猪B淋巴细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-53586 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：猪B淋巴细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝的造血细胞岛中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫。B细胞在骨髓内分化各阶段的主要变化为免疫球蛋白基因的重排和膜表面标志的表达。B细胞在发育分化过程中，同样也经历选择作用，以除去非功能性基因重排B细胞和自身反应性B细胞，形成周围成熟的B细胞库。B细胞表面有多种膜表面分子，识别抗原、与免疫细胞和免疫分子相互作用，也是分离和鉴别B细胞的重要依据。B细胞表面分子主要有白细胞分化抗原、MHC以及多种膜表面受体。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常外周血组织。2)细胞鉴定：CD19免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：悬浮培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过 85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 七、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物菌种冷冻干燥保藏法的操作流程与步骤！ 1、目的 1.1理解冷冻干燥保藏菌种的原理 1.2掌握冷冻干燥保藏菌种的方法 2、原理 冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。 3、材料 3.1菌株  待保藏的各种菌种。 3.2试剂 2% HCl；牛奶。 3.3器具   安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。 4、流程 备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化 5、步骤 5.1准备安瓿管 安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安培管内，管口塞上棉花，灭菌备用。 5.2制备脱脂乳 用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。 5.3制菌悬液 将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。 5.4分装 用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装量约为0.9毫升。(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3) 5.5预冻 将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东。 5.6真空干燥 预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。 5.7封管 封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。 5.8保藏 做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。 5.9活化 如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。在用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。 6、结果  6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理。 6.2记录大肠杆菌斜面作液体石蜡封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要点。 7、思考 7.1菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？ 7.2经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？ 7.3沙土管法适合保藏那一类微生物？ 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    大鼠膀胱基质成纤维细胞的运输和保存及使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132324 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞名称：大鼠膀胱基质成纤维细胞用途：原代细胞 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱是一个储尿器官。它是一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱基质成纤维细胞作为膀胱上皮细胞的支持细胞，起着十分重要的作用。体外培养膀胱基质成纤维细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究膀胱纤维化的基础与前提。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常膀胱组织。2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      RIN-m5F细胞系的知识与应用及培养操作！ 一、背景 RIN-m5F是一种来源于大鼠的胰岛β细胞瘤细胞系。这些细胞是通过大剂量放射线照射近交系NEDH大鼠，再经过裸鼠维持肿瘤后得到的。RIN-m5F细胞系具有分泌胰岛素及L型多巴脱羧酶的特性，但不产生生长激素抑制激素。因此，它们常被用于胰岛细胞信号转导和胰岛肿瘤相关的研究。 在研究中，RIN-m5F细胞系常被用作体外模型来模拟胰岛β细胞的功能和行为。例如，它们可以用于研究胰岛素的分泌、合成和代谢等生物学过程，以及胰岛β细胞在糖尿病等疾病中的变化。此外，RIN-m5F细胞系也可以用于药物筛选和毒理学研究，以评估药物对胰岛β细胞的影响和潜在毒性。 然而，需要注意的是，虽然RIN-m5F细胞系具有一定的代表性，但并不能完全模拟真实的人体环境。因此，在将实验结果应用于临床之前，仍需要进行更多的实验验证和临床研究。 此外，有研究表明，金丝桃素的光动力学效应可以显著地抑制RIN-m5F细胞的增殖，这为开发新的抗肿瘤药物提供了思路。同时，RIN-m5F细胞系也被用于软琼脂克隆形成实验，以研究化合物对细胞活力的影响。 二、RIN-m5F细胞系培养操作 1)复苏RIN-m5F细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)RIN-m5F细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)RIN-m5F细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 RIN-m5F可以用于γ-氨基丁酸对RIN-m5f细胞的保护作用及机制探究： 研究拟建立高糖（G）和H2O2氧化损伤RIN-m5f细胞模型，以探讨GABA对胰岛β细胞抗氧化调节作用及其作用机制。 方法：分别采用11mM、22mM、44mM G孵育RIN-m5f细胞48h，以及10μM、50μM、100μM H2O2孵育1h建立体外氧化损伤细胞模型。GABA干预实验分为：对照组（11mM G）、损伤组（G/H2O2）、GABA组（G/H2O2+GABA）、硫辛酸组（G/H2O2+LA）。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平；检测细胞氧化还原状态指标和胰岛素分泌水平；MTT法测定细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡线粒体膜电位；RT-PCR法检测与抗氧化、抗凋亡和胰岛素分泌相关基因mRNA表达水平；Western blot法检测Nrf2和GSK-3β蛋白水平、p-GSK-3β（Ser9）和p-GSK-3β（Tyr216）磷酸化水平。 结果：随着G和H2O2浓度的增加，胞内ROS和MDA水平显著提高（P0.05）。 结论：GABA可显著增强氧化损伤（G和H2O2）RIN-m5f细胞抗氧化能力，提高细胞存活率和胰岛素合成分泌，具有抗凋亡作用；GABA可调节胞内GSK-3β/Nrf2通路相关基因mRNA表达水平，显著提高Nrf2核质比例，增强细胞抗氧化能力，其作用机制可能与提高p-GSK-3β(Ser9)磷酸化水平、降低GSK-3β蛋白水平有关；GABA抗氧化调节作用具有浓度依赖效应，即随着氧化损伤程度的增加，GABA需要量增加。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物学的基础性工作：微生物的分类和鉴定！ 百欧博伟生物：微生物的分类和鉴定是微生物学的基础性工作。微生物分类是在对大量单个微生物进行观察、分析和描述的基础上，以它们的形态、结构、生理生化反应和遗传性等特征的异同为依据，并根据生物进化的规律和应用方便，将微生物分门别类地排列成一个系统。目前微生物分类鉴定方法分为以下几个方面。 1、形态特征 ①个体特征，包括在显微镜下的细胞大小、形状、排列、运动性、鞭毛着生部位和数目、芽孢有无、部位和形状、有无荚膜，放线菌和真菌繁殖器官的形状、构造、孢子数目、形状、大小、颜色和表面特征等。 ②群体特征即培养特征，菌落是菌株在一定的培养基中的群体特征。包括固体培养基上菌落的形状、大小、颜色、光泽、黏稠度、隆起情况、透明度及边缘特征，是否分泌水溶性色素、质地、移动性和气味；半固体培养基上穿刺接种后的生长及运动情况；液体培养基中培养液混浊程度，表面有无菌膜，有无沉淀及其沉淀的形态，有无气泡产生，培养液的色泽变化等。 2、生理和生化特征 ①营养来源 可以试验多种糖能否被微生物作为碳源和能源利用，以及微生物对特定有机化合物和CO2的利用能力。对于氮源，看其是利用蛋白质、蛋白胨、氨基酸或铵盐、硝酸盐中的氮，还是大气中的游离氮。 ②代谢产物 例如在培养基中检测微生物有否形成有机酸、有否产生气体，能否分解色氨酸产生吲哚，能否使硝酸盐还原硝酸盐或氮，能否产生色素或抗生素等。 ③与温度和氧气的关系 有嗜热菌，嗜冷菌，嗜温菌之分，也有好氧菌，厌氧菌和兼性好氧菌之分。 3、血清反应 将已知菌种、型或菌株制成抗血清，根据它是否与待鉴定对象发生特异性血清反应鉴别未知菌。此反应也用于病毒分类，尤其是噬菌体分类。 4、生态特性 微生物与其他生物的寄生或共生，细菌的致病性，微生物在自然界中是否耐高渗、是否嗜盐性等。 5、生活史 亲代个体经一系列生长、发育阶段而产生子一代个体的全部经历，就称为该生物的生活史或生命周期。微生物个体发育的阶段变化也是分类鉴别的重要依据。 6、对噬菌体的敏感性 与血清反应类似，各噬菌体有严格的寄生范围，可以根据菌体对噬菌体的敏感性进行区分。 7、核酸分析 DNA是遗传物质的携带者，决定生物的表型。遗传信息在DNA中的存在形式表现为DNA的碱基数目及其排列顺序。亲缘关系越远的种，其碱基数目和排列顺序相差越大。 8、DNA杂交试验 进一步判断微生物间的亲缘关系，须比较DNA的碱基序列，最简便的方法是DNA杂交。其基本原理是DNA解链的可逆性和碱基配对的专一性。提取DNA并使之解链，再使互补的碱基重新配对结合成双链。根据能生成双链的情况，可测知杂合率。杂合率越高，表示两个DNA之间碱基顺序的相似越高，亲缘关系也就越近。 9、细胞壁成分分析 不同微生物的细胞壁，在其组成单位的物质基础或在结构方面有许多明显的特殊性。比如，霉菌的细胞壁主要含有几丁质；而细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖。革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖含量较低，另外还有多肽、脂蛋白及脂多糖等；革兰阳性菌细胞壁肽聚糖的比例则较高，另外有蛋白质、多糖、磷壁酸和磷璧质等。 10、红外光谱 一般认为每种物质的化学结构都具有特定的红外光谱。若两个样品红外吸收光谱完全相同，可以初步认为它们是同一种物质。所以，利用红外光谱技术测定微生物的化学成分，也能用于微生物分类，简单快速，样品用量少。 11、数值分类法 又称统计分类法。根据“等重要原则”，不分主次，以分析多数特征为基础，进行菌株间两两比较，通过计算菌株间的总相似值来分群归类，数据处理量较大，需借助于计算机实现。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 博伊丁假丝酵母的形态特征与培养方法及使用范围！ 博伊丁假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-53361 规格：冻干物拉丁属名：Candida Boidinii 菌株名称：博伊丁假丝酵母其他编号：1950 ＝AS2.1647培养基编号：13培养温度：30培养时间：24-48h用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征博伊丁假丝酵母，较小；凸起；较湿；乳白色；有光泽；边缘齐整；圆形光滑；专性或兼性好氧生活，分离于富含糖类的环境中或者植物分泌物；无鞭毛，不能游动；菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一；最适pH 值为pH4.5-5.0；最适生长温度一般在20℃~30℃之间。 三、培养基*麦芽汁琼脂培养基*YM 培养基（酵母粉 3.0 g； 麦芽提取物 3.0 g；葡萄糖 10.0 g；蛋白胨 5.0 g；琼脂 20.0 g；蒸馏水 1000 ml；pH 6.2 +/- 0.2 ） 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C 保存。  