动物双歧杆菌单层冻干管打管说明书！                                                         动物双歧杆菌（Bifidobacterium），是人和许多哺乳动物肠道中的优势菌之一。在微生态学上属于菌群。1899年法国巴斯德研究院的蒂瑟尔（Tissier)首次从母乳喂养的婴儿大便中分离到了该菌，并指出它对乳儿的营养和预防肠道疾病具有重要作用。该菌是人和动物肠道中重要的生理性细菌。参与免疫、营养、消化和保护等一系列的生理过程，发挥着重要的功能。一、菌种简介平台编号：bio-52494规格：冻干物拉丁属名：Bifidobacterium animalis菌株名称：动物双歧杆菌其他编号：AS1.1852培养基编号：62培养温度：37℃培养时间：48 小时用途：乳制品发酵；食品饮料注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养基双歧杆菌培养基大豆蛋白胨 5.0 克 胰胨 5.0 克 酵母提取物 10.0 克 葡萄糖 10.0 克盐溶液 40.0ml L-半胱氨酸 0.5 克 0.1%刃天青 1.0ml 琼脂 15.0 克蒸馏水 1.0 升 pH7.0其中盐溶液的配制：氯化钙 0.2 克 七水硫酸镁 0.48 克 磷酸氢二钾 1.0 克 磷酸二氢钾 1.0 克碳酸氢钠 10.0 克 氯化钠 2.0 克 蒸馏水 1.0 克 pH 6.5三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存,活化好的菌种要放厌氧环境下保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能保留，用 0.1-0.2ml 的培养液或者无菌水溶解，接种在 1-2 个平板上，因冻干菌种处于休眠状态，请勿接种多个平板，以免因接种量不足导致复苏不成功。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）斜面菌种保藏时间通常为 6 个月，应根据菌种状况及时转接；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。冻干管打开后需一次用完，不能留存。5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

          BL21(DE3)感受态细胞的操作步骤与注意事项！一、细胞简介平台编号：bio-105922规格：20×0.05ml拉丁属名：BL21(DE3)感受态细胞细胞名称：BL21(DE3)感受态细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、产品说明BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70℃保存几月转化效率不发生改变。 BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。该菌株是以T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7 噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5 启动子调控，该区整合在BL21 染色体上。本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pU19持粒检测，转化效率可达107。基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS λ DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5三、产品特点1、转化效率可达107。2、可用于非毒性蛋白表达。3、长时间保存于-80 ℃，转化效率不发生改变 四、操作步骤1、取感受态细胞置于冰浴中，放置10分钟。2、向感受态细胞中加入1-5μl含有1pg-100ng的质粒DNA，轻轻地敲打4-5下。3、冰浴30分钟，不要震荡。4、42℃热击45秒，不要震荡，迅速转移到冰浴中，放置2分钟。5、加入250μl室温的SOC培养基。6、混匀后，置于37℃的摇床上，250rpm震荡培养60min。7、将含有抗生素的平板加热到37℃，放置半个小时，使其表面干燥，易于均匀涂布。8、根据实验要求，取适量转化的感受态的细胞，加到含有抗生素的固体琼脂糖培养基上（LB或SOC），用无菌棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃培养箱，倒置过夜培养（8-12h）。五、运输和储藏干冰运输，收到后请置于-80℃。六、注意事项1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。

                   中间普氏菌的菌株优势与注意事项！                                         一、菌种简介平台编号：bio-107059规格：冻干粉拉丁属名：Prevotella intermedia中文名称：中间普氏菌拉丁名称：Prevotella intermedia来源历史：ATCC原始编号：ATCC 25611=JCM 7365模式菌株：否主要用途：L16468生物安全级别：GR2培养基编号：35培养温度：37℃培养时间：24-48h需氧类型：严格厌氧分离基物：积脓症保存方法：冷冻干燥管保藏用途：标准菌种、标准菌株、质控菌种、质控菌株，用于实验室质控、检测。贮藏条件：-20℃避光储存，使用后放入冰箱内。保质期：5-10年，应根据菌种状况及时转接。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。三、培养基* TSA+5%脱纤维蛋白羊血 （血琼脂平板）四、保藏条件安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。活化好的菌种要放厌氧环境下保存。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3-0.5ml 培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

             具核梭杆菌聚核亚种单层冻干管打管说明书！                                                           一、菌种简介平台编号：bio-67774规格：冻干物拉丁属名：Fusobacterium mucleatum subsp nucleatum菌株名称：具核梭杆菌聚核亚种其他编号：ATCC 25586 培养基编号：122 培养温度：37℃ 厌氧环境80%N2-10%CO2-10%H2下培养培养时间：48 小时用途：科研 分离源：培养基信息 培养基编号：122 名称：ATCC#1490 改良肉碎培养基     备注：碎牛肉(无脂肪) 　500.0 g 蒸馏水：1.0 L 1N NaOH25.0 ml  牛肉铰碎，加水和NaOH 煮至沸腾，冷却至室温，去掉上层脂肪，过滤，保留滤液和肉粒，补足水至1.0L。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、培养基TSA+5%脱纤维羊血（血琼脂平板）三、保藏条件安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存，活化好的菌种要放厌氧环境下保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.5-1.0ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 支平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

                   我国生物创新药研发如日方升！百欧博伟生物：近年来，我国生物医药领域发展迅猛，科技赋能创新，积极开发新靶点，借助数字化飞速发展，使得生物创新药如日方升。从20世纪80年代的人胰岛素、促红细胞生成素、干扰素和疫苗等第一代产品，到第二代TNC-α-Fc融合蛋白、粒细胞集落刺激因子、生长因子，第三代的单抗、抗体偶联药物，再到2015年后的第四代生物创新药双特异性抗体、重组多克隆抗体、免疫疗法等，还有目前仍在持续研发的新一代生物创新药如细胞与基因治疗，生物创新药一直处于不断发展与迭代之中。成功研制一个生物创新药是一项庞大的系统工程，需要历经五个阶段——新药发现和开发、临床前研究、临床试验、上市申请、上市后研究，这样一个完整的研发周期平均需要10年左右，而其中的临床试验就需要6~7年时间。由此可见，加速研发过程可以极大地推动生物医药的创新。创新药研发上市不断加速生物创新药正逐渐得到我国的重视。在新修订《药品注册管理办法》中，明确定义了四个审评加速通道——突破性治疗药物、附条件批准、优先审评审批及特别审批程序，这为创新药的上市审批提供了更加细化的快速通道。据医药魔方数据库显示，2019年-2020年，我国生物创新药获批数量已经超越美国，2021年继续保持良好势头。这主要得益于近年来我国创新药上市政策与监管制度的改革、数字技术在生物医药创新领域的应用以及外包服务企业CRO/CDMO的崛起等。自2015年8月国务院发布《关于改革药品医疗器械审评审批制度的意见》，我国创新药物获批数量逐步增多。生物创新药上市数量在2018年增长迅速，以跨国企业生物创新药为主。2020年，由于新冠肺炎疫情的影响，获批生物创新药数量下降，但是本土企业和跨国企业生物创新药物获批数量已基本持平。生物靶点的发现一直是生物医药创新的关键。据PharmaProject s数据库统计，2020年全球总计新增139个靶点，10年来仅次于2011年的179个靶点，2021年预计会有更多的新靶点被发现。截至2021年1月，全球排名第一的靶点为Her-2，共研发药物163个，连续两年排名第一。在乳腺癌、卵巢癌、胃肠道癌和肺癌里都发现了Her-2基因的异常，以Her-2为靶点的药物炙手可热。创新疗法与人工智能齐发力新一代的细胞和基因疗法（cell & genetherapy，CGT）为以往不能治愈的疾病提供了更多选择，例如CAR-T疗法、干细胞疗法和腺病毒的基因疗法，都发挥了很大作用。我国有大量适合CGT的患者，在我国开展的CGT临床试验数量目前位居全球第二，仅次于美国。据药智网数据显示，截至2021年4月，我国已有5个产品获得临床批件，分别为武汉波睿达生物科技的靶向CD30嵌合抗原受体基因修饰的自体T细胞注射液，重庆精准生物技术的Pcar-19B细胞自体回输制剂，北京贝来生物科技的人脐带间充质干细胞注射液，上海科济制药的CTO41自体CAR-T细胞注射液，中生复诺健生物科技的重组人1L12/15-PDL1B单纯疱疹Ⅰ型溶瘤病毒注射液（Vero细胞）。在全球创新趋势的影响和国内国外双循环发展模式的推动下，我国生物创新药正蓬勃发展并逐渐凸显出自身特色。主要体现在国家对于生物创新药的重视、生物医药产业数字化转型的领先以及人工智能对于生物医药全产业链的赋能持续加强。值得一提的是，近年来越来越多的人工智能企业和资金注入到“AI+新药研发”中，人工智能技术无疑将大大推动和提高我国新药研发的速度和效率。人工智能在生物创新药研发上可以发挥全方位的作用，从药物发现阶段、临床前研究阶段、临床试验阶段到审批上市各环节都有应用。可以预见，未来将会有越来越多的医药企业引进人工智能，加快创新药物的研发。

