细胞膜荧光探针DiI, DiI细胞膜染料

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试剂描述：

产品名称：DiI perchlorate

产品别名：细胞膜荧光探针DiI, DiI细胞膜染料, 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate; 3H-Indolium; 2-(3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol- 2-ylidene)-1-propenyl)-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, perchlorate

CAS号：41085-99-8

英文别名：DiI perchlorate

分子量：933.87

分子式：C₅₉H₉₇ClN₂O₄

纯度：≥95%

外观：见爱必信官网

保存方法：?20°C干燥避光保存，产品有效期为12个月

描述：

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

应用：细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪

使用方法：

1. 染色液制备 
（1）配置DMSO 或 EtOH 储存液：储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1～5 mM。 注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。 
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储存液，配制浓度为 1～5μM 的工作液。 注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。 建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。 
2. 悬浮细胞染色 
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×10 6 /mL。 
（2）37℃ 孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间 不同。可以20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得 到均一的标记结果。 
（3）孵育结束，1000～1500 rpm离心5 min。倾倒上清液， 再次缓慢加入37 ℃预热的生长培养液重悬细胞。 
（4）重复步骤（3）两次以上。 
3. 贴壁细胞的染色 
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但表面要 保持湿润。 
（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动 使染料均匀覆盖所有细胞。 
（4）37℃ 孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2～3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。

注意事项：1. DiI 染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液 会导致荧光背景较高。 2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧 光淬灭。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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