七、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况，请在收到菌种后2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   GEN犬肺腺癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129553 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：GEN 细胞名称：犬肺腺癌细胞GEN产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研4类培养体系：DMEM高糖培养基（不含丙酮酸钠）+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：犬肺腺癌细胞GEN取自雄性个体，贴壁培养。注释：倍增时间38h用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管，直接浸入 37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃)，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   产酸拟杆菌的培养方法与保藏条件及注意事项！ 一、菌种简介平台编号：Bio-107393 规格：冻干粉 拉丁属名：Bacteroides Acidifaciens 中文名称：产酸拟杆菌拉丁名称：Bacteroides acidifaciens来源历史/保藏单位：DSM其他保藏中心编号：DSM 15896=JCM 10556生物安全级别：一级收藏时间：2017-08-31模式菌株：是培养基编号：35A40培养温度(℃)：37℃培养时间(天)：1-2天需氧类型：专性厌氧分离基物：盲肠用途：AB/21164 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基（血琼脂平板） 三、保藏条件冻干菌种应在 2-8°C 保存，活化好的菌种要放厌氧环境下保存。 四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.5-1ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                       CTLL-2小鼠T细胞的处理方法与培养步骤！ 一、知识概述T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。T细胞是相当复杂的不均一体、可将T细胞分成若干亚群，其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4。通过与MHCⅡ递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。 二、产品信息平台编号：Bio-73272 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：CTLL-2 细胞名称：CTLL-2小鼠T淋巴细胞规格：T25瓶或者2ml冻存管生长特性：悬浮生长传代比例：持细胞浓度在1×105~2×106/ml培养条件：90%RPMI-1640，10%胎牛血清(优质)，100U/ml rmIL-2，100U/ml双抗，37℃,5%CO2冻存条件：70%基础培养基+20%FBS+10%DMSO细胞用途：仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗用途：种属鉴定报告注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、冻存细胞接收后的处理1）干冰运输，收到细胞后推荐直接复苏1管，另一管放入-80度冰箱保存过夜后转入液氮，细胞直接转入液氮暂存可能导致细胞复苏率降低。2）收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。 四、复苏细胞接收后的处理1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。2）在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片2~3组以及培养瓶外观照留存。3）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，镜检观察细胞密度未达到80-90%时，将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1000rpm离心5min，离心后弃去上清，用新鲜完全培养基重悬后加入T25培养瓶或60mm皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基。4）如您收到细胞7天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。注：发货用培养基不可再次用来培养细胞 五、细胞培养方法1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代①收集所有细胞悬液，1000rpm离心5min，小心弃去上清；②加1-2ml新鲜完全培养基吹匀重悬后按照1:2比例加入2个T25培养瓶或60mm皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基；注：第一次传代推荐1:2传代，后续可根据细胞生长以及客户需求自行确定。2、细胞复苏：①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml新鲜完全培养基吹匀，将细胞悬液加入T25培养瓶或者60mm培养皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基。3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存①收集所有细胞悬液，可细胞计数，1000rpm离心5min，弃上清；②加入配制好的冻存培养液重悬细胞，冻存液的添加量按细胞最终浓度为1~10×106/ml添加。③将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   ATCC 24204 髓囊毕赤酵母的微生物培养方法！ 髓囊毕赤酵母，细胞据不同形状，多边芽殖，多数种形形成假菌丝。子囊形成前进行同形或异形接合或不接合。子囊孢子球形、冒形或星形，常有一油滴在其中，子囊孢子表面光滑，有的有痣点。每个子囊通常含有1-4个孢子，子囊容易破裂而释放孢子。发酵或不发酵，不同化硝酸盐。 一、菌种简介平台编号：Bio-07237 提供形式：冻干物拉丁属名：Kuraishia Capsulata 中文译名：髓囊毕赤酵母拉丁学名：Kuraishia capsulata原始编号：AKU 4305菌株来源：←日本京都大学农学部保藏人：张震元直接来源国家：日本保藏时间：12/20/1985其他保藏编号：=ATCC 24204 =CBS 1993 =IFO 0721 =JCM 1991 =NRRL Y-1842生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：25-28℃培养基：0013   用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.5-1ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                        TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系的应用与培养操作！一、背景 TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系是一种来源于小鼠肾小管上皮细胞的细胞系，常用于研究肾脏疾病的发生机制、药物筛选和毒性评价等。该细胞系具有以下特点： 来源：TCMK-1细胞系来源于小鼠肾小管上皮细胞，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。 形态特征：TCMK-1细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。 生长特性：TCMK-1细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。 特异性标志物：TCMK-1细胞表达多种特异性标志物，如Ksp-cadherin、AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、NHE3、Na-K-ATPase等，可用于鉴定其肾小管上皮细胞特性。 其他特性：TCMK-1细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究肾脏疾病发生机制和药物筛选的模型。 二、TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系培养操作 1)复苏TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系可以用于Tisp40在肾间质纤维化中的作用和机制研究： Tisp40与肾间质纤维化的关系目的：探讨Tisp40在缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)诱导的肾间质纤维化及转化生长因子betal(Transforming growth factor betal,TGF-β1)诱导的TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系中表达量的变化,验证所构建的慢病毒转染Tisp40过表达细胞系TCMK-1/Tisp40效果并在3种所构建的siRNA-Tisp40中筛选沉默效果最好的siRNA-Tisp40。 方法：体内实验C57BL/6小鼠I/R建立肾脏纤维化动物模型,免疫组化、RT-PCR及Western blot检测各组小鼠肾脏Tisp40的分布与表达。体外实验采用TGF-β1(10ng/ml)刺激TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系24h建立肾细胞纤维化模型,Western blot检测TGF-β1不同浓度(0.1,1,10ng/ml)及刺激时间(4,8,12,24,48h)下Tisp40蛋白的表达变化。在野生型TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞系(TCMK-1/wildtype,TCMK-1/wt)及Tisp40过表达的TCMK-1/Tisp40细胞中,RT-PCR及Western blot检测Tisp40 mRNA及蛋白表达变化,免疫荧光评估所构建的TCMK-1/Tisp40细胞效果。Western blot检测Tisp40被沉默后的蛋白表达,比较三种siRNA-Tisp40(siRNAl-Tisp40,siRNA2-Tisp40,siRNA3-Tisp40)沉默效率。 结果：体内实验假手术组小鼠(Sham)肾脏Tisp40表达较少;缺血再灌注纤维化组(I/R)中小鼠肾脏Tisp40mRNA及蛋白表达明显增加(p 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  大肠杆菌发酵罐噬菌体污染的原因及预防措施！ 大肠杆菌发酵罐是生物工程领域中常用的设备之一，主要用于生产各种生物制品，如抗生素、疫苗等。然而，在发酵过程中，如果受到噬菌体污染，将会对生产过程和产品质量产生严重影响。因此，了解大肠杆菌发酵罐噬菌体污染的原因、危害及措施对于保障生产安全和产品质量具有重要意义。 一、大肠杆菌发酵罐噬菌体污染的原因 原料污染：大肠杆菌发酵罐的原料中可能含有噬菌体，这些噬菌体在原料中繁殖并进入发酵罐，导致发酵过程受到污染。 设备污染：大肠杆菌发酵罐在使用过程中，如果设备清洗不彻底或存在缺陷，噬菌体可能会在设备表面繁殖并进入发酵液中，导致污染。 操作不当：在操作过程中，如果操作人员没有严格遵守操作规程，如没有及时更换过滤器、没有定期清洗发酵罐等，都可能导致噬菌体污染。 二、大肠杆菌发酵罐噬菌体污染的危害 影响产品质量：噬菌体污染会导致大肠杆菌发酵过程中产生异常代谢产物，从而影响产品的质量和稳定性。 降低生产效率：噬菌体污染会导致发酵过程受到干扰，发酵周期延长，生产效率降低。 增加生产成本：为了消除噬菌体污染，需要进行额外的清洗、消毒等操作，增加了生产成本。 对人体健康造成威胁：如果产品中含有噬菌体，将会对人体健康造成威胁。 三、大肠杆菌发酵罐噬菌体污染的措施 加强原料管理：在采购原料时，应选择信誉良好的供应商，确保原料中不含有噬菌体。同时，对原料进行严格的检验和筛选，确保原料质量符合要求。 严格设备清洗和消毒：在设备使用前和使用后，应进行严格的清洗和消毒操作。采化学消毒剂、高压蒸汽灭菌等方法对设备进行彻底消毒，确保设备表面无噬菌体残留。 规范操作流程：制定并执行严格的操作规程，确保操作人员遵守操作规程。定期对过滤器进行更换和清洗，定期清洗发酵罐等设备，以减少噬菌体污染的风险。 加强监控和检测：定期对发酵液进行检测和分析，及时发现并处理噬菌体污染。采用灵敏度高的检测方法，如PCR等方法对发酵液中的噬菌体进行检测和鉴定。 建立应急预案：针对可能出现的噬菌体污染情况，建立应急预案并进行演练。一旦发现噬菌体污染，应立即采取措施进行隔离和处理，防止污染扩散。 提高员工素质：加强员工培训和教育，提高员工对噬菌体污染的认识和防范意识。通过培训和教育，使员工掌握正确的操作方法和应对措施，减少人为因素导致的噬菌体污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞的培养操作规程！ 