                 青春双歧杆菌的功能功效与注意事项！青春双歧杆菌是一种益生菌，可治疗慢性腹泻、便秘，还有抗衰老作用。一、菌种简介平台编号：bio-67127提供形式：冻干物拉丁属名：Bifidobacterium adolescentis中文名称：青春双歧杆菌属名：Bifidobacterium种名加词：adolescentis其它中心编号：=ATCC 15703来源历史：←钟顺昌←美国ATCC收藏时间：1995.7.3资源归类编码：15131527101模式菌株：模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：厌氧。生物危害程度：四类致病对象：无培养基：大豆蛋白胨 5.0g，胰蛋白胨 5.0g，酵母粉 10.0g，葡萄糖 10.0g，盐溶液 40.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g(培养基煮沸后加入)，0.1%刃天青 1.0ml，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。以上液体培养基在接种前煮沸驱氧后接种，于厌氧罐中培养。[注] 盐溶液配方：CaCl2 0.2g，MgSO4?7H2O 0.48g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，NaHCO3 10.0g，NaCl 2.0g，混合CaCl2和MgSO4在300ml蒸馏水中直至溶解，加500ml蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌至全部溶解，加200ml蒸馏水混匀，保存于4℃下备用。培养温度：37℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：《GB 4789.34-2012双歧杆菌的鉴定》阳性对照菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。三、培养条件1、培养基编号：CM02332、培养基成分：大豆蛋白胨 5.0g，胰蛋白胨 5.0g，酵母粉 10.0g，葡萄糖 10.0g，盐溶液40.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g(培养基煮沸后加入)，0.1%刃天青 1.0ml，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。以上液体培养基在接种前煮沸驱氧后接种，于厌氧罐中培养。[注] 盐溶液配方：CaCl2 0.2g，MgSO4 7H2O 0.48g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，NaHCO3 10.0g，NaCl 2.0g，混合 CaCl2 和 MgSO4 在 300ml 蒸馏水中直至溶解，加 500ml 蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌至全部溶解，加 200ml 蒸馏水混匀，保存于 4℃下备用。3、需氧类型：厌氧4、培养温度：37℃四、功能功效1、治疗腹泻青春双歧杆菌可治疗慢性腹泻。通过用双歧杆菌对慢性腹泻患者临床观察研究表明，在服药两周以后，患者大便次数、形状正常，临床症状消失，对总有效率为90.3%，复发率低。许多国内医院已将双歧杆菌制剂作为治疗慢性腹泻的首选药物。抗生素相关性肠炎实际上是抗生素的使用，使原来过路菌或外籍菌（如肠杆菌）成为优势种群，它们大量增殖或分泌相关毒素与肠粘膜上皮细胞受体结合后使CAMP酶活性升高，大量水盐电解质丢失，而造成腹泻症状。增殖双歧杆菌，扶植了肠道中的原籍菌，使机体定植抗力升高，有利于拮抗致病菌和条件致病菌的定植。双歧杆菌可治疗因大量使用抗生素而导致的伪膜性肠炎。有人采用双歧杆菌制剂治疗伪膜性肠炎380例，临床总治愈率无明显差异，但临床副作用和复发率均明显降低。2、治疗便秘青春双歧杆菌可治疗便秘。便秘是指排便次数减少或粪便干燥难解（一般两天以上无排便）而言，根据病因其大致上可分为器质性便秘和功能性便秘两大类。双歧杆菌主要用于功能性便秘这一类症状。引起功能性便秘一般来说与肠道菌失调密切相关，多半互为因果。尤其是肠道外籍菌（或过路菌）等腐败菌增加，其产生相应有毒代谢产物如胺、酚、吲哚类等物质。通过调整肠道正常菌群，恢复肠道正常菌群平衡，使腐败菌数量大大减少，而其有毒代谢产物吸收减少，从而使便秘症状得以缓解。尤其补充双歧杆菌等原籍菌，其产生乙酸和乳PH值为2.8~3.1,使肠道呈酸性，其结果能控制由有害菌引起的异常发酵，并且刺激肠蠕动，从而减少水分的过度吸收而缓解便秘症状，还可以复活机体免疫功能，有利于调整内分泌——免疫功能恢复，恢复肠道蠕动功能从而缓解便秘等症状。3、抗衰老青春双歧杆菌具有显著的抗衰老作用，可明显增加血中超氧化物歧化酶（SOD)的活性与含量。从而减少自由基的氧化反应和对人体细胞的损伤，具有延年益寿的功效。青春双歧杆菌还具有降低胆固醇和甘油三酯的作用，使胆固醇转化成人体不吸收的粪甾醇，从粪便排出体外。五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。

            MUG营养琼脂(NA-MUG)的用途与使用方法！一、菌种简介平台编号：bio-55008规格：250g菌株名称：MUG营养琼脂(NA-MUG)用途：用于滤膜法检测生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、用途用于滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌(GB/T5750.12-2006)。三、原理蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；琼脂是培养基的凝固剂；大肠埃希氏杆菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（4-Methylumbellifery-β-D-Glucuronide简称MUG）的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。四、配方（g/L）蛋白胨 5.0g牛肉膏粉 3.0g琼脂 15.0gMUG   0.1g最终pH =6.8±0.2五、使用方法1、称取本品23.1g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，在无菌操作条件下倾注直径50mm平板备用，倒好的平板在4℃下可保存两周。2、将总大肠菌群滤膜法有典型菌落生长的滤膜进行大肠埃希氏菌检测。在无菌操作条件下将滤膜转移到NA－MUG平板上，细菌截流面朝上，进行培养。36±1℃培养4h。3、观察结果：在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示大肠埃希氏菌为阳性。六、质量控制本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下菌名              菌号     生长状况     荧光大肠埃希氏菌   ATCC25922    良好         +产气肠杆菌    CMCC(B)45103     良好      －沙门氏菌      CMCC(B)50115       良好    －粪链球菌      CMCC(B)32223       被抑制  －欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   假单孢菌属的使用范围与培养方法！一、菌种简介平台编号：bio-56757规格：冻干粉拉丁属名：Pseudomonas sp.中文名称：假单孢菌属拉丁名称：Pseudomonas sp.来源历史：←绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室收藏时间：2011/7/6原始编号：DSH3Y原产国：中国资源归类编码：15131134101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌体链球状，革兰氏阴性，菌落乳白色、圆形、凸起，边缘整齐，表面光滑，质地湿润、不透明。V.P反应阴性，甲基红试验阴性，吲哚实验阳性，糖发酵实验阴性；NCBI GenBank数据库序列接受号：EU545155。具体用途：能够高效降解苯酚，能够以苯酚作为唯一碳源和能源，降解苯酚实验使用无机盐培养基。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：32-35℃需氧类型：好氧分离基物：含酚废水活性污泥采集地：四川省绵阳市保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；能够高效降解苯酚，能够以苯酚作为唯一碳源和能源，降解苯酚实验使用无机盐培养基。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。储存条件：冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。二、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。3、需氧类型：好氧4、培养温度：32-35℃三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

                人肾小管上皮细胞的培养步骤与应用！一、背景人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。二、培养步骤1、显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。2、严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。3、用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。4、1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。三、应用用于铅致人肾小管上皮细胞凋亡、转分化研究以及铅结合蛋白分离鉴定研究：以正常人肾小管上皮细胞系为研究对象,观察醋酸铅致HK-2细胞凋亡、转分化作用,其剂量反应关系,以及对细胞凋亡、转分化信号通路相关分子的影响和碘化钾的干预作用。在此基础上,运用功能蛋白质组学方法,分离鉴定与铅有高亲和性的结合蛋白,探讨铅致HK-2细胞凋亡、转分化的内在原因。以往的研究显示,铅可在细胞内与蛋白质形成高亲和性的铅结合蛋白（PbBPs）,PbBPs的形成与铅在肾脏引起的一种特征性病理改变-肾小管上皮细胞质、细胞核内形成包涵体有关。研究提示,铅穿过细胞膜,在细胞内沉积、迁移以及发挥其毒作用,是以铅结合蛋白结合的形式来进行的。所谓铅结合蛋白是指与铅有高亲和结合能力,与细胞对铅的适应性、反应性相关的细胞内铅受体和靶点蛋白质。铅刺激HK-2细胞出现凋亡、转分化时,是否有PbBPs参与其中起了什么作用?在肾小管上皮细胞凋亡、转分化细胞模型上分离鉴定PbBPs,将可能弄清楚铅致细胞凋亡、转分化的真正原因所在,明了细胞内的分子靶点。并有可能找到新的高亲和性的PbBPs,为开发铅蛋白质络合剂药物提供证据。以出现明显凋亡、转分化的HK-2细胞为研究对象,采用铅亲和柱一金属螯合亲和层析、一维SDS-PAGE电泳分离、ESI-MS/MS液-质联用串联质谱鉴定混合蛋白质样品,免疫印迹法验证,这种功能蛋白质组学方法筛选与HK-2细胞凋亡、转分化相关的铅结合蛋白,用生物信息学方法分析铅结合蛋白在铅致HK-2细胞毒效应中的可能作用。

                不动杆菌属的生物学特性与微生物学检查！不动杆菌属广泛分布于外界环境中，分为6种，即醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）、鲁菲不动杆菌（A. lwoffi）、鲍曼不动杆菌（A. baumanii）、溶血不动杆菌（A. haemolytius）、琼氏不动杆菌（A. junii）和约翰逊不动杆菌（A. johnsonii）。一、菌株简介平台编号：bio-56754提供形式：冻干物拉丁属名：Acinetobacter sp.中文名称：不动杆菌属属名：Acinetobacter种名加词：sp.来源历史：←绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室收藏时间：2011.7.6原始编号：BS8Y资源归类编码：15131114102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：能够高效降解苯酚，能够以苯酚作为唯一碳源和能源，降解苯酚实验使用无机盐培养基。特征特性：菌体短杆状，革兰氏阴性，菌落白色、圆形、稍隆起，边缘整齐，表面光滑，湿润，质地湿润、不透明。V.P反应阴性，甲基红试验阴性，吲哚实验阳性，糖发酵实验阴性；NCBI GenBank数据库序列接受号：EU545154。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：含酚废水活性污泥采集地：四川省绵阳市培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4.H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：32-35℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；能够高效降解苯酚，能够以苯酚作为唯一碳源和能源，降解苯酚实验使用无机盐培养基。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、菌株分类不动杆菌属（Acinetobacter）归于莫拉菌科，根据DNA-DNA杂交将不动杆菌属分成25个基因种，常见的有鲍曼不动杆菌（A.baumanii)、溶血不动杆菌（A.haemolytius),醋酸钙不动杆菌（A.calcoaceticus)、洛菲不动杆菌（A.lwoffi)、琼氏不动杆菌（A.juni)和约氏不动杆菌（A.johnsonii)。不动杆菌属细菌DNA的G+C的摩尔分数为38％～46.5％。三、生物学特性不动杆菌属细菌为革兰染色阴性杆菌，菌体多为球杆状，常成双排列，似双球菌，革兰染色有时不易脱色，无芽胞、无鞭毛，黏液（M)型菌株有荚膜。本菌属为专性需氧菌，最适生长温度为35℃，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在血平板上形成圆形、光滑、湿润、边缘整齐、灰白色菌落，溶血不动杆菌在血平板上可产生β溶血。在麦康凯培养基上生长良好，形成无色或粉红色（氧化乳糖）菌落，部分菌株呈黏液状。四、临床意义不动杆菌广泛分布于自然界、医院环境和健康人的皮肤。该菌黏附力极强，易在各类医用材料上黏附，是引起医院感染的常见病原菌。易感者为老年患者、早产儿和新生儿，手术创伤、严重烧伤、气管切开或插管、使用人工呼吸机、行静脉导管和腹膜透析者以及广谱抗菌药物或免疫抑制剂应用者等。所致疾病包括肺炎、尿路感染、皮肤和伤口感染、心内膜炎、脑膜炎和腹膜炎等。在临床标本中最常见的是鲍曼不动杆菌，它是仅次于铜绿假单胞菌而居临床分离阳性率第二位的非发酵菌。五、微生物学检查1、标本采集根据临床疾病的不同采集不同标本，如痰液、尿液、分泌物、血液、脑脊液等。2、直接镜检标本涂片、革兰染色，镜检为革兰阴性球杆菌，本菌有时不易脱色，常成双排列，在吞噬细胞内也有存在，应注意与奈瑟菌属细菌相区别。3、分离培养将标本接种于血平板和麦康凯平板上，经35℃培养24 h，观察菌落特征及溶血情况。4、鉴定不动杆菌属主要特征包括：在血平板和麦康凯平板上均能生长，革兰阴性，为成双排列的球杆菌，形态似奈瑟菌；氧化酶阴性，葡萄糖O/F试验为氧化型或产碱型，无动力，据此可初步确定为不动杆菌属；然后依据生化反应进行属内种的鉴定，见表17-4。表17-4不动杆菌属菌种的鉴别注：+表示90％以上阳性；一表示90％以上阴性；+／-表示多数为阳性；-／+表示多数为阴性。5、药物敏感性试验本菌属细菌可采用Kirby-Bauer法做药敏试验。不动杆菌耐药性强，对氨苄西林、头孢菌素、氯霉素和喹诺酮类药物大多耐药。虽然不动杆菌对碳青霉烯类抗生素敏感性较好，但耐药性呈上升趋势。不同菌株对同样的抗生素耐药性不同，所以对分离菌株均应进行药敏试验。非发酵菌中多重耐药多见干醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌和溶血不动杆菌，耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌成为各医院重点监测对象。

