农户的种植观念，并且继续和各科研院校进行深度合作，用更多的科研成果助力“三农”事业的全面发展，为人类健康作出更大贡献。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！