一、背景 NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞是一种人经典小细胞肺癌细胞系，来源于一位小细胞肺癌患者的胸腔积液。这种细胞系具有上皮细胞样的形态，并且贴壁生长。NCI-H1688细胞系被广泛用于生物医学研究，特别是小细胞肺癌的研究。 首先，NCI-H1688细胞系可用于模拟小细胞肺癌在体内的生物学行为。通过体外培养这些细胞，研究人员可以观察它们的生长特性、细胞周期、细胞凋亡等过程，从而深入了解小细胞肺癌的发病机制。 其次，NCI-H1688细胞系还可用于药物筛选和治疗方法的研究。研究人员可以使用这些细胞来测试新药物对小细胞肺癌细胞的细胞毒性、抗增殖作用或诱导凋亡的能力，从而为临床治疗提供药物选择和剂。 二、NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞培养操作 1)复苏NCI-H1688细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NCI-H1688细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)NCI-H1688细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞可以用于小细胞肺癌的综合治疗及预后因素研究： MicroRNA-150对人小细胞肺癌细胞系生物学表型的影响背景和目的：通过检测小细胞肺癌患者术后标本中发现microRNA-150表达水平可直接影响总体生存时间和无进展生存时间,是SCLC患者预后的独立因素。本实验旨在研究miR-150高表达在体外对于肺癌细胞系的表型的影响。 材料与方法：采用化学方法合成成熟的miR-150寡核苷酸模拟物,以lipofectamine2000瞬时转染小细胞肺癌细胞系NCI-H446和NCI-H1688。转染后48小时,采用real-time RT-PCR技术测定miR-150在各细胞系中的表达水平。转染后24小时,通过MTS法绘制各细胞系的增殖曲线；采用transwell模型及预铺matrigel的transwell模型分别进行迁移、侵袭实验；采用PI(propidium iodide)染色法,流式细胞技术分析细胞周期分布。转染后24小时,以顺铂处理细胞24小时,之后采用Annexin-FITC/PI双染色,流式细胞技术分析细胞凋亡。构建稳定高表达miR-150的H446、H1688细胞系,按照相同方法检测增殖能力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期分布和细胞凋亡。 研究结果：转染后48小时,NCI-H446和NCI-H1688细胞中miR-150的表达水平均显著上调。NCI-H446、NCI-H1688稳转细胞较对照miR-150表达水平显著上调。在体外迁移实验中,miR-150高表达的NCI-H446细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为104±3、170±4,miR-150高表达的NCI-H1688细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为71±2、120±3,差异有统计学意义：侵袭试验中,miR-150高表达的NCI-H446细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为44±3、84±2,miR-150高表达的NCI-H1688细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为35±2、60±3,差异有统计学意义；而miR-150高表达对NCI-H446和NCI-H1688细胞的增殖、细胞周期分布以及顺铂诱导的细胞凋亡均无显著影响。结论：miR-150可能通过抑制肺癌细胞的迁移和侵袭能力而在小细胞肺癌患者中发挥保护性作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     标准绵羊血清(碳吸附过滤)的知识与应用研究！ 一、背景 标准绵羊血清(碳吸附过滤)是绵羊血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。 标准绵羊血清(碳吸附过滤)经无菌采集、批量混合，最终过3次0．1um过滤分装而成在经过生物碳吸附补体等有害物质。标准绵羊血清(碳吸附过滤)适合于单抗研制、较常规的原代和传代细胞培养、规模化培养的疫苗生产。 碳吸附过滤根据吸附过程中，活性炭分子和污染物分子之间作用力的不同，可将吸附分为两大类;物理吸附和化学吸附(又称活性吸附)。在吸附过程中，当活性炭分子和污染物分子之间的作用力是范德华力(或静电引力)时称为物理吸附;当活性炭分子和污染物分子之间的作用力是化学键时称为化学吸附。 物理吸附的吸附强度主要与活性炭的物理性质有关，与活性炭的化学性质基本无关。由于范德华力较弱，对污染物分子的结构影响不大，这种力与分子间内聚力一样，故可把物理吸附类比为凝聚现象。物理吸附时污染物的化学性质仍然保持不变。 碳吸附型血清是一款低水平类固醇类的血清产品，通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等，该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中对于那些需要这些分子的细胞培养，可能降低细胞生长性能。 二、应用 用于Lnc-SEMT促进绵羊肌肉分化生成的功能研究： 通过高通量测序的手段筛选到一个的可以促进绵羊肌肉细胞分化,促进成肌生成的LncRNA分子(命名为Lnc-SEMT),试验分析发现它对骨髂肌发育具有重要调控作用.该分子的研究为阐明动物肌细胞的增殖、分化的分子机制具有重要意义,并可为肉羊分子辅助育种和开发新型的促生长制剂提供科学依据和技术支持。 1、通过对胚胎期90口和120日龄绵羊背最长肌样品进行高通量测序,共计得到1114个lncRNA,其中466个lncRNA差异表达,而466个差异表达的lncRNA中,其中157个lncRNA上调,309个lncRNA下调。 2、通过对测序得到的1114个lncRNA进行芯片验证,发现有867个预测的lncRNA存在,其中有119个lncRNA的表达上调,对这119个lncRNA进行定量筛选后,得到了一个在骨骼肌组织中特异性高表达的上调LncRNA(命名为Lnc-SEMT)。 3、通过检测绵羊不同生长时期的Lnc-SEMT表达水平发现,在胚胎期120日龄时,其表达量最高,出生后逐渐降低,成年后表达水平变化不大。 4、通过检测绵羊成肌细胞生长分化过程中的lncRNA表达量变化,在成肌细胞分化0-5天内,随着成肌细胞的生长分化,MYOG和MYOD基因表达水平也随着升高。 5、构建了Lnc-SEMT的高表达和干扰载体,分别转染到绵羊成肌细胞,通过DAPI和MyHC试验分析,结果表明随着成肌细胞分化过程中Lnc-SEMT的过表达和干扰,MYOG,MYOD等基因随着Lnc-SEMT的变化而变化。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     如何预防保健食品微生物的污染及生产安全？ 百欧博伟生物：保健食品生产安全是确保产品品质和消费者健康的关键环节。在生产过程中，预防微生物污染是至关重要的。 一、确保保健食品生产安全的重要性保健食品作为满足消费者特殊健康需求的食品，其安全性和有效性直接关系到消费者的健康。生产安全不仅要求产品无毒无害，还要确保产品中的营养成分和功效成分的稳定性和活性。因此，保健食品生产企业必须高度重视生产安全，采取有效措施确保产品质量和消费者安全。 二、预防微生物污染的措施 1、严格控制原料质量 原料是保健食品生产的基础，其质量直接关系到产品的安全。企业应建立严格的原料采购和验收制度，确保原料来源可靠、质量稳定。同时，对原料进行微生物检测，确保符合生产要求。 2、优化生产环境 生产环境是影响产品安全的重要因素。企业应确保生产车间符合卫生要求，保持清洁、干燥、通风良好。同时，定期使用奥克-泰士高效消毒剂对生产车间进行消毒处理，防止微生物滋生。 3、严格执行生产工艺 生产工艺是确保产品安全的关键环节。企业应制定科学的生产工艺流程，确保生产过程中的温度、湿度、时间等参数控制在适宜范围内。同时，加强生产过程中的监控和检测，确保产品质量稳定。 4、加强人员培训和管理 人员是生产过程中的关键因素。企业应加强对员工的培训和管理，提高员工的卫生意识和操作技能。同时，建立严格的卫生管理制度，规范员工的行为，防止微生物污染的发生。 5、严格控制包装和储存环节 包装和储存环节是影响产品安全的重要环节。企业应选择符合卫生要求的包装材料，确保产品在包装过程中不受污染。同时，建立完善的储存和运输制度，确保产品在储存和运输过程中保持干燥、清洁、防潮、防霉变。 6、定期进行微生物检测和评估 为了确保保健食品生产安全，企业应定期进行微生物检测和评估。通过对生产过程中的各个环节进行微生物检测，及时发现并处理微生物污染问题。同时，根据检测结果对生产工艺和环境进行调整和改进，不断提高产品的安全性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    大鼠中枢神经细胞的复苏与传代及冻存实验步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133071 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：B35 细胞名称：B35大鼠中枢神经细胞产品类别：大鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS细胞形态：上皮细胞样用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 三、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 四、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 五、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，1）对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4.将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含8ml完全培养基的新瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml完全培养基新瓶中。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液 ，混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   稻生黄单胞菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 稻生黄单胞菌是Xanthomonas属的微生物，原产地为中国。在NA培养基上，菌落圆形，黄色，略带粘稠，表面光滑，边缘整齐。主要用途为研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-25242 规格：培养物 拉丁属名：Xanthomonas Oryzae Pv.Oryzae 中文名称：稻生黄单胞菌拉丁属名：Xanthomonas种名加词：oryzae pv.oryzae (Ishiyama)收藏时间*：2007-10-25来源历史：湖北林科院转原产国：中国资源归类编码：15131127101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产生物危害程度：四类寄主中文名称：水稻致病对象：植物分离基物：水稻病叶采集具体地点：华中农业大学植病教研室水稻田培养基信息：培养基编号: 33 培养基名称: LB培养基培养温度：28资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：CCTCC AB 91123 Xanthomonas Oryzae 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：（1）蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。（2）糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅胶保存法;磁珠保存法;麸皮保存法;纸片(滤纸)保存法。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   微生物实验室常用的灭菌方法之湿热灭菌法！ 百欧博伟生物：常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、气体灭菌法、辐射灭菌法和过滤除菌法。可根据被灭菌物品的特性采用一种或多种方法组合灭菌。只要产品允许，应尽可能选用最终灭菌法（即产品分装至包装容器后再灭菌）灭菌。若产品不适合采用最终灭菌法，可选用过滤除菌法或无菌生产工艺达到无菌保证要求，只要可能，应对非最终灭菌的产品作补充性灭菌处理（如流通蒸汽灭菌）。  湿热灭菌法     本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋 白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。该法灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品，均可用本法灭菌。流通蒸汽不能完全杀灭细菌孢子，一般可作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。     