                   停乳链球菌的培养特性与鉴别要点！停乳链球菌可引起菌血症、心内膜炎、脑膜炎、脓毒性、关节炎、呼吸道和皮肤感染等疾病。一、菌种简介平台编号：bio-67843规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae中文名：停乳链球菌 外文名：S. dysgalactiae equisimilis 形态与染色：成双，单个，短链排列 生化反应：触酶试验阴性其它编号：JCM 5673= ATCC 27957培养基编号：35培养温度：37℃用途：研究分离源：感染的牛乳房培养基信息培养基编号：35名称：Blond Agar (血琼脂培养基) 备注：Peptone (蛋白胨) 10g Glucose (葡萄糖) 2g NaCl 5g NaH2PO4 2.5gSodium citrate (柠檬酸钠) 5g Brain infusion (脑浸汁) 800mlPig heart infusion (猪心浸) 200ml Sleep Blood (羊血) 10%pH 7.2 [Note]：Preparation of pig brain and pig heart infusion：（1） Smash up 100g fresh pig heart （without fat and blood vessel）.Add distilled water up to 1000ml;（2） Cut 200g fresh pig brain (without blood vessel). Add distilled water up to 1000ml;（3） Keep the two infusions at 50℃ for 1 hr , then boil for 15 minutes;（4） Cool and filtrate through gauze . [注]猪心和猪脑浸汁法：（1）新鲜猪心除去心头和脂肪，搅碎100克加蒸馏水至1000毫升；（2）新鲜猪脑除去血管，取200克加蒸馏水至1000毫升；（3）50℃保温1小时，然后煮开15分钟；（4）冷却后用纱布过滤备用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。保藏条件：冻干菌种和斜面培养物应在 2-8°C 保存。二、形态与染色革兰阳性球菌，成双，单个，短链排列。三、培养特性在血琼脂平板上35℃培养18 ~ 2 4 h ，形成圆形、光滑、凸起、有β溶血环的菌落。四、生化反应触酶试验阴性，β葡萄糖醛酸苷酶(BGUR) 阳性，吡咯烷酮皖芳基酰胺酶(PYR) 、VP 和CAMP 试验均为阴性。五、鉴别要点1、本菌特征革兰阳性球菌，β溶血环的菌落，CAMP试验均为阴性，β葡萄糖醛酸苷酶试验阳性。2、与无乳链球菌的鉴别停乳链球菌CAMP 试验为阴性，无乳链球菌则阳性。六、临床意义药敏试验的选药原则：首选青霉素，其次可选择头孢菌素、红霉素，氯霉素、克林霉素、氧氟沙星、万古霉素、头孢曲松等抗生素。七、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.5-1.0ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

                  豌豆根瘤菌的生物现状与注意事项！豌豆根瘤菌，在贵州江口梵净山省溪司采集的豇豆根瘤中分离；化能异养菌；革兰氏染色阴性；生长速度较快，菌落为圆形，半透明，粘稠；利用碳源较为广泛，能利用硝态氮、氨态氮和有机氮为氮源生长；在甘露醇或其它碳水化合物培养基上生长产酸，产生大量胞外多糖粘液。一、菌株简介平台编号：bio-51833规格：斜面培养物拉丁属名：Rhizobium legumiunosarum (Frank) Frank中文学名：豌豆根瘤菌 拉丁学名：Rhizobium leguminosarum 界：细菌界 门：变形菌门其它编号：M1.38b培养基编号：9培养温度：25-28℃培养时间：18-24 小时用途：研究分类地位：菌物界 > 变形菌门 > α变形菌纲 > 根瘤菌目 > 慢生根瘤菌科 > 豌豆根瘤菌属保护级别：未列入濒危等级：无危可信度：1级可信度野生驯化：家养/栽培水生陆生：陆生注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、生物现状保护及保存现状：人工保存主要用途和价值：与豌豆共生固氮开发利用现状：未开发利用保护建议：不详遗传多样性：不详三、培养基*YEB四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 适宜的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面,或直接液体培养）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

               扣囊复膜孢酵母的形态特征与主要价值！扣囊复膜孢酵母是Saccharomyces属的微生物，原产地为中国。细胞圆形、椭圆形或柱形。无性繁殖为多边出芽。某些种可形成假菌丝，但决无真菌丝。菌落乳白色、有光泽、较平坦、边缘整齐。在液体培养时通常不形成菌醭。营养细胞多为双倍体，也有多倍体。有性生殖时产生子囊孢子。 一、菌种简介平台编号：bio-84954提供形式：冻干物拉丁属名：Saccharomycopsis fibuligera中文名称：扣囊复膜孢酵母拉丁名称：Saccharomycopsis fibuligera来源历史：←南阳师范学院收藏时间：2016/7/4原始编号：K-5原产国：中国资源归类编码：15151113128模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：宏观形态：麦芽汁琼脂培养基，28℃，培养3天，菌落粉状，白色，表面干燥，边缘呈流苏状。微观形态：麦芽汁琼脂培养基，28℃，培养2-3天，细胞椭圆形或卵圆形，单生或对生，3.0-4.0 μm × 4.0-6.0 μm，有真菌丝。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：赊店大曲采集地：中国河南南阳保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、形态特征细胞圆形、椭圆形或柱形。无性繁殖为多边出芽。某些种可形成假菌丝，但决无真菌丝。菌落乳白色、有光泽、较平坦、边缘整齐。在液体培养时通常不形成菌醭。营养细胞多为双倍体，也有多倍体。有性生殖时产生子囊孢子。 三、主要价值主要用途为研究；教学，具体用途为抗生素化验指示剂。四、安瓿瓶冻干管打管说明（一）打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。（二）特别注意事项1、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

                 地球上的生物是更高级智慧创造的么？生命是地球最精华的所在，到目前为止，地球上已经存在上百万种上生物。地球的生命是如何形成的，最早的生命来源于哪里呢？却是一个至今困扰人们的谜题，人们对它进行过很多的假设和猜想，有的认为生命的种子可能是从遥远的太空面来，或者是夹杂在坠落到地球的队有或者彗星的内核里，而后在地球上繁衍开花。多数科学家认为，生命是在地球环境趋于稳定之后才出现的。可是关于生命最初的起源，仍然众说纷纭、争论不一。到目前为止关于生物起源的理论都是推测出来的，缺乏能够证明或是推翻这些理论的证张。世界上仍然设有一种被广泛认可的生物起源理论,＂回答这个问题的意义不仅仅在于能够弥补人类科学与自然世界之间最大的空白，或者会推翻我们人类的认知,就好比现在时代的快速发展，古代的人们也会颠覆他们的人生观。对于人类是否有可能在地球以外找到生命也具有重大意义。这也是我们对生命的探索以及对未来的渴望！生命是如何形成的？生命使地球显得生机勃勃、姿态万千,生命也将地球装粉得多姿多彩,生命是地球上最宝贵的物体。据统计,目前地球上有100多万种动物、30多万种植物和10多万种做生物。尽管生命产生已经几十亿年了，对于地球百分之70的海洋中有许多我们人类不知道的东西,人们也探索和积累了很多关于生命的知识,但是关于生命最初的形成,至今仍然还是一个未解之谜。人类了解的也不是很多。科学家们普遍认为，生命是一种物质结构的自然状态，表现为一种复杂化学系统的自然属性，它依据基本的物质作用规律形成。生命形成的众多学说仍然还在被人们争论和怀疑着。关于地球生命起源的理论？现在社会处于百家争鸣的状态,其中的几种现论甚至怀疑生命是否是在地球上诞生的地球50多亿年环境由于有自转使得大气环流不断运动，还有电闪雷鸣使得无机物不断组合，这些组合可以说穷尽了有机物的所有组合，并不断累加有机物大分子的出现上是必然的，只要出现有机物生命的出现是必然的，有了简单生命然后生命向复杂高等级进化也是必然的，或者说在地球环境下出现人也是必然的。有的理论甚至认为地球上的生命先后出现和毁灭过多次,经历了反复地起伏轮回。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               具核梭杆菌具核亚种冻干管打管说明书！一、菌种简介平台编号：bio-03971提供形式：冻干物拉丁属名：Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum中文译名：具核梭杆菌具核亚种拉丁学名：Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum原始编号：ATCC 25586菌株来源：←ATCC保藏人：周宇光直接来源国家：美国保藏时间：3/31/2000生物危害：三类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；media testing, quality control培养温度：37℃培养基：0288    其他培养条件：厌氧分离源：颈-颜面病变注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。 三、培养条件EG 培养基牛肉提取物 2.4 g 月示 胨 10.0 g 酵母提取物 5.0 g葡萄糖 1.5 g Na2HPO4 4.0 g 可溶性淀粉 0.5 g脱纤维马血 50.0ml L-半胱氨酸 0.5 g 蒸馏水 1.0 LPH 7.6-7.8四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。

