DH5α 感受态细胞

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产品描述：

产品名称：DH5α 感受态细胞

描述:

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁷cfu/μg DNA，-70℃长期保存转化效率不发生改变。
基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
产品特点：
1、DH5α菌株是实验室最常用的基因克隆菌株；
2、DH5α在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补，可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株；
3、核酸内切酶(endA)和重组酶 (recA)的突变有利于克隆DNA的稳定性和高纯度质粒DNA的提取；
4、质量稳定，使用方便，质优价廉。

使用方法: 操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）： 1、从-70℃冰箱取出E.coli DH5α感受态细胞，迅速放入冰水，使其融化。（一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。)以下实验以 50μl 感受态细胞为例。 2、取一无菌的1.5mL EP管，向其中加入10μl DNA连接产物+30μl ddH2O+10μl 5×KCM(0.5 M KCl, 0.15 M CaCl2, 0.25 M MgCl2),；或者是1μl质粒+39μl ddH2O+10μl 5×KCM。（具体的DNA及ddH2O的加入量可根据实际情况调整） 3、取50μl 感受态细胞悬液加入上述EP管中，轻轻混匀，置于冰水中冰浴20min。 4、28℃再孵育10min。 5、无菌条件下，加入500μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃，150rpm，摇床振荡培养60min。 6、无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，将平板倒置于37℃恒温箱培养12-16 小时。（涂布用量可根据具体实验来调整。90mm 平皿涂布100μl，55mm 平皿涂布50μl；连接产物的转化菌液建议6000rpm离心5min后弃掉大部分上清，余200μl，取100μl 用于涂布。） 7、保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。 相关试剂及培养基的制备方法： 1、5×KCM：0.5M KCl,0.15M CaCl2,0.25M MgCl2，121℃高压灭菌20min。 2、IPTG：称取1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40 ml灭菌水，浓度为 200mM。用无菌0.22μm滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。 3、X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成20mg/ml，小份分装后， -20℃避光保存。 4、LB 液体培养基：称取 10g Tryptone， 5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去离子水， 完全溶解后用 2M 的 NaOH 溶液调节 pH 值至7.0。加去离子水定容至1L。分装后，121℃高压灭菌 20 分钟。 5、LB 固体选择培养基： 100ml LB液体培养基中加入1.5g琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌 20 分钟。冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素，混匀后倒在无菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。

储存/保存方法: -70℃保存，避免反复冻融

技术指标: 使用pUC19质粒检测，转化效率≥1×10⁸cfu/μg。

注意事项: 1、感受态细胞应在-70℃下保存，不可多次冻融，也不可放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、不适合在液氮中保存。
3、感受态细胞应在冰上融化。
4、转化高浓度质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5、所有步骤都应在无菌条件下进行。

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