湿热灭菌条件通常采用121℃*15min、121℃*15min或116℃*40min的程序，也可采用其他温度和时间参数。总之，必须保证对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，其SAL应    采用湿热灭菌时，被灭菌物品应有适当的包装和装载方式，不能排列过密，以保证灭菌的有效性和均一性。     湿热灭菌工艺验证时，应进行热分布试验、热穿透试验和生物指示剂验证试验。以确定灭菌柜空载及不同装载时腔室中的热分布状况及可能存在的冷点；在空载条件下，确认121℃时腔室各点的温度差值应 1、热分布试验的操作：空载状态下的热分布试验： ①整个灭菌腔室内的温度探头应均匀分布，将水平和垂直区均覆盖在内； ②说明温度探头在腔室内的数量及位置，并有图示； ③在排水口处，在靠近设备本身的温度传感/控制器的位置，应再放置一支探头； ④在灭菌温度稳定期，各处温度应基本保持一致（如各点之间的温度差在1℃范围内）； ⑤重复试验至少3次，以证明在该工艺条件下的温度均一性、重现性、并且与规定标准相符； ⑥每种装载方式下的热分布试验； ⑦在产品容器内以及腔室均匀放置测温探头以确定在装载状态下升温缓慢的位置。此试验应在最大和最小装载方式下分别进行。     测定不同装载方式对产品的热力学效果的影响，通过实验应得到以下参数：  ①保温阶段的最高和最低温度（温度范围）及平均温度； ②最小和最大F。值； ③保温时间。复试验装载3次，以证明在该工艺条件下的温度均一性、重现性、并且与规定标准相符。  2、热穿透试验： 通过在产品容器内均匀分布测温探头以确定在灭菌时相应装载方式下的冷点。应分别在最大和最小装载方式下进行此试验，以确定不同装载方式对被灭菌物品的热力学效果的影响，通过实验应能获得如下数据：各点间的最大和最低温度（温度范围）保温阶段各点的平均温度、各点的最小及最大F。值、以及各点的保温时间。     通过热穿透试验应达到以下目的： ①测试数据应证明，在灭菌保温阶段整个腔室内各容器 内的温度应不超过士1℃，各容器内温度之间的最大温差应不超过2℃； ②根据灭菌参数确定合适的产品灭菌程序； ③至少连续运行3次，以确保设定灭菌程序的稳定性和可靠性。     对于肠外用大输液产品及高黏性的液体产品，必须对容器内的冷点进行测试。可在容器内布置2—3个温度探头（插在不同的深度位置）来获得此方面的数据，对旋转灭菌器可以不用考虑容器内的冷点。     用相同的方法对于干热灭菌设备进行验证试验，但在保温期间各点间的温度差较湿热的要大，如在强制对流式或隧道式干热灭菌条件下，各点间温差会达到士15℃。另外，与湿热灭菌相比，干热灭菌设备内不同类别的装载物及其装载方式，对热穿透效果的影响要大得多。   北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  丝瓜枯萎病菌的病原特征与流行规律及防治方法！ 一、知识背景 丝瓜枯萎病是由尖镰孢菌丝瓜专化型引起的、发生在丝瓜的病害。苗期发病子叶先变黄，部或茎基部变褐溢缩成立枯状；成株期症状依发病早迟可分为由初侵染引起的枯萎病和由再浸染引起的枯萎病。  高温有利于丝瓜枯萎病的发生和扩展，空气相对湿度90%以上易发病。秧苗老化、连作、有机肥不腐熟上壤过分干旱或质地黏重的酸性土，是引起该病发生的主要条件。 丝瓜枯萎病的防治方法主要有选用抗（耐）病品种和早熟品种，播种前进行种子消毒或包衣，实行轮作，施用酵素菌沤制的堆肥或充分腐熟的有机肥，采用营养钵育苗移栽时选用化学药剂灌穴等。  二、病原特征 丝瓜枯萎病病原为尖镰孢菌丝瓜专化型（Fusarium oxysporum (Schl.) f. Sp. melonis (Leachet Currenee) Snyderet Hansen），属半知菌亚门真菌。瓜蔓上大型分生孢子梭形或镰刀型，无色透明，两端渐尖，顶细胞圆锥形，有时略呈钩状，基部倒圆锥截形，有足细胞，具横隔0～3个或1～3个，大小1个隔膜的（12.5～32.5）微米×（3.75～6.25）微米，两个隔膜的（21.25～32.5）微米×（5.0～7.5）微米，三个隔膜的（27.5～45.0）微米×（5.5～10.0）微米；小型分生孢子多生于气生菌丝中，椭圆形至近梭形或卵形，无色透明，大小（7.5～20.0）微米×（2.5～5.0）微米。  三、为害症状 苗期：苗期发病子叶先变黄，部或茎基部变褐溢缩成立枯状。  成株期：成株期症状依发病早迟可分为两种： 1、由初侵染引起的枯萎病主要症状：田间发病较早的植株为越冬病菌初侵染茎基部或根部引起，初发病茎基部症状不明显或呈水渍状淡褐色斑，此时植株的叶片自下向上开始萎惹，中午前后萎蔫更为明显，早晚可恢复常态，数日后不再恢复，逐渐枯萎，发病后期植株茎基部稍缩，常纵裂，有时病部溢出琥珀色胶质物，纵部病茎可见维管束变褐色。  2、由再浸染引起的枯萎病主要症状：田间发病较迟的植株，由病菌再侵染引起，初发病茎部症状不明显，病部以上叶片陆续萎蕉，拔起植株茎基部及根部不变褐色而病健交界处以下维管束不变褐色。  四、侵染循环 病菌主要以菌丝体、厚垣孢子和拟菌核在土壤和未腐熟的带菌粪肥及病残体中越冬。种子也可带菌。病害在田间主要依靠灌溉水、风雨和土壤耕作传播。地下害虫和土壤中的线虫也可带菌，且危害时造成的伤口为病菌侵入创造了条件。带菌种子可远距离传播。带菌粪肥是病田扩大的主要原因。病菌多由根部伤口侵入，也可由根毛顶端细胞间隙侵入，后进入维管束，在导管内发育。  五、流行规律 气候条件与发病：病原发育和侵染适温24～25℃，高温有利于该病的发生和扩展，空气相对湿度90%以上易发病。  栽培管理与发病：秧苗老化、连作、有机肥不腐熟上壤过分干旱或质地黏重的酸性土，是引起丝瓜枯萎病发生的主要条件。  六、防治方法 （一）农业防治 1、选用抗（耐）病品种和早熟品种。  2、与非瓜类作物进行5年以上轮作。  3、施用酵素菌沤制的堆肥或充分腐熟的有机肥或在土壤中添加0.5%的S-H添加剂（稻壳、蔗渣、虾壳粉等加尿素、过磷酸钙、硝酸钾制成），可减少枯萎病发生。对酸性土壤应施用消石灰，每667平方米/100～150千克把土壤pH调到中性。  4、丝瓜枯萎病发生重的地区或田块，提倡选用云南黑籽南瓜或南砧1号做砧木，用适合当地的优良丝瓜品种做接穗进行嫁接。嫁接苗对枯萎病防效达90%以上。采用靠接或插接法，进行嫁接后置于塑料棚中保温、保湿，白天控温28℃，夜间15℃，相对湿度90%左右，经半个月成活后，转为正常管理。  （二）化学防治 1、种子消毒或包衣：①浸种种子可用40%福尔马林150倍液浸种30分钟，捞出后用清水冲洗干净再催芽播种；也可用50%甲基硫菌灵或多菌灵可湿性粉剂浸种30～40分钟。②用种子重量0.2～0.3%的40%拌种双粉荆或50%多菌灵可湿性粉剂拌种。③种子包衣，用0.3～0.5%的种衣剂9号或10号进行包衣。  2、药剂防治：采用营养钵育苗，移栽时用双多悬浮剂（西瓜重茬剂）300～350倍液灌穴，每穴0.5千克，每667平方米用药1千克；对直播的在播种和丝瓜5～6片真叶时分别灌双多悬浮剂600～700倍液，每穴灌对好的药液0.5千克，每667平方米两次用药1千克。坐瓜后发病前或发病初期，除采用上述药剂外，还可选用10%双效灵水剂200倍液或60%防霉宝超微可湿性粉剂600倍液、50%苯菌灵可湿性粉剂1500倍液、20%甲基立枯磷乳油1000倍液、12.5%增效多菌灵浓可溶剂200～300倍液、60%琥乙膦铝可湿性粉剂350倍液灌根，每株灌对好的药液100毫升，隔10天再灌一次，连续防治2～3次。对丝瓜枯萎病一定要早防、早治，否则效果不明显。此外，于定植后开始喷洒液体法生产的细胞分裂素500～600倍液，隔7～10天1次，共喷3～4次，可明显提高抗性，如能加入0.2%磷酸二氢钾或0.5%尿素或喷洒喷施宝每毫升加水11～12升、植宝素7500倍液、惠满丰活性液肥，每667平方米400～500毫升，对水400～500倍液，也可喷洒促丰宝600～800倍液。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   微生物的诱变和突变回复试验原理与操作步骤！ 一、实验原理 紫外线是一种最常用的物理诱变因素，它的主要作用是使DNA双链中的两个相邻的嘧啶核苷酸形成二聚体，并阻碍双链的解开和复制，从而引起基因突变，最终导致表形的变化，如产生色素能力的消失，丧失合成某种氨基酸的能力，以及抗药性的变化等。紫外线照射后造成的DNA损伤，一般在可见光照射下，由于光激活酶的作用，可将嘧啶二聚体解开，使其恢复正常，这称为光复活作用。为避免光复活，当用紫外线进行诱变处理时及处理后的操作都应在红光下进行，并且应将微生物在黑暗的条件下进行培养。 亚硝基胍（NTG）是一种挥发性的烷化剂，具有很强的诱变作用，它的作用机制主要是引起NTGDNA链中G： C——A：T的转换，它的杀菌作用虽很低，但在存活菌中突变率很高。故成为超级诱变剂。 艾姆氏试验的基本原理是利用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型（his-）菌株发生回复突变性能来检测物质的诱变及致癌性能，此菌株在不含组氨酸的基本培养基上不能生长，但遇有诱变性能的物质后可发生回复突变，因而在基本培养基上也能生长，形成肉眼可见的菌落，因此可以在短时间内，根据回复突变发生的频率来判定该物质是否具有诱变或致癌的性能。由于有些被检测的致癌剂需要哺乳动物肝细胞中的羟化酶系统激活后方能显示致突变物的活性，所以在进行试验时还需要加入哺乳动物肝细胞内微粒体的酶作为体外活化系统（S-9混合液），提高阳性物的测出率。所以艾姆氏试验也称鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体试验。 二、实验步骤 （一）紫外线的诱变作用 1、菌悬液的准备 （1）将1299菌株转接完全培养基斜面，32℃培养24小时。 （2）自斜面取一接种环菌接与20ml/250 ml三角瓶的肉汤培养基中，32℃培养18小时。 （3）取培养液离心3000 rpm离心15分钟，弃去上清液，用生理盐水洗菌体两次，再加适量的生理盐水。显微镜直接计数法，使菌体浓度为108个/ml。 2、诱变处理 （1）吸取上述无菌液10mL于无菌平皿中（皿内放一搅拌子，下为磁力搅拌器），放在15W紫外灯下,距离28.5cm照射60秒，取出放在红灯下，将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法，具体可按估计的存活率进行稀释。 （2）取各稀释率下的菌液0.1 ml接于肉汤培养基中，用黑纸包好，32℃培养48小时。 3、淘汰野生型 （1）取肉汤培养基3000 rpm离心15分钟，以生理盐水洗涤两次，加到5mL无氮培养基饥饿培养4~6小时。 （2）加入与无氮培养基等量的二倍氮培养基，培养3~4小时再加青霉素，使青霉素的最终浓度为200单位/毫升。放置3小时。 （3）取上述菌液0.1毫升涂于完全培养基平板上，32℃培养8小时。 4、营养缺陷型菌株的检出 （1）准备完全培养基和基本培养基平板各三个。将划有若干小格并编号的圆形纸贴到平板的背面。 （2）用无菌牙签选取菌落，分别接种于基本培养基和完全培养基的相应位置，32℃培养24小时。 （3）在完全培养基上生长而在基本培养基上不生长的菌落，转接在完全培养基斜面上，32℃培养24~48小时。 5、营养缺陷型类型的鉴定 （1）营养缺陷型分为氨基酸、核酸碱基、维生素三大类物质。 （2）将待测菌株制成细胞悬液，浓度为108个/ml。 （3）制作基本培养基混菌平板。 （4）待冷凝后分为三个区，标明氨基酸，碱基，维生素，用接种针将相应物质放在各区中间。 （5）37℃培养24小时，观察生长情况，哪个区生长，就说明缺陷型菌株需要哪类物质。 6、营养缺陷型具体营养要求的鉴定 （1）将待测菌株制成细胞悬液，浓度为108个/ ml。 （2）制作基本培养基混菌平板。 （3）对于具体氨基酸缺陷型的鉴定，可先将各种氨基酸分为6组，如表1，将待测平皿分为六区，分别将6组氨基酸点在六区中央位置，30℃培养24小时，观察生长谱（表2）即可确定具体所需要的营养物质。 （4）核酸碱基缺陷型的鉴定（只做4种物质），将待测平皿分为四区，在中央位置分别点上，黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤，次黄嘌呤，37℃培养24小时，观察生长情况，即可确定具体所需营养物质。 7、复测 经上述步骤确定的各菌株的营养要求，再以所确定的纯一的营养物质所配制的补充培养基复测一次，如果在补充培养基上生长，在对照的基本培养上不生长，则该菌无疑是这种物质的缺陷型。 （二）NTG对谷氨酸棒杆菌1299的诱变效应 1、制备含菌平板 （1）将活化的斜面菌种挑一环接种于5ml的肉汤培养基中，37℃培养过夜。 （2）次日，按5％接种量取上述菌液于肉汤培养基中，37℃培养6－7h。 （3）取0.2mL菌液于完全培养基平板上，用无菌涂棒将菌液均匀的涂满整个平板表面，倒置培养2h。 2、诱变处理 在上述含菌平板的中央和其他部位放少许NTG结晶，然后将培养皿倒置于37℃恒温箱中，培养24h。 3、增殖培养 放有NTG药物的周围有一透明的抑菌圈，紧靠抑菌圈有一个生长较密集的生长圈，用接种环挑取该处菌苔于装有20mL肉汤培养生物科学与工程系微生物学教学研究室基的三角瓶中，于37℃恒温箱中，培养过夜，使诱变后的突变体进行繁殖，以增加菌数。 4、淘汰野生型 （1）培养菌液：取增殖后的菌液5mL于无菌离心管中，3500r/min离心10min，倒去上清夜，再用生理盐水洗涤两次，离心，去上清液后的约1/10菌液接种到5mL无氮基本培养基中培养12h。 （2）加青霉素：取上述菌液5mL加到5mL高渗培养液的三角瓶中，再加入青霉素，使最终浓度约为500单位/mL，再置于37℃恒温箱中继续培养6h，离心，弃去上清夜，重新悬浮于5mL无氮基本培养基中置冰箱保存。 （3）涂布平板：取上述培养液的原液和10－1、10－2的稀释液各0.1mL，分别涂布于完全培养基平板上，置于37℃恒温箱中继续培养24h，然后选取合适的平板（约长有50－200个菌落）用作营养缺陷型的检查（如无合适平板，可取保存于冰箱中经青霉素处理过的菌液再行稀释、涂布）。 5、缺陷型的检出 同紫外线诱变处理的缺陷型的检出。 (三)艾姆氏试验检测突变回复 1、组氨酸营养缺陷型(his+)鉴定 基于菌株只能在含组氨酸的培养基上生长、无组氨酸的培养基上不能生长的原因,将下层培养基融化,冷却至50℃左右,倒入4个培养皿内,冷凝后倒置过夜制成底层平板。从测试菌株TA100及对照菌株斜面各取一环分别接入肉膏蛋白胨培养液内，37℃，培养16~24h后离心，取菌体并用生理盐水洗涤3次，然后制成菌悬液（浓度1~2×109/mL）。取氯化钠琼脂融化并冷却至45℃左右，保温，各管加0.1mL菌液,每个菌株做两管,迅速摇匀并倒在底层平板上铺匀.在各培养皿背面用记号比标出1,2,3三点.翻转平皿,打开皿盖,在“1”处加微量的组氨酸颗粒,“2”处滴加组氨酸-生物素混合液1小滴,“3”处不加作为对照。37℃，培养2天，观察结果，要求结果为检测菌株为组氨酸-生物素缺陷型。 2、亚硝基胍致突变效应的检测 （1）自发回复突变对照 将下层培养基融化后倒入平皿，制成底层平板。上层培养基融化后冷至45℃左右，加0.1mL菌悬液、0.5mLS-9混合液,不加待测样品液。经37℃培养48h后，观察在下层平板上长出的菌落表示为该菌自发回复突变后生成。记录并算出每组平皿菌落平均数/皿，以Rc表示。 突变率（MR）=每皿诱变菌落均数（Rt）/每皿自发回复突变菌落均数（Rc） 只有突变率〉2才认为样品属艾姆氏试验阳性。当试验样品浓度达到500μg/皿仍未能出现阳性结果时，便可报告该待测样品属艾姆氏试验阴性。 对于阳性结果的样品，其试验结果尚要经统计分析，若计算剂量与回变菌落之间有可重复的相关系数，经相关显著性检验，最后才能确认为阳性。 （2）阴性对照 为说明样品本身确为艾姆氏试验阳性而与配制样品液所用的溶剂无关，所以阴性对照是采用配制样品时的溶剂。 3、亚硝基胍致突变效应的检测 取测试菌珠1管接肉膏培养基活化，37℃，培养16~24h后离心，将菌体用生理盐水洗涤3次，最后配成浓度为1~2×109/mL菌悬液备用.融化下层培养基并倒入6套平皿制成平板,用记号笔作好标记.做1μg、5μg、10μg三种浓度,每浓度每菌重复两皿。取上层培养基6管融化并冷却至45℃左右，标记各管1~6号。每管加TA100菌悬液0.1mL、0.5mLS-9混合液到1~6管.迅速摇匀后,倒在底层平板上,待凝固后在每皿中央放置1片直径为6mm无菌滤纸片。在1、2各皿的滤纸上滴加浓度为50μg /mL的NTG0.02mL,在3、4各皿滤纸滴加250μg NTG0.02mL,在5、6各皿滤纸滴加500μg NTG0.02mL,即终浓度为1μg、5μg、10μg。37℃，培养48h观察结果。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  人心肌成纤维细胞的性质与用途及生产工艺！ 人心肌成纤维细胞分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成，非心肌细胞占细胞总数的70%，其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。 一、细胞简介平台编号：Bio-73541 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：人心肌成纤维细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏中，心肌成纤维细胞约占正常心肌组织细胞总数的60%-70%，是心脏中非心肌细胞的主要组成部分，广泛存在于心脏组织中，包围心肌细胞，连接心肌细胞间质，与缺血性心脏病、炎症、肥大、梗死等病理状态密切相关。 三、细胞特性1）组织来源于人的正常心脏组织。2）细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、应用人心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成，当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子。人心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中最常见的细胞，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质。 七、验收细胞注意事项1、收到人心肌成纤维细胞HCFCs细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。2、收到人心肌成纤维细胞HCFCs细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。3、收到人心肌成纤维细胞HCFCs细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。4、收到人心肌成纤维细胞HCFCs细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。6、24小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 15538菊糖芽孢乳杆菌冻干管打管说明书！ 菊糖芽孢乳杆菌，革兰氏染色呈阳性，以周生鞭毛运动。芽孢产生稀少，椭圆形，中生，膨大。兼性厌氧，但在大气中生长贫乏。糖类同型发酵产D-乳酸。不产接触酶和氧化酶。最适温度35℃，从鸡饲料和土壤中分离到，也可能广泛分布于环境中。 一、菌种简介平台编号：Bio-53073 提供形式：冻干物拉丁属名：Sporolactobacillus Inulinus 中文名称：菊糖芽孢乳杆菌属名：Sporolactobacillus种名加词：inulinus来源历史：←DSMZ←K. Kitahara, EU其他编号：AS1.3758= ATCC15538培养基编号：54，厌氧培养温度：37模式菌株：模式菌株主要用途：研究  生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：家禽饲料培养基：酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸镁 0.2 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三铵 2.0 g，磷酸氢二钾 2.0 g，硫酸锰 0.05 g，吐温80  1.0 g，蒸馏水 1000mL。pH6.2±0.2。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：模式菌株、生产D-乳酸注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二铵 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。请勿长期置于室温。  四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况，请在收到菌种后2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3 滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。3、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。4、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    MHCC-97L人低转移肝癌细胞的培养操作规程！ 一、背景 MHCC-97L人低转移肝癌细胞是一种人低转移肝癌细胞系，来源于中山医院。这种细胞系具有贴壁上皮样的生长特性，生长速度较慢。其细胞形态为上皮细胞样，细胞代数一般在10代以内。 在细胞培养中，MHCC-97L细胞需要使用特定的培养基，通常是含有90%DMEM和10%FBS（胎牛血清）的培养基，同时还需要添加PS（青霉素-链霉素）以防止细菌感染。细胞传代时，一般使用胰酶进行消化，传代比例为1:2-1:4，具体取决于细胞生长速度和密度。 MHCC-97L人低转移肝癌细胞系具有一定的科研价值，可以用于研究肝癌的发病机制、药物筛选以及肝癌治疗等方面的研究。同时，该细胞系也可以作为一种实验工具，用于评估不同治疗策略对肝癌细胞的影响和效果。 在使用MHCC-97L人低转移肝癌细胞系时，需要注意细胞的培养条件、传代方法和细胞保存等方面的问题，以确保细胞的生长状态和实验结果的准确性。此外，还需要遵守相关的实验室安全规定和操作规程，以保证科研人员的人身安全和实验室的正常运行。 二、MHCC-97L人低转移肝癌细胞系培养操作 1)复苏MHCC-97L人低转移肝癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MHCC-97L人低转移肝癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MHCC-97L人低转移肝癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MHCC-97L人低转移肝癌细胞可以用于慢病毒介导的STAT1基因过表达和STAT1基因沉默在肝癌MHCC97L细胞中的应用： 探索慢病毒载体介导下STAT1基因在肝癌MHCC97L细胞中过表达和STAT1基因沉默后在MHCC97L细胞中表达量的变化及其分子生物学机制,从而探明STAT1基因是否为影响肝癌细胞生物学效应的靶向基因。 研究方法： ①根据人类STAT1基因的mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建过表达载体,然后转化至感受态DH5α细胞进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装产生慢病毒,再将慢病毒载体转染至MHCC-97L人低转移肝癌细胞系,荧光定量PCR及Westernblot检测MHCC97L原始细胞株、MHCC97L-statl稳转细胞株中STAT1的表达情况,确定STAT1过表达的有效性。 ②设计shRNA干扰序列3对及对照序列1对,构建3个shRNA干扰慢病毒载体,并转化至感受态细胞DH5α行测序验证。脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,侵染MHCC-97L人低转移肝癌细胞系,荧光定量PCR及Western blot检测MHCC-97L人低转移肝癌细胞系、MHCC97-statl过表达细胞株、MHCC97-shSTATl干扰细胞株中STAT1的表达情况,明确STAT1干扰的可行性。 研究结果：STAT1基因过表达研究结果：①STAT1基因合成：通过人类基因组数据库STAT1mRNA序列,全基因合成STAT1基因(CDS区域序列)并基因测序验证成功；②过表达慢病毒颗粒的包装：脂质体介导下转染293T细胞成功,慢病毒侵染MHCC97L细胞,24h后荧光及可见光显微镜下观察细胞,可见大部分细胞发出荧光,侵染成功；③PCR法检测STAT1基因的表达：侵染48h后,相对于原始MHCC-97L人低转移肝癌细胞系,稳转细胞株MHCC97-statl的STAT1基因表达量提高了10938倍,差异具有统计学意义(P STAT1基因干扰沉默研究结果：①干扰慢病毒载体的构建和鉴定：shRNA干扰序列3对,另有对照序列1对连接入pLKO-1-EGFP-puro并基因测序验证成功；②干扰慢病毒颗粒的包装：脂质体介导下转染293T细胞成功,慢病毒侵染MHCC97L-STAT1细胞,24h后荧光及可见光显微镜下观察细胞,可见大部分细胞发出荧光,侵染成功；③PCR法检测STAT1基因的表达：侵染48h后,相对于原始MHCC-97L人低转移肝癌细胞系,pLKO-1-statl-shRNA-1和pLKO-1-statl-shRNA-2的干扰效果比较好,各自的干扰效率为81.4%和72.1%,差异具有统计学意义(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   常用杀灭和抑制微生物的化学方法有哪些？ 百欧博伟生物：能抑制、杀死微生物的化学因素种类较多，用途也相当广泛，主要可以分为表面消毒剂、防腐剂、化学治疗剂。 1、化学表面消毒剂 凡是用于杀死微生物的化学药品都称为化学消毒剂，种类较多，主要如下： （1）乙醇 杀菌机理是其脱水作用、溶解细胞膜脂和进人蛋白质的肽键空问结构，引起蛋白质变性。70%~75％是乙醇消毒的最佳浓度。主要用于物体的表面和皮肤的消毒。 （2）甲醛 杀菌机理是它能破坏蛋白质的氢键，并能与氨基结合，从而造成蛋白质变性。杀菌效果较好，对营养体和孢子都有作用。工厂和实验室常采用甲醛熏蒸进行空间消毒。 （3）来苏儿（2%煤酚皂） 石炭酸（苯酚）能使蛋白质变性，并能损伤细胞膜，因而是较好的消毒剂。石炭酸的水溶性较差，通常将它与皂液和煤油混合，增加其溶解度，这种混合液称为来苏儿。常用于物体表面、地面和皮肤等消毒。 （4）过氧化氢 3%的过氧化氢也是一种皮肤伤口消毒剂。杀菌机理是利用其氧化性使蛋白质活性基团被氧化而失活。 （5）过氧乙酸 是一种高效、速效、广谱和无毒的化学杀菌剂。0.001%浓度的过氧乙酸水溶液能在10min内杀死大肠杆菌。适用手塑料、玻璃制品、棉布、人造纤维等制品的消毒，也适用于果蔬和鸡蛋等食品表面的消毒。 （6）红汞 属于重金属，它能与蛋白质的巯基结合，使蛋白质变性失活。医学上常用于皮肤伤口的消毒。 （7）硝酸银 属重金属，能造成蛋白质变性沉淀。医学上用于皮肤和眼睛等部位的消毒。 （8）氯、次氯酸钠、漂白粉（次氛酸钙） 杀菌机理是它们的氧化性破坏细胞膜和酶蛋白的结构，从而造成菌体死亡。可用于环境消毒和空间消毒。 （9）二氧化氯杀菌能力强、效果持续时间长和用量省，尤其是水体经其消毒后，不会残留有毒物质。广泛用于生活用水和污水的消毒处理，也适用于食品加工和养殖业中的消毒、灭菌、防腐、保鲜、除臭和漂白等。 （10）碘酒2.5%的碘溶解于酒精中，可做皮肤消毒剂。其杀菌机理是利用碘与蛋白质中的酪氨酸发生卤化反应，而使蛋白质失活。 （11）新洁而灭 新洁而灭是季胺类，属阳离子表面活性剂亡。对微生物的营养细胞有杀灭作用，但对芽孢杆菌仅有抑制作用。它与菌体表面结合，破坏膜结构，并能使蛋白变性。