              大肠埃希氏菌OP50的保藏条件与注意事项！一、菌种简介平台编号：bio-096178规格：冻干物拉丁属名：Escherichia coli菌株名称：大肠埃希氏菌OP50收藏时间：2010/6/7 原始编号：OP50 原产国：中国 资源归类编码：15131122101 模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学 特征特性：革兰氏阴性短杆菌，周生鞭毛，能运动，无芽孢；菌落圆形，表面光滑湿润而具闪光，微凸起，边缘整齐。 培养基编号：33 培养温度：37℃ 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、保藏条件安瓿瓶和斜面菌种在 2-8°C 保存。 三、培养基LB四、注意事项1）冻干粉以 200ul-500ul 无菌水或者推荐培养基的液态溶解，最适接种量为 2 支斜面（18*180试管）或者 2 支 5ml 液体（请不要在平板上，更不要在锥形瓶中复苏菌种）待菌种活化成功后才能扩大培养。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）请充分了解所购菌种的情况，尤其是该菌种的用途和生物安全信息，并且掌握必需的微生物操作技术，已具备必要的设备条件；如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                OSK-1小鼠诱导型多能干细胞的应用！一、背景OSK-1小鼠诱导型多能干细胞是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。分化的细胞在特定条件下被逆转后,恢复到全能性状态,或者形成胚胎干细胞系,或者进一步发育成新个体的过程即为细胞重编程(Cell reprogramming)。分化是基因选择性表达的结果,并没有改变遗传物质,而重编程在某种意义上就是分化的一个逆转。与经典的胚胎干细胞技术和体细胞核移植技术不同,PSCs技术不使用胚胎细胞或卵细胞,因此没有伦理学问题。此外,利用IPSCS技术可以用病人自己的体细胞制备专有的干细胞,从而大大降低了免疫排斥反应发生的可能性。iPSCS的岀现,在干细胞、表观遗传学以及生物医学等研究领域都引起了强烈的反响,使人们对多能性的调控机制有了突破性的新认识,进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离。iPSCS在细胞替代性治疗以及发病机理的研究、新药筛选以及神经系统疾病、心血管疾病等临床疾病治疗等方面具有巨大的潜在价值。iPS细胞建立的过程主要包括：（1）分离和培养宿主细胞；（2）通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的基因导入宿主细胞；（3）将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上，并于ES细胞专用培养体系中培养，同时在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进重编程；（4）出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定（细胞形态、表观遗传学、体外分化潜能等方面）。二、应用用于体内诱导iPS细胞向胸腺上皮细胞分化的研究：将表达绿色荧光蛋白(GFP)的C57BL/6小鼠的iPS细胞,通过显微注射的方法,注射到ICR小鼠胚胎的囊胚腔内,构建iPS细胞嵌合体,再从嵌合子代中获得iPS细胞来源的胸腺上皮细胞,并鉴定iPS来源的胸腺上皮细胞的功能。为iPS细胞定向分化的研究及临床应用奠定实验基础。研究方法：1、iPS细胞的培养：iPS细胞培养于预先铺有丝裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上,在37℃、5%C02、饱和湿度的条件下培养,每日换液,每3d传代1次。按照1：3到1：8的比例进行传代。用于囊胚注射的iPS细胞在注射前两日传代,注射当天用差速贴壁法去除MEF细胞,将消化成单细胞的iPS细胞悬浮于培养基中,冰浴备用。2、分离获得ICR小鼠囊胚：6-8周龄的雌性ICR小鼠,腹腔注射孕马血清促性腺激素及人绒毛膜促性腺激素刺激超数排卵,并与育龄公鼠合笼。E3.5即交配后第四天上午处死雌鼠,取出子宫,冲胚获得胚胎。3、iPS细胞囊胚注射：将表达绿色荧光蛋白(GFP)的iPS细胞,通过显微注射的方法,注射到ICR小鼠E3.5胚胎的囊胚腔内,每个囊胚注射10-15个iPS细胞,获得嵌合胚胎。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                嗜碱盐单胞菌的培养方法与使用范围！嗜碱盐单胞菌是Halomonas属的微生物，原产地为中国。菌落圆形，凸起，边缘完整；菌体梭形，直或弯曲。革兰氏染色阴性。主要用途为研究。 一、菌种简介提供形式：冻干物拉丁属名：Halomonas alkalicola中文名称：嗜碱盐单胞菌拉丁名称：Halomonas alkalicola其它保藏中心编号：=DSM 103354来源历史：←某化妆品工厂收藏时间：2013/5/21原始编号：56-L4-10aEn原产国：中国资源归类编码：15131312000模式菌株：模式菌株(新种)主要用途：分类；研究；分析检测特征特性：革兰氏阴性短杆菌，细胞大小0.5-0.6 μm×1.5-2.1 μm ，不运动，不形成芽胞。TSA培养基上菌落圆形，光滑，表面反光，边缘整齐，赭石色。在TSB培养基中可以在0-8 % (w) NaCl生长（最适为0-2%），15-37℃生长（最适28-30℃），pH 7-12.5生长（最适pH 9-10）。TSA厌氧条件下不生长。氧化酶和过氧化氢酶反应阳性。主要呼吸醌为Q-9。主要极性脂质为二磷脂酰甘油（DPG），磷脂酰甘油（PG）和磷脂酰乙醇胺（PE）。主要脂肪酸为C18：1ω7c和/或C18：1ω6c和C16：0。DNA G + C含量为63.2mol%。16S rRNA序列号为KU530128。生物危害程度：四类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。培养温度：30℃需氧类型：好氧保存方法：液氮超低温冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：分类；研究；分析检测注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。三、使用范围1、合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 2、天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 3、半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 四、注意事项1、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退；2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染；3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年；4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

                弗氏链霉菌的应用与使用及保存方法！弗氏链霉菌气丝落英淡粉色或粉色。基丝无色或微黄色。在大部分培养基内无可溶色素。克氏合成1号琼脂：气丝荷花白色。一、菌种简介规格：冻干物英文名：Streptomyces fradiae中文名称：弗氏链霉菌属名：Streptomyces种名加词：fradiae来源历史：←湖北省生物农药工程研究中心收藏时间：2006-9-18原始编号：HBERC 00470，Wa-10600原产国：中国资源归类编码：15131517101模式菌株：非模式菌株主要用途：a:1:{i:0;s:4:研究;}特征特性：在高氏一号培养基上，菌体生长较差。菌落直径约1mm，基丝无色至乳白色，直径约0.6-0.7µm，无隔不断裂；气丝近白色，直径约0.6-0.7µm；孢子丝直形至柔曲，孢子杆状，大小0.6-0.8×1.0-1.5µm。在所试培养基上均不产生水溶性色素。明胶不液化，牛奶不凝固不胨化，淀粉不水解，不产硫化氢，不产黑色素，不还原硝酸盐，纤维素上不生长。利用D-葡萄糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、肌醇、D-甘露醇，不利用L-阿拉伯糖、棉子糖、鼠李糖。具体用途：代谢产物具有抗真菌活性。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：土壤采集地：青海湟源培养基编号1：0027资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:2:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:14:真空冷冻干燥法;}共享方式：a:4:{i:0;s:16:资源纯交易性共享;i:1;s:12:合作研究共享;i:2;s:18:知识产权性交易共享;i:3;s:14:资源交换性共享;}提供形式：斜面培养物用途：代谢产物具有抗真菌活性。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、菌种外形孢子丝直或柔曲。孢子椭圆形，长圆形，表面光滑。三、菌种属性蔗糖硝酸盐琼脂：基丝麦芽糖黄色。可溶色素无或微黄色。葡糖天冬素琼脂：气丝落英淡粉色。基丝微黄色。高氏合成1号琼脂：气丝荷花白色、浅粉色。基丝淡黄色。淀粉合成琼脂：气丝微白色。基丝无色。瓦氏肉汤琼脂：气丝白色。基丝无色或风帆黄色。高氏有机2号琼脂：气丝无或很少，微白色。基丝微黄色或淡锈色。马铃薯琼脂：气丝粉白色或粉色。基丝浅风帆黄色或山鸡褐色。可溶色素芒果棕色或淡栗棕色。马铃薯块：无气丝。基丝橙色。无可溶色素。明胶液化(高泽等：不液化)，无色素。牛奶不凝固(高泽等：凝固)，但胨化。淀粉水解。纤维素上生长(高泽等：不生长)。硝酸盐还原(高泽等：不还原)。不产生类黑色素和H2S。利用葡萄糖、D—果糖、蔗糖以及D—半乳糖、 D—甘露糖、麦芽糖、淀粉、甘油、醋酸钠、柠檬酸钠。不利用D—阿拉伯糖、D—木糖、L—鼠李糖、棉子糖、肌醇、甘露醇以及乳糖、卫矛醇、D—山梨醇、七叶树素、草酸钠。抑制革兰氏阳性和阴性细菌、真菌(我们的菌株对细菌无作用)。四、菌种的应用在农业上弗氏链霉菌可以制备安全高效的微生物菌剂，是一种优良的杀菌剂。（一）产品性能及特点1、本品是一种安全高效的微生物菌剂，制作工艺精湛，作用机理更加全面，纯度高，喷酒在作物叶片上，可在楂物根、茎、叶快速生长繁衍，分泌各种抗革兰氏阳性、阴性细菌作用的活性物质，能够排斥、阻断、抑制病菌的侵入。本品作用方式复杂，包括化学作用、抗生作用和寄生作用；2、本品分泌多种植物必须生长酶，是普通菌种的50倍以上，迅速修复病灶，提高免疫速度快至2-3倍，増强作物光合作用；3、本品促进被土壤固定的元素的吸收，均衡营养；4、本品可以促进根系的生长，提升作物的抗病能力，满足作物的生长需求；5、本品高纯度、无杂菌、溶解性好，便于配制溶液。 （二）使用方法与使用用量1、将本品稀释1000－1500倍叶面喷雾，可强效抑菌。2、适用各种瓜果、蔬菜、果树及大田作物。（三）注意事项1、使用本品时应穿戴防护服和手套，避免与皮肤接触，防止由口鼻吸入，施药期间不可吃东西和饮水，施药后应及时洗手和洗脸。2、用过的容器应妥善处理，不可做他用，也不可随意丢弃。3、长期存放如出现结块情况，属正常现象，请放心使用，不影响效果。（四）储存和运输1、本品应贮存在干燥、阴凉、通风良好的仓库里，远离火源或热源。2、放置在儿童接触不到的地方，并加锁。勿与食品、饮料、饲料等其他商品同贮同运。五、菌种低温保存法1、简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月。2、液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至-35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。