其稀溶液对人体无刺激，不污染衣物，性质较稳定，易于保存，应用较广，以0.01%做创面消森，以0.1%做皮肤和器械等的消毒。 （12）龙胆紫（结晶紫染料） 结晶紫染料能与蛋白质的羧基结合，造成蛋白变性，达到杀菌的目的。2%～4%的结晶紫溶液也是较好的皮肤伤口消毒剂。 （13）硫磺粉 硫磺燃烧产生SO2，S02与水结合形成H2SO3，在菌体表面夺取氧成为H2SO4，从而致使菌体脱氧死亡。常用于厂区消毒。 2、防腐剂 防腐是利用物理和化学的手段，完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，防止食品等发生霉变的措施。此时，微生物并没有被杀灭，而只是妥到抑制。用于抑制体外微生物生长的化学药品称为防腐剂，实际上，小剂量的消毒剂也就是防腐剂。如酱油中的苯甲酸钠，饮料和化妆品中的山梨酸钠都是良好的防腐剂。 3、化学治疗剂 利用具高度选择毒力的化学物质来抑制宿主体内病原微生物的生长繁殖，甚至杀灭，达到治疗疾病的目的。主要有抗代谢类药物、抗生素和中草药等。 （1）抗代谢类药物  有些化合物在结构上与生物体所必需的代谢物很相似，以至于可以和特定的酶结合，从而阻碍酶的功能，干扰代谢的正常进行，这些物质称为抗代谢物。若用于疾病的治疗，可以称为抗代谢类药物。磺胺类药物是典型的抗代谢类药物 （2）抗生素 抗生素是许多生物的生命活动过程中产生的一类次级代谢产物或其人工衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或影响其他种类生物的生命活动。抗生素可通过抑制细胞壁的合成、改变细胞膜的通透性、抑制蛋白质或核酸的合成等反应机理抑制或杀死微生物。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物培养过程中存在的污染因素及预防方法！ 1、风速与风向  培养箱内的风速和风向对于保持温度的均一性以及避免污染都非常重要。一般来说，适当的风速和风向可以帮助培养箱内的温度保持均一，有利于微生物的正常生长。然而，当风速过大时，可能会导致培养基干裂，从而影响培养结果的准确性。另外，药典要求培养皿倒置培养，这是因为经过多次验证发现，当培养箱运行时的风向与培养皿盖的朝向不一致时，容易引入空气中的灰尘、杂菌等，从而污染培养物。因此，在使用培养箱的过程中，需要注意风速和风向的控制，并尽量与培养皿盖的朝向一致。 2、培养皿的密闭性 培养皿由平底和盖组成，一些微生物实验室常用的培养皿直径为90mm，采用顶盖封装。然而，由于不同厂家制造的培养皿的成型工艺和参数不同，平底和盖之间的间隙也存在差异。这些间隙虽然能够满足需氧型微生物对氧气的需求，但也增加了污染的可能性。经过实验证实，在同样的培养条件下，间隙大的培养皿比间隙小的培养皿更容易受到污染。此外，间隙的大小不同还会导致培养皿内培养基的水分蒸发不一致，从而影响培养结果数据的一致性。因此，在使用培养皿的过程中，需要选择质量可靠的培养皿，并注意平底和盖之间的间隙情况。 3、培养箱内的湿度 微生物生长需要一定的湿度条件。湿度对微生物生长的影响是通过影响微生物细胞内水分活度进而影响其新陈代谢来实现的。不同微生物的生长对湿度有一定的要求，一般来说，细菌最为敏感，酵母和霉菌次之。降低湿度会使微生物的水分活度降低，从而减慢其生长速度。因此，在微生物培养的过程中，需要保持适宜的温度和湿度，以有利于微生物的生长。培养箱内湿度的来源主要有培养基的水分散失、湿度自动调控系统以及培养箱所在的环境。因此，在使用培养箱的过程中，需要控制湿度，保持适宜的生长环境。 4、培养物溢洒 培养物溢洒是指含有生物危险物质的液体或固体物质意外与包装材料分离的过程。一旦发生生物危害物品的溢出，尤其是含有病原微生物的培养物的溢出时，会导致微生物的生长和繁殖，从而引起培养箱的污染。为了预防交叉污染，当发生培养物溢洒时，需要及时清理和消毒培养箱。应该使用有效的消毒剂对培养箱的内壁以及接触溢出物品的材料进行消毒或高压灭菌。此外，如果溢洒物中含有破碎的玻璃等材料，不得直接用手取走或弃置，应该使用硬纸板和镊子等工具处理，并将处理物放置在安全的废弃物容器中。最后，对清洁工具也需要进行消毒处理，以确保卫生安全。 5、自然环境污染 培养箱需要放置在洁净、干燥、通风良好的自然环境中。如果环境中空气洁净度不够高，容易滋生细菌、真菌和病毒等微生物，并通过平底和盖之间的间隙污染培养基，从而影响培养结果数据的准确性。因此，在使用培养箱的过程中，需要注意放置环境的卫生和通风状况，尽量避免自然环境的污染。 综上所述，微生物培养过程中存在着多种污染因素，这些因素可能会对实验结果产生影响或导致实验结果不准确。为了保证实验结果的准确性，需要在使用培养箱进行微生物培养时，注意控制风速和风向、选择合适的培养皿、控制湿度、避免培养物溢洒以及注意自然环境的卫生状况。只有这样，我们才能够获得可靠且准确的微生物培养结果。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    金黄色葡萄球菌的抗生素耐药性及其治疗方法！ 金黄色葡萄球菌是一种在环境中普遍存在的细菌，在人的皮肤表面和上呼吸道粘膜中很常见。 感染性疾病是全球人类死亡的第二重要原因；金黄色葡萄球菌（S. aureus）是一种非常常见的人类致病微生物，可引发多种传染病，例如皮肤和软组织感染，心内膜炎，骨髓炎，菌血症和致命性肺炎。此外，根据对抗生素的敏感性，金黄色葡萄球菌可分为对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）和对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）。近几十年来，由于细菌的进化和抗生素的滥用，金黄色葡萄球菌的耐药性在世界范围内，MRSA的感染已逐渐增加，MRSA的感染率也在增加，并且针对MRSA的临床抗感染治疗变得更加困难。越来越多的证据表明，金黄色葡萄球菌的耐药机制非常复杂，尤其是对于对多种抗生素具有耐药性的MRSA。因此，及时了解MRSA的耐药性并从分子水平阐明其耐药机制对于金黄色葡萄球菌感染的治疗具有重要意义。大量研究人员认为，对金黄色葡萄球菌的分子特征进行分析，可以为设计有效的预防和治疗措施引起的医院感染提供基础。金黄色葡萄球菌进一步演变金黄色葡萄球菌。本文综述了MSSA和MRSA的研究现状，内在抗药性和获得性抗药性的详细机制，抗MRSA抗生素的先进研究以及新型的MRSA治疗策略。金黄色葡萄球菌（S. aureus）是医院和社区感染的主要病原体之一，可引起许多传染病，例如轻度皮肤和软组织感染，感染性心内膜炎，骨髓炎，菌血症和致命性肺炎。金黄色葡萄球菌于1880年由外科医生亚历山大·奥格斯顿（Alexander Ogston）从溃疡疮患者中首次发现。金黄色葡萄球菌属于金黄色葡萄球菌类。革兰氏染色阳性，直径约0.8μm，需氧或厌氧显微镜下排列在“一串葡萄”中；并在37°C和pH7.4下最佳生长。血琼脂平板上的菌落厚而有光泽，呈圆形，直径为1〜2 mm。它们大多数是溶血的，在血琼脂平板上的菌落周围形成透明的溶血环。此外，金黄色葡萄球菌不形成孢子或鞭毛，但具有胶囊，可以产生金黄色颜料并分解甘露醇。此外，还发现在金黄色葡萄球菌中血浆凝固酶，乳糖发酵和脱氧核糖核酸酶的检测呈阳性。  耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） 弗莱明（Fleming）在1940年代发现了青霉素，并开创了用于感染治疗的抗生素时代。当时，由金黄色葡萄球菌引起的传染病得到了很好的控制，但是随着青霉素在1950年代的广泛使用，耐青霉素的金黄色葡萄球菌出现在诊所中。耐青霉素的金黄色葡萄球菌能产生青霉素酶，能水解青霉素的β-内酰胺环，导致对青霉素的耐药性。后来，科学家开发了一种新的耐青霉素酶的半合成青霉素，称为甲氧西林，它对β-内酰胺酶的水解具有耐药性。于1959年应用于诊所后，甲氧西林有效控制了耐青霉素的金黄色葡萄球菌的感染。然而，在使用甲氧西林仅两年后，1961年，英国科学家Jevons报道了MRSA菌株的分离。这种耐药性是由编码青霉素结合蛋白2a或2'（PBP2a或PBP2'）（mecA）的基因产生的，该基因已整合到对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌的染色体元件（SCCmec）中 。此外，MRSA已迅速成为在世界许多地方（包括欧洲，美国，北非，中东和东亚）发现的最常见的抗药性病原体。根据其原始来源，MRSA分为医院获得的MRSA（HA-MRSA）和社区获得的MRSA（CA-MRSA）。在中国，医院获得性MRSA的比例已达到50.4％。此外，根据美国疾病控制中心（CDC）的数据，MRSA感染的死亡率已超过获得性免疫缺陷综合症（AIDS），帕金森氏病和谋杀的死亡率。因此，对金黄色葡萄球菌分子特征的分析已成为全球公共卫生关注的焦点，可以帮助我们了解金黄色葡萄球菌的流行情况，监测金黄色葡萄球菌的进化。金黄色葡萄球菌，探索新的分子特征的金黄色葡萄球菌，和提供一种用于开发新的药物，以防止信息的金黄色葡萄球菌。  内在抗生素耐药性 金黄色葡萄球菌感染和多药耐药菌株的耐药率正在增加，使得临床抗感染治疗更加困难。内源性耐药机制主要包括三个方面。  1、外膜通透性 当细胞膜通透性降低时，细菌的能量代谢受到影响，因此药物吸收减少，导致耐药性。例如，金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类的耐药性是由膜通透性的降低引起的，最终导致药物摄入的减少。  2、外排系统 细菌的主动外排系统是1980年由Ball和McMurry在研究大肠杆菌对四环素的耐药性时发现的。之后，学者们对主动外排系统进行了许多实验，证实了主动外排系统是细菌的正常生理结构，并存在于敏感菌株中。当长时间被环境中的底物诱导时，外排系统编码基因被激活并表达，外排药物的能力大大增强，从而导致耐药性。活性药物外排系统在对多种药物的耐药性中发挥作用。金黄色葡萄球菌细胞膜上存在三种类型的多药泵蛋白：QacA，NorA和Smr。野口等认为QacA是MRSA中的重要因素。多药泵送蛋白都是质子驱动蛋白。也就是说，不是依靠ATP水解来释放能量，而是通过由H +在细胞膜两侧形成的电化学梯度进行材料交换。通常，这是一个可逆的过程，即H +从细胞外转移到细胞内，而细胞内有害物质（例如染料和抗菌药物）从细胞内部流到外部。Kristiansen等人的实验。也证明了主动外排系统在MRSA耐药性中的作用(图1C）。  3、β-内酰胺酶生产过多 β-内酰胺酶是一种催化各种β-内酰胺抗生素（包括碳青霉烯广谱抗生素等抗生素）水解的酶，由细菌染色体基因编码，并且可以转移。目前，研究表明，β-内酰胺类抗生素主要通过两种机制对细菌具有致死作用：首先，通过与青霉素结合蛋白（PBP，即细胞壁粘蛋白合酶）结合，抑制细胞壁粘蛋白的合成，破坏细胞壁，并导致细菌膨胀和裂解；其次，通过触发细菌的自溶酶活性，导致自溶和死亡。MRSA过度分泌β-内酰胺酶主要通过两种机制降低了抗生素的作用，这导致了MRSA耐药。首先是水解机制，即β-内酰胺酶水解并灭活β-内酰胺抗生素。第二个是夹捏的机制，即大量的β-内酰胺酶与细胞外抗生素快速牢固地结合，阻止了抗生素到达细胞内空间，因此抗生素无法到达靶位，最终导致MRSA对抗生素的耐药性（图1D）。  获得性抗生素耐药性 1、抵抗突变 金黄色葡萄球菌可通过改变目标DNA促旋酶或减少外膜蛋白的基因突变而变得耐药，从而减少药物积累。例如，对克林霉素和红霉素的耐药性原理是由核糖体RNA甲基化酶的修饰引起的。  2、耐药性基因的获得 获得性耐药性是一种质粒介导的耐药性。通过质粒介导的转导，转化和耐药基因的插入，可产生过量的β-内酰胺酶，导致细菌耐药性。MRSA耐药的机制主要是因为质粒或质粒介导的耐药基因传递可以扩展基因组，耐药基因可以在金黄色葡萄球菌和其他细菌之间转移。例如，MRSA可以从肠球菌获得抗药性质粒，从而进一步扩大和增强其抗药性。  3、生物膜介导的抵抗 细菌生物膜是由附着于基质表面的微生物种群组成的细胞外复合结构，其内部微生物被自身产生的高度水化的细胞外聚合物基质包围，这是细菌适应其生存的保护性生存方式周围环境。此外，自然界中的绝大多数细菌都以生物膜的形式存在，而细菌生物膜的最显着特征是它们的强粘附性和耐药性，使细菌能够抵抗宿主的免疫反应并逃避抗生素的杀灭。它们对抗菌药物的抵抗力可以提高到浮游生物的1000倍。目前，国内外抗生物膜治疗主要集中在新型抗菌药物的不断开发上，但临床医学中使用的抗生素和化学合成药物具有一定的毒性作用。生物膜细菌易于对这些常规药物产生耐药性，耐药菌株呈上升趋势。研究表明，中药和抗生素的联合应用具有降低药效的优势。  4、持久性细胞对抗生素的耐药性 持久性细胞是微生物群体中遗传同源但表型异质的一小部分细胞，生长缓慢或休眠并在高浓度抗生素下存活。早期研究表明，与抗生素耐药性不同，细菌滞留是细菌的生理状态，可暂时抵抗抗生素胁迫，并且不会导致基因型发生变化。但是，由于高通量测序技术的飞速发展，这一说法受到了挑战。当细菌遇到诸如抗生素的外部刺激时，大多数细菌会立即被杀死，但是一小部分细菌将通过阻止生长并保持不活动来抵抗这种压力。当外部压力消失时，少量细菌可以恢复正常生长。我们将这些细菌称为持久性细胞。持久性细胞的存在对彻底消除细菌感染和预防复发感染构成了许多障碍。细菌持久性细胞表现出对抗生素的耐受性，缓慢的生长以及在抗生素治疗后能够重新感染的能力。抗生素可以对细菌造成致命的破坏，但是持久性细胞可以通过减少细胞生长和代谢，甚至进入休眠状态来抵抗这种杀伤。细菌持久性是指代谢活动降低的状态，赋予同基因细菌亚群多药耐药性。持久性是表型变体，但不是突变体。现有研究结果表明，细菌持久性的机制很复杂，相关的信号传导途径包括毒素-抗毒素系统，能量代谢和蛋白质和核酸合成的细胞生理减少，DNA保护和修复系统，蛋白酶系统，翻译，外部抽水系统等。  常用抗生素的研究进展 MRSA是一种对青霉素，头孢菌素，氯霉素，林可霉素，氨基糖苷，四环素，大环内酯类，喹酞酮，磺酰胺和利福平具有抗药性的多药“超级细菌”，这在临床治疗中是非常困难的问题。此外，据报道，MRSA感染由于其高发病率和高死亡率而成为世界上主要的传染病之一，严重威胁人类健康并引起了全球医学界的关注。因此，迫切需要找到有效的药物来治疗耐多药细菌感染。我们在表1中列出了一些用于抗MRSA感染的药物，这些药物已在临床中使用，其中三个（即：万古霉素，达托霉素和利奈唑胺）表现突出。 1、万古霉素 万古霉素一直被认为是治疗严重MRSA感染的最佳药物，包括可引起严重的浸润性感染（例如肺炎和脓毒症）的HA-MRSA和CA-MRSA。万古霉素已被称为对抗革兰氏阳性球菌感染的最后一道防线。发现万古霉素的耐药机制主要是万古霉素通过肽聚糖前体小肽与细菌细胞壁的特异性结合，所述肽以D-丙氨酰-D-丙氨酸终止。这种结合会抑制细菌细胞壁肽聚糖的伸长和交联，从而抑制细胞壁合成，并最终导致细菌死亡。然而，金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药性每天都在增加，引起医学界的广泛关注。当前，大量研究人员通常将耐万古霉素的金黄色葡萄球菌分为三种：耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VISA）和异源耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（hetero-VRSA）。VRSA是指临床分离的金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）万古霉素 2、达托霉素 达托霉素是一种环化的脂肽药物，它是从玫瑰链霉菌的发酵液中提取的。它的作用机制是在存在钙离子的情况下破坏质膜的电势，但达托霉素不抑制脂磷壁酸。由于其独特的作用机理，达托霉素与其他抗生素没有交叉耐药性，可用于治疗由MRSA引起的皮肤软组织感染和血液感染，但不能用于MRSA诱导的肺炎，因为它的活性可以被肺泡表面活性剂抑制。大量证据表明达托霉素比万古霉素，利奈唑胺或奎奴普丁/达洛平具有更快的杀菌作用。此外，达托霉素具有在体外抵抗大多数临床革兰氏阳性细菌的作用。因此，达托霉素主要用于治疗许多耐药菌的感染，例如耐万古霉素的肠球菌，MRSA，糖肽敏感的金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性的葡萄球菌和耐青霉素的肺炎链球菌。美国已批准静脉注射达托霉素用于治疗复杂的皮肤和软组织感染。对于剂型，达托霉素目前仅以注射剂形式获得，并且其口服剂型正在研究中。 3、利奈唑胺 利奈唑胺是一种新型的恶唑烷酮合成抗菌剂，可抑制肠球菌和大多数链球菌菌株。它主要用于控制由耐万古霉素的粪肠杆菌（如脓毒症和肺炎）引起的全身感染。利奈唑胺可与细菌中50S和30S核糖体亚基的细菌抑制50S和30S核糖体亚基的核糖体RNA的23S位点结合，从而阻止蛋白质合成。这种独特的作用机制消除了利奈唑胺与其他抗生素之间的交叉耐药性。据报道，利奈唑胺治疗的MRSA感染患者的存活率和临床治愈率显着高于万古霉素治疗的患者。根据大规模的临床研究，利奈唑胺的口服和注射剂型在MRSA的治疗中均有效，并且还对耐万古霉素的肠球菌，耐青霉素的肺炎球菌和耐大环内酯的抑菌链球菌。鉴于该药物对耐多药细菌的良好治疗效果，在2000年获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准后已在临床上使用。2007年，利奈唑胺进入中国市场。由于它对大多数革兰氏阳性细菌具有很强抗菌作用，因此被认为是治疗MRSA的重要选择。 MRSA治疗的新治疗策略 MRSA具有多重耐药性，不仅对β-内酰胺类抗生素具有耐药性，而且对氨基糖苷类，喹诺酮类和大环内酯类等抗菌剂也具有耐药性。全身感染的死亡率超过50％，这已成为临床和社区抗感染治疗的全球性问题，而且难以治疗。同时，医院的ICU是MRSA的主要感染地点，很可能会引起暴发。因此，迫切需要许多抗MRSA的新药。表2列出了近年来新研究的抗MRSA药物。 1、凝集素抑制 凝集素是一种非免疫衍生的糖结合蛋白，能够使细胞凝集或沉淀糖结合物。据报道，凝集素不仅可以凝集红血球，还可以凝集各种细胞，例如病原体，免疫细胞和生殖细胞。目前，凝集素在医学领域的应用主要是对凝集素的特异性识别和粘附，这使得各种病原微生物能够结合并感染其受体细胞。例如，某些甘露糖凝集素可以显着影响HIV的毒性，从而可以开发出抗病毒药物。因此，有可能利用凝集素的特性来设计和开发新的临床药物，并从根本上阻止病原微生物与受体细胞的结合，从而预防大多数传染性疾病。 2、铁螯合 铁离子是包括细菌在内的大多数生物的必需营养素。研究表明，铁离子构成重要的生物酶（例如氧化还原酶）的催化中心，并参与各种生命活动，例如电子传输，抗氧化剂反应和核酸合成。病原菌的抗生素耐药性不断提高；因此，迫切需要新的抗菌药物。细菌耐药性的重要机制之一是降低外膜的通透性，从而阻碍药物分子进入细胞。为了避免这种机制介导的耐药性，一种方法是将抗生素分子附着到铁载体上，形成铁载体-抗生素结合物，并且该铁载体-抗生素结合物可以选择性地与细菌细胞膜表面相互作用。铁载体的外膜受体与该结合物相互作用。然后，结合物通过铁离子转运系统主动转运穿过细胞外膜。在这种情况下，与抗生素结合的铁载体可以与Fe 3+结合，生成的复合物（抗生素-铁载体-Fe 3+）进入单元格。最后，药物在细胞内释放，从而发挥抗菌作用。 3、噬菌体疗法 在发现之初，前苏联和东欧医学界曾使用噬菌体来治疗细菌感染。但是，随着抗生素时代的到来，人们逐渐忽略了对噬菌体的深入研究。近年来，由于耐药菌的全球感染率不断上升，使用抗生素治疗细菌感染面临着前所未有的挑战。出现了一系列耐药病原体，如金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，鲍曼不动杆菌，结核病，粪肠球菌尤其是MRSA，导致一些科学家和临床医生将注意力重新集中在噬菌体研究上，从而在该领域取得了巨大进展。大量实验证明，噬菌体可以有效提高被细菌感染的动物的存活率。与抗生素相比，噬菌体制剂具有特异性高，自我增殖快，开发时间短的优势。噬菌体疗法被认为是针对人类病原体（包括抗生素耐药菌株）最有前途的疗法之一。早在1921年，噬菌体就被用于治疗由葡萄球菌引起的皮肤感染。2007年，意大利研究人员证明，噬菌体Msa可通过建立小鼠静脉内注射模型来有效控制由金黄色葡萄球菌引起的致死性感染。随着耐药菌的增多，噬菌体优势已为越来越多的学者所认识。然而，多年来金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性和相关动物研究表明，噬菌体的制备，储存和条件存在许多限制。与抗生素相似，细菌也可能对噬菌体具有耐药性。然而，自然界中噬菌体的多样性和变异性也为噬菌体控制的细菌提供了取之不尽的资源库。此外，对细菌基本构架具有破坏作用的噬菌体裂解酶可以弥补缺乏噬菌体的耐药性。而且，目前，噬菌体疗法在临床上仍不成熟。主要问题如下：（1）大多数噬菌体具有高度特异性，只能杀死一个或几个细菌亚群。（2）噬菌体疗法在特定的体外试验中显示有效，但并不意味着它同样有效体内；（3）只有当细菌达到一定密度时，噬菌体才开始增殖。噬菌体可能会过早接种或以不适当的剂量接种，并可能在其开始增殖之前被人体清除。因此，确定最佳接种时间和剂量将成为噬菌体治疗的主要困难。以上是噬菌体治疗中的常见问题。因此，在金黄色葡萄球菌治疗过程中也存在这些问题。 4、纳米粒子 纳米技术指的是纳米级物质的制备，研究和工业化，以及使用纳米级材料进行交叉研究和工业化的综合技术系统。研究表明，纳米技术可以应用于医学，医学，生物学，化学和信息技术领域。因此，它可以在无创微创医学中发挥重要作用。在医学领域，纳米颗粒增强了在人体中释放药物的能力。几层纳米粒子包裹的智能药物进入人体后，它们可以主动搜索并攻击癌细胞或修复受损的组织。中国已经成功开发了新一代的纳米级抗菌药。粉状纳米颗粒的直径仅为25纳米，对诸如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等病原微生物具有很强的抑制和杀灭作用。纳米级抗菌药物具有许多特性，例如光谱，亲水性和环境保护，并且由于使用天然矿物质而不会产生耐药性。 结束语 金黄色葡萄球菌是一种在环境中普遍存在的细菌，在人的皮肤表面和上呼吸道粘膜中很常见。大约20％的人口是金黄色葡萄球菌的长期携带者，大多数人没有临床症状。然而，金黄色葡萄球菌仍然是人类的重要病原体。金黄色葡萄球菌可引起医院和社区的感染，并已成为全世界医院中的主要病原体。在1840年代，英国细菌学家弗莱明（Fleming）发现了青霉素，并在临床中将其用于控制青霉素。金黄色葡萄球菌感染。后来，各种抗菌药物不断涌现。但是，这项重大研究也为人类社会带来了隐患。抗生素的广泛使用导致细菌耐药性的发生率增加，首先是出现了多重耐药性菌株，例如MRSA，这已被视为临床上的重要问题，也引起了国内外研究专家的广泛关注。尽管近年来一些欧洲国家的MRSA感染死亡率下降了，但MRSA仍然是世界范围内严重公共卫生挑战。由于其易感染，高死亡率和多药耐药性的特点，MRSA已成为临床治疗的绊脚石。因此，如何有效预防和控制MRSA已成为现代研究的热点。多年来，科学技术日新月异，医学不断发展。人类在MRSA的致病因素研究中取得了杰出的成就。目前，万古霉素仍可能是治疗MRSA感染的最佳药物。然而，MRSA的多药耐药性大大增加了人类研究的难度。需要进一步的研究来不断研究MRSA引起感染的能力和MRSA的抗生素耐药性途径，并促进抗MRSA感染的新药物的开发。新药的开发为医生提供了更多的选择来治疗MRSA感染，为人类健康提供更大保护。但是，药物的疗效和安全性需要进一步临床研究。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   人肾小球足细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129504 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HGPC 细胞名称：人肾小球足细胞HGPC产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研2类培养体系：DMEM高糖+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人肾小球足细胞HGPC取自女性供体，贴壁培养。用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  环状芽孢杆菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 环状芽孢杆菌微生物个体虽小，却在自然界起着巨大的作用。它能把复杂的天然有机物（动植物遗体）及大量的人工合成物有机物，分解为简单的有机物，最终降解成无机物还到大自然中。 一、菌种简介平台编号：Bio-107340 规格：冻干粉 拉丁属名：Bacillus Circulans 中文名称：环状芽孢杆菌拉丁名称：Bacillus circulans来源历史：CGMCC原始编号：CGMCC 1.6966=ATCC 4516模式菌株：否生物安全级别：GR1培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：需氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上三款任选一种作为培养基） 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。  四、培养方法1、安瓿瓶开封：用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、环状芽孢杆菌3.高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   酒酒球菌在葡萄酒中的作用与应用及研究进展！ 酒酒球菌（Oenococcus oeni，O.oeni）是葡萄和葡萄酒中主要的乳酸菌种类，它是一种营养缺陷型细菌，能够在葡萄酒恶劣条件下生存，在葡萄酒苹果酸-乳酸发酵（malolactic fermentation，MLF）中担任主要角色，是葡萄酒最终风味的塑造者。为了进一步提高酒酒球菌在葡萄酒酿造工业中的应用，该文从酒酒球菌菌株分离筛选和鉴定，及其对葡萄酒酿造的有益作用，葡萄酒酿造过程对酒酒球菌的影响以及酒酒球菌在分子生物学方面的研究进展进行归纳和展望。 葡萄酒的酿造是一个复杂的过程，涉及不同微生物的相互作用，其中主要包括酿酒酵母和乳酸菌。酿酒酵母主要负责酒精发酵，可以将葡萄汁中的糖转化为酒精和CO2，是葡萄酒香气物质形成的主要时期。苹果酸-乳酸发酵通常在酒精发酵期间或酒精发酵结束时进行，由一种或多种乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）启动并进行。其能够降低葡萄酒的酸度，并且有利于提高微生物的稳定，乳酸菌的次级代谢产物还能够极大地葡萄酒的香气，提高感官特性。在所有乳酸菌品种中，酒酒球菌既能适应恶劣的葡萄酒环境，又能通过苹果酸-乳酸发酵改善葡萄酒口感，因此是商业葡萄酒发酵剂的代表菌株。 由于酒酒球菌在葡萄酒酿造中的重要地位，越来越多的研究者对酒酒球菌做了相关研究。在研究初期，通过对我国葡萄酒主产区的乳酸菌进行分离和鉴定，从中筛选出了酿酒适应性和酿酒特性优良的菌株。进一步研究发现，酒酒球菌能够在复杂的葡萄酒环境中生存，其产生的次级代谢物能够提高葡萄酒的品质和改善风味。虽然酒酒球菌能够耐受环境中葡萄酒发酵中的乙醇、SO2等不利条件，但是葡萄酒中存在的各种因素，都有可能制约着酒酒球菌的生长繁殖和代谢。全面认识酒酒球菌在葡萄酒酿造中的作用有利于更好地调控葡萄酒苹乳发酵，从而进一步提高其在葡萄酒酿造中的应用。 一、酒酒球菌的分离筛选和鉴定 在葡萄酒酿造中启动并参与苹果酸-乳酸发酵（简称苹乳发酵）的乳酸菌被称为葡萄酒乳酸菌，目前研究结果发现主要有4个属，分别为乳杆菌属（Lactobacillus beijerinck）、明串珠球菌属（Leuconostoe mesenteroides）、片球菌属（Pediococcus blaussen）以及酒球菌属（Oenococcus）。在所有的苹乳发酵菌株中，酒酒球菌表现出优良的酿酒风味特性，对提升葡萄酒品质有着积极作用，因此商业乳酸菌主要以酒酒球菌为主导者。植物乳杆菌也是发酵过程中一种常见的菌种，可以作为苹乳发酵的启动菌。有相关研究表明植物乳杆菌会在苹乳发酵过程中产生生物胺等不良次级代谢物，使酒产生鼠臭味影响葡萄酒的品质和香气。