                         人淋巴母细胞的背景应用！一、背景人淋巴母细胞是处于增殖状态的淋巴细胞，其体积增大，RNA和蛋白质合成率增高，受抗原刺激后，可发生活化、增殖和分化成淋巴细胞。淋巴细胞（lymphocyte）是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。其由淋巴器官产生，主要存在于淋巴管中循环的淋巴液中，是机体免疫应答功能的重要细胞成分，是淋巴系统几乎全部免疫功能的主要执行者，是对抗外界感染和监控体内细胞变异的一线“士兵”。淋巴细胞是一类具有免疫识别功能的细胞系，按其发生迁移、表面分子和功能的不同，可分为T淋巴细胞（又名T细胞）、B淋巴细胞（又名B细胞）和自然杀伤(NK)细胞。T细胞和B细胞都是抗原特异性淋巴细胞，它们的最初来源是相同的，都来自造血组织。淋巴细胞是免疫反应的核心。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同，可分为T细胞、B细胞和NK细胞三类。T淋巴细胞随血循环到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B细胞在骨髓中分化成熟。当受抗原刺激后，T淋巴细胞即转化为淋巴母细胞，再分化为致敏T淋巴细胞，参与细胞免疫，其免疫功能主要是抗胞内感染、瘤细胞与异体细胞等；而B淋巴细胞是先转化为浆母细胞，再分化为浆细胞，产生并分泌免疫球蛋白（抗体），参与体液免疫，其功能是产生抗体，提呈抗原，以及分泌细胞内因子参与免疫调节；NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应，具有杀伤靶细胞的作用。二、应用用于EB病毒转化淋巴母细胞中相关基因表达的检测与分析研究：研究EB病毒诱导淋巴细胞转化的分子机制提供实验依据。方法：从5例健康成人外周静脉血中分离出淋巴细胞，在体外利用EBV诱导B淋巴细胞转化建立永生化的淋巴母细胞系。提取转化淋巴母细胞及其配对的健康人淋巴细胞的总RNA和总蛋白，应用实时定量PCR和Western blot方法，分别检测E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例转化淋巴母细胞及其匹配的健康人淋巴细胞中的表达情况。结果：成功建立EBV转化的淋巴母细胞系，得到了5例健康人转化淋巴母细胞，检测了E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例转化的淋巴母细胞及其配对的健康人淋巴细胞中的表达情况。E2F1基因在两种细胞中均表达，与正常人淋巴细胞相比，转化细胞中E2F1的mRNA表达上调3.161倍，差异有统计学意义（PWestern blot结果显示，与正常人淋巴细胞相比，E2F1在转化细胞中的蛋白表达上调1.850倍，差异有统计学意义（PPLK1基因在两种细胞中均表达，与正常人淋巴细胞相比，淋巴母细胞中PLK1的mRNA表达上调11.329倍，差异有统计学意义（PWestern blot结果显示，与正常人淋巴细胞相比，PLK1在转化细胞中的蛋白表达上调8.140倍，差异有统计学意义（PBIRC5基因在两种细胞中均表达，相比正常人淋巴细胞，淋巴母细胞中BIRC5的mRNA表达上调7.921倍，差异有统计学意义（PWestern blot结果显示，与正常人淋巴细胞相比，BIRC5在转化细胞中的蛋白表达上调2.065倍，差异有统计学意义（P微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    微生物实验室需要注意的事项汇总！一、无菌操作要求  1、接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。     2、进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。       3、接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。      4、进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。        5、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。       6、接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。       7、接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。8、吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。   二、无菌间使用要求 1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。       3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。       4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。       5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 （一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1、灭菌前准备①所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。②装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。2、装放①干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。②大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。3、设备检查（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水 量补足，水变混浊需更换）；②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）；③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）；④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）；⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。     （3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出；② 夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出；③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至灭菌完成；④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破；⑤使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。4、灭菌温度与时间①干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5-2h。②压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间一般为121℃,15min。 （二）间歇灭菌方法1、灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。①将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽；②关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒10～20min；     ③灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。 2、血清凝固器使用方法，培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到灭菌目的。①在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用；②将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃1h灭菌，放37℃温箱过夜，再如此灭菌三次。 3、煮沸消毒：可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60 min均可达到灭菌目的，但选用煮沸消毒的增消剂时，应注意对物品的腐蚀性。 4、灭菌处理：灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染。     ①物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用；    ②取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用；③培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃；④启闭式容器，在取出时应将筛孔关闭；⑤取出的物品掉落在地或误放不洁这处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用；⑥取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放；⑦凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限；⑧每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。 四、有毒有菌污物处理要求微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。1、经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。2、经微生物污染的培养物，必须经121℃ 30min高压灭菌。3、染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液体不得低于浸泡的高度）再经121℃ 30 min高压灭菌。4、涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯 中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，必须高压灭菌后洗涤。5、打碎的培养物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭干净。污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。    五、培养基制备要求 培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：1、根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。2、PH 测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基 PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的 PH 降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基 的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。3、培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。4、盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。5、培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。6、每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。7、目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。8、每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。 六、样品采集及处理要求 1、所采集的检验样品一定要具有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在。2、根据食品的种类及数量，采样数量及方法应按标准检验方法的要求进行。3、采样应注意无菌操作，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤 酚皂溶液，用新洁尔灭、酒精等消毒药物灭菌，更不能含有此类消毒药物或抗生素类药物，以避免杀死样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可应用。4、样品采集后应立即送往检验室进行检验，送检过程中一般不超过3h，如路程较远，可保存在1～5℃环境中，如需冷冻者，则在冻存状态下送检。5、检验室收到样品后，进行登记（样品名称、送检单位、数量、日期、编号等），观察样品的外观，如果发现有下列情况之一者，可拒绝检验。①样品经过特殊高压、煮沸或其他方法杀菌者，失去代表原食品检验意义者。②瓶、袋装食品已启开者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者，即失去原食品形状者（食物中毒样品除外）。③按规定采样数量不足者。对送检符合要求的样品， 检验室收到后，应立即进行检验，如果条件不具备，应置4℃冰箱存放，及时准备创造条件，然后进行检验。6、样品检验时，根据其不同性状，进行适当处理。①液体样品接种时，应充分混合均匀，按量吸取进行接种。②固体样品，用灭菌刀、剪取其不同部位共25g，置于225ml 灭菌生理盐水或其他溶液中，用均质器搅碎混匀后，按量吸取接种。③瓶、袋装食品应用灭菌操作启开，根据性状选择上述方法处理后接种。七、记录和报告的要求 1、检验室收到样品后，首先进行外观检验，及时按照国家标准检验方法进行检验，检验过程中要认真、负责、严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。 2、样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验纪录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   多粘芽孢杆菌的产品性能与作用机理！多粘芽孢杆菌以芽孢形式存在，耐温性好，质量稳定，“以菌治菌”，药效持久；“药肥兼能”，不仅是防治青枯病、枯萎病、根腐病、软腐病等土传病害最理想的药剂，而且具有明显的促进生长、提高产量、改善品质的作用；无任何药害和残留，是无公害、绿色、有机蔬菜生产的首选微生物制剂；对茄科类作物青枯病防效显著。美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一。一、产品性能本品属于广谱的微生物杀菌剂。通过有效成分——多粘芽孢杆菌产生的抗菌物质和位点竞争，诱导抗性的作用方式，杀灭和控制病原菌，从而达到防治病害的目的；同时对初发病的土传病害和叶部病害具有一定的治疗作用。1、有效活菌数：5亿/克。2、形态特征：椭圆形芽孢使孢囊膨大,芽孢中生到端生。3、生理生化特征：从碳水化合物产气；产生乙酰甲基甲醇；从甘油形成二羟基丙酮。4、应用作物：各种有机蔬菜、瓜类、药材、烟草、水果、花卉、草坪等植物。5、防治对象：作物黄萎、黑根腐、炭疽病、赤霉病；全蚀病；白叶枯病；青枯病；软腐病；角斑病；疮痂等。二、作用机理本品的防病机制是“以菌治菌”，其有效成分——多粘芽孢杆菌在根、茎、叶等植物体内具有很强的定殖能力，可通过位点竞争阻止病原菌侵染植物；同时多粘芽孢杆菌不断分泌出的广谱抗菌物质可抑制或杀灭病原菌；此外，多粘芽孢杆菌还能诱导植物产生抗病性。生防特点：以芽孢形式存在，耐温性好，质量稳定，“以菌治菌”，药效持久；“药肥兼能”，不仅是防治青枯病、枯萎病、根腐病、软腐病等土传病害最理想的药剂，而且具有明显的促进生长、提高产量、改善品质的作用；无任何药害和残留，是无公害、绿色、有机蔬菜生产的首选微生物制剂；对茄科类作物青枯病防效显著。美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一。多年的试验示范结果表明，多粘类芽孢杆菌具有两大功能：（1）通过灌根可有效防治植物细菌性和真菌性土传病害，同时可使植物叶部的细菌和真菌病害明显减少；（2）对植物具有明显的促生长、增产作用。多类芽孢杆菌对细菌性土传病害—植物青枯病具有很好的防治效果，在收获后期，对番茄、茄子、辣椒、烟草、马铃薯、罗汉果和生姜青枯病（姜瘟病）的田间防效可达70～92%，最高增产率达493%，甚至当对照发病率高达97%时防效也是如此。多类芽孢杆菌对真菌性土传病害—植物枯萎病也具有很好的防治效果，在收获后期，对番茄、茄子、辣椒、西瓜、甜瓜、黄瓜、苦瓜、冬瓜、香蕉和草莓等枯萎病的田间防效可达65～85%。多粘芽孢杆菌对芋头软腐病、大白菜软腐病、辣椒根腐病、花卉根腐病、玉竹根腐病、沙参根腐病、番茄猝倒病、番茄立枯病以及辣椒疫病等土传病害也具有较好的防治作用。防治土传病害（青枯病、枯萎病、根腐病等）的使用技术用药时期：播种，每亩用量（克）：40，稀释倍数：50～100，用药方法：浸种和泼浇，说明：浸种量为栽1亩地所需的种子量；浸种30分钟，晾干后播种，然后将药液泼浇于苗床。用药时期：育苗，每亩用量（克）：120，稀释倍数：500，用药方法：泼浇，说明：育苗中期苗床泼浇，若假植则泼浇栽1亩地所需的营养钵。用药时期：移栽定植，每亩用量（克）：360~600 500～1500，稀释倍数：灌根或喷淋，用药方法：移栽当天用药特别关键；100克兑水50-150公斤。用药时期：开花结果或初发病，每亩用量（克）：360~600 500～1500，稀释倍数：灌根或喷淋，用药方法：100克兑水50～150公斤对未发病株普遍灌根。备注：1、灌根时，最好与有机肥或生物菌肥、生根剂等配合使用，如根部有线虫则必须配合使用杀线剂；2、对发病单株用50～150倍液单独浇灌（每株不得少于250克药液），效果更佳；3、对于重病田，适当增加用药量和用药次数，效果更佳。防治叶部病害的使用技术发病前或初发病时用150～450倍液喷施，隔7～10天喷一遍，连续防治2～3次。叶面喷雾时，最好与叶面肥（如腐殖酸、微肥等）、植物生长调节剂（如芸苔素内酯等）混合使用。使用技术要点1、对青枯病、枯萎病等土传病害的防治，苗期用药不仅可提高防效而且还具有防治苗期病害及壮苗的作用，切勿省略。2、施药应选在傍晚进行，若施药后24小时内遇有大雨天气，天晴后应补施一次；3、土壤潮湿时，应减少稀释倍数，确保药液被植物根部土壤吸收；土壤干燥、种植密度大或冲施时，则应加大稀释倍数，确保植物根部土壤浇透；4、本品结合基施或穴施有机肥、生物菌肥使用，以及与甲壳素、生根剂、杀线剂及叶面肥等配合使用，可明显增强防治效果、促进作物生长。但不宜与杀细菌的化学农药直接混用或同时使用，否则效果可能会下降！三、注意事项1、对青枯病、枯萎病的防治，苗期用药不仅可提高防效而且还具有防治苗期病害及壮苗的作用，切勿省略。2、施药应选在傍晚或早晨，不宜在太阳暴晒下或雨前进行；若施药后24小时内遇大雨天气，天晴后应补用一次。3、土壤潮湿时，在登记范围内则减少稀释倍数，确保药液被植物根部土壤吸收；土壤干燥时，种植密度大或冲施时，在登记范围内则加大稀释倍数，确保植物根部土壤浇透。4、不能与杀菌的化学农药同时使用。5、包装开启后最好一次性用完，未用完应密封，于阴凉、干燥处保存。

                    平头炭疽菌的功效用途与使用方法！平头炭疽菌是Colletotrichum属的微生物，原产地为中国。培养基上菌落呈圆形，中央为黑色，其上有白色菌丝，边缘为白色菌丝；其菌落背面为黑色，产黑色色素。菌丝长度为3～5μm。主要用途为研究；教学。一、菌种简介提供形式：斜面培养物 拉丁属名：Colletotrichum truncatum中文名称：平头炭疽菌 拉丁属名：Colletotrichum 种名加词：truncatum (Schwein.) Andrus & W. D. Moore 其它中心编号： 收藏时间*：2005-12-12 来源历史：徐州师范大学转 原产国：中国 资源归类编码：15151911101 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教学 特征特性：培养基上菌落呈圆形，中央为黑色，其上有白色菌丝，边缘为白色菌丝；其菌落背面为黑色，产黑色色素。菌丝长度为3～5μm。 生物危害程度：四类 致病对象：无  分离基物：黄山石杉根组织 采集地区：安徽黄山 采集具体地点：黄山 培养基信息：培养基编号:14 培养基名称:PDA 培养温度：25 资源保护类型：培养物 保藏方法：定期移植法 共享方式：公益性共享 实物状态：有实物注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用二、菌种特性平头炭疽菌，细胞圆球状，在直角两个平面交替分裂形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性，不产细胞色素。三、功效用途产酸，调节胃肠道菌群，维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用，可竞争性地抑制病原微生物，增强动物机体的免疫功能，产生有益的代谢产物，激活酸性蛋白酶的活性，参与机体的新陈代谢，防止有害物质产生。四、使用方法直接加入配合饲料中或先按一定倍数稀释后，再加入饲料中混匀。也可预先活化后再发酵饲料或直接供动物饮用。具体用量参考产品使用说明。五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌六、注意事项产品仅用于科研实验储存时，提高水分含量则菌群活力明显下降。高温制粒时，必须对产品进行包被处理。不饱和脂肪酸对乳酸片球菌具有颉颃作用，配合日粮中添加乳酸片球菌，应尽量避免与添加的油脂直接接触。饲料中的钙也会明显影响乳酸片球菌的活性。

             松口蘑的营养价值与经济用途及储存方法！松口蘑，一种名贵食用菌。口蘑科，口蘑属。菌盖幼时半球形，活白色，表面具黄褐色至栗壳色细鳞片，边缘内卷。菌肉白色，厚。菌褶白色或稍带乳黄色，稍密，弯生，不等长。菌柄圆柱形，内实，菌环以上白色，有粉末，菌环以下同盖色，有鲜片。菌环生于柄上部，丝膜状。孢子印白色。孢子无色，光滑，宽椭圆形至近球形，6.5～7.5 μm×4.5～6.2 μm。自然界于秋季生在松林或针、阔叶混交林地上。中国主产东北地区及台湾、云南、贵州等省。尚不能人工栽培。菌肉肥厚，具香气，味鲜美。一、概况介绍松茸是一种纯天然的珍稀名贵食用菌类，被誉为“菌中之王”。相传1945年8月广岛原子弹袭击后，唯一存活的植物只有松茸，不能人工培植。它长在寒温带海拔3500米以上的高山林地。宋代《经史证类务急本草》有过记载。研究证明，松茸富含蛋白质，多种氨基酸，不饱和脂肪酸，核酸衍生物，肽类物质等稀有元素。松茸秋季的8月上旬到10月中旬采集、食用。有特别的浓香，口感如鲍鱼，极润滑爽口。松茸的营养价值很高，富含粗蛋白，粗脂肪、粗纤维和维生素B1、B2、维生素C、维生素PP等元素，不仅味道鲜美可口，还具有药用价值，能强身、益肠胃、止痛、理气化痰、驱虫及治疗糖尿病等独特功效，是老年人理想的保健食品。在欧洲、日本自古就枧松茸为山珍，日本在古代还把松茸作为百姓向贵族和皇亲国戚进献的贡品之一。二、形态特征子实体散生或群生。菌盖直径5-20CM。扁半球形至近平展，污白色，具黄褐色至栗褐色平状的纤毛状的鳞片，表面干燥，菌肉白色，肥厚。菌褶白色或稍带乳黄色，较密，弯生，不等长。菌柄较粗壮，长6-14CM，粗2-2.6CM；菌环以下具栗褐色纤毛状鳞片，内实，基部稍膨大。菌环生于菌柄商埠，丝膜状，上面白色，下面与菌柄同色。孢子呈白色；孢子无色，光滑，款椭圆形至近球形，6.5-7.5mmx4.5-6.2mm。秋季生于松林或针阔混交林地上，群生或散生，有时形成蘑菇圈。 三、生物学特性松口蘑属担子菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属,生长于海拔1 600～ 2 600m的温带和寒温带松树与栎树混交林带的林地上,与松属、栎属的须根发生共生关系,形成菌根。菌根所在地形成直径2～ 10 m的蘑菇圈,长出子实体。子实体散生或群生。菌盖直径5～ 20cm。扁半球形至近平展,污白色,具黄褐色至栗褐色平状的纤毛状的鳞片,表面干燥,菌肉白色,细嫩,有特殊的清香气,肥厚。菌褶白色或稍带乳黄色,较密,弯生,不等长。菌柄较粗壮,长6～ 25cm,粗2.0～ 3.5cm;菌环以下具栗褐色纤毛状鳞片,内实,基部稍膨大。菌环生于菌柄上部,丝膜状,上面白色,下面与菌柄同色。担子棒状,四枚孢子,孢子无色,光滑,款椭圆形至近球形, 6.5～ 7.5mm× 4.5～ 7.0mm。无囊状体,无锁状联合。松口蘑蘑菇圈的大小主要取决于土壤中的营养条件。松口蘑产区的土壤主要为瘠薄、酸性的棕色林土或山地黑壤、黄壤土。同时,要求林地枯枝落叶较稀疏。生产松口蘑的林龄一般不低于20年,在30～ 40年生的林地为产松口蘑的旺盛时期, 60年以上的林地产量开始下降。 四、分类地位松茸（TricholomaMatsutake[S.ItoetImai]Sing）属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属。五、地理分布松口蘑主要分布在中国东北吉林省，西南地区的云南、四川、西藏。此外，在安徽、广西、山西、青海等地也有松口蘑分布，但数量较少。青冈蕈则分布在喜马拉雅山带。主要分布在云南、四川、西藏等地。假松口蘑分布于四川、云南、河南等地。小松茸和黄褐口蘑仅见于四川。松茸台湾变种主要分布于台湾省，此外在福建的漳州也有分布。粗壮口蘑分布在陕西、云南、四川等地。 六、营养价值松茸是一种名贵的食用菌。松茸营养价值很高，含粗蛋白17%，粗脂肪5.8%，粗纤维8.6%，可溶性无氮化合物61.5%，钾、铁等微量元素和维生素B1、B2、维生素C、维生素PP等元素，实为野生蘑菇之王。专家预测“菇菌是未来最为理想的食品之一”，其营养价值相当于动物的肌肉组织和植物蛋白，每人每天食用100～200克干菇就可维持营养平衡。 七、经济用途此种菌肉肥厚，具有香气，味道鲜美，是名贵的野生食用菌。在西藏群众将此菌火烤蘸盐吃，味道很好。此种含有蛋白质、脂肪和多种氨基酸，含人体必须的氨基酸8种。还含维生素B1、B2、C和PP。松口蘑具有强身、益肠胃、止痛、理气化痰之功效。其子实体热水提取物对小白鼠肉瘤180和艾氏癌的抑制率分别为91.8%和70%。该菌属树木的外生菌根菌。目此菌处于半人工栽培状态。 八、现实意义该成果主要完成了松口蘑发生的各项生态因子分析研究，松口蘑发生与共生树种之间的各种关系，与产区的气候关系，试管菌丝培养，松口蘑保鲜技术的研究。通过黑龙江省科委组织专家鉴定与现场验收鉴定，认为：此项成果填补了中国在松口蘑研究方面的空白，具有国内领先水平，在人工促进增产及保鲜措施上达到了国际领先水平。1994年5月获黑龙江省森工总局科技进步一等奖，1994年9月获黑龙江省科委科技进步三等奖。 九、储存方法一种长期储存松口蘑（松茸）的方法包含如下步骤：将松口蘑放入一个具有弹性并由合成树脂制作的不透水不透气的袋中，排出袋中的空气以防松口蘑同空气接触，然后封口并将袋子在10℃至－40℃温度下保藏。一种在冰冻状态下储存松口蘑的方法包含下述步骤：先将松口蘑放入第一个具有弹性并由合成树脂制作的不透气不透水的袋口，排出袋中的空气以防其与松口蘑接触，然后将袋封口，放入第二个同样具有弹性并由合成树脂制作的不透气不透水的袋中，向第二只袋中灌水并封闭袋口，迅速将其冷冻。本发明还涉及一种通过采用上述方法而长期保藏的松口蘑。 

             人正常肝细胞收到后的处理方法与培养步骤！一、细胞简介平台编号：bio-53604规格：1*10 6拉丁属名：WRL68 人正常肝细胞细胞名称：人正常肝细胞细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。二、细胞特性1）来源：人的肝组织2）形态：贴壁生长3）含量：>1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

            质粒中量提取试剂盒的操作方法与注意事项！一、概述本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐和低pH条件下高效结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的特制玻纤膜材料可高效、与一吸附DNA。本试剂盒适用于提取5-30 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与不宿主菌的种类和培养条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。二、试剂盒组成三、储存条件试剂盒可置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于4℃。注意：第一次使用前将RNase A加入Solution I中混匀后建议置于4℃保存；Solution III 建议置于4℃保存。四、注意事项1、Solution I 在使用前应先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀后4℃保存。2、Solution II 如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。使用后应立即盖紧盖子，以避免空气中的CO2不Solution II 中的NaOH反应，从而造成溶液裂解效率下降。3、DNA Wash Buffer 在使用前先加入无水乙醇（按试剂盒包装规定的体积加入）。4、所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。5、去蛋白液PE可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为endA+（TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量较高的菌株时，则推荐使用去蛋白液PE。五、操作方法1、取5-30 ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，4,000 rpm 离心3 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。2、向有菌体沉淀的离心管中加入2 ml Solution I（已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀，然后静置5 min。注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。3、向离心管中加入2 ml Solution II，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间丌应超过5min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解丌彻底，应减少菌体量。4、向离心管中加入2.8 ml Solution III，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。12,000rpm离心10 min。注意：Solution III 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。5、将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱中 （吸附柱放入收集管中），注意尽量丌要吸出沉淀。12,000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。6、可选步骤：向吸附柱中加入3.5 ml去蛋白液 Solution PE，12,000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。如果宿主菌是end A+宿主菌（TG1，BL21，HB101，JM系列，ET12567等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。如果宿主菌是endA-宿主菌（DH5α，TOP10等），这步可省略。7、向吸附柱中加入3.5 ml DNA Wash Buffer（使用前请先检查是否已加入相应体积的无水乙醇），12,000 rpm离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。8、重复操作步骤7。9、将吸附柱放入收集管中, 12,000 rpm离心1 min，将吸附柱中残余的漂洗液去除。10、将吸附柱开盖，置于室温放置3-5 min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。11、将吸附柱置于一个干净的15ml离心管中，向吸附膜的中间部位滴加0.5-1.0 ml洗脱缓冲液Elution Buffer（或者ddH2O），室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。注意：将洗脱缓冲液Elution Buffer（或者ddH2O）预热至60℃将有助于提高质粒洗脱的效果。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物检测无菌室的操作规程！1、无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 2、无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。3、严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。4、无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。5、无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。6、需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。7、工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。8、无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。9、供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。10、每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。11、吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。12、接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。13、带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。14、凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