因此，分离筛选和鉴定出具有优良酿酒适应性和酿酒特性的酒酒球菌，对于提高葡萄酒二次发酵品质具有重大意义。 1、酒酒球菌的分离筛选 酒酒球菌是一种营养缺陷型菌株，绝大多数菌株缺乏烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，需要在添加番茄汁生长因子的培养基中才能够生长。目前我们所采用的酒酒球菌分离培养基为番茄汁培养基。为了提高酒酒球菌的鉴别能力，一般还会添加放线菌酮50 mg/L、万古霉素50 mg/L（放线菌酮能有效地抑制酵母菌和霉菌的生长，万古霉素能够抑制其他乳酸菌）。通过添加这两种抗生素，可以分离得到原存在于葡萄酒中的酒酒球菌。 2、酒酒球菌的鉴定 对分离得到的酒酒球菌一般会先采用生化鉴定，主要从菌株的形态特征（细胞球型至椭圆型，常成对和链形排列，直径通常小于1 μm）、生理生化特征（革兰氏阳性菌，能够分解苹果酸）等方面进行分类区别。生化鉴定法作为一种基础鉴定方法，虽然操作简单，但过程会相对复杂，耗时长，结果也会有差异性。随着科学技术不断发展，分子技术不断推陈出新，特别是在物种鉴定方面，逐渐形成快速准确的方法。目前的分子鉴定方法一般为16SrRNA、分子标记、扩增核糖体DNA限制性分析和多位点序列分析。我国葡萄种植和葡萄酒酿造地域性差距大，分离筛选和鉴定出本土优质的酒酒球菌菌种，对我国葡萄酒产业发展具有推动作用。 二、酒酒球菌对葡萄酒酿造的作用 酒酒球菌是目前公认的能够较快适应葡萄酒酒精发酵之后恶劣环境的一类乳酸菌，如低pH值、高SO2浓度和高乙醇体积分数，能够对葡萄酒苹乳发酵起到启动和执行的作用。苹乳发酵主要指葡萄酒中苹果酸通过酒酒球菌作用转化为乳酸的过程。在此过程中能够提高葡萄酒pH值，一般被认为是葡萄酒的生物降酸过程。此外，酒酒球菌在发酵过程中还会产生许多次级代谢物，一部分为自身的生长和繁殖提供能量和营养，另一部分能在一定程度上赋予葡萄酒丰富的香气。此过程对于提高葡萄酒品质的意义在于提高葡萄酒生物稳定性、降低色度、增加香气复杂度、提高葡萄酒品质和改善口感。 1、提高葡萄酒生物稳定性 葡萄酒是葡萄汁经过发酵形成的产物。酵母通过酒精发酵将绝大多数的营养物质消耗掉，这一过程会产生大量有机酸，其中苹果酸容易被多种微生物利用，因而会使葡萄酒在贮存过程中腐败。在苹乳发酵过程中，酒酒球菌对苹果酸具有独特的分解作用，同时也会消耗其他营养物质，从而减少其他有害微生物的产生，经过这一过程，可以提高葡萄酒生物稳定性，有益于延长葡萄酒贮存时间。 2、降低葡萄酒色度 葡萄酒的颜色是判断葡萄酒品质的一个重要标准，其颜色的形成主要与葡萄品种和陈酿有关，主要成分为花色苷。参与苹乳发酵的酒酒球菌可以利用与SO2结合的物质如α-酮戊二酸、丙酮酸等，可以释放出SO2。处于游离状态的SO2可以与花色苷结合，从而减少葡萄酒中的显色物质，经过这一过程可以使葡萄酒的颜色更加具有观赏性。 3、增加葡萄酒香气复杂度 随着葡萄酒酸度的降低，会使酒的口味变得柔和圆润。酒酒球菌在将苹果酸转化为乳酸的同时也会产生一些次级代谢物，比如双乙酰、乙偶姻、2，3-丁二醇及其它优良的风味物质，这些都是对葡萄酒有利的物质，能够增加葡萄酒香气的复杂度。 4、提高葡萄酒品质改善口感 酸类物质是葡萄酒的主要成分，其组成和含量直接和间接影响着葡萄酒的品质。葡萄酒中的有机酸主要是苹果酸和酒石酸，其中苹果酸给人的感官特征为尖锐且带有涩感，不太容易被人接受。经过酒酒球菌转化为乳酸，乳酸口感柔和顺口，没有涩感。因此，能够在提高葡萄酒品质的同时改善口感，让更多的人群接受。这使得酒酒球菌在葡萄酒后期香气形成中有着独特的作用。 5、酒酒球菌可能引起的潜在质量风险 相关研究表明，当葡萄酒苹乳发酵结束后不立即采取中止措施，酒酒球菌可会转化为病原菌，引发葡萄酒病害，如酒石酸发酵病、乳酸发酵病、乳酸性酸败等。因此在进行苹乳发酵时，检测苹果酸和乳酸的含量是十分有必要的，严格的工艺流程也是生产出优质葡萄酒的先决条件。 三、葡萄酒酿造过程对酒酒球菌的影响 酒酒球菌独特的酿酒特性会影响其生长的环境，即对葡萄酒品质的影响。而在这一过程中，葡萄酒的自身环境同样是制约着酒酒球菌的生长的关键因素。除此之外，不同的酿酒工艺，如酒酒球菌不同的接种量和接种时间也会影响其生长。酒精发酵后残留的酵母菌，以及其他乳酸菌菌群，彼此之间的相互作用同样会对酒酒球菌有影响。 1、环境因素对酒酒球菌的影响 酒精发酵结束后，葡萄酒处于比较恶劣的环境：低pH值、高酒精度、高SO2浓度等，这些因素很大程度上影响了酒酒球菌的生存和生长。pH值越低，对酒酒球菌的抑制效果越明显，会阻碍苹乳发酵的启动。酒精是酒酒球菌在葡萄酒中生长的主要抑制因子，高含量乙醇能影响细胞膜流动性，会阻碍酒酒球菌生长。溶解氧不仅不利于酒酒球菌生长，还会使醋酸菌等有害微生物大量繁殖，乙酸、双乙酰等不良产物含量上升，使葡萄酒败坏。SO2在葡萄酒酿造过程中起到抗氧化、抑制野生酵母和腐败菌生长的作用，但它对酒酒球菌也会有一定的抑制作用，当浓度大于100 mg/L时，酒酒球菌将会完全被抑制，无法生长。研究表明：酒酒球菌能够在pH值不低于3.2、酒精度10%vol～14%vol、总SO2浓度不超过50 mg/L条件下正常生长。 2、不同接种量和接种时间的影响 酒酒球菌不同的接种量会影响苹乳发酵的速度，从而影响葡萄酒中挥发酸的含量和葡萄酒的色泽。不同的酒酒球菌发酵特性不同，在使用前应进行接种量试验，选择最佳接种量有利于苹乳发酵的顺利进行。同时接种时间对苹乳发酵的启动和保持菌种活性同样重要。通常有以下3种接种时间安排：混合接种（在酒精发酵启动时与酵母同时接种），过程接种（在酒精发酵过程中接种），顺序接种（酒精发酵结束后接种），接种时间会影响接种后酒酒球菌的成活率和延滞期的长短。混合接种和过程接种会在一定程度上影响酒精发酵，对于葡萄酒香气物质的形成存在不可控性。因此，目前在葡萄酒酿造中都是采用顺序接种。 3、微生物间相互作用 酵母菌和酒酒球菌有一定的抑制作用。首先，酒酒球菌能产生分解酵母菌细胞壁的β-1，3葡聚糖酶；其次，酵母菌会产生抑制肽、酒精和中链脂肪酸，它们在一定的浓度下也会抑制酒酒球菌的生长。葡萄酒在酒精发酵结束后，存在一些酵母没有利用完的营养物质，同时酵母菌自溶会释放蛋白质等大分子化合物。此时，葡萄酒中存在的乳酸菌群体就会相互竞争这些营养物质，其中植物乳杆菌和戊糖片球菌会产生一些短肽和蛋白质，会对酒酒球菌有强烈的抑制作用，虽然会造成酒酒球菌生长速率降低，但是对其并没有致死作用。希氏乳杆菌也会和酒酒球菌竞争氮源和多肽，会产生一种互害共栖的关系。在葡萄酒酿造时，可以通过人工添加酒酒球菌的方式，有利于苹乳发酵的进行。 四、酒酒球菌分子生物学研究 分子生物学是从分子水平上阐明遗传、生殖、生长和发育等生命特征的分子机理，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新手段。长期以来，人们利用这一技术对酒酒球菌也进行了深入研究，现阶段对其的研究主要集中在以下几个方面：种类鉴定、遗传图谱构建、全基因组测序、种群遗传学、抗胁迫性分子机理及调控等。 通过酒酒球菌完整基因组序列，可以预测其生理学特性，并且验证相关基因在酿酒中的功能。其中苹乳发酵启动的相关基因mleA（苹果酸乳酸酶基因）及mleP（苹果酸转运蛋白基因）研究比较多，一般都会将这两个基因外源表达在酵母中，虽然这样能够使酵母同时具备启动苹乳发酵载体的功能，但苹乳发酵还会涉及其他物质的代谢，是酵母无法替代的。因此，如果利用分子生物学技术对酒酒球菌进行改造，有利于更高效的进行苹乳发酵启动，同时酒酒球菌本身也会赋予葡萄酒更加丰富的香气成分。可是目前由于酒酒球菌具有生长缓慢，不易培养等特点，同时又缺乏相关的载体，因此对其进行转化存在相当大的困难。 五、结语 酒酒球菌作为葡萄酒苹乳发酵的启动者和执行者，优良菌株的筛选及其酿酒特性一直是人们的研究重点。优良酒酒球菌能够代谢苹果酸、糖、含氮物质等，产生的次级代谢物能够丰富葡萄酒风味，提高葡萄酒感官品评。酒酒球菌在复杂的葡萄酒环境中，每一个因素都能影响其生长繁殖和代谢，各个因素作用机制尚不明确，这些因素对酒酒球菌的作用机理还有待研究。酒酒球菌工程菌株构建一直还未明了，如果将有利于葡萄酒香气的相关基因表达到酒酒球菌中，能够在葡萄酒发酵的最后阶段对其香气的形成有很好的塑造作用。因此，未来对酒酒球菌的作用机理研究和工程菌株的构建将是其研究重点。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    咽峡炎链球菌的特点与优势及微生物培养方法！ 咽峡炎链球菌是Streptococcus属的微生物，原产地为中国天津市。主要用途为研究；教学；分类。 一、菌种简介平台编号：Bio-80350 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Streptococcus Anginosus 菌株名称：咽峡炎链球菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Streptococcus anginosus (Andrewes and Horder) Smith and Sherman emend. Whiley and Beighton 拉丁名(ATCC? 33397?) 统一编号Deposited As Streptococcus anginosus (Andrewes and Horder) Smith and ShermanStrain Designations 菌株别名 NCTC 10713 [ATCC 12395, CCUG 27298, CCUG 35776, CIP 102921, DSM 20563, HAMBI 1525, LMG 14502, Lancefield F68A]Isolation 分离基物 Tissue, human throatBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Antigenic Properties Lancefield's group G, type 1Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen（冷冻物）: -80℃ or colderFreeze-Dried（冻干物）: 2℃ to 8℃Live Culture（活物）: See Propagation SectionPreceptrol? noType Strain 模式菌株 yesAntigenic Properties Lancefield's group G, type 1Medium 培养基 ATCC? Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/BrothATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37℃Atmosphere 需氧情况: AerobicName of Depositor 寄存人 NCTCSpecial Collection NSF - BacteriologyChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离基物 Tissue, human throatReferences 参考文献 Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.Coykendall AL, et al. "Streptococcus milleri", Streptococcus constellatus, and Streptococcus intermedius are later synonyms of Streptococcus anginosus. Int. J. Syst. Bacteriol. 37: 222-228, 1987.Whiley RA, Beighton D. Emended descriptions and recognition of Streptococcus constellatus, Streptococcus intermedius, and Streptococcus anginosus as distinct species. Int. J. Syst. Bacteriol. 41: 1-5, 1991.Vandamme P, et al. Whole-cell protein electrophoretic analysis of viridans streptococci: evidence for heterogeneity among Streptococcus mitis biovars. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 48: 117-125, 1998. PubMed: 9542082Cross References Nucleotide (GenBank) : Z69038 S.anginosus 16S ribosomal RNA. Nucleotide (GenBank) : Z95895 Streptococcus anginosus sodA gene.Nucleotide (GenBank) : U91912 Streptococcus anginosus D-alanine:D-alanine ligase gene, partial cds.Nucleotide (GenBank) : AF276257 Streptococcus anginosus elongation factor Tu (tuf) gene, partial cds. 三、形态特征卵圆形或球形的，近球形的细胞直径0.5-1.25µm。典型的成对，有时单个或短链，每对细胞的外端较尖或矛状，有荚膜。革兰氏染色阳性。形成粘菌落，光滑形菌落闪光并呈圆顶状。在血培养基上厌氧培养结果呈α-溶血。兼性厌氧菌。温度范围25-42℃。  四、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 五、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 六、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。