            耐辐射奇球菌的形态和生长特性及细胞结构！耐辐射奇球菌（Deinococcusradiodurans, DR）是一种极端微生物。1956 年由美国科学家Anderson等首次从4kGy电离辐射灭菌后仍然变质的肉类罐头中分离出来，被“吉尼斯世界记录”收录并誉为是“世界上最顽强的细菌”。因该细菌具有极强的DNA修复能力，已成为微生物中DNA损伤修复的理想模式生物。对其研究利用还将为放射性和重金属污染物的生物修复、放疗和抗肿瘤药物的研究以及细胞衰老的研究开辟新途径。一、耐辐射奇球菌简介耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans, DR)是地球上已知物种中最耐电离辐射的生物之一。它是1956 年由美国科学家Anderson 等首先从辐照灭菌后仍然发生变质的肉类罐头中分离出来的。该细菌属于极端微生物，对电离辐射、紫外线、干燥、强氧化剂和一些化学诱变剂等各种DNA 损伤介质的致死和突变效应显示惊人的抗性，被誉为“地球上最顽强的细菌”。二、耐辐射奇球菌的形态和生长特性耐辐射奇球菌的菌落呈圆形，直径约在1~2 μm之间，好氧，能产生粉红色色素，不产孢子。单克隆的菌苔呈凸状，表面光滑，在指数生长期，约90%的细菌呈二联体存在；随着细胞分裂，生长后期形成四叠体；在稳定期，绝大多数细菌呈四叠体。其最适生长温度是30℃，在37℃时生长速度最快。当温度低于4℃或高于45℃时，细胞停止生长。三、耐辐射奇球菌的细胞结构 耐辐射奇球菌有一个不寻常的细胞壁结构，虽然它的细胞壁成分和一般的兰氏阴性细菌相似，但是由于它的肽聚糖层比较厚，难以脱色，因此实际革兰氏染色呈阳性。其细胞壁可以划分为一个14-到20-nm 的肽聚糖层和一个未知的分层结构，在电镜下，至少可以分为六层，最里面一层是细胞膜，紧挨着细胞膜是含有肽聚糖的细胞壁，细胞壁上有很多孔，也称为多孔层，壁上的这些孔对细胞有重要的生理学意义。第三层是可以分成无数的细小的区域（分区层），第四层是外膜，第五层是电子致密区；第六层由规则排列的六角形的蛋白亚单位组成(S 层, 或六角排列的中间体层)，也有一些耐辐射奇球菌外面还有一层厚的多糖外膜。但是在细胞分裂时，只有细胞质膜和肽聚糖层参与形成细胞间隔断，其他的各层仅作为外鞘，在分裂的子细胞分离时，包绕在子细胞外面。细胞外膜和细胞质膜在脂类组成上一样，但没有发现其他菌中普遍存在的脂多糖。耐辐射球细胞壁的脂肪酸组成也是与众不同，它既不含有羟基脂肪酸、类脂A 以及庚糖，也不含有多不饱和脂肪酸、环丙基和分支脂肪酸，而含有一个由15-, 16-, 17-, 以及18-碳饱和或单不饱和脂肪酸组成的混合物。和其他细菌另一个明显的不同是缺乏磷脂，耐辐射球细胞膜的脂类中，43%是含有烷基胺的磷酸甘油酯。四、耐辐射奇球菌的基因组结构 耐辐射奇球菌为多基因组，稳定生长期细胞中至少含有4 个拷贝的基因组，而在分裂旺盛的指数生长期则可达10 个以上拷贝。冗余的基因组拷贝数给细胞提供了一个遗传信息储蓄库，使其通过同源重组修复DNA 双链断裂更有优势。Levin-Zaidman等描述了在耐辐射奇球菌类核中的一个不同寻常的环状结构。高度浓缩的类核结构对辐射抗性有贡献，因为这种结构使得耐辐射奇球菌在产生DSB 后也能维持DNA 线状连续性。基因组构象与DNA修复的关系显然很重要，然而Zimmerman 等人和本实验室的研究结果则认为类核环形结构对耐辐射奇球菌的电离辐射抗性并不是必须的。1999 年，White 等在Science 上公布了耐辐射奇球菌野生型菌株R1 的全基因组序列。整个基因组由4 个环状分子组成，包括两条染色体(染色体I 为2.65 Mb、染色体II 为412 kb) 、一个巨型质粒(177 kb) 和一个小质粒(45. 7 kb)，总共3284156bp，平均G+C 含量66.6%。整个基因组编码3187 个开放阅读框(Open reading frames，ORFs)，平均大小约937 bp，覆盖了整个基因组的91%。其中约1/3的基因不能从现有数据库中找到同源物（1002 个）或是功能未知的（511 个）和复制有关的基因主要位于染色体I 和II。五、耐辐射奇球菌的DNA 损伤抗性 耐辐射奇球菌是最具辐射抗性的生物体之一。指数生长期的耐辐射奇球菌对γ-射线表现出极强的抗性，存活的最高剂量是15 kGy（若在生长后期，则它们的存活率更高些，可达到17 kGy），是人体细胞耐受力的3000倍，且没有任何产生突变的证据。在8kGy 的电离辐射下，耐辐射奇球菌仍保持10%的存活率，而大肠杆菌在0.15 kGy照射剂量下才能达到10 %的存活率。另外，指数生长期的耐辐射奇球菌在在5kGy的电离辐射下，对数生长期的耐辐射奇球菌细胞不受任何影响；其D37（存活率为37 %时的辐射剂量）为6.5 kGy左右，而在该电离辐射剂量下大肠杆菌（E. coli）和枯草杆菌（Bacillus spp.）都不能生长。在紫外线抗性上，耐辐射奇球菌可以在高达1000J/m的UV处理后存活下来，在500J/m2的剂量下，它的生存没有影响，而大肠杆菌的存活则急剧下降。对数生长期的耐辐射奇球菌的UV抗性大约是大肠杆菌的33倍左右。耐辐射奇球菌具有很强的抗干燥能力，在一个干燥器内存放六年后，仍能保10%的存活率。科学家研究证明了耐辐射奇球菌的辐射抗性和干燥抗性的关系。他们将野生型和41株对辐射敏感的耐辐射奇球菌同时放在干燥器内，六周后检测他们的存活率，结果表明对辐射敏感的菌株对干燥同样敏感。表明耐辐射奇球菌抗干燥机制和抗辐射机制有关。耐辐射奇球菌经大剂量γ-射线照射（15 kGy）后染色体基因组产生约150～200 个双链断裂（Double-strand break, DSB）的DNA 片段，约3000 个单链片段(SSBs)和至少1000 个损伤的碱基位点。其中DSB 是DNA 损伤中最致死的形式。尽管所有生物都具有DNA 修复机制，但在多数物种中只有很少一部分DSB 能被修复。DNA 脉冲场凝胶电泳实验表明，电离辐照后耐辐射奇球菌染色体基因组由原来的2.65×10 kb 泳带变为50 kb 或更小的一条带，这些产物对一般细胞都是致命的，而受损伤的耐辐射奇球菌基因组却能在几十小时之内完全修复。六、耐辐射奇球菌极端抗性机制 耐辐射奇球菌对辐射、干燥、化学试剂毒性等极端环境有明显的耐受性，归因于其在细胞结构，遗传信息，代谢调节，损伤修复等方面形成了一套完善的抗性机制。1、耐辐射奇球菌的自我保护在结构上，耐辐射奇球菌细胞拥有多方面的保护，如外面有一层较厚的细胞壁，细胞膜内含有大量的类胡萝卜素。另外，基因组内编码多种清除活性氧的蛋白，包括三种过氧化氢酶，至少三种超氧化物歧化酶和过氧化物酶，有利于防范因电离辐射，UV 、强氧化剂和干燥等造成的活性氧损伤细胞。如电离辐射的间接作用能在细胞内产生大量的自由基，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)能有效清除细胞内超氧阴电离自由基(Oˉ)、径自由基(·OH)和过氧化氢(H2O2)等对细胞毒害作用极强的活性氧自由基。生物体内的SOD、CAT 和POD 3 种酶活性的高低和所含的其他保护物质的量，在一定程度上也决定着对辐射抗性的强弱。在正常条件下，耐辐射奇球菌细胞中SOD 的活性比对照大肠杆菌高出6 倍，用Mn处理稳定期的细胞，其SOD 的活性又比未处理的高出3倍。耐辐射奇球菌细胞中CAT 的活性更是比对照的大肠杆菌高出30 多倍。耐辐射奇球菌的SOD、CAT 和POD 等保护酶的高含量成了其辐射抗性极强的一个原因。耐辐射奇球菌菌体内大量合成以deinoxanthin为主要产物的类胡萝卜素类胡萝卜素。Deinoxanthin具有特殊结构，该色素由一个六元环和一条长不饱和碳链组成，环上含有一个羟基（2-OH）和酮基（4=O），长链末端尾部还具有一个羟基（1′-OH），其结构与现在已知的主要色素种类如番茄红素（lycopene）和β-胡萝卜素（β-carotene）等均存在明显差异，自由基清除能力比同类色素均要强很多，因此认为该特殊类胡萝卜素作为高效的抗氧化剂，参与了菌体内抗氧化体系，对该菌的极端抗性机制具有重要贡献。2、冗余的遗传信息耐辐射奇球菌细胞内有多个基因组拷贝，一般在稳定期的细胞内有4个拷贝的染色体，而活化的细胞内则有4-10条染色体。多拷贝的基因组提供了冗余的遗传信息，有利于减少因辐射造成的遗传信息丢失，从而有利于DNA修复，使其在抗逆性中扮演重要角色。3、染色体间重组经过5kGy剂量辐照处理后，耐辐射奇球菌的每个染色体上可产生150个左右的DNA双链断裂。细胞内的核酸外切酶可以作用于DNA断裂处，迅速破坏DNA末端，造成序列信息的丢失。尽管如此，耐辐射奇球菌还是有能力将这些碎片重新组合成完整的染色体。断裂是随机产生的，由此在每条染色体上造成的遗传信息缺失也是随机的，因此尽管每一条染色体都有断裂，但是不同染色体间断裂的分布是不同的，如果细胞可以介导染色体间碎片重排的话，理论上，碎片是足够修复形成一个完整的染色体。实验证明在耐辐射奇球菌的四条染色体间，辐照可以诱导产生600多个交联，其中大约有三分之一是单向的，说明耐辐射奇球菌可能是通过将染色体片段连接到一起来重建其完整染色体。4、DNA修复的有序调节在真核细胞中，DNA损伤可以抑制细胞的DNA复制。在原核细胞中，只有当DNA损伤阻碍了沿着模板移动的DNA聚合酶时， DNA复制才会停止。然而在耐辐射奇球菌中，也存在着辐射诱导的DNA复制抑制现象。实验证明在耐辐射奇球菌染色体中，损伤引起的复制暂停时间和剂量相关，并且停顿的时间总是超过修复引起停顿的DNA损伤时间，表明耐辐射奇球菌的DNA复制对细胞内的DNA损伤是很敏感的，细胞内有一套检测DNA损伤修复程度的机制发挥作用，并可给复制系统传导修复的信息。也就是说耐辐射奇球菌内有一套类似真核生物的可调节的检测点，可以控制DNA复制以及后面的细胞分裂。研究人员从遗传学上进一步证明了耐辐射奇球菌DNA损伤检测点的存在，他们鉴定了耐辐射奇球菌突变体SLR2、SLR4和SLR5，这些突变体的辐射抗性没有改变，倍增时间也和野生一样长，不影响生长，但是辐照后恢复明显变慢，形成菌落需要更长的时间。5、DNA降解电离辐照后，耐辐射奇球菌中迅速发生广泛的染色体DNA 降解。这种降解可能是由细胞内的DNA 单链或双链断裂引起的。对大多数物种来说，伴随着DNA 降解造成的遗传信息丢失是辐射诱导死亡的一个重要原因。然而，研究表明耐辐射奇球菌的DNA 降解是其修复的一部分，降解的过程和辐照剂量相关，剂量越大，降解持续的时间越长，染色体DNA 的损失也就越多。DNA 降解速率与剂量无关，每分钟大约有0.1%的染色体被降解。耐辐射奇球菌限制DNA 降解的程度是细胞对电离辐射致死效应的一种保护。6、损伤DNA的外排染色体DNA降解伴随着损伤DNA片段由细胞内向细胞外的排出。DNA损伤早期，在耐辐射奇球菌的细胞质及培养液中均发现DNA损伤片段，初期降解产物是寡核苷酸，长约2 kb碱基对，随后降解为核苷，可快速地从细胞中排出。这一阶段被认为是耐辐射奇球菌DNA损伤修复的第一阶段，称“细胞清除期”。游离核苷酸输出的程度与辐照的剂量呈正相关。尽管向外释放DNA损伤和损伤抗性的关系还没有详细的研究，但是向外排除损伤是修复碱基损伤的一种有效的机制，也代表一种存活策略，可能有两方面的作用：其一、向外排除损伤核苷酸可以减少突变水平，阻止损伤的碱基在随后的合成中再次利用；其二、向外排除碱基是协调DNA修复信号的一个环节。耐辐射奇球菌中有多种UvrA同源蛋白，其中的某些UvrA蛋白除能识别DNA损伤外，也许还参与了损伤核苷酸的排出。7、锰含量和蛋白质氧化Daly等研究了高浓度Mn(Ⅱ)的作用，发现Mn的聚集可以增强D.radiodurans的抗辐射能力。当D. radiodurans处于缺乏Mn的培养条件下时，它们的抗离子辐射能力也就下降。不论是否有Mn的存在，该菌在特定辐射剂量下形成的DNA双链断裂数是相同的，因此Mn并不能阻止DNA损伤。但Mn存在时，该菌种更能忍受高辐射剂量导致的细胞损伤。大多数辐射产生的DNA损伤是活性氧的产生导致的。细胞内的Mn通过清除活性氧来实现保护作用。例如，乳杆菌（Lactobacillus plantarum）缺少过氧化物岐化酶的保护酶，取而代之的是细胞内20-25mM浓度的Mn离子。由于D. radiodurans的双链断裂似乎并不受Mn的影响，因而活性氧的清除一定是保护大分子而不是DNA，猜想Mn离子的富集阻止了过氧化物并和辐射蛋白损伤活性氧产生有关。如果存在这种情况，那么没有聚集足够Mn离子的细菌可能死于离子辐射引起先于DNA损伤的蛋白损伤。已通过实验证实，Mn的确可以保护蛋白免受自由基的攻击。经辐照处理后，基于小分子Mn(2+)的抗氧化保护机制保持了DNA修复和复制蛋白高效性。除此之外，Mn离子浓度的增加可以提高D. radiodurans基因组的浓度。当在生物体DNA溶液环境中加入多价阳离子时，DNA就会被浓缩，这是因为阳离子中和了骨架中磷酸基团相斥的部分。8、特有的DNA保护和修复因子经历电离辐射的细胞内反应是非常复杂的。电离辐射可诱导产生多种类型的DNA 损伤，包括双链断裂（DSB）、单双链断裂（SSB）、DNA-蛋白交联和不同类型的碱基损坏等。细菌的DNA 修复包括一些部分冗余的途径，被认为是一种适应。耐辐射奇球菌拥有全套的细菌DNA 修复系统如碱基切除修复、核苷酸切除修复、碱基错配修复和同源重组修复等。许多科学家认为耐辐射奇球菌极强的抗辐射能力与其本身具有完善而高效的DNA修复系统有关。但在耐辐射奇球菌中是否存在SOS 反应和非同源末端重组(NHEJ)，一直是研究人员所疑惑的。至今尚未有确凿的证据来证明这两条途径对耐辐射奇球菌的抗性有作用。利用基因组学和蛋白组学，筛选到了一批辐照和干燥处理后被大量诱导表达基因，其中一部分为功能未知的特有基因，如ddrA、ddrB、ddrC、ddrD和pprA等。现在探明一些重要未知基因的功能。DdrA蛋白具有末端保护的功能，结合在DNA单链的3’端的，防止它们被核酸酶的降解。通过对断裂DNA末端的保护，细胞能够保护基因组DNA 直到环境适合细胞的生长和DNA 的修复。ddrA突变株在营养丰富的基质中培养的细胞辐射敏感性只有略微的提高。而如果将细胞辐射后使其处于饥饿状态，那在五天之后其生存能力只为野生型的1/100。DdrB蛋白有具有和DdrA蛋白类似却不同的保护机制。而PprA蛋白被认为能在体外促进DNA双链断裂的连接。这些蛋白可能对该细菌的超强抗性均具有重要贡献。在耐辐射奇球菌中新发现了一个能够促进DNA损伤修复的多效开关因子PprI。该蛋白突变株对电离辐射、紫外线辐射和丝裂霉素C等DNA损伤介质均极其敏感。可以在DNA损伤后激活recA、pprA与其他DNA修复基因的转录与翻译，并可以大幅度地提高过氧化氢酶的活性，启动了包括了胁迫响应途径、转录翻译途径、能量和物质代谢途径、抗氧化途径等在内的DNA损伤响应和细胞生存网络，是耐辐射奇球菌抗辐射必需的。因此，在该菌中存在着别具一格的DNA损伤响应机制，使得其具有非凡的NA修复能力和耐辐射抗性。

                  人前列腺癌细胞的传代流程与应用！一、背景LNCAP人前列腺癌细胞是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离，该患者经确诊为前列腺癌转移。LNCaP clone FGC细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。LNCaP clone FGC细胞并不形成一致的单层，而是形成集落，在传代时可以用滴管反复吹吸打碎。LNCaP clone FGC细胞仅仅轻轻地吸附在基底上，不形成汇合，很快使培养基变酸。LNCaP clone FGC细胞生长极其缓慢，传代后48小时内不应扰动。当培养瓶封包后，多数LNCaP clone FGC细胞从培养瓶底分离，悬浮在培养基中。收到后，在通常培养单层细胞的条件下培养24-48小时，以使细胞再贴壁。此后，可以换上新鲜培养液。如果需要，培养瓶内容物可以收集，300g离心15分钟，以10毫升培养液重悬并培养到一个单独的培养瓶中。二、细胞传代流程（1）吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）（2）注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存（3）取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养（4）镜下观察消化情况，在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。三、应用用于GNMT的表达及调控对人前列腺癌细胞系LNCap和PC3生物学特性的影响研究：研究GNMT的体外调控对人前列腺癌细胞系LNCap和PC3的分化、凋亡、增殖和侵袭性等各项生物学特性的影响。方法：细胞培养液中分别加入GNMT（10μg/ml）和SAH（10ng/ml）来上调和下调LNCap和PC3细胞内GNMT的活性。在12h、24h、36h和48h这4个时间点,光镜下观察细胞分化,TUNEL和流式细胞法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭性。结果：①光镜观察第48h,GNMT和SAH处理过的LNCap和PC3细胞形态在200倍光镜下观察,均没有发生明显变化,延长培养时间至5d后结果仍是一样。②TUNEL两种细胞中凋亡率,GNMT组均低于对照组,SAH组均高于对照组。其差异在LNCap细胞中GNMT组和对照组之间,第48h无统计学意义,p>0.05,第12h、24h和36h有统计学意义,p0.05,第24h和36h有统计学意义,p0.05,第24h、36h和48h有统计学意义,p③流式细胞两种细胞中凋亡率,GNMT组均低于对照组,SAH组均高于对照组。其差异在LNCap细胞中3组之间两两比较,4个时间点均有显著统计学意义,p0.05,第12h、24h和36h有统计学意义,p④MTT两种细胞中吸光度值,GNMT组均高于对照组,SAH组均低于对照组。其差异只在PC3细胞中的48h时间点SAH组与对照组之间有统计学意义,p⑤Transwell两种细胞中穿膜细胞数,GNMT组均高于对照组,SAH组均低于对照组。其差异在两种细胞中均在36h和48h时间点才有统计学意义,p

              青霉属的形态描述与生长速度及菌落形态！青霉属指的是子囊菌门，不整囊菌纲，曲霉目，发菌科的一属。营腐生生活，生长在腐烂的水果、蔬菜、肉类和各种潮湿的有机物上。青霉菌丝体生长在植物的表面或深入物体内部。它由多细胞分枝很多的菌丝组成，细胞壁薄，内含一个或多个胞核。一、简介青霉菌属(Penicillium)隶属于子囊菌门(Ascomycota)、散囊菌纲(Eurotiomycetes)、散囊菌目(Eurotiales)、丝裂孢科(Trichocomaceae)。所有列举出的青霉菌菌名均是基于2014年10月6日公布的被公认的青霉菌名，共计354个种。这些种的分类基于ITS、BenA、CaM以及RPB2的分子系统进化分类结果。以前的青霉菌属包括4亚属，狭义的青霉菌亚属(Penicillium sensu stricto)、曲霉样亚属(Aspergilloides)、镰样亚属(Furcatum)、双轮霉亚属(Biverticilliun)。后来将双轮霉亚属划归蓝状菌属(Talaromyces)。原来隶属于双轮霉亚属的马尔尼菲青霉菌更名为马尔尼菲蓝状菌。其主要是单轮生分枝与狭义上的青霉亚属(Penicillium sensu stricto)不同。青霉属的菌类属于子囊菌纲，以腐生方式生活，生长在腐烂的水果、蔬菜、肉类和各种潮湿的有机物上。青霉菌丝体生长在植物的表面或深入物体内部，由分枝很多的菌丝组成，细胞壁薄，内含一个或多个细胞核。青霉菌可使许多农副产品腐烂，也有少数种类可使人或动物致病，但它能分泌一种抗生素——青霉素，对葡萄球菌、肺炎球菌、淋球菌、破伤风杆菌等有高度杀伤力。二、形态描述分生孢子梗自菌丝单个地发生或不常成束。在顶部附近分枝。青霉状。末端生小梗。分生孢子梗无色或成团时带色。单胞。大都球形或卵圆形。成干燥向基的链。三、影响青霉菌可使许多农副产品腐烂，也有少数种类可使人或动物致病。它能分泌一种抗生素叫青霉素即盘尼西林（Penicillin）。盘尼西林（Penicillin）青霉素对葡萄球菌、肺炎球菌、淋球菌、破伤风杆菌等有高度杀伤力。四、医学医学上通常培养黄霉菌（Penicillium chrysogenum）和点霉菌（Penicillium notatum）提取青霉素。五、致病性通常认为其是污染菌，但在多种疾病中发现该菌，其病原学意义不确定。已知其可引起角膜、皮肤、外耳、呼吸道、泌尿系统感染，以及人工瓣膜植入后发生的心内膜炎。已有报道，在严重免疫功能低下患者中引起播散性疾病。许多菌株产生毒素。六、生长速度生长速度快，4天内成熟。通常在37℃不生长或生长很差。七、菌落形态菌落正面先是白色，然后产生很多粉状物，蓝绿色、边缘白色。些不太常见的菌种颜色和质地不同。背面通常是白色的，但可能是红色或棕色。如果分离株菌落背面红色，且色素向琼脂扩散，必须考虑是否为马尔尼菲青霉，应做温度双相性检测;如果患者最近到过东南亚，这是特别有关联性的。八、镜下形态有隔菌丝(直径1.5~5μm)，有分枝或无分枝的分生孢子梗，有次级分支称为梗基。瓶状瓶梗呈螺旋状排列于梗基上，瓶梗上生有由光滑或粗糙、近圆形的分生孢子(直径2.5~5μm)构成的不分枝的分生孢子链，整个结构形成特征性的“帚状枝”或“毛刷